CN112546060B - 降脂的中药单体组合物、制剂及用途 - Google Patents

降脂的中药单体组合物、制剂及用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了降脂的中药单体组合物、制剂及用途。该降脂的中药单体组合物由质量比为9.1～9.6：1：4.2～4.7：1.6～2.1：2.2～2.7：1.7～2.2的槲皮素‑3‑O‑β‑D‑葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素‑8‑O‑β‑D‑葡萄糖苷、O‑去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。本发明中药单体组合物可以降低血脂，特别对于高甘油三酯血症，降脂效果优于现有常用中成药降脂药降脂宁颗粒。

Description

降脂的中药单体组合物、制剂及用途
技术领域
本发明涉及一种降脂的中药单体组合物、制剂及用途。
背景技术
高脂血症是当今社会常见的一种疾病，表现为血清中胆固醇和甘油三酯过高，可直接引起一些严重危害人体健康的疾病，如动脉粥样硬化、冠心病、胰腺炎等。高脂血症的发病率逐年上升，在全国30岁以上的成年人中，高脂血症的发病率在10％～20％。
目前市场上降血脂药物很多，因西药起效快且疗效肯定，因此多以西药为主。常用药物如辛伐他汀，它可用于降低升高的总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B和甘油三酯，但其副作用明显，可引起患者血糖异常、全身肌肉酸痛、软弱无力等。
中医上认为血脂升高多为体内痰湿较重，进而影响气血运行导致出现气滞血瘀的证型，所以治疗时多选用健脾除湿、行气活血类的中药。常用降脂的中成药有降脂宁颗粒、银杏叶胶囊、血脂康胶囊等，虽然中成药降脂副作用小，但其用量大，且降脂效果不如西药明显。
CN104173495A公开一种降脂宁颗粒，该中药由如下重量份的原料制备而成：25～27.5份山楂，1～1.25份制何首乌，1～1.25份决明子，3.25～3.75份荷叶。该降脂宁颗粒虽然具有扩张冠脉血管，增加冠脉流量，减少胆固醇吸收，加快胆固醇***，抑制血清胆固醇升高和动脉粥样硬化斑块形成，降血脂和胆固醇等作用，但降低高脂血症(TG)的效果并不明显，且该降脂宁颗粒每日需服用3次，每次10g，口服剂量大，服用不方便，且颗粒剂容易受潮。
CN104352594A公开一种降脂宁分散片，其将山楂、制何首乌、决明子和荷叶提取后加入填充剂、崩解剂、崩解剂、矫味剂、润湿剂、润滑剂和助流剂，制成降脂宁分散片。该分散片服用方便，适合老人和吞服困难的患者，但仍无法解决降低高脂血症的效果不明显，且口服剂量大的问题。
CN108635426A公开一种降脂宁中药浓缩水丸，其将山楂、制何首乌、决明子和荷叶提取后制成水丸。该水丸体积小、便于吞服、不易吸潮，但仍无法解决降低高脂血症的效果不明显，且口服剂量大的问题。
综上，西药降脂药辛伐他汀虽然降脂效果好，但是副作用明显，不适宜患者长期食用。中成药降脂药降脂宁颗粒及其改进剂型虽然治疗高脂血症的副作用小，适合长期食用，但存在服药量大，降血脂效果不明显等问题。
发明内容
有鉴于此，本发明的一个目的在于提供一种降脂的中药单体组合物。该中药单体组合物可以降低血脂，特别对于高甘油三酯血症，降脂效果显著。
本发明的另一个目的在于提供一种降脂的中药制剂。该中药制剂降脂效果好，用药安全，且服用量小。
本发明的再一个目的在于提供一种上述中药单体组合物的用途。
一方面，本发明提供一种降脂的中药单体组合物，该中药单体组合物由质量比为9.1～9.6：1：4.2～4.7：1.6～2.1：2.2～2.7：1.7～2.2的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
根据本发明的中药单体组合物，优选地，所述中药单体组合物由质量比为9.25～9.45：1：4.35～4.55：1.75～1.95：2.35～2.55：1.85～2.05的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
根据本发明的中药单体组合物，优选地，所述中药单体组合物由质量比为9.32：1：4.45：1.85：2.41：1.92的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
根据本发明的中药单体组合物，优选地，所述中药单体组合物由质量比为9.28：1：4.51：1.78：2.52：1.87的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
根据本发明的中药单体组合物，优选地，所述中药单体组合物由质量比为9.42：1：4.38：1.93：2.38：2.04的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
另一方面，本发明提供一种降脂的中药制剂，包括上述的中药单体组合物和药学上可接受的辅料。
根据本发明的中药制剂，优选地，所述中药制剂包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、汤剂、酒剂、冲剂、口服液剂、注射剂、贴剂、缓释制剂和控释制剂中的任意一种。
根据本发明的中药制剂，优选地，单位中药制剂中包含10～200mg的中药单体组合物。
再一方面，本发明还提供一种上述中药单体组合物的用途，用于制备降血脂药物。
根据本发明的用途，优选地，所述中药单体组合用于制备降低甘油三酯的药物制剂。
本发明降脂的中药单体组合物由特定用量比的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成，用于降低血脂，治疗高脂血症，且服用量小，用药安全，可长期服用，特别对于高甘油三酯血症，降脂效果卓著，明显优于现有常用中成药降脂药降脂宁颗粒。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
本发明通过对中成药降脂宁颗粒的化学成分的分析及药理进行***研究，发现本发明的单体组合物为降脂宁颗粒发挥降血脂作用最关键的化学成分。上述单体化合物以本发明的用量配比组成组合物，其降脂效果明显优于降脂宁颗粒，因而提供了一种新的更有效的降血脂药物组合物，也为阐述中成药降脂宁颗粒降血脂作用的内涵和进行制剂的标准化提供了依据。
＜中药单体组合物＞
本发明降脂的中药单体组合物，由质量比为9.1～9.6：1：4.2～4.7：1.6～2.1：2.2～2.7：1.7～2.2的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
本发明中，优选地，所述中药单体组合物由质量比为9.25～9.45：1：4.35～4.55：1.75～1.95：2.35～2.55：1.85～2.05的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
根据本发明一个优选的实施方式，所述中药单体组合物由质量比为9.32：1：4.45：1.85：2.41：1.92的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
根据本发明另一个优选的实施方式，所述中药单体组合物由质量比为9.28：1：4.51：1.78：2.52：1.87的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
根据本发明再一个优选的实施方式，所述中药单体组合物由质量比为9.42：1：4.38：1.93：2.38：2.04的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
本发明降脂的中药单体组合物中，各原料均为已知化合物，均可通过市售购买得到，或采用本领域公知的方法制备得到，比如根据文献记载的方法从药材中提取分离得到。组合物可以采用本领域常规混合的方法制备，也可以采用其他方法制备，没有特别限定。
本发明中，所用槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的英文名为Quercetin 3-O-β-D-Glucuronide，化学式为C21H18O13，分子量为478.37。
所用金丝桃苷的英文名为Hyperoside，化学式为C21H20O12，分子量为464.3763。
所用红镰霉素龙胆二糖苷的英文名为Rubrofusarin-6-O-β-gentiobioside，化学式为C27H32O15，分子量为596.53。
所用大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的英文名为Emodin-8-glucoside，化学式为C21H20O10，分子量为432.41。
所用O-去甲荷叶碱(即为2-羟基-1-甲氧基-阿朴啡)的英文名为Ortho-Nornuciferine，化学式为C18H19NO2，分子量为281.35。
所用杏黄罂粟碱的英文名为Armepavine，化学式为C19H23NO3，分子量为313.39。
本发明的中药单体组合物中，六种成分均为中成药降脂宁颗粒含有的化学成分。这六种单体以本发明的用量配比组成组合物，其降脂效果卓著，明显优于降脂宁颗粒，同时也优于其他配比的组合物。
＜制剂及用途＞
本发明提供一种降脂的中药制剂，其包括本发明的中药单体组合物和药学上可接受的辅料。本发明中药制剂的剂型没有特别限定，可以为任意药用剂型。优选为胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、汤剂、酒剂、冲剂、口服液剂、注射剂、贴剂、缓释制剂和控释制剂中的任意一种。更优选为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂和口服液剂中的任意一种。
本发明中，降脂的中药制剂可以包含药学上可接受的辅料。所述药学上可接受的辅料的种类不做限制。当所述降脂的中药制剂为口服制剂时，所述辅料可以选自稀释剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂中的一种或多种。所述稀释剂包括但不限于甘露醇、微晶纤维素、乳糖、蔗糖、预胶化淀粉或糊精中的一种或多种，优选为微晶纤维素、乳糖或糊精中的一种或多种。所述黏合剂选自甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、明胶、聚维酮或聚乙二醇中的一种或多种，优选为羧甲基纤维素钠、明胶或聚维酮中的一种或多种。所述崩解剂包括但不限于羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮中的一种或多种。所述润滑剂选自聚乙二醇、十二烷基硫酸钠、滑石粉或硬脂酸镁中的一种或多种，优选为交联聚维酮或交联羧甲基纤维素钠。
本发明中，单位中药制剂中中药单体组合物的用量为10～200mg，优选为50～100mg。所述单位中药制剂是指一个制备和应用单位的制剂，例如一片片剂、一袋颗粒剂、一个胶囊、一瓶口服液等。制备的单位中药制剂中中药单体组合物的用量在上述范围时，服用量小，用药安全，可长期食用，且降脂效果显著。
本发明中药单体组合物具有显著的治疗高脂血症的作用，特别对于高甘油三酯血症具有确切的疗效。
下面介绍以下实施例和比较例使用的原料。
降脂宁颗粒：购自通化吉通药业有限公司，批号为20200702，规格为10克*18袋。
辛伐他汀：购自Adamas Reagent CO.,Ltd.，LOT:P03869。
槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷：购自成都曼斯特生物技术有限公司，LOT:MUST-20070805。
金丝桃苷：购自上海源叶生物技术有限公司，LOT:P14A11F121347。
红镰霉素龙胆二糖苷：购自上海同田生物技术有限公司，LOT:16120621。
大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷：购自上海源叶生物技术有限公司，LOT:P17A10F86138。
O-去甲荷叶碱：购自上海源叶生物技术有限公司，LOT:M16N10S103163。
杏黄罂粟碱：购自上海源叶生物技术有限公司，LOT:P22M10F88910。
实施例1
本实施例降脂的中药单体组合物，由质量比为9.32：1：4.45：1.85：2.41：1.92的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
实施例2
本实施例降脂的中药单体组合物，由质量比为9.28：1：4.51：1.78：2.52：1.87的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
实施例3
本实施例降脂的中药单体组合物，由质量比为9.42：1：4.38：1.93：2.38：2.04的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
对比例1
本对比例降脂的中药单体组合物，由质量比为2.22：1：0.73：
1.44：0.24：1.23的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
对比例2
本对比例降脂的中药单体组合物，由质量比为0.178：1：0.94：0.38：0.16：0.38的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
对比例3
本对比例降脂的中药单体组合物，由质量比为1.03：1：2.08：0.45：0.44：0.04的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
实验例1-降血脂活性测试
为了比较实施例1的中药单体组合物与对比例1-3的中药单体组合物、中成药降脂药降脂宁颗粒、西药降脂药辛伐他汀之间降血脂活性的差异，本发明采用油酸钠诱导HepG2细胞建立的高脂模型，进行了降血脂活性研究。
1.主要溶液配制
RMPI-1640完全培养基：RMPI-1640培养基加入1wt％青-链双抗、10wt％胎牛血清，于4℃条件下储存。
磷酸盐缓冲液(PBS)：取固定包装磷酸盐粉末一袋，加入2L双蒸水，不断搅拌使得PBS溶解均匀，分装到血清瓶后高压灭菌后，储存在4℃条件下。
细胞冻存液：含20wt％胎牛血清、10wt％DMSO溶液、70wt％RMPI-1640培养基。
MTT溶液：将噻唑蓝(MTT)粉末150mg溶解于30mL的PBS缓冲液中，避光，使其溶解均匀，经0.22μm微孔滤器过滤后，分装后置于-20℃下避光保存。
油酸钠溶液：称取一定量的油酸钠对照品，加入少量PBS完全溶解后，再加入RMPI-1640完全培养基配制成一定浓度的溶液，经0.22μm微孔滤器过滤后，置于4℃下保存。
降脂宁颗粒溶液：称取降脂宁颗粒3.12mg，加入15.600mL RMPI-1640完全培养基，完全溶解后，制成200μg/mL溶液。经0.22μm无菌滤膜过滤后备用。
本发明中药单体组合物溶液：按槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷：金丝桃苷：红镰霉素龙胆二糖苷：大黄素-8-O-β-D葡萄糖苷：O-去甲荷叶碱：杏黄罂粟碱＝9.32：1：4.45：1.85：2.41：1.92的质量比进行配制，最终得到浓度为0.2mg/mL的中药单体组合物溶液，经0.22μm微孔滤器过滤后，置于4℃下保存。
对比例1中药单体组合物溶液：按槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷：金丝桃苷：红镰霉素龙胆二糖苷：大黄素-8-O-β-D葡萄糖苷：O-去甲荷叶碱：杏黄罂粟碱＝2.22：1：0.73：1.44：0.24：1.23的质量比进行配制，最终得到浓度为0.2mg/mL的中药单体组合物溶液，经0.22μm微孔滤器过滤后，置于4℃下保存。
对比例2中药单体组合物溶液：按槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷：金丝桃苷：红镰霉素龙胆二糖苷：大黄素-8-O-β-D葡萄糖苷：O-去甲荷叶碱：杏黄罂粟碱＝0.178：1：0.94：0.38：0.16：0.38的质量比进行配制，最终得到浓度为0.2mg/mL的中药单体组合物溶液，经0.22μm微孔滤器过滤后，置于4℃下保存。
对比例3中药单体组合物溶液：按槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷：金丝桃苷：红镰霉素龙胆二糖苷：大黄素-8-O-β-D葡萄糖苷：O-去甲荷叶碱：杏黄罂粟碱＝1.03：1：2.08：0.45：0.44：0.04的质量比进行配制，最终得到浓度为0.2mg/mL的中药单体组合物溶液，经0.22μm微孔滤器过滤后，置于4℃下保存。
2.实验方法
2.1细胞复苏、培养及冻存
2.1.1细胞复苏
RMPI-1640完全培养基放置至室温，调节恒温水浴锅温度至37℃，将HepG2细胞从超低温冰箱中取出并迅速置于恒温水浴锅中融化。将管中细胞悬液轻轻吹打均匀，加入到装有4mL RMPI-1640完全培养基的15mL无菌离心管中离心(1000r，2min)。弃去上清液，收集细胞，加入2mL RMPI-1640完全培养基吹打成细胞悬液后转移至细胞培养瓶中，置于37℃、5％CO2恒温培养箱中培养。
2.1.2细胞培养及传代
HepG2细胞培养于配制的无菌RMPI-1640完全培养基中，置于细胞培养箱中培养，细胞培养箱条件设定为37℃和5％CO2，观察细胞生长状态进行传代；当细胞生长密度达到80％时传代，用放置至室温的无菌PBS清洗细胞2遍，加入无菌胰酶消化，于显微镜下观察细胞形态，消化完毕弃去胰酶，加入3mL无菌RMPI-1640完全培养基，用无菌吸管轻轻吹打瓶底细胞，转移到15mL离心管后离心，弃去上清液，加入配制的无菌RMPI-1640完全培养基，吹打至完全悬浮，根据细胞的数量按比例传代。
2.1.3细胞冻存
取生长状态良好的HepG2细胞，按“传代”中的步骤收集细胞，加入4℃预冷的冻存液，吹打至完全悬浮，将细胞分装到已标记的冻存管中，标记内容应包括标记细胞名称、代数和冻存日期，细胞经梯度降温后放入液氮中长期保存。
2.2细胞活力测定
采用MTT比色法检测细胞活力值，MTT可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原成为不溶于水的蓝紫色结晶甲瓒，沉积在细胞中，而死细胞不具有此现象。细胞中的蓝紫色结晶甲瓒可以被DMSO溶解，于酶标仪下检测其吸光度值，可间接反映细胞活力。
取对数生长期的HepG2细胞，制成细胞悬液，以3000个/孔的密度接种于96孔板中，每孔加入100μL，置于5％CO2、37℃的细胞培养箱中孵育24h。用RMPI-1640完全培养基溶解红镰霉素龙胆二糖苷、金丝桃苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、杏黄罂粟碱、O-去甲基荷叶碱、油酸钠、辛伐他汀。经0.22μm微孔滤器过滤后调整油酸钠浓度为20、40、60、80、100μg/mL；辛伐他汀浓度为30、35、40、50、60、70、80、90μM；红镰霉素龙胆二糖苷、金丝桃苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、杏黄罂粟碱、O-去甲基荷叶碱分别设置六个浓度，该六个浓度分别为10、20、40、80、160、320μM。弃去培养基，每孔加入各浓度含药培养基150μL，设置空白对照组，每组各浓度设置6个复孔，于5％CO2、37℃孵育24h。弃去培养基，加入MTT溶液100μL，置于5％CO2、37℃的细胞培养箱中孵育4h。弃掉MTT溶液，每孔加入150μL DMSO溶液，置于微孔板振荡器上震荡10min，使蓝紫色甲瓒结晶充分溶解，于490nm波长处测定吸光度(OD)值。以不同给药浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制细胞活力图。
细胞活力值(％)＝OD加药/OD对照×100％
2.3高脂细胞模型建立及细胞给药
将HepG2细胞培养于RMPI-1640完全培养基，置于37℃、5％CO2的培养箱中。取对数生长期的细胞制成细胞悬液，调整密度为1×105个/mL接种于6孔板中，各组每个浓度设置5个复孔，于5％CO2、37℃孵育24h。弃去培养基，空白组孔加入培养基2mL，其余各孔分别加入含油酸钠的培养基2mL，诱导建立高脂模型，5％CO2、37℃孵育24h。随后，弃去培养基，设置空白组、给药组、降脂宁颗粒组、模型组、对比例1组、对比例2组、对比例3组及阳性药组(辛伐他汀35μM)。空白组孔加入培养基2mL，模型组孔加入含油酸钠的培养基2mL，给药组孔加含有本发明中药单体组合物的培养基2mL，对比例1组孔加入含有对比例1中药单体组合物的培养基2mL，对比例2组孔加入含有对比例2中药单体组合物的培养基2mL，对比例3组孔加入含有对比例3中药单体组合物的培养基2mL，降脂宁颗粒组加入含有降脂宁颗粒的培养基2mL，阳性药组孔加入含辛伐他汀的培养基2mL，置于5％CO2、37℃的培养箱中孵育24h。
2.4TG含量测定
建立HepG2细胞高脂模型，在给药24h后测定细胞内TG含量。弃去培养基，加3mLPBS溶液进行清洗，重复两次。加入1mL胰酶进行消化，置于倒置显微镜下观察，待消化完成后弃去胰酶溶液。加入1mL RMPI-1640完全培养基收集孔内细胞，并将细胞悬液移至无菌离心管中进行离心(1000r，2min)。离心后弃去上清液，加入1mL PBS缓冲液于离心管中进行离心(1000r，10min)，重复两次。加入2％Triton X-100裂解液200μL，吹打数次后置于冰上裂解40min，待细胞裂解完全后进行低温离心(1000r，10min)，取上清液，根据TG试剂盒实验操作方法进行检测：于波长510nm处检测TG的OD值，计算TG含量，公式如下：
Figure BDA0002836998850000131
根据以下公式将TG含量测定结果转换为各药物对TG的抑制率(即药效值，Efficacy)：
Figure BDA0002836998850000132
采用SPSS 22.0软件对实验数据进行统计分析，结果以均值±标准差
Figure BDA0002836998850000141
表示，采用ANOVA分析。进行正态、方差齐性检验后，进行组间比较，若方差不齐，采用非参数检验进行组间比较。采用GraphPad Prism 7.0软件对实验数据进行统计分析及绘图。
3.实验结果
本发明采用MTT法分析了中药单体组合物中的6个单体化合物对HepG2细胞活力的影响。结果显示，各单体化合物安全浓度范围见下表1，表明在本发明各个单体化合物的给药浓度下，药物是安全、无毒的，可长期食用，解决了现有西药降脂药辛伐他汀副作用大，无法长期食用的问题。
表1本发明中药单体组合物中各单体化合物的安全浓度范围
化合物 安全浓度范围
红镰霉素龙胆二糖苷 10～320μM
金丝桃苷 10～160μM
槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷 10～320μM
大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷 10～320μM
杏黄罂粟碱 10～80μM
O-去甲荷叶碱 10～80μM
降脂实验结果显示，本发明中药单体组合物对油酸钠诱导的HepG2细胞内TG含量的抑制率为74.03％，降脂宁颗粒的抑制率为36.21％，对比例1的抑制率为34.92％，对比例2的抑制率为33.33％，对比例3的抑制率为41.77％。其中，本发明中药单体组合物对TG含量的抑制率最高，且其抑制率与降脂宁颗粒具有显著性差异(P<0.01)。可见，本发明中药单体组合物对甘油三酯的降脂效果优于中成药降脂药降脂宁颗粒。
并且，采用本发明特定比例组成的中药单体组合物(槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱与杏黄罂粟碱的质量比为9.32：1：4.45：1.85：2.41：1.92)的降脂效果远远好于采用其他比例组成的中药单体组合物。
表2本发明中药单体组合物对HepG2细胞内TG含量的影响
Figure BDA0002836998850000151
注：VS模型组，*P<0.05，**P<0.01；VS阳性组，#P<0.05,##P<0.01；VS空白组，▲P<0.05，▲▲P<0.01。
表3降脂宁颗粒对HepG2细胞内TG含量的影响
Figure BDA0002836998850000152
注：VS模型组，*P<0.05，**P<0.01；VS阳性组，#P<0.05,##P<0.01；VS空白组，▲P<0.05，▲▲P<0.01。
表4对比例1中药单体组合物对HepG2细胞内TG含量的影响
Figure BDA0002836998850000161
注：VS模型组，*P<0.05，**P<0.01；VS阳性组，#P<0.05,##P<0.01；VS空白组，▲P<0.05，▲▲P<0.01。
表5对比例2中药单体组合物对HepG2细胞内TG含量的影响
Figure BDA0002836998850000162
注：VS模型组，*P<0.05，**P<0.01；VS阳性组，#P<0.05,##P<0.01；VS空白组，▲P<0.05，▲▲P<0.01。
表6对比例3中药单体组合物对HepG2细胞内TG含量的影响
Figure BDA0002836998850000163
注：VS模型组，*P<0.05，**P<0.01；VS阳性组，#P<0.05,##P<0.01；VS空白组，▲P<0.05，▲▲P<0.01。
本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。

Claims (10)

1.一种降脂的中药单体组合物，其特征在于，所述中药单体组合物由质量比为9.1～9.6：1：4.2～4.7：1.6～2.1：2.2～2.7：1.7～2.2的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
2.根据权利要求1所述的中药单体组合物，其特征在于，所述中药单体组合物由质量比为9.25～9.45：1：4.35～4.55：1.75～1.95：2.35～2.55：1.85～2.05的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
3.根据权利要求1所述的中药单体组合物，其特征在于，所述中药单体组合物由质量比为9.32：1：4.45：1.85：2.41：1.92的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
4.根据权利要求1所述的中药单体组合物，其特征在于，所述中药单体组合物由质量比为9.28：1：4.51：1.78：2.52：1.87的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
5.根据权利要求1所述的中药单体组合物，其特征在于，所述中药单体组合物由质量比为9.42：1：4.38：1.93：2.38：2.04的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、红镰霉素龙胆二糖苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、O-去甲荷叶碱和杏黄罂粟碱组成。
6.一种降脂的中药制剂，其特征在于，包括权利要求1～5任一项所述的中药单体组合物和药学上可接受的辅料。
7.根据权利要求6所述的中药制剂，其特征在于，所述中药制剂包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、汤剂、酒剂、冲剂、口服液剂、注射剂、贴剂、缓释制剂和控释制剂中的任意一种。
8.根据权利要求7所述的中药制剂，其特征在于，单位中药制剂中包含10～200mg的中药单体组合物。
9.一种如权利要求1～5任一项所述的中药单体组合物在制备降脂药物中的应用。
10.根据权利要求 9所述的应用，其特征在于，所述中药单体组合用于制备降低甘油三酯的药物制剂。
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