CN112603983A - 一种治疗copd伴肺纤维化的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗COPD伴肺纤维化的药物组合物，它包括如下重量份的组分：黄芪3‑15、丹参5‑20、黄芩5‑15、甘草3‑10、红花5‑15、当归5‑15、天丁5‑20、川芎3‑15、五味子3‑15、莪术5‑20。

Description

一种治疗COPD伴肺纤维化的药物组合物
技术领域
本发明属于药物技术领域，具体涉及一种治疗COPD伴肺纤维化的药物组合物。
背景技术
肺间质纤维化(PF)是一种慢性肺间质疾病，基本病变是肺上皮细胞损伤、炎细胞浸润、纤维组织增生，最终肺组织纤维化，引起肺功能损害和呼吸衰竭。很多疾病可以引起肺纤维化，如呼吸***最常见疾病慢性阻塞性肺疾病(COPD)约80％伴纤维化肺纤维化、冠状病毒感染如以前的SARS、目前正在爆发的COVID-19、抗肿瘤药、职业性粉尘及放射线等因素等。肺纤维化可能会成为本次疫情过去后最为严重的并发症，因此，对于高致病性冠状病毒肺炎，早期阶段预防肺纤维化的治疗手段势在必行，通过早期干预，减少并发症，降低死亡率。肺纤维化又可引起慢性肺源性心脏病、肺癌等，它们同肺纤维化一起被称为毁灭性的肺部疾病。
PF病因及其发病机制复杂，确切机制尚不清楚。迄今对各种原因引起的肺纤维化目前仍缺乏有力的针对性药物治疗，治疗效果不佳，其5年生存率仅50％。随着对肺间质纤维化的发病机制的深入研究，早期防治显得尤为重要，是迫在眉睫需要解决的问题。现代医学常规对PF的治疗方法仅仅只能缓解病情，难以达到满意效果，更达不到治愈的目的。目前国内外研究的热点及焦点集中在探寻肺纤维化的致病因素及其发病机制上，寻找能够抑制炎症反应、阻止纤维化进程，从而进一步使得肺纤维化达到逆转的可能且副作用低的有效方法。但目前临床尚无有效的治疗方法，PF现代医学临床常规的治疗方法仅仅只能缓解病情，而达不到完全控制疾病进展，更达不到到治愈的目的。目前已有药物如糖皮质激素联合免疫抑制剂、氧疗法等对其进行治疗，但是发现这些治疗方法对根除这类疾病无显著功效。伴有肺衰竭者，最后只能进行肺的器官移植，效果也差强人意，更主要的是该项手术费用昂贵，技术难度大，供应器官难找。
西医治疗PF难以达到满意效果，故应该发挥中医中药的特有作用。目前中西医结合分别治疗肺纤维化已取得一定进展，但鲜有文献报道，经查阅相关文献资料，治疗慢性阻塞性肺疾病伴肺纤维化兼具预防及抑制肺癌的药物更是未见报道。
发明内容
本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种治疗COPD伴肺纤维化的药物组合物。
为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为：
所述治疗COPD伴肺纤维化的药物组合物包括如下重量份的组分：黄芪3-15、丹参5-20、黄芩5-15、甘草3-10、红花5-15、当归5-15、天丁5-20、川芎3-15、五味子3-15、莪术5-20。
优选地，所述药物组合物包括如下重量份的组分：黄芪3、丹参5、黄芩5、甘草3、红花5、当归5、天丁5、川芎3、五味子3、莪术5。
优选地，所述药物组合物包括如下重量份的组分：黄芪15、丹参20、黄芩15、甘草10、红花15、当归15、天丁20、川芎15、五味子15、莪术20。
优选地，所述药物组合物包括如下重量份的组分：黄芪3、丹参20、黄芩5、甘草10、红花5、当归15、天丁5、川芎15、五味子3、莪术20。
优选地，所述药物组合物包括如下重量份的组分：黄芪15、丹参5、黄芩15、甘草3、红花15、当归5、天丁20、川芎3、五味子15、莪术5。
优选地，所述药物组合物经水煮醇沉法制成浸膏。
更优选地，所述浸膏中生药含量为10g/mL。
本发明所述的药物组合物通过治疗COPD伴肺纤维化，兼具毒杀A549肺癌细胞的作用，可作为A549肺癌细胞毒杀剂应用。
本发明根据活血化瘀、破血散结原则，优化筛选出来药物组合物，用于治疗肺纤维化。方剂由：黄芪3-15g、丹参5-20g、黄芩5-15g、甘草3-10g、红花5-15g、当归5-15g、天丁5-20g、川芎3-15、五味子3-15g、莪术5-20g等组成。黄芪、当归益气活血养血，丹参、红花、川芎、莪术活血化瘀行气，天丁清热利湿化浊，甘草为使调和诸药。本发明应用GHLF改善、缓解肺部纤维化的方法应为首创研究。
总之，本发明所述药物组合物治疗肺纤维化效果良好，可以有效的治疗及改善COPD伴肺部纤维化，明显改善患者临床症状，可以有效的治疗及改善COPD伴肺部纤维化，明显改善患者临床症状，增强患者运动耐力和心肺功能，效果良好。在试管内可提高淋巴细胞转化率、对A549肺癌细胞有明显的毒杀作用，体外抗菌消炎，为中医中药治疗肺纤维化提供坚实的理论基础，为更广泛应用于临床提供理论依据。本发明数据真实可靠，操作规范，符合涉及人的研究伦理要求，符合国家卫生计生委相关规定。
附图说明
图1为治疗前CT片；
图2为治疗后CT片；
图3：左图中较大的是过渡型淋巴细胞：比成熟淋巴细胞稍大；小的是成熟淋巴细胞：也既未转化的细胞，大小同末梢血中未培养的淋巴细胞相一致；右图中较大网状细胞样淋巴细胞：细胞明显增大，为成熟未转化细胞的数倍，形态不规则，大致呈阿米巴样，可见核仁。
具体实施方式
一、该药物组合物对A549肺癌细胞有明显的毒杀作用实验方法：
材料和方法
1、材料
该药物组合物制备,选择上述组分中的组分(黄芪3份、丹参5份、黄芩5份、甘草3份、红花5份、当归5份、天丁5份、川芎3份、五味子3份、莪术5份)草药经水煮醇沉法制成1:10的浸膏；肺癌A549细胞株由友好人士友情提供。
2、方法
参照文献所介绍的方法将肺癌A549细胞培养于含lO％胎牛血清(FBS)DMEM完全培养液中，调配成4×lO5/ml的细胞悬液，接种于96孔平板中，每孔加瘤细胞悬液l00ml。分别加入不同浓度浸膏(共设5个药物浓度组，每组浓度分别为1g、0.4g、0.16g、0.064g、0.0256g/ml，不加中药的试管为空白对照组，每个浓度重复四个相同样本)。每孔加含药溶液lOOμl；空白对照组加入等容积的含8％FBS的DMEM培养液(重复8个相同样本)，放入37℃、5％C02培养箱中，培养48h，吸去上清液，PBS洗2次，加入MTT储液12μl(10mg/m1)，置37℃，5％C02条件下继续培养4h，再去上清液，PBS洗一次，加lOOμl二甲基亚砜(DMSO)溶解MTT还原产生的蓝紫色甲臜颗粒，用酶联免疫检测仪(DG3022A型)测定OD值。测定波长为490nm(有效读数在0.01-1.O之间)。各组药对A549癌细胞MTT OD值的影响及其对肿瘤细胞的杀伤率按下列公式计算：
Figure BDA0002878158000000031
3、结果：
通过计算，得出每组浓度的药物对A549肺癌细胞均有明显的毒杀作用，均可导致癌细胞的死亡，且药物浓度越高，对肿瘤细胞杀伤率越高，即对细胞的毒杀作用越强。
二、该药物组合物对淋巴细胞转化率实验方法：
我们应用微量全血细胞培养法，通过体外实验观察其对人淋巴细胞转化率的影响，综合评估该方剂对人体免疫功能的作用。
材料和方法
1、材料
该药物组合物制备，选择上述组分中的组分(黄芪3、丹参5、黄芩5、甘草3、红花5、当归5、天丁5、川芎3、五味子3、莪术5)草药经水煮醇沉法制成1:10的浸膏。内含植物血凝素(PHA)的RPMI1640完全培养液购自青岛海尔斯生物工程公司(PHA浓度为0.3mg/ml。全血：采自一名三个月内未服用过任何药物的成年人。
2.方法
2.1培养分离淋巴细胞
药物组合物对淋巴细胞转化率的影响参照文献所介绍的方法，将0.2ml含有各种不同中药浓度的药液加入内含全血0.3ml的试管中，共设5个药物浓度组，每组浓度分别为1g、0.4g、0.16g、0.064g、0.0256g/ml，不加中药的试管为对照组。每支试管内加配制好的1640完全培养液2.5ml，各种浓度分别重复两个相同样本。于37℃恒温培养箱中孵育72小时后取出，1500转/分离心10分钟，除去上清液，加入已预温的0、75M氯化钾溶液8ml，用吸管反复吹打充分溶解红细胞，置37℃水浴箱中30分钟，加固定剂1ml(甲醇：冰乙醋＝3:1)混匀后，同样条件离心除上清液，再加8ml固定剂重复上一操作后，得到较纯的淋巴细胞。参照文献资料中正常成年人淋巴细胞转化率作为正常对照值进行统计学处理。
2.2涂片标本制备及镜检
培养结束，吸取淋巴细胞液涂片，烘干，每份标本涂片两张，用Wright-Giemsa氏法染色，由不知道各组药物浓度的医师镜检计数，每片又按头、体、尾分别计数100个淋巴细胞，所得的均值为最后淋巴细胞转化率。
淋巴细胞转化率的计算方法如下：
Figure BDA0002878158000000041
2.3统计学方法
以T检验进行统计学处理
结果
淋巴细胞经加入***原培养后，可转化为各种形态的母细胞，掌握好其形态特点是确定淋巴细胞转化的关键，一般分以下几种类型细胞(如图3所示):
1.网状细胞样淋巴细胞：细胞明显增大，为成熟未转化细胞的数倍，形态不规则，大致呈阿米巴样，核仁明显。
2.淋巴母细胞：比成熟淋巴细胞大3-4倍，胞浆有时伸出伪足或有空泡，核质疏松有核仁。
3.过渡型淋巴细胞：比成熟淋巴细胞稍大，和成熟淋巴细胞的区别是有核仁。
4.成熟淋巴细胞：也既未转化的细胞，大小同末梢血中未培养的淋巴细胞相一致，核大，类似圆形，匀质状，一般看不到胞浆。
转化了的淋巴细胞是指淋巴母细胞、网状细胞及过渡型淋巴纪细胞，具体结果如表1所示：
图1:治疗COPD伴肺纤维化的药物对淋巴细胞转化率的影响
Figure BDA0002878158000000051
从表1中看出该中药在0.4～0.0256g/ml浓度范围内同空白对照组相比，可提高淋巴细胞的转化率即免疫功能，但在0.4g/ml组没有统计学意义(P＞0.05)，在
0.16～0.025g/ml组可明显提高淋巴细胞的转化率，有显著性差异(P值分别﹤0.05和﹤0.01)，并显示出一定的量效关系。如图1所示，随浓度的降低，其对淋巴细胞转化率的影响不断增强。
本发明应用中医药方剂治疗慢性阻塞性肺疾病(Chronic ObstructivePulmonary Disease，COPD)伴肺纤维化效果良好。患者最佳用药浓度与剂量有所保留，一个疗程用药十天，五个疗程后，从客观疗效指标六分钟步行试验、呼吸困难指数、肺功能及影像学等项指标上结果发现，治疗组的疗效应该明显优于对照组，明显改善患者临床症状，增强患者运动耐力和心肺功能，甚至是患者的不良情绪也有改善，中西医结合组总有效率高于西医治疗组，提高了患者的生活质量。影像学上发现有效的治疗及改善及消融肺部纤维化(如图1-图2所示)，图1为治疗前CT片，实变区出现斑片状、网格状、索条状纤维化较高密度影，图2为中药治疗后，肺内纤维化征象逐渐减轻,甚至完全消失。
该药物组合物的治疗COPD、抗炎、抗纤维化、抗肿瘤和提高免疫功能的作用使其可能成为辅助COPD伴PF治疗的新药物，特别是肺部纤维化中医药治疗的文献不多，兼具预防及抑制肺癌、提高免疫功能的药物更是未见报道。
该项目应用生物学、细胞学、免疫学等高新技术，对该方剂进行综合研究，部分阐明了该药物组合物对肺纤维化以及抑制预防肺癌的发生等方面的治疗作用及其作用机理、作用部位、药用效果，将为临床提供科学的用药依据及为中药开拓国际市场打下科学的基础。
本发明旨在对中医药应用于肺部纤维化治疗能有所贡献，为肺损伤、纤维化以及防止后续肺癌的产生提供新的治疗途径。

Claims (8)

1.一种治疗COPD伴肺纤维化的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括如下重量份的组分：黄芪3-15、丹参5-20、黄芩5-15、甘草3-10、红花5-15、当归5-15、天丁5-20、川芎3-15、五味子3-15、莪术5-20。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括如下重量份的组分：黄芪3、丹参5、黄芩5、甘草3、红花5、当归5、天丁5、川芎3、五味子3、莪术5。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括如下重量份的组分：黄芪15、丹参20、黄芩15、甘草10、红花15、当归15、天丁20、川芎15、五味子15、莪术20。
4.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括如下重量份的组分：黄芪3、丹参20、黄芩5、甘草10、红花5、当归15、天丁5、川芎15、五味子3、莪术20。
5.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括如下重量份的组分：黄芪15、丹参5、黄芩15、甘草3、红花15、当归5、天丁20、川芎3、五味子15、莪术5。
6.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物经水煮醇沉法制成浸膏。
7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述浸膏中生药含量为10g/mL。
8.如权利要求1所述的药物组合物在制备A549肺癌细胞毒杀剂中的应用。
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