CN112587730B - 复合细胞支架及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本申请公开了复合细胞支架及其制备方法。该复合细胞支架包括若干细胞单元，细胞单元包括：支架，支架上具有细胞容置腔，细胞容置腔用于装载目标植入细胞；预血管化模块，预血管化模块内具有预血管化腔体；半透膜，预血管化腔体与细胞容置腔通过半透膜连通。根据本申请实施例的复合细胞支架，至少具有如下有益效果：通过预血管化模块的设置，将装载有目标植入细胞的支架与其相连，从而使支架内的目标植入细胞能够通过预血管化模块内的毛细血管网络进行氧气和营养物质的交换，保证支架内的目标植入细胞在较长时间内发挥功能，从而满足支架植入的有效性和长效性。

Description

复合细胞支架及其制备方法

技术领域

本申请涉及细胞治疗技术领域，尤其是涉及复合细胞支架及其制备方法。

背景技术

随着再生医学和组织工程领域研究的深入，细胞疗法已经作为药物疗法的有效补充和替代，逐渐成为了医疗手段的一大发展方向。细胞疗法一般是将自体或异体细胞植入患者的特定部位替代缺失或损坏的细胞来改善其生理功能、特别是生物活性物质分泌功能。采用生物活性物质分泌细胞支架进行治疗时，要求细胞与毛细血管间距在300～400μm以内，以保证支架内装载的细胞存活并完全发挥功能。然而，人体中并无完全满足此条件的植入部位，其它各种可能的适合植入的部位又都无法达到预期的理想效果。这就导致植入的支架只能部分贴附在人体自身毛细血管表面，而另外未贴附毛细血管的部分由于氧气、营养物质等浓度较低，无法及时交换，致使装载的细胞不能发挥正常功能、存活率降低甚至死亡，产品的持效性较低。

发明内容

本申请旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本申请提出一种能够长期发挥作用的复合细胞支架及其制备方法。

本申请的第一方面，提供复合细胞支架，该复合细胞支架包括若干细胞单元，细胞单元包括：

支架，支架上具有细胞容置腔，细胞容置腔用于装载目标植入细胞；

预血管化模块，预血管化模块内具有预血管化腔体；

半透膜，预血管化腔体与细胞容置腔通过半透膜连通。

根据本申请实施例的复合细胞支架，至少具有如下有益效果：

通过预血管化模块的设置，将装载有细胞的支架与其相连，从而使支架内的细胞能够通过预血管化模块内的毛细血管网络进行氧气和营养物质的交换，保证支架内的目标植入细胞在植入后可以立即获得体内氧气与营养物质的供给，不发生急性缺氧/养造成的细胞死亡，为人体自身毛细血管的诱生与长入提供缓冲时间，从而满足支架植入的有效性与长效性。

根据本申请的一些实施例，支架内装载的目标植入细胞具有产生生物活性物质的功能，生物活性物质包括但不限于激素、酶、营养因子、神经递质或其它一些具有参与对内外环境刺激应答、维持机体内环境稳定等作用的活性物质。

根据本申请的一些实施例，为保证目标植入细胞植入后在患者体内正常进行物质交换维持状态，半透膜应使150kd(千道尔顿)以下分子通过，而使150kd以上分子不能通过。

根据本申请的一些实施例，预血管化腔体包括：

主通道腔体，主通道腔体用于供给预血管化培养液；

分支腔体，分支腔体与主通道腔体相连通。

在模块的预血管化过程中，通过主通道腔体向腔体内供给预血管化培养液，为其中的内皮细胞提供合适的生长环境，促进其构建形成血管结构。

根据本申请的一些实施例，分支腔体的内壁具有内皮细胞贴壁形成的预血管层，或分支腔体内具有内皮细胞形成的三维微血管网络。通常，组织工程诱导血管生成的方法包括通过内皮细胞构建血管、生长因子和细胞因子促进血管化、天然或人工合成的血管支架等方法，在本申请的实施例中，主要通过内皮细胞的使用来完成毛细血管网络的构建，从而使复合细胞支架在装载目标植入细胞后可一次手术完成植入，无需第一次手术先植入支架、等待植入部位的宿主血管长入到复合细胞支架中再二次手术向支架内装载目标植入细胞。其中，第一类是预制管道/腔体的预血管化，是指在分支腔体的内壁上通过内皮细胞贴壁生长形成预血管腔体，具体而言，在分支腔体内壁注入内皮细胞和培养液通过生物反应器动态培养的方法使内皮细胞在分支腔体内贴壁生长从而使分支腔体内皮化形成预血管层。第二类是组织工程三维微血管网络，是指内皮细胞在分支腔体内通过芯片集成静压力控制的动态灌注***，提供动态微流控三维培养环境，形成非贴腔壁生长的、最终形成和人体毛细血管网结构相同或相近的三维微血管网络。

其中，内皮细胞包括但不限于血管内皮细胞、多能干细胞分化来源的内皮细胞、血管内皮祖细胞在内的能够用于预血管化的细胞类型。

根据本申请的一些实施例，内皮细胞为内皮祖细胞。内皮祖细胞作为一种内皮前体细胞，能够通过多种途径促进内皮细胞的增殖，具有良好的血管形成能力。

根据本申请的一些实施例，主通道腔体具有开口，开口用于手术血管吻合。以主通道腔体作为总的人工血管，将分支腔体内的小血管汇集到主通道腔体的总人工血管内，通过主通道腔体的开口来完成对宿主手术血管的吻合，从而使手术操作更加方便快捷。

根据本申请的一些实施例，预血管化腔体与半透膜直接覆盖相连通接触的面积为第一面积，预血管化模块与半透膜的接触面积为第二面积，第一面积和第二面积之比不小于50％。支架主体内装载的细胞的功能发挥与半透膜上预血管模块的血管网覆盖率有关，当预血管化腔体与预血管化模块在半透膜上的连通接触面积之比越高时，半透膜上的血管覆盖率也就越高。而血管覆盖率越高，支架中越多的细胞就能够通过血管维持生存并发挥功能。优选的，上述面积之比不小于50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％。其中，预血管化腔体与半透膜直接覆盖相连通接触的面积是指预血管化腔体与半透膜接触并使物质选择性通过的部分的面积。

根据本申请的一些实施例，复合细胞支架还包括壳体，壳体包裹支架和预血管化模块。通过壳体的设置，为复合细胞支架提供整体结构的支撑作用和防冲击保护功能。

根据本申请的一些实施例，壳体上设有固定件，支架和预血管化模块通过固定件与壳体固定。通过固定件的设置，使支架、预血管化模块与壳体的相对位置更为稳定，同时，可以使壳体与支架、预血管化模块之间的组装更为简单方便。

根据本申请的一些实施例，细胞单元为多个，多个细胞单元层层堆叠形成复合细胞支架。单个细胞单元形成的支架的细胞装载量有限，为了能够装载更多的细胞，可以将多个细胞单元层层堆叠形成具有多个装载细胞的支架的组合，有效提高复合细胞支架整体的细胞装载量。

根据本申请的一些实施例，细胞单元还包括基板，不同的细胞单元通过基板相间隔开。

根据本申请的一些实施例，基板上设有固定件，细胞单元通过固定件与基板固定连接。

根据本申请的一些实施例，不同细胞单元的预血管化腔体通过人工血管相互连通。

根据本申请的一些实施例，支架上的细胞容置腔根据需要可以选择整体性的一体化腔室或多个相互独立的腔室。

本申请的第二方面，提供预血管化模块的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

制备包含预血管化腔体的基材；

向预血管化腔体内注入包含内皮细胞的水凝胶；

采用微流控动态灌注的方法向预血管化腔体内连续流动注入培养液以培养内皮细胞。

通过在预血管化腔体内填充包含内皮细胞的水凝胶并利用动态灌注的方法提供流动的培养环境，使内皮细胞贴壁腔体内壁达成预血管化，或直接在腔体内形成和人体毛细血管结构相同或相近的微血管，促进人工血管网络的生成，从而使预血管化后的腔体能够提供更高效的物质交换条件。

本申请的第三方面，提供复合细胞支架的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

在表面具有半透膜的支架上采用上述的制备方法体外制备预血管化模块，制备完成后，预血管化模块与支架的半透膜贴合在一起，并向支架注入目标植入细胞，得到复合细胞支架。

通过在预血管化腔体内填充包含内皮细胞的水凝胶并利用动态灌注的方法提供流动的培养环境，使其更接近体内血管生成的原有环境，促进人工血管网络的生成。预血管化后的腔体紧密贴合支架上的半透膜，与之结合甚至不能被剥离，能够提供更高效的物质交换条件，从而使复合细胞支架具有更高效的作用环境，延长产品的使用寿命，避免第一次手术植入先支架在体内预血管化，再二次手术往支架内装载细胞的两步手术植入方案或无预血管化直接支架内装载细胞植入的一次手术植入方案。后者由于体内毛细血管不能及时诱生长入，可能导致产品失效，而本申请实施例所提供的通过上述方法制得的复合细胞支架产品具有更好的功能性、有效性和稳定性。

本申请的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本申请的实践了解到。

附图说明

下面结合附图和实施例对本申请做进一步的说明：

图1是本申请的实施例的复合细胞支架结构的正视图。

图2是本申请的实施例的复合细胞支架的预血管化腔体的结构示意图。

图3是本申请的图2所示实施例的预血管化腔体与预血管化模块投影面积示意图。

图4是本申请的实施例的复合细胞支架的预血管化腔体的结构示意图。

图5是本申请的图4所示实施例的预血管化腔体与预血管化模块投影面积示意图。

图6是本申请的实施例的预血管化腔体内壁贴壁有内皮细胞层的预血管化结构，A是该预血管化结构的示意图，B是该预血管化结构的电镜照片。

图7是本申请的实施例的预血管化腔体的毛细血管网络，A是菱形的分支小室内的三维毛细血管照片，B是该分支小室在培养6天后的电镜照片，C是圆角矩形的分支小室内的三维毛细血管照片。

图8是本申请的实施例的复合细胞支架的层叠示意图。

图9是本申请的实施例的基板的结构示意图。

附图标记：预血管化模块110、预血管化腔体111、半透膜120、支架130、细胞容置腔131、目标植入细胞132、主通道腔体210、第一开口211、第二开口212、分支腔体220、分支小室221、内皮细胞610、细胞单元810、人工血管820、基板910、孔隙911、限位柱912。

具体实施方式

以下将结合实施例对本申请的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本申请的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本申请的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本申请的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本申请保护的范围。

下面详细描述本申请的实施例，描述的实施例是示例性的，仅用于解释本申请，而不能理解为对本申请的限制。

在本申请的描述中，若干的含义是一个以上，多个的含义是两个以上，大于、小于、超过等理解为不包括本数，以上、以下、以内等理解为包括本数。如果有描述到第一、第二只是用于区分技术特征为目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量或者隐含指明所指示的技术特征的先后关系。

本申请的描述中，除非另有明确的限定，设置、安装、连接等词语应做广义理解，所属技术领域技术人员可以结合技术方案的具体内容合理确定上述词语在本申请中的具体含义。

本申请的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示意性实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本申请的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

参考图1，示出了本申请实施例的复合细胞支架结构的正视图。该复合细胞支架包括支架130、半透膜120和预血管化模块110。支架130内具有若干个相连通或独立的细胞容置腔131，在细胞容置腔131内装载有目标植入细胞132。预血管化模块110内具有预血管化腔体111，预血管化腔体111内具有一定数量的微血管，预血管化腔体111通过半透膜120与支架130内的细胞容置腔131相连通，从而使细胞容置腔131内装载的目标植入细胞132通过预血管化腔体111内的微血管进行氧气和其它营养物质的交换，从而保证支架130内的目标植入细胞132在较长时间内发挥功能，从而满足支架植入的有效性与长效性。

参考图2及图4，在本申请的一些具体实施例中，预血管化腔体111包括主通道腔体210和分支腔体220，分支腔体220包括多个阵列排布的分支小室221。相邻的分支小室221之间相互连通，并且靠近主通道腔体210的分支小室221与主通道腔体210之间也相连通，从而使主通道腔体210与分支腔体220相连通。该预血管化模块110上的预血管化腔体111结构可以采用诸如光刻技术进行加工得到。为了实现良好的精度，具体可以采用精度在1微米以上的光刻机完成加工。而该预血管化模块110的基体可以采用聚二甲基硅氧烷(PDMS)/聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)等材质的微流控芯片。

参考图1、图2及图4，在本申请的一些具体实施例中，主通道腔体210的两端具有开口，分别是第一开口211和第二开口212，第一开口211和第二开口212在预血管化腔体111的预血管化过程中可以分别向预血管化腔体111内注入和排出内皮细胞预血管化所需的营养液。而在预血管化腔体111完成预血管化后，主通道腔体210可以作为汇集预血管化腔体111内部的微血管的复合细胞支架的总人工血管，在植入到宿主体内时，主通道腔体210通过第一开口211和第二开口212与宿主体内植入部位的血管完成吻合，从而使植入操作更加方便快捷。

在本申请的一些具体实施例中，预血管化腔体111与半透膜120直接覆盖相连通接触的面积为第一面积，预血管化模块110与半透膜120的接触面积为第二面积，第一面积和第二面积之比不小于50％。参考图3和图5，第一面积为图3和图5中的阴影部分，第二面积为图3和图5中的方框，两者之比不小于50％。这同时也就表示在支架130内装载的目标植入细胞132在植入后至少有50％能够及时通过预血管化模块110完成氧气和其它营养物质的交换从而保证正常的存活和功能发挥。比较图3和图5可以看出，当分支小室221为菱形或近椭圆形时，其面积之比要明显小于分支小室221为圆角矩形时的面积之比。而当该面积之比越大时，目标植入细胞132中能够维持存活和功能发挥的量也就越多，复合细胞支架的效果和持效性也就越好。上述面积之比可以不小于50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％。当然，分支小室221的形状具体不限于上述示意图中描述的菱形、矩形、椭圆形和圆角矩形等形状，其它包括圆形、以及三角形、梯形、四边形、五边形、六边形、七边形、八边形、九边形、十边形、十一边形、十二边形等各种扩展规则或不规则的多边形形状。而且分支小室221之间也不限于以上述的平行阵列排布方式，其它以树枝交叉状、叶脉纹状等本领域所熟知的各类排布方式均可以实现。另外，预血管化腔体111内不同分支小室221以及分支小室221之间的流道的数量可以在数十、数百、数千、数万个、数十万个之间形成连通流道体系，其宽度和流向可以适当进行调整以避免堵塞和局部流量过多或过少。而且，在部分分支小室221出现堵塞损坏情况，已损坏或堵塞的分支小室221不会影响其它部分的正常工作。

在本申请的一些具体实施例中，预血管化腔体111的预血管化方法可以采用组织工程诱导血管生成的常用方法，包括通过内皮细胞构建血管、生长因子和细胞因子促进血管化、天然或人工合成的血管支架等方法。

在本申请的一些具体实施例中，预血管化腔体111的预血管化方法主要通过内皮细胞来完成毛细血管网络的构建，从而使复合细胞支架在使用时无需将植入部位的宿主血管额外长入到复合细胞支架中。通过内皮细胞的预血管化方法具体包括通过预血管化腔体111的内壁贴附内皮细胞形成预血管层而得到复合预血管化结构、或者在预血管化腔体111内形成主要由内皮细胞构成的与人体毛细血管网络结构相同或相近的三维微血管网络。

其中，通过预血管化腔体111的内壁贴附内皮细胞形成预血管层而得到复合预血管化结构是通过向预血管化腔体111内注入内皮细胞和相应的培养液，使内皮细胞贴壁生长形成预血管层，该预血管层和预血管化腔体111形成复合预血管化结构。如图6所示，图6中的A是该预血管层结构的示意图，B是该预血管层结构的电镜照片，在预血管化腔体111的内壁上具有内皮细胞610贴壁生长而形成的预血管层。

在预血管化腔体111内形成主要由内皮细胞构成的三维微血管网络的方法首先向预血管化腔体111内注入混有内皮细胞的水凝胶，随后将第一开口211、第二开口212或更多开口分别连接动态灌注***的两个/多个管道口，使预血管化腔体111与动态灌注***之间形成往复的液体循环回路，通过静压力或其它方式控制动态灌注***内的培养液以一定流速和流向在预血管化腔体111和动态灌注***内往复流动以模拟内皮细胞的体内诱导生长环境，从而使内皮细胞在预血管化腔体111内生成和人体毛细血管网结构功能相同或相近的三维微血管网络。参考图7，A是采用上述的预血管方法制备得到的预血管化腔体111的一个如图3的菱形的分支小室221内的毛细血管显微镜照片，B是该分支小室221在培养6天后的电镜照片，C是采用上述的预血管方法制备得到的预血管化腔体111的一个如图5的圆角矩形的分支小室221内的毛细血管照片。从图中可以看出，采用上述方法可以在分支小室221中制备出大量毛细血管(B中箭头所示方向为其中一条微血管示例)，形成良好的三维微血管网络从而进行物质输送。

在本申请的一些具体实施例中，半透膜120的厚度为5～100μm。半透膜120的厚度对于预血管化模块110和支架130之间物质输送的速度以及复合细胞支架的整体厚度有一定影响，厚度在5～100μm时，可以兼顾多个方面。

在本申请的一些具体实施例中，半透膜120为双层非对称复合半透膜。该双层复合半透膜具体利用不可降解材料的功能性薄膜(如PTFE纳滤层复合微米孔隙PTFE支撑膜而形成的复合膜、PP/PE非织造膜)进行复合。功能性薄膜自身可以经过亲水改性和防纤维化改性处理以获得相应的效果。膜材料中的亲水纳米膜屏障起到调控膜的孔隙结构和渗透性作用，对小分子进行滤过筛选，同时阻隔大分子的免疫蛋白，实现抗排斥的物理屏障作用，在植入时不需另外服用抗排斥药物。另一方面，外层的微米孔隙及亲水的特性有利于宿主体内血管细胞的表面粘附和新生血管的诱导。

在本申请的一些具体实施例中，半透膜120为水凝胶调节膜孔隙型支架半透膜。该种半透膜具体可以以具有较大孔隙的PTFE膜为骨架结构，并在该骨架结构中加入非降解天然高分子纤维素、甜菜碱、海藻酸及其改性衍生物填充骨架结构的孔隙。通过调节骨架结构的孔隙以及填充在内部的水凝胶的交联度，得到具有适当网络孔隙结构的复合半透膜，实现物理屏蔽免疫组分攻击的功能。半透膜中的水凝胶组分可以进一步进行防纤维化改性，降低复合细胞支架对免疫细胞的粘附能力，从而预防炎症信号引发的纤维化效应，提升体内长期稳定性。

在本申请的一些具体实施例中，半透膜120为纳米针溶蚀工艺支架半透膜。具体可以通过氧化锌纳米针溶蚀工艺在基材内实现纳米膜孔隙结构，同时在表层复合微米孔隙支撑膜形成双层膜结构。半透膜120的基材可以选择聚氨酯(PU)/聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)或其余生物相容性合成大分子材料。通过半透膜内层纳米孔隙物理屏障膜可有效截留大分子量免疫组分，屏蔽免疫因子如抗体对生物活性物质分泌细胞的攻击，且不影响细胞正常的营养物质/废物代谢。半透膜表面的微米孔隙膜可以进一步通过表面亲水性接枝改性和防纤维化改性，降低支架成纤维化特性和免疫细胞黏附，改善支架材料体内稳定性和内皮细胞的表面血管化能力。

在本申请的一些具体实施例中，半透膜120为静电纺丝(静电直写)、非织造工艺支架半透膜。采用不可降解或降解缓慢的生物相容性静电纺丝、静电直写、非织造的屏障膜(如PTFE、PVDF、PAN、PP、PE、PEGDA或PEGMA等)，使该屏障膜单独实现小分子物质的滤过筛选，阻隔大分子免疫蛋白，实现其抗免疫排斥的作用。该屏障膜还可以进一步通过结合水凝胶填充调节孔隙和表面改性作用，提高整体的抗排斥功能以及促血管化和防纤维化作用。

在本申请的一些具体实施例中，复合细胞支架还包括包裹支架130和预血管化模块110的壳体。通过壳体的设置，为复合细胞支架提供整体结构的支撑作用。该壳体具体可以选择如聚醚醚酮(peek)材料、聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)或其它具有类似性质的聚合物材料。

参考图8，在本申请的一些具体实施例中，支架130、预血管化模块110与半透膜120形成细胞单元810，多个细胞单元810层层堆叠形成复合细胞支架。单个细胞单元的支架的细胞装载量有限，为了能够装载更多的细胞，可以将多个细胞单元层层堆叠形成具有多个装载细胞的支架的组合，有效提高复合细胞支架整体的细胞装载量。更进一步，不同细胞单元810的支架130之间相互独立隔离，互不连通；而不同细胞单元810的预血管化腔体111之间通过人工血管820相互连通或者同样保持互不连通的状态，该人工血管820可以是毫米级，具体可以采用上述细胞灌注培养的方法在腔体内壁贴壁培养内皮细胞层形成人工血管或其他本领域熟知的人工血管的制备方法制得。另外，人工血管820也可以作为不同的预血管化模块110的接头。而不同的预血管化腔体111之间可以通过对应的主通道腔体210分别与宿主血管吻合或另外形成总的汇接口进行吻合。

参考图8和图9，在本申请的一些具体实施例中，不同的细胞单元810之间设置有基板910，基板910的大小、厚度、选材与细胞单元810相适应，同时，基板910需要具有一定的力学性能以保证通过基板910对不同层间的细胞单元810进行独立的支撑作用，并将不同的细胞单元810相互间隔开。更进一步，在基板910上可以设置孔隙911以维持上下细胞单元810之间的通透。为使不同的细胞单元810分别实现单独和一体化功能，孔隙911的大小可以设置为微米级别。另外，在基板910上还可以设有突出的固定件，细胞单元810通过固定件与基板910固定连接。例如，固定件为设置在基板910上的圆柱形的限位柱912，而在支架130和预血管化模块110上设置与限位柱912相配合的限位通孔，使其能够通过该限位柱912与基板910相固定。限位柱912或其它本领域熟知的固定件必须不会对基板910以及固定在其上的细胞单元810(包含支架130和预血管化模块110)造成功能性影响。更进一步，多个基板910之间也可以通过固定件或通过壳体相互连接组装。

在本申请的一些具体实施例中，支架内装载的目标植入细胞132具有产生生物活性物质的功能，生物活性物质包括但不限于激素、酶、营养因子、神经递质或其它一些具有参与对内外环境刺激应答、维持机体内环境稳定等作用的活性物质。

在本申请的一些具体实施例中，支架内装载的目标植入细胞132为胰岛细胞、胰岛前体细胞、多能干细胞来源胰岛样细胞或各种基因工程来源胰岛素分泌细胞，通过装载这些细胞，复合细胞支架可以用于治疗I型和胰岛素依赖II型糖尿病。

在本申请的一些具体实施例中，支架内装载的目标植入细胞132为肝脏细胞、肝脏前体细胞、多能干细胞来源肝脏细胞或各种基因工程来源肝蛋白分泌细胞，通过装载这些细胞，复合细胞支架可以用于治疗终末期肝病患者。

在本申请的一些具体实施例中，支架内装载的目标植入细胞132为甲状腺细胞、多能干细胞来源甲状腺细胞或各种基因工程来源甲状腺素分泌细胞，通过装载这些细胞，复合细胞支架可以用于治疗甲状腺功能低下。

在本申请的一些具体实施例中，支架内装载的目标植入细胞132为VIII因子分泌细胞、多能干细胞来源VIII因子分泌细胞或各种基因工程来源VIII因子分泌细胞，通过装载这些细胞，复合细胞支架可以用于治疗甲型血友病和获得性凝血因子VIII缺乏而致的凝血机能障碍。

上面结合实施例对本申请作了详细说明，但是本申请不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本申请宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

Claims (4)

1.复合细胞支架，其特征在于，包括若干细胞单元，所述细胞单元包括：

支架，所述支架上具有细胞容置腔，所述细胞容置腔用于装载目标植入细胞；

预血管化模块，所述预血管化模块内具有预血管化腔体；

半透膜，所述预血管化腔体与所述细胞容置腔通过所述半透膜连通；

其中，所述预血管化腔体包括：

主通道腔体，所述主通道腔体用于供给预血管化培养液；所述主通道腔体的两端具有开口，所述开口用于手术血管吻合；

分支腔体，所述分支腔体与所述主通道腔体相连通；所述分支腔体的内壁有内皮细胞贴壁形成的预血管层，或所述分支腔体内具有内皮细胞形成的三维微血管网络；

所述预血管化腔体与所述半透膜直接覆盖相连通接触的面积为第一面积，所述预血管化模块与所述半透膜直接覆盖接触的面积为第二面积，所述第一面积和所述第二面积之比不小于50％。

2.根据权利要求1所述的复合细胞支架，其特征在于，所述复合细胞支架还包括壳体，所述壳体包裹所述支架和所述预血管化模块。

3.根据权利要求1至2任一项所述的复合细胞支架，其特征在于，所述细胞单元还包括基板，所述基板上设有固定件，所述支架和所述预血管化模块通过所述固定件与所述基板固定连接。

4.根据权利要求1至2任一项所述的复合细胞支架，其特征在于，所述细胞单元为多个，多个所述细胞单元层层堆叠形成所述复合细胞支架。