CN112626200B - 血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1在子宫内膜异位症诊断及复发预测中的用途 - Google Patents
血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1在子宫内膜异位症诊断及复发预测中的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112626200B CN112626200B CN202110033775.9A CN202110033775A CN112626200B CN 112626200 B CN112626200 B CN 112626200B CN 202110033775 A CN202110033775 A CN 202110033775A CN 112626200 B CN112626200 B CN 112626200B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- endometriosis
- serum
- microvesicle
- lgmnp1
- pseudogene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/118—Prognosis of disease development
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
血清微囊泡‑天冬酰胺内肽酶假基因1在制备作为诊断子宫内膜异位症或者预测子宫内膜异位症复发的生物标记物的用途,血清微囊泡‑天冬酰胺内肽酶假基因1的基因序列如SEQ ID NO.1所示。还提供了用于诊断子宫内膜异位症或者预测子宫内膜异位症复发的试剂盒,含有检测EV‑LGMNP1的试剂,包括上游引物序列、下游引物序列和探针,其序列如SEQ ID NO.5‑7所示。发现内异症患者血清中可检测到EV‑LGMNP1,并且其表达水平明显高于非内异症女性,且在子宫内膜异位症复发患者中表达明显增高,因此,血清EV‑LGMNP1可成为诊断子宫内膜异位症、预测子宫内膜异位症复发及病情监测的新型非侵入性生物标志物。
Description
技术领域
本发明属于医学检测领域,涉及一种诊断标记物,具体来说是循环微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1(EV-LGMNP1)在制备作为诊断子宫内膜异位症或者预测子宫内膜异位症复发的标记物和诊断试剂盒中的用途。
背景技术
子宫内膜异位症(endometriosis,EMs/EMT,简称“内异症”)是一种具有侵袭性、***依赖性的疾病,以子宫内膜的腺体和基质存在子宫体以外的其他部位为特点。子宫内膜异位症轻度病变可有器官表面的微小病灶,重度病变可导致盆腔脏器肠管、膀胱、输尿管的广泛性粘连。子宫内膜异位症的主要临床表现为疼痛和***,在全球范围内6%-10%的生育年龄女性受其影响,严重影响女性生活质量。同时,内异症虽然是一种良性疾病,但具有侵袭、复发等类似于肿瘤的恶性行为特征,容易复发,且复发形式多样,严重影响育龄女性的身心健康。此外,内异症的发病机制至今尚未完全明了,缺乏特异性血清标志物及有效的复发预测手段,导致难以对其进行早期诊断和预后评估。因此,积极探索一种无创性诊断内异症及预测内异症复发的生物标志物,有助于监测内异症的病情进展,促进内异症的早期诊断、干预和治疗。
目前在生物标志物中,组织标志物存在标本采集、无法连续监测和随访等诸多限制,不利于临床开展和推广应用。现有的外周血标志物如CA125等特异性差,不足以早期诊断内异症。最近,基于液态活检的循环生物标志物受到重视。液态活检三大来源主要是:循环肿瘤DNA、循环肿瘤细胞和微囊泡(外泌体)。微囊泡,是细胞外环境的重要成分之一,是30-150nm膜结合分泌囊泡,容易从各种生物体液中分离。微囊泡存在于血液、尿液、腹水等人体大多数体液中,可携带多种生物活性物质,包括蛋白质、脂质、及遗传物质如信使RNA(messenger RNA,mRNA),微小RNA(microRNA,miRNA)及长链非编码RNA(long non-codingRNA,lncRNA)等。微囊泡的稳定性极高,在各种冷冻冷藏和解冻条件下都可保存长达数年,含量也极为丰富,每毫升血浆中就含有108-13个微囊泡。这些优点赋予了微囊泡成为新型标志物的可能性。目前认为,循环血液中的各种RNA是由相关微囊泡释放而来,同时也正是由于微囊泡的保护,使循环血液中的各种RNA免遭降解。因此,基于液态活检技术探寻微囊泡来源的特异性RNA分子,或能为内异症的早期诊断及病情监测带来新的契机。
在微囊泡的运载成分中,lncRNA受到广泛关注。已有研究表明微囊泡可作为功能性lncRNA的运输载体,诱导受体细胞内的表型改变,参与肿瘤的发生发展;并能成为肿瘤诊断,预后预测的潜在标志物。然而在内异症中,国内外鲜见微囊泡lncRNA的研究报道。
发明内容
本发明的目的在于提供血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1(EV-LGMNP1)的用途,所述的这种循环血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1(EV-LGMNP1)的用途在于解决现有技术中难以对子宫内膜异位症进行早期诊断及早期预测复发的技术问题。
本发明提供了血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1在制备作为诊断子宫内膜异位症的生物标记物的用途,所述的血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1的基因序列如SEQID NO.1所示。
本发明还提供了血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1在制备作为预测子宫内膜异位症复发的生物标记物的用途,所述的血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1的基因序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了一种用于诊断子宫内膜异位症的试剂盒,含有检测血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1(EV-LGMNP1)的试剂,所述的试剂包括上游引物序列、下游引物序列和探针,所述上游引物序列如SEQ ID NO.5所示,所述下游引物序列如SEQ ID NO.6所示,所述的探针序列如SEQ ID NO.7所示。
本发明还提供了一种用于预测子宫内膜异位症复发的试剂盒,含有检测血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1(EV-LGMNP1)的试剂,所述的试剂包括上游引物序列、下游引物序列和探针,所述上游引物序列如SEQ ID NO.5所示,所述下游引物序列如SEQ ID NO.6所示,所述的探针序列如SEQ ID NO.7所示。
本发明和已有技术相比,其技术效果是积极和明显的。本发明发现:(1)微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1(EV-LGMNP1)介导异位子宫内膜***和巨噬细胞的交互对话,促进局部内异症微环境中巨噬细胞向M2型极化,具有监测内异症病情进展的潜能。(2)另一方面,内异症患者血清中可检测到微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1(EV-LGMNP1),并且其表达水平明显高于非内异症女性,具有诊断内异症的潜能。(3)在内异症复发患者中,其术前血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1(EV-LGMNP1)表达明显高于非复发患者,表明该指标具有成为术前预测内异症复发的生物学标记物潜能。因此,液体活检循环微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1(EV-LGMNP1)可以成为内异症诊断及复发病情监测的新型非侵入性生物标志物。
附图说明
图1:鉴定来源于异位内膜***(Ecto-ESCs)上清液中的微囊泡(EV/Ecto-ESCs)。
图2:Ecto-ESCs所释放的微囊泡(EV/Ecto-ESCs)被受体细胞人髓系白血病单核细胞(THP-1)内吞,诱导THP-1向M2型巨噬细胞极化。
图3:Ecto-ESCs过表达的LGMNP1可经微囊泡递至受体细胞THP-1,上调下游靶基因天冬酰胺内肽酶(LGMN),促进THP-1向M2型巨噬细胞极化。
图4:血清EV-LGMNP1在内异症患者中的表达显著高于非内异症女性,在复发患者中显著高于非复发者。
图5:血清EV-LGMNP1是预测内异症复发的独立预后因素。
具体实施方式
实施例1异位子宫内膜***(Ecto-ESCs)上清液微囊泡(EV/Ecto-ESCs)的提取及鉴定
细胞上清液微囊泡提取和鉴定过程:
1)原代培养异位子宫内膜***(1#和2#Ecto-ESCs)
2)使用免疫组化方法,利用vimentin(波形蛋白)、cytokeratin(角蛋白)、CD45和CD10等特异标记对Ecto-ESCs进行鉴定。
3)用微囊泡抽提试剂盒ExoQuick EV precipitation solution kit(catalogueno.EXOTC50A-1;System Biosciences,Palo Alto,California)提取上述细胞上清液中微囊泡。
4)微囊泡的透射电子显微镜(Transmission electron microscope,TEM)鉴定:取上述得到的微囊泡溶液20ul,加入20uL PBS稀释后滴加到显微镜专用的载样铜网上,室温放置3分钟,晾干,吸取3%磷钨酸钠溶液20ul滴加至铜网进行负染1分钟,吸纸吸去多余液体。铜网放置到电镜中进行抽真空后,观察并拍照如图1B。
5)使用纳米粒度仪检测EV/Ecto-ESCs径粒:使用PBS将所提取的EV/Ecto-ESCs适度稀释,重悬至1.5-3mL,充分吹打混匀。上机,在纳米粒度仪NS300下采用动态光散射法测定其粒径。
6)Western blot鉴定微囊泡表面标志性蛋白:利用微囊泡表面标志性蛋白CD9,CD63,TSG101,HSP70抗体作为阳性标志物,Calnexin抗体作为阴性对照标志物,通过Western blot试剂盒进行鉴定。
我们发现:如图1A所示,成功培养原代Ecto-ESCs。如图1B-1C所示,用透射显微电镜及NTA对所分离的Ecto-ESCs上清液中微囊泡进行鉴定,可见电镜下所分离到的微囊泡表现为圆形形态,大小较一致的颗粒,直径在50-150nm。然后进行Western blot进一步鉴定,如图1D所示,可检测到微囊泡表面标志性蛋白CD9,CD63,HSP70,TSG101的表达,同时阴性对照Calnexin阴性。以上结果表明本发明成功提取了Ecto-ESCs上清液中的微囊泡(EV/Ecto-ESCs)。
实施例2异位子宫内膜***分泌的微囊泡(EV/Ecto-ESCs)被受体细胞THP-1内吞,并诱导THP-1向M2型巨噬细胞极化
微囊泡的标记及内吞实验:
1)将微囊泡用绿色染料PKH67(green dye,Sigma-Aldrich,St.Louis,MO,USA)标记。
2)将异位子宫内膜***分泌的微囊泡(EV/Ecto-ESCs)与受体THP-1共培养,16小时后利用荧光显微镜观察微囊泡的内吞现象。
受体细胞THP-1向M2型巨噬细胞极化验证:
使用实时荧光定量PCR法及Western blot鉴定THP-1细胞中特异性M1型分子CD86及M2型分子CD206的表达情况,qRT-PCR中以GAPDH为内参,引物序列如下。
表1 CD86,CD206引物序列
Target Gene | Primer | Sequence |
GAPDH | forward | 5'-gtctcctctgacttcaacagcg-3'(SEQ ID NO.2所示) |
reverse | 5'-accaccctgttgctgtagccaa-3'(SEQ ID NO.3所示) | |
CD 86 | forward | 5'-ctgctcatctatacacggttacc-3'(SEQ ID NO.11所示) |
reverse | 5'-ggaaacgtcgtacagttctgtg-3'(SEQ ID NO.12所示) | |
CD 206 | forward | 5'-tccgggtgctgttctccta-3'(SEQ ID NO.13所示) |
reverse | 5'-ccagtctgtttttgatggcact-3'(SEQ ID NO.14所示) |
反应体系如下:
混合吹打反应体系,并以6000rpm短暂离心去除气泡,后放入荧光定量PCR仪中,按95℃10分钟预变性;进入循环:变性95℃15秒——退火60℃45秒——延伸75℃15秒,共40个循环;PCR结束后绘制熔解曲线(60℃1分钟——95℃15秒——60℃15秒)进行扩增。
我们发现:如图2A所示,Ecto-ESCs所释放的微囊泡(EV/Ecto-ESCs)能被受体细胞THP-1内吞,提示微囊泡能从供体异位子宫内膜***(Ecto-ESCs)转运至受体细胞THP-1。如图2B所示,受体细胞THP-1在内化EV/Ecto-ESCs后,在mRNA及蛋白质水平,其M1型特异性分子CD86表达下降,M2型特异性分子CD206表达上升,初步提示EV/Ecto-ESCs促进THP-1向M2型极化。(Western blot也证实了上述的实验结果)
实施例3供体Ecto-ESCs分泌的过表达的EV-LGMNP1能促进受体细胞THP-1向M2型巨噬细胞极化,并上调下游靶基因LGMN
过表达慢病毒载体构建及细胞转染实验
1)慢病毒载体构建:选择慢病毒载体,根据引物设计原则,选择特异性引物,特异扩增LGMNP1基因片段(来自:>NC_000013.11:c64959518-64957561Homo sapienschromosome 13,GRCh38.p13 Primary Assembly,如SEQ ID NO.1所示)。通过两端酶切位点,将基因片段LGMNP1与酶切过的慢病毒载体连接,将其转入制备好的感受态细菌中,经培养后对单克隆菌落行PCR鉴定,随后测序对比、挑选成功表过表达LGMNP1的慢病毒载体。
2)慢病毒包装及测定:使用transgene reagent将测序正确的慢病毒LGMNP1过表达载体与其余辅助质粒共同转染HEK293T细胞,转染12小时后加入Enhancing buffer继续培养4小时后,使用新鲜的培养基继续培养48小时,随后收集细胞上清液,进一步浓缩并检测病毒滴度。
3)感染Ecto-ESCs后,加入适当浓度的嘌呤霉素进行压力筛选,随后进行鉴定,收集细胞提取总RNA,qRT-PCR验证Ecto-ESCs中LGMNP1过表达慢病毒转染效率。
qRT-PCR验证过表达的LGMNP1能经微囊泡传递给THP-1
1)为确保lncRNA-PCR反应体系稳定性、重复性和可信度,对LGMNP1及LGMN的检测采取探针法,以GAPDH为内参,使用TaqMan Universal Master Mix-II with UNG(AppliedBiosystems,美国)试剂,对Ecto-ESCs,EV/Ecto-ESCs及共培养后THP-1细胞进行LGMNP1表达的qRT-PCR检测,引物如下。
表2 LGMNP1,LGMN引物序列
2)反应体系如下:
2×TaqMan Universal Master Mix-II with UNG | 10μL |
模板cDNA | 1μL(100ng) |
probe-primer mix | 1μL |
ddH2O | 8μL |
总体积 | 20μL |
混合吹打反应体系,扩增过程:50℃2分钟,95℃10分钟预变性;进入循环:变性95℃15秒——退火延伸60℃1分钟,共45个循环;过程中使用阴性对照(NTC)排除假阳性。
qRT-PCR及Western blot检测CD206,CD86、LGMN的表达
使用qRT-PCR及Western blot验证与对照组及过表达组Ecto-ESCs所分泌的EVs(EV/NC vs.EV/OE)共培养THP-1中CD86,CD206,LGMN的表达(方法同前述)。
我们发现:如图3A所示,供体异位子宫内膜***(Ecto-ESCs)能通过微囊泡运输LGMNP1至受体细胞THP-1;如图3B-3C显示,内化过表达LGMNP1的微囊泡后,受体细胞THP-1可向M2型巨噬细胞极化,并上调下游靶基因LGMN。
实施例4内异症患者和对照组血清微囊泡LGMNP1(EV-LGMNP1)的表达情况血清微囊泡提取过程:
1)将组织库收集的外周血清样本从-80℃取出,放置于室温(15-25℃)下复融后在3000g条件下离心15分钟,以充分移除细胞或细胞碎片。
2)用移液枪吸出上清液,将上清液转移至灭菌后的离心管中,使用ExoQuick EVprecipitation solution kit(catalogue no.EXOQ5A-1;System Biosciences,PaloAlto,California)提取EVs,参照说明书,以样本体积:ExoQuick体积=4:1为准,将ExoQuick-EXOQ5A-1试剂加入离心管中。
3)离心管上下颠倒混匀,4℃静止孵育60分钟。1500g下,离心30分钟,离心结束后弃去上清。继续在1500g下离心6分钟,去除残留的上清。加入1×PBS重悬EVs沉淀。4)EVs的TEM,NTA及WB鉴定方法同第一部分。
内异症患者和对照组血清微囊泡LGMNP1(EV-LGMNP1)的表达情况
使用实时荧光定量PCR法检测EV-LGMNP1表达水平(具体方法同前述)。
我们发现:提取血清微囊泡后,如图4A所示,通过qRT-PCR的方法对52例内异症患者及21例对照组的血清微囊泡LGMNP1(EV-LGMNP1)进行了检测,结果显示内异症患者血清微囊泡LGMNP1(EV-LGMNP1)的含量明显高于对照组(P=0.0106)。且如图4B所示,在内异症患者中,复发人群的微囊泡LGMNP1(EV-LGMNP1)的表达明显增高(P=0.0004)。
实施例5内异症患者中血清微囊泡-LGMNP1(EV-LGMNP1)的表达与临床预后的相关性分析
在52例内异症患者中,使用Kaplan-Meier方法,结合单因素Log-rank及多因素Cox回归分析无复发生存(Recurrence free survival,RFS),并描述95%置信区间(Confidence intervals,CIs)。基于Cox分析结论,以有临床意义、有独立预后意义的因素为基础,使用R语言(Version 3.5.3)构建诺曼图(Nomogram)预测复发的模型。此外,根据外周血EV-LGMNP1的检测水平,绘制受试者工作特征曲线(Receiver operatingcharacteristic,ROC)了解外周血EV-LGMNP表达水平对预测复发的价值,计算约登指数,根据最大值决定最佳界限值(Cut-off value),并计算对应灵敏度及特异度。P<0.05被判定为具有统计学差异。
我们发现:如图5A-5B所示,EV-LGMNP1高表达(p=0.012)、子宫直肠陷凹完全封闭(p=0.026)是内异症复发的独立预后因素。如图5C-5E所示,基于此构建的预测内异症复发的Nomogram模型的C指数(C-index)可达0.836(95%置信区间:0.775-0.898)。使用校正曲线对其进行内部检验发现,该模型可有效预测术后48月和54月的RFS。如图5F所示,基于EV-LGMNP1的表达水平绘制ROC结果提示:以外周血EV-LGMNP1高于2.338倍表达差异为标准,预测内异症复发的灵敏度为93.3%,特异度为75.5%,曲线下面积(Ander the curve,AUC)可达0.869(95%置信区间:0.774-0.963)。
序列表
<110> 复旦大学附属妇产科医院
<120> 血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1在子宫内膜异位症诊断及复发预测中的用途
<160> 14
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1958
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
ttctcacggt cccgctgccg ccaccaccgc ggtcactcgg caccgcggct gccactgctg 60
ccaccactgc caccacgatc gcttatcaca ggtttctgca gttgaactcc aaagtgcaga 120
aggctttgga aagtagctgt attcctcagc gtggcactgg gcactggtgc tgttcccata 180
gatgatcctg aagatggacg caagcactgg gtggtgatcg tggcgggttc aaatggctgg 240
tataattaca ggcaccaggc agctgcgtgc catgcctacc agatcattta ctggaatggg 300
attccagacg agcacatcat tgttatgatg tacgatgaca ctgctcactc tgaagacaat 360
cccactccag gaattgtgat caacagaccc aatggcacgg atgtctatca gggattcccg 420
aaggactgac tacactggag aggatgttac cccacaaaat ttccttgctg tgttgacagg 480
cgatgcagaa gcagtgaagg gcataggaac cgggaaagtc ctgaagagcg gtccccagga 540
tcatgtatgt gttcgtttac ttcactgacc atggatctac tggaatactg gtttttccca 600
atgaagatct tcatgtaaag tacctgaatg agaccatcca ttacatgtac atacataaaa 660
tgtaccaaaa gatggtgttc tatattgaag cctgtgagtc tgggtccatg atgaaccacc 720
tgcctggtga tactaatgtt tatgcaacta ctgctgccaa ccccagagag tcgtcctaca 780
cctgttacta tgatgagaag aggtcgacgt acctggggga ctggtacagc gtcaactgga 840
tggaagactc ggacgtggaa gatctgacta accagaccct gcacaagcag tgccgcctgg 900
taaaatcata caccaatacc agccacatca tgcagtacgg aaacgaaacg atctccacat 960
taaagtgatg cagtttcaga gtatgaaaca caaagccagt tctcctatct ccctgcctcc 1020
agtcacacac cttgacctca cccccagccc tgatgtgccc ctcatgatcg tgaaaaggaa 1080
actgatgaac accaacgatc tggaggactc caggcagctc acagaggaga tccagcggca 1140
tctggatgcc aggcacctca ttgagaagtc agtgcgcaag atcgcctcct tgctggcagc 1200
gtccgaggct gaggtggagc agctcctgtc tgagagagcc ccgttcacgg ggcatagctg 1260
ctacctggag gccctgctgc acttccagac ccactgcttc aactggcact cccccacgtg 1320
cgagtatgcg ttgagacatt tgtacgtgct ggccaacctt tgtgagaaac cgtatccgct 1380
tcacaggata aaattgtcca tggaccacgt gtgcctcggt cgctactgaa gagctgcctc 1440
ctggaagctt ttccaagtgg aagcactccc ccgaatgtgt gctaatcaga gactgaagag 1500
gtggagtgag aagtccccgc tgctccgggc cctcctgggg agtccccact ctagggctcg 1560
ctccaggacc ttcctcacag gatgacttgc tcgctgttac ctacttcccc agtcttctct 1620
gaaaacctac aaattggagt ggggaaagct ctgtattgag aagggtcata tttgctttct 1680
aggaggtttt tttgttttgt ttttgttttg cccattagtt ttaaggagca ggaagttcat 1740
gggggcttct gtagccccgc tcaaaaggag tctttattct gagaaatttg aagctgaaac 1800
ccctttaaat cttcagaatg attttattga agggggccgc aagccccaaa tggaaaacta 1860
tttttagaaa atattatgat tttttattgc ttttgtattt agttctgcca gtgttcaagt 1920
actaaaaaat aaagatttat aacagagtcc caccaaaa 1958
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gtctcctctg acttcaacag cg 22
<210> 3
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
accaccctgt tgctgtagcc aa 22
<210> 4
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
cggccatcac gccacagttt cc 22
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
tatgcaacta ctgctgccaa c 21
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
ccacgtccga gtcttccatc 20
<210> 7
<211> 14
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
caagcagtgc cgcc 14
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
catagctcca ccagtcaccg 20
<210> 9
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
tcacaccaaa cacccacga 19
<210> 10
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
cacaagcagt accacc 16
<210> 11
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
ctgctcatct atacacggtt acc 23
<210> 12
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
ggaaacgtcg tacagttctg tg 22
<210> 13
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
tccgggtgct gttctccta 19
<210> 14
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
ccagtctgtt tttgatggca ct 22
Claims (2)
1.检测血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1的引物在制备诊断子宫内膜异位症试剂盒中的用途,所述的血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1的基因序列如SEQ ID NO.1所示,所述的试剂盒含有检测血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1的试剂,所述的试剂包括上游引物序列、下游引物序列和探针,所述上游引物序列如SEQ ID NO.5所示,所述下游引物序列如SEQ ID NO.6所示,所述的探针序列如SEQ ID NO.7所示。
2.检测血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1的引物在制备预测子宫内膜异位症复发的试剂盒中的用途,所述的血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1的基因序列如SEQ IDNO.1所示,所述的试剂盒含有检测血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1的试剂,所述的试剂包括上游引物序列、下游引物序列和探针,所述上游引物序列如SEQ ID NO.5所示,所述下游引物序列如SEQ ID NO.6所示,所述的探针序列如SEQ ID NO.7所示。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110033775.9A CN112626200B (zh) | 2021-01-12 | 2021-01-12 | 血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1在子宫内膜异位症诊断及复发预测中的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110033775.9A CN112626200B (zh) | 2021-01-12 | 2021-01-12 | 血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1在子宫内膜异位症诊断及复发预测中的用途 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112626200A CN112626200A (zh) | 2021-04-09 |
CN112626200B true CN112626200B (zh) | 2022-07-22 |
Family
ID=75294033
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110033775.9A Active CN112626200B (zh) | 2021-01-12 | 2021-01-12 | 血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1在子宫内膜异位症诊断及复发预测中的用途 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN112626200B (zh) |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010500967A (ja) * | 2006-07-20 | 2010-01-14 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション | コンビナトリアルターゲティングを通じたプロトキシンの選択的活性化のための方法、組成物、およびキット |
CA2710828A1 (en) * | 2008-01-07 | 2009-07-16 | Dynamic Throughput Inc. | Discovery tool with integrated microfluidic biomarker optical detection array device and methods for use |
CN108676874B (zh) * | 2018-08-27 | 2021-05-18 | 复旦大学附属妇产科医院 | 循环外泌体长链非编码rna-tc0101441作为诊断子宫内膜异位症的标记物用途 |
-
2021
- 2021-01-12 CN CN202110033775.9A patent/CN112626200B/zh active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN112626200A (zh) | 2021-04-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Schoenfeld et al. | The detection of micrometastases in the peripheral blood and bone marrow of patients with breast cancer using immunohistochemistry and reverse transcriptase polymerase chain reaction for keratin 19 | |
van der Toom et al. | Prostate-specific markers to identify rare prostate cancer cells in liquid biopsies | |
AU2011250588C1 (en) | Method for the diagnosis of epithelial cancers by the detection of EpICD polypeptide | |
Jin et al. | Liquid biopsy in uveal melanoma: are we there yet? | |
Ferrara et al. | Beyond liquid biopsy: Toward non-invasive assays for distanced cancer diagnostics in pandemics | |
JP2014513959A (ja) | 新生物の診断方法 | |
Li et al. | The universal overexpression of a cancer testis antigen hiwi is associated with cancer angiogenesis | |
Chen et al. | Breast cancer plasma biopsy by in situ determination of exosomal microRNA-1246 with a molecular beacon | |
AU2011250588A1 (en) | Method for the diagnosis of epithelial cancers by the detection of EpICD polypeptide | |
CN109609630B (zh) | 用于早期胃癌诊断的分子标志物及其应用 | |
AU2020214287A1 (en) | Novel biomarkers and diagnostic profiles for prostate cancer | |
Song et al. | Exosomes in urological diseases-biological functions and clinical applications | |
Guo et al. | Appraising the Value of Serum and Serum-Derived Exosomal LncRNA-EXOC7 as a Promising Biomarker in Cervical Cancer. | |
Zhao et al. | Exosome-driven liquid biopsy for breast cancer: recent advances in isolation, biomarker identification and detection | |
CN112626200B (zh) | 血清微囊泡-天冬酰胺内肽酶假基因1在子宫内膜异位症诊断及复发预测中的用途 | |
CN108753980A (zh) | 一种甲状腺微小***状癌的转移性筛查的筛查试剂盒 | |
CN111500736A (zh) | ***的诊治标志物-非编码rna | |
CN110257514A (zh) | 一种新的食管癌血液miRNA标志物及其应用 | |
Rao et al. | Tissue-derived exosome proteomics identifies promising diagnostic biomarkers for esophageal cancer | |
CN105288659A (zh) | Tenm1基因及其表达产物在诊治***状腺癌的应用 | |
CN114582509A (zh) | 一种葡萄膜黑色素瘤预后风险评分模型及其应用 | |
CN115305283A (zh) | 一种外泌体小非编码rna分子标志物及其应用 | |
CN111454949A (zh) | 长链非编码rna linc00702作为诊断和治疗膀胱癌标志物的应用 | |
CN111394471A (zh) | Linc00494作为***诊治标志物的用途 | |
US20210238690A1 (en) | Hla-j and medical/diagnostic uses thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |