CN112640997A - 一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法 - Google Patents
一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112640997A CN112640997A CN202011518180.4A CN202011518180A CN112640997A CN 112640997 A CN112640997 A CN 112640997A CN 202011518180 A CN202011518180 A CN 202011518180A CN 112640997 A CN112640997 A CN 112640997A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- silage
- concentration
- aerobic stability
- improving
- culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000004460 silage Substances 0.000 title claims abstract description 104
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 57
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 40
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims abstract description 20
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 20
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims abstract description 9
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 5
- 239000010902 straw Substances 0.000 claims description 17
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 15
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 15
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 15
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 15
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 15
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 14
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 claims description 8
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 claims description 8
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 6
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 6
- 241000186679 Lactobacillus buchneri Species 0.000 claims description 6
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 6
- 240000001929 Lactobacillus brevis Species 0.000 claims description 4
- 235000013957 Lactobacillus brevis Nutrition 0.000 claims description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 2
- 241000186842 Lactobacillus coryniformis Species 0.000 claims description 2
- 241000186685 Lactobacillus hilgardii Species 0.000 claims description 2
- 244000172809 Leuconostoc cremoris Species 0.000 claims description 2
- 235000017632 Leuconostoc cremoris Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 2
- KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N carbocromen Chemical compound CC1=C(CCN(CC)CC)C(=O)OC2=CC(OCC(=O)OCC)=CC=C21 KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 2
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 claims description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 2
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 claims 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 abstract description 9
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 abstract description 8
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 8
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241000219823 Medicago Species 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 8
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 description 3
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 235000019614 sour taste Nutrition 0.000 description 3
- 244000153158 Ammi visnaga Species 0.000 description 2
- 235000010585 Ammi visnaga Nutrition 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 2
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 239000002932 luster Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 1
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 1
- 240000008467 Oryza sativa Japonica Group Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000191996 Pediococcus pentosaceus Species 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012864 cross contamination Methods 0.000 description 1
- 238000013400 design of experiment Methods 0.000 description 1
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 235000019629 palatability Nutrition 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K30/00—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs
- A23K30/10—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder
- A23K30/15—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging
- A23K30/18—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging using microorganisms or enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/121—Brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/129—Cornyiformis
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于青贮饲料制备技术领域,涉及一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法。将青贮饲料发酵剂种于培养基中在厌氧条件下培养至体系pH为3.95‑4.45,且体系内乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69~13.25,将所得培养液离心,收集沉淀将其接种至青贮原料发酵成青贮饲料,即可提高青贮饲料有氧稳定性。本发明通过控制青贮饲料接种培养物的产酸量,乳酸、乙酸的含量及比例,使乳酸浓度/乙酸浓度比值在的比例在9.69‑13.25之间,进而在制备青贮饲料过程中可以有效抑制霉菌、酵母菌的生长,大幅度的提高青贮饲料的有氧稳定性,可将开窖后青贮饲料的储存时间延长至40d以上,而且可以提高青贮饲料感官评价评分,改善青贮饲料的品质。
Description
技术领域
本发明属于青贮饲料制备技术领域,涉及一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法。
背景技术
青贮是通过利用青贮材料中乳酸菌厌氧发酵,使原料产生有机酸,降低pH值,抑制和杀死各种有害微生物的繁衍,从而达到保存饲料长时间使用的一种贮藏方式。青贮生物饲料是反刍动物重要的饲料来源,青贮饲料能有效保存青贮植物的营养成分,保证原料青绿时的鲜嫩汁液,质地柔软,适口性好,消化率高等优点,是反刍动物(如牛、羊等)的重要的饲料来源。青贮可发生在筒仓、青贮饲料堆、青贮饲料窖、青贮饲料捆、或适于所选植物材料青贮的任何其它方法中。
青贮是解决青饲料不易贮藏的一个有效而经济的方法。但是,自然状态下青贮比较困难,目前普遍采用添加菌剂青贮,通过在青饲料中加入植物乳杆菌、布氏乳杆菌、短乳杆菌、戊糖片球菌等菌株,加快青贮的发酵速度,进而提高青贮饲料的品质。CN106615609B“公开了所提供的布氏乳杆菌可以增加苜蓿及粳稻秸青贮发酵品质,降低蛋白质损失,增加青贮饲料有氧稳定性;专利所述的有氧稳定性时间为最长为422h,有氧稳定性时间较短,不利于对青贮饲料的储存。
CN 106103697 B公开了一种用于处理青贮饲料以增强有氧稳定性的方法,所述方法通过抑制选自酵母、霉菌和孢子形成细菌的微生物的生长提高青贮饲料的发酵和稳定性,并且允许较早的有氧暴露,该发明有氧稳定性时间为30d。该专利中使用的菌种为布氏乳杆菌或短乳杆菌,专利中没有提及菌株筛选评价方法,
CN 106028829 B提供了一种用于处理青贮饲料的方法,其包括将青贮饲料接种剂加入青贮饲料中,所述青贮饲料接种剂能有效防止或降低有氧酸败。该发明中提及的青贮饲料有氧稳定性时间73.05h,有氧稳定性较差,影响青贮饲料开窖后的品质。
上述各方法,虽然能够一定程度上的提高相应的有氧稳定性,但青贮饲料的有氧稳定性时间较短,影响青贮饲料开窖后饲料的品质,不利于青贮饲料的长期储存,进而需要提供一种延长有氧稳定性的方法。
发明内容
本发明目的在于提供一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法。
为实现上述目的,本发明采用技术方案为为:
一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法,将青贮饲料发酵剂种于培养基中在厌氧条件下培养至体系pH为3.95-4.45,且体系内乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69~13.25,将所得培养液离心,收集沉淀将其接种至青贮原料发酵成青贮饲料,即可提高青贮饲料有氧稳定性。
所述青贮饲料发酵剂接种于培养基中在厌氧条件下培养至体系pH为3.95-4.45,且体系内乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69~13.25,丙酸浓度在小于等于0.92g/L,将所得培养液离心,收集沉淀将其按以1×105cfu/g~5×105cfu/g(青贮饲料)接种至青贮原料中,发酵成青贮饲即可提高青贮饲料有氧稳定性。
所述培养基为改良的MRS培养基。
所述改良的MRS培养基配方为:蛋白胨10.0-20g/L,牛肉膏10.0-16g/L,酵母粉5.0-8.8g/L,葡萄糖20.0-30g/L,乙酸钠2.8-8.6g/L,磷酸氢二钾2.0g/L,柠檬酸氢二铵2.0g/L,MgSO4·7H2O 0.2g/L,MnSO4·4H2O 0.05g/L,吐温-801mL,pH 6.2~6.4。
所述青贮饲料发酵剂培养后,培养物的细胞数达到5×108cfu/mL-4×109cfu/mL,且发酵液的pH值达到3.95-4.45,乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69~13.25,丙酸浓度在小于等于0.92g/L。
所述青贮饲料原料为全株玉米、不带穗玉米秸秆、苜蓿,也适用于其他可以青贮的其他秸秆类植物。
所述青贮饲料发酵剂为乳酸菌和/或青贮饲料培养物。
所述乳酸菌为布氏乳杆菌、短乳杆菌、棒状乳杆菌、希氏乳杆菌、乳脂明串球菌中的一种或几种。
本发明的优点与积极效果为:
本发明通过控制青贮饲料接种培养物的产酸量,乳酸、乙酸的含量及比例,使乳酸浓度/乙酸浓度比值在的比例在9.69-13.25之间,进而在制备青贮饲料过程中可以有效抑制霉菌、酵母菌的生长,大幅度的提高青贮饲料的有氧稳定性,可将开窖后青贮饲料的储存时间延长至40d以上,而且可以提高青贮饲料感官评价评分,改善青贮饲料的品质。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的具体实施方式做进一步说明,应当指出的是,此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本发明,并不局限于本发明。
下述青贮饲料有氧稳定性测定:青贮发酵结束后,每个处理组随机取3处保存完好的青贮饲料,混匀后取样,取混匀后的饲料800~1000g置于大的塑料封口袋中,直至塑料袋装满,用牙签扎数个小孔,再套上一个宽松不封口的塑料袋,防止交叉污染和减少水分损失,用50℃的普通温度计测定温度变化。样品都置于阴暗处,环境温度根据实际情况确定,温度变化每4h记录1次,当青贮物料的温度超过环境温度2℃时为止。试验中的温度计、牙签等用具使用前均须紫外灭菌。
pH值测定:青贮完成后,打开上述密封袋,分别将各组的青贮饲料混合均匀,准确称取20克青贮饲料,加入180ml蒸馏水,搅拌均匀,用组织捣碎机搅碎1min静置沉淀,然先后用四层纱布和定性滤纸过滤,滤出草渣得到浸出液,用pH计直接测定浸出液的pH值即青贮饲料的pH值。
高效液相测定有机酸含量的方法:设备型号Agilent 1260,色谱柱Agilent SB-C18;液相条件:流动相A为乙腈,流动相B为0.08%的磷酸溶液,A:B=5:95;检测波长200nm,流速0.7mL/min;上样量10μL。
实施例1
取市售青贮玉米秸秆20g,放置于的500mL的三角瓶中(瓶中含180mL无菌水),密封,置于摇床上以150r/min摇动2h,吸取1mL上清液加入到9mL无菌水中,漩涡振荡,而后利用无菌水进行稀释,稀释成10-4、10-5、10-6、10-7等4个梯度,分别取4个梯度的菌液100μL涂布于改良的固体MRS平板培养基上,30℃厌氧培养48-72h,根据菌落颜色、大小、光泽、是否有透明圈等挑取单菌落,将挑取单菌落在MRS固体培养基上划线,30℃恒温厌氧培养24-60h,按上述方式重复划线分离培养3次,直至培养物形态单一,即获得纯的培养物。
将该纯培养物,转接至改良的MRS培养基中培养24h后测定发酵液中的pH为4.45,并利用高效液相色谱法测定发酵液中有机酸,该培养物乳酸含量为6.89g/L,乙酸含量为0.52g/L,丙酸为0.36g/L,无丁酸产生,乳酸浓度/乙酸浓度比值为13.25。高效液相测定有机酸含量的方法:设备型号Agilent 1260,色谱柱Agilent SB-C18;液相条件:流动相A为乙腈,流动相B为0.08%的磷酸溶液,A:B=5:95;检测波长200nm,流速0.7mL/min;上样量10μL。
挑取该培养物使用改良的MRS液体培养基培养24h,菌落数可达到1.5×109cfu/mL(通过涂布平板菌落计数),离心收集菌体,待用,用于制备玉米青贮试验。
制备青贮饲料:将该纯培养物接种至玉米秸秆中,具体为:全株玉米于蜡熟期收获切碎至1-3cm长,并将上述离心后获得纯培养物按试验设计用量2×105cfu/g秸秆溶于500g去离子水中,用喷雾器均匀的喷洒在50kg切碎的全株玉米上,并搅拌均匀;装于青贮袋中,抽真空后封口储存于室温环境中,环境温度为22℃-28℃之间,青贮时间45d,试验后测定青贮秸秆的pH值及有氧稳定性,并进行感官评定。试验做3个平行。青贮完成后,青贮玉米秸秆为黄绿色,具有芳香酸味,外形湿润紧密,感官形象较佳;测定青贮玉米pH为3.89,有氧稳定性时间达到45d,大大延长了青贮饲料的储存周期。
实施例2
取市售青贮苜蓿20g,放置于的500mL的三角瓶中(瓶中含180mL无菌水),密封,置于摇床上以150r/min摇动2h,吸取1mL上清液加入到9mL无菌水中,漩涡振荡,而后利用无菌水进行稀释,稀释成10-4、10-5、10-6、10-7等4个梯度,分别取4个梯度的菌液100μL涂布于改良的固体MRS平板培养基上,30℃厌氧培养48-72h,根据菌落颜色、大小、光泽、是否有透明圈等挑取单菌落,将挑取单菌落在MRS固体培养基上划线,30℃恒温厌氧培养24-60h,按上述方式重复划线分离培养3次,直至培养物形态单一,即获得纯的培养物。
将该纯培养物,转接至改良的MRS培养基中培养24h后测定发酵液中的pH为4.21,并利用高效液相色谱法测定发酵液中有机酸,其中乳酸含量为19.16g/L,乙酸含量为1.98g/L,无丙酸、丁酸产生,乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69。高效液相测定有机酸含量的方法:设备型号Agilent 1260,色谱柱Agilent SB-C18;液相条件:流动相A为乙腈,流动相B为0.08%的磷酸溶液,A:B=5:95;检测波长200nm,流速0.7mL/min;上样量10μL。挑取该培养物使用改良的MRS液体培养基培养24h,培养温度为30℃,该菌株菌落数可达到2.5×109cfu/mL(通过涂布平板菌落计数),离心收集菌体,待用,用于制备苜蓿青贮试验。
制备青贮饲料:以2年生、当年第2次刈割(8月份)的紫花苜蓿为青贮原料,刈割后,植株在阳光下萎蔫4h,切碎至1.0-1.5cm。将该纯培养物接种至苜蓿秸秆中,按试验设计用量5×105cfu/g苜蓿溶于500g去离子水中,用喷雾器均匀的喷洒在30kg切碎的苜蓿上,并搅拌均匀;装于青贮袋中,抽真空后封口储存于室温环境中,环境温度为22℃-28℃之间,青贮周期60d,试验后测定青贮苜蓿的pH值及有氧稳定性,并进行感官评定。试验做3个平行。青贮苜蓿,60d后测定pH为3.98,有氧稳定性时间达到42d,大大延长了青贮饲料的储存周期。
实施例3
将市售菌株棒状乳杆菌,在MRS培养基中培养20h后测定发酵液中的pH为3.95,发酵液中有机酸采用高效液相色谱法测定,其中乳酸含量为28.65g/L,乙酸含量为2.61g/L,丙酸为0.92g/L,无丁酸产生,乳酸浓度/乙酸浓度比值为10.98。此菌株使用MRS液体培养基培养20-24h,离心收集菌体,涂布平板菌落计数,该菌株菌落数可达到3.0×109cfu/mL。
青贮试验:全株玉米于蜡熟期收获切碎至1-3cm长,并将离心后的棒状乳杆菌菌体按试验设计用量1×105cfu/g秸秆溶于500g去离子水中,用喷雾器均匀的喷洒在50kg切碎的全株玉米上,并搅拌均匀;装于青贮袋中,抽真空后封口储存于室温环境中,环境温度为22℃-28℃之间,青贮周期45d,试验后测定青贮秸秆的pH值及有氧稳定性,并进行感官评定。试验做3个平行。45d测定青贮玉米的pH值为3.93,青贮玉米外观为黄绿色,有芳香酸味,感官评定较佳;有氧稳定性时间为41.3d,延长了青贮饲料的保质期。
对比例
将市售菌株布氏乳杆菌(保藏号:CGMCC1.15607)采用MRS培养基,在厌氧条件下,培养24h后测定发酵液的pH为4.41,并用高效液相色谱法测定发酵液中有机酸,乳酸浓度/乙酸浓度比值为13.26,其中乳酸含量为8.57g/L,乙酸含量为0.65g/L,丙酸为0.34g/L,无丁酸产生。该菌株使用改良的MRS液体培养基培养24h,涂布平板菌落计数,该菌株菌落数可达到1.3×109cfu/mL,离心收集菌体,用于制备玉米青贮试验。
制备青贮饲料:
全株玉米于蜡熟期收获切碎至1-3cm长,并将上述离心后的菌体按试验设计用量2×105cfu/g秸秆溶于500g去离子水中,用喷雾器均匀的喷洒在50kg切碎的全株玉米上,并搅拌均匀;装于青贮袋中,抽真空后封口储存于室温环境中,环境温度为22℃-28℃之间,青贮周期45d,试验后测定青贮秸秆的pH值及有氧稳定性,并进行感官评定。试验做3个平行。45d后测定青贮秸秆的pH为3.83,有氧稳定性时间为15.5d;青贮秸秆颜色为黄褐色,有浓的酸味,秸秆外观湿润,感官评价较好。
Claims (8)
1.一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法,其特征在于:将青贮饲料发酵剂种于培养基中在厌氧条件下培养至体系pH为3.95-4.45,且体系内乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69~13.25,将所得培养液离心,收集沉淀将其接种至青贮原料发酵成青贮饲料,即可提高青贮饲料有氧稳定性。
2.按权利要求1所述的提高青贮饲料有氧稳定性的方法,其特征在于:所述青贮饲料发酵剂接种于培养基中在厌氧条件下培养至体系pH为3.95-4.45,且体系内乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69~13.25,丙酸浓度在小于等于0.92g/L,将所得培养液离心,收集沉淀将其按以1×105cfu/g~5×105cfu/g(青贮饲料)接种至青贮原料中,发酵成青贮饲即可提高青贮饲料有氧稳定性。
3.按权利要求1或2所述的提高青贮饲料有氧稳定性的方法,其特征在于:所述培养基为改良的MRS培养基。
4.按权利要求3所述的提高青贮饲料有氧稳定性的方法,其特征在于所述改良的MRS培养基配方为:蛋白胨10.0-20g/L,牛肉膏10.0-16g/L,酵母粉5.0-8.8g/L,葡萄糖20.0-30g/L,乙酸钠2.8-8.6g/L,磷酸氢二钾2.0g/L,柠檬酸氢二铵2.0g/L,MgSO4·7H2O 0.2g/L,MnSO4·4H2O 0.05g/L,吐温-801mL,pH 6.2~6.4。
5.按权利要求2所述的提高青贮饲料有氧稳定性的方法,其特征在于:所述青贮饲料发酵剂培养后,培养物的细胞数达到5×108cfu/mL-4×109cfu/mL,且发酵液的pH值达到3.95-4.45,乳酸浓度/乙酸浓度比值为9.69~13.25,丙酸浓度在小于等于0.92g/L。
6.按权利要求1或2所述的提高青贮饲料有氧稳定性的方法,其特征在于:所述青贮饲料原料为全株玉米、不带穗玉米秸秆、苜蓿,也适用于其他可以青贮的其他秸秆类植物。
7.按权利要求1或2所述的提高青贮饲料有氧稳定性的方法,其特征在于:所述青贮饲料发酵剂为乳酸菌和/或青贮饲料培养物。
8.按权利要求7所述的提高青贮饲料有氧稳定性的方法,其特征在于:所述乳酸菌为布氏乳杆菌、短乳杆菌、棒状乳杆菌、希氏乳杆菌、乳脂明串球菌中的一种或几种。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011518180.4A CN112640997A (zh) | 2020-12-21 | 2020-12-21 | 一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011518180.4A CN112640997A (zh) | 2020-12-21 | 2020-12-21 | 一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112640997A true CN112640997A (zh) | 2021-04-13 |
Family
ID=75358482
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202011518180.4A Pending CN112640997A (zh) | 2020-12-21 | 2020-12-21 | 一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN112640997A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115669809A (zh) * | 2022-10-17 | 2023-02-03 | 湖南农业大学 | 一种玉米青贮添加剂 |
CN116790423A (zh) * | 2023-05-18 | 2023-09-22 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一株短乳杆菌及其在玉米或水稻秸秆微贮中的应用 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104365995A (zh) * | 2014-11-22 | 2015-02-25 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种用于制备青贮饲料的微生物添加剂 |
CN107828681A (zh) * | 2017-11-06 | 2018-03-23 | 四川省草原科学研究院 | 高寒牧区裹包青贮用混合乳酸菌制剂 |
CN108570421A (zh) * | 2017-03-09 | 2018-09-25 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 一株植物乳杆菌菌株及其青贮饲料发酵剂 |
CN108935972A (zh) * | 2018-05-14 | 2018-12-07 | 中国科学院微生物研究所 | 一种饲用大豆与甜高粱混贮的方法 |
CN111534456A (zh) * | 2020-04-03 | 2020-08-14 | 中国科学院微生物研究所 | 一种复合乳酸菌剂及其在甘蔗尾叶青贮中的应用 |
-
2020
- 2020-12-21 CN CN202011518180.4A patent/CN112640997A/zh active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104365995A (zh) * | 2014-11-22 | 2015-02-25 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种用于制备青贮饲料的微生物添加剂 |
CN108570421A (zh) * | 2017-03-09 | 2018-09-25 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 一株植物乳杆菌菌株及其青贮饲料发酵剂 |
CN107828681A (zh) * | 2017-11-06 | 2018-03-23 | 四川省草原科学研究院 | 高寒牧区裹包青贮用混合乳酸菌制剂 |
CN108935972A (zh) * | 2018-05-14 | 2018-12-07 | 中国科学院微生物研究所 | 一种饲用大豆与甜高粱混贮的方法 |
CN111534456A (zh) * | 2020-04-03 | 2020-08-14 | 中国科学院微生物研究所 | 一种复合乳酸菌剂及其在甘蔗尾叶青贮中的应用 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
黄峰等: "青贮微生物及其对青贮饲料有氧稳定性影响的研究进展", 《动物营养学报》 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115669809A (zh) * | 2022-10-17 | 2023-02-03 | 湖南农业大学 | 一种玉米青贮添加剂 |
CN116790423A (zh) * | 2023-05-18 | 2023-09-22 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一株短乳杆菌及其在玉米或水稻秸秆微贮中的应用 |
CN116790423B (zh) * | 2023-05-18 | 2023-11-28 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一株短乳杆菌及其在玉米或水稻秸秆微贮中的应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106148249B (zh) | 一种适用于牧草青贮的乳酸菌菌剂及其应用 | |
CN102864095B (zh) | 一株用于青贮苜蓿的植物乳杆菌及其使用方法 | |
CN108330080B (zh) | 一种含有布氏乳杆菌的饲料青贮剂及其制备方法和应用 | |
CN107047978A (zh) | 一种植物乳杆菌及其在制备青贮饲料中的应用 | |
CN102864094B (zh) | 一株用于青贮玉米的乳酸菌及其使用方法 | |
CN107034156A (zh) | 植物乳杆菌及其应用 | |
CN106635911A (zh) | 一种复合菌种发酵剂及青贮饲料的制备方法 | |
CN102864093B (zh) | 一株适用于青贮稻草的植物乳杆菌及其使用方法 | |
NZ525289A (en) | Mixed cultures for improved fermentation and aerobic stability of silage | |
AU2002239449A1 (en) | Mixed cultures for improved fermentation and aerobic stability of silage | |
CN112640997A (zh) | 一种提高青贮饲料有氧稳定性的方法 | |
CN105851501A (zh) | 一种混合青贮饲料及其制备方法 | |
Stirling | Bacterial changes in experimental laboratory silage | |
CN108998387B (zh) | 一种用于甘蔗尾叶青贮的乳酸菌组合制剂及其应用 | |
CN102994421B (zh) | 一株适用于青贮燕麦的乳酸菌及其应用 | |
CN106615609B (zh) | 一种可提高饲料青贮品质的布氏乳杆菌及其应用 | |
CN108102975A (zh) | 一株用于发酵青绿饲料的植物乳杆菌及其菌剂的生产方法 | |
CN102450525A (zh) | 一种豆科牧草的青贮复合菌添加剂 | |
CN109971667A (zh) | 一株猪源植物乳杆菌及应用 | |
CN109943505A (zh) | 一种用于无害化处理粪渣卧床垫料的复合益生菌菌剂 | |
CN117778278B (zh) | 一种复合乳酸菌青贮添加剂及其制备方法和应用 | |
RU2789442C1 (ru) | Биопрепарат для консервирования растительных кормов и способ его получения | |
CN112852673B (zh) | 一株黑麦草青贮菌株及其应用 | |
CN112899197B (zh) | 复合微生物菌剂及其制备和在饲料添加剂中的应用 | |
CN117551581A (zh) | 一种新型纤维素分解菌以及青贮饲料发酵剂 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210413 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |