CN112522112B - 一种用于防治苜蓿斑蚜的真菌菌株及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及植物保护领域，具体涉及一种用于防治苜蓿斑蚜的真菌菌株及其应用。所述菌株的保藏编号为CGMCC No.19034。本发明的菌株防治苜蓿斑蚜效果最佳。该菌株培养比较简单，生长速度快，产孢量大，孢子萌发率高，对苜蓿斑蚜不同时间均有致病性，不同浓度下致病浓度较低，对环境友好、不易产生抗药性，可以用于苜蓿斑蚜的防治。

Description

一种用于防治苜蓿斑蚜的真菌菌株及其应用
技术领域
本发明涉及植物保护领域，具体涉及一种用于防治苜蓿斑蚜的真菌菌株及其应用。
背景技术
蚜虫是广泛分布于世界各地的多食性害虫之一，危害多种作物和经济植物，危害苜蓿的主要为苜蓿斑蚜，常群集于嫩梢和嫩叶吸食汁液，使叶片卷曲、发黄，植株矮缩，生长缓慢，严重时嫩梢枯萎，破坏叶绿素，***蜜露降低光合作用并导致病菌滋生，还可传播病毒病。由于其生长周期短、繁殖量大的特点，条件适宜时迅速爆发，对农牧业造成不可衡量的损失。
目前生产上主要依靠化学药剂防治苜蓿斑蚜，现有的室内杀虫活性测定都是筛选一些效果较高的化学药剂。然而长期大量且不合理的使用，导致苜蓿斑蚜产生了不同程度的抗药性。需要科研人员对苜蓿斑蚜的抗药性机制和代谢更为深入的研究，从而提出更好更环保的防治方法。
生物测定作为害虫抗药性监测的重要技术手段，它可以反应害虫对某种杀虫剂产生了抗性，也可以反应抗性的程度，对调整抗性治理策略具有实践意义。生物防治中最常用的两种生防微生物是金龟子绿僵菌和球孢白僵菌。深入研究白僵菌、绿僵菌生物学特征，增强其防治效果，为将来的生产和应用及紫花苜蓿害虫的生物防治提供理论依据。
发明内容
本发明的目的是提供治苜蓿斑蚜的真菌菌株。
本发明的再一目的是提供上述菌株的应用。
本发明的再一目的是提供防治苜蓿斑蚜的方法。
本发明的再一目的是提供防治苜蓿斑蚜的生物菌剂。
根据本发明的球孢白僵菌(Beauveria bassiana)IPPHBB094菌株，其保藏编号为CGMCC No.19034，保藏日期2019年12月11日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址，北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
根据本发明的防治苜蓿斑蚜的方法，所述方法包括利用球孢白僵菌(Beauveriabassiana)IPPHBB094菌株致死苜蓿斑蚜的步骤。
根据本发明的防治苜蓿斑蚜的生物菌剂，所述菌剂包含球孢白僵菌(Beauveriabassiana)IPPHBB094菌株。
本发明还提供球孢白僵菌(Beauveria bassiana)IPPHBB094菌株防治苜蓿斑蚜的应用。
本发明的球孢白僵菌IPPHBB094防治苜蓿斑蚜效果最佳。该菌株培养比较简单，生长速度快，产孢量大，孢子萌发率高，对苜蓿斑蚜不同时间均有致病性，不同浓度下致病浓度较低，对环境友好、不易产生抗药性，可以用于苜蓿斑蚜的防治。
具体实施方式
实施例1分离菌株
该菌株来源于从北京海淀区西郊田间采集到的蚜虫僵虫。将僵虫转移入带有湿润滤纸的无菌培养皿中，置于30℃下恒温培养。待长出菌丝后，用无菌接菌环挑取先端菌丝体，接种至平板(PDA培养基)上，30℃恒温纯化培养，获得本发明的球孢白僵菌IPPHBB094，重复培养2-3次后4℃保存于实验室。
1、供试菌株：IPPHBB094、IPPBSX-1、IPPB34-3、IPPB18514、IPPB2010-15、IPPB2010-16、IPPB2010-17、IPPBFrM2019-137、IPPM189、IPPM202均由中国农业科学院植物保护研究所提供，采用PDA培养基分离纯化后4℃保存于实验室。
2、方法：采用培养皿萌发法，进行萌发率试验。
3、结果检查：用无菌水冲洗PDA上的分生孢子，配制成10×镜下每视野20～30个孢子的悬浮液，培养皿萌发法在无菌水中进行萌发试验。设3个重复，每个重复随机观察3次，统计100个孢子，计算萌发率。
表1不同菌株的萌发率比较
Figure BDA0002820030970000021
Figure BDA0002820030970000031
菌株的孢子是否萌发是菌株存活力或致病力的指标，也是侵染的前提。由表1可见，本试验对10株菌株的孢子进行萌发率测定，采用PDA培养基培养，分别在10h、22h进行孢子萌发率测定。表1可见，两个时间孢子萌发率差异显著。22h各菌株的萌发率均达90％以上，表明供试菌株性状优良，可进行室内杀虫活性试验。其中22小时萌发率最高的菌株为IPPHBB094，萌发率为97.33％。
实施例2对苜蓿斑蚜种群的毒力测定
1、方法：采用浸渍法接种，进行室内毒力测定。用PDA培养基于30℃培养各菌株，待孢子粉长满整个培养皿后，用刮孢子器刮取孢子粉，移入含0.01％Tween-80的无菌水中制备孢子悬浮液，将其置于振荡器上充分振荡，用血球计数板测出孢子浓渡，用无菌水稀释至所需浓度(1x108孢子/mL)。
2、供试菌株：IPPHBB094、IPPBSX-1、IPPB34-3、IPPB18514、IPPB2010-15、IPPB2010-16、IPPB2010-17、IPPBFrM2019-137、IPPM189、IPPM202均由中国农业科学院植物保护研究所提供，采用PDA培养基分离纯化后4℃保存于实验室。
3、供试苜蓿斑蚜选择：苜蓿斑蚜采自河北省沧州市献县韩村镇日晟现代农业苜蓿园，采集虫态为成虫，将采集回的成虫置于温度(25±1)℃、相对湿度65％±5％、光周期(L/D)16/8h的培养箱中，以新鲜苜蓿叶片饲养。选取大小一致活泼的苜蓿斑蚜，采用浸渍法接种，每个重复选取20头大小一致活泼的苜蓿斑蚜于培养皿中，用喷壶均匀喷于虫体，保证每头蚜虫体表含有孢子悬浮液，每个处理5次重复，用0.01％Tween-80的无菌水作空白对照。
4、不同菌株对苜蓿斑蚜的死亡率测定：置于25℃，相对湿度75％、光周期为L/D＝16h/8h的人工气候箱中，连续观察6d，每天挑出新生蚜虫和死亡蚜虫放入有滤纸的培养皿保湿以观察菌丝生长情况，记录苜蓿斑蚜死亡数目，统计死亡率。数据分析使用IBMSPSSStatistics21软件分析，求得毒力回归方程、相关系数R2、LT50。
死亡率(％)＝(死亡虫数/供试虫数)×100
校正死亡率(％)＝[(处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照死亡率)]×100
5、结果与分析
由表2可知，不同真菌菌株处理后1-7d均对苜蓿斑蚜有一定的控制效果。处理1、2d后死亡率差异不显著，处理3d后，IPPM189、IPPHBB094、IPPBSX-1、IPPB34-3、IPPB2010-16、IPPB2010-17致死率均到达50％以上。由表3可知，10株真菌菌株对苜蓿斑蚜室内毒力测定的回归方程及相关系数，由相关系数R值均在0.84以上其相关性较好。对各菌株采用孢子浓度1×108孢子/mL菌悬液进行半致死时间统计，结果表明，致病力最快的是IPPHBB094，半致死时间是66.26h，其次是IPPB34-3半致死时间为67.37h，最差的是IPPBFrM2019-137，半致死时间为84.22h。
表2不同种菌株对苜蓿斑蚜的室内生物测定
Figure BDA0002820030970000041
注：表中数据均为平均值，同一列数据后不同字母分别表示在0.05水平上差异显著。
表3同一孢子浓度各菌株对苜蓿斑蚜毒力测定LT50的毒力回归方程(1×108孢子/mL)
Figure BDA0002820030970000042
Figure BDA0002820030970000051
实施例3不同菌株浓度对苜蓿斑蚜种群的毒力策略
1、方法：采用浸渍法接种，进行室内毒力测定。用PDA培养基于30℃培养各菌株，待孢子粉长满整个培养皿后，用刮孢子器刮取孢子粉，移入含0.01％Tween-80的无菌水中制备孢子悬浮液，将其置于振荡器上充分振荡，用血球计数板测出孢子浓渡，用无菌水稀释至所需浓度(1x108孢子/mL)。
2、供试菌株：IPPHBB094、IPPBSX-1、IPPB34-3、IPPM189、IPPM202均由中国农业科学院植物保护研究所提供，采用PDA培养基分离纯化后4℃保存于实验室。
3、供试苜蓿斑蚜选择：苜蓿斑蚜采自河北省沧州市献县韩村镇日晟现代农业苜蓿园，采集虫态为成虫，将采集回的成虫置于温度(25±1)℃、相对湿度65％±5％、光周期(L/D)16/8h的培养箱中，以新鲜苜蓿叶片饲养。
选取大小一致活泼的苜蓿斑蚜，采用浸渍法接种，每个重复选取20头大小一致活泼的苜蓿斑蚜于培养皿中，用喷壶均匀喷于虫体，保证每头蚜虫体表含有孢子悬浮液，每个处理5次重复，用0.01％Tween-80的无菌水作空白对照。
4、不同菌株浓度对苜蓿斑蚜的死亡率测定，菌株浓度设计如下表4。每个处理重复5次。
表4不同菌株浓度
Figure BDA0002820030970000052
置于25℃，相对湿度75％、光周期为L/D＝16h/8h的人工气候箱中，连续观察6d，每天挑出新生蚜虫和死亡蚜虫放入有滤纸的培养皿保湿以观察菌丝生长情况，记录苜蓿斑蚜死亡数目，统计死亡率。数据分析使用IBMSPSSStatistics21软件分析，求得毒力回归方程、相关系数R2、LT50。
死亡率(％)＝(死亡虫数/供试虫数)×100
校正死亡率(％)＝[(处理死亡率-对照死亡率)/(1-对照死亡率)]×100
5、结果与分析
由表5可见，生物测定在第三天(72h)时，各菌株的半致死浓度差异显著，其中菌株IPPHBB094的半致死浓度最低，LC50为0.5×104孢子/mL，其次为菌株IPPB34-3、菌株IPPM189、菌株IPPM202、半致死浓度最高为菌株IPPBSX-1，LC50为1.1×106孢子/mL，表明菌株IPPHBB094对苜蓿斑蚜的毒力最强，菌株IPPBSX-1对苜蓿斑蚜的毒力最弱。
表5不同菌株对苜蓿斑蚜的毒力(72h)
Figure BDA0002820030970000061
综上所述，本发明的球孢白僵菌IPPHBB094防治苜蓿斑蚜效果最佳。该菌株培养比较简单，生长速度快，产孢量大，孢子萌发率高，对苜蓿斑蚜不同时间均有致病性，不同浓度下致病浓度较低，对环境友好、不易产生抗药性，可以用于苜蓿斑蚜的防治。

Claims (4)

1.球孢白僵菌(Beauveriabassiana ) IPPHBB094菌株，其特征在于，所述菌株的保藏编号为CGMCC No.19034。
2.一种防治苜蓿斑蚜的方法，所述方法包括利用权利要求1所述的球孢白僵菌(Beauveriabassiana ) IPPHBB094菌株致死苜蓿斑蚜的步骤。
3.一种防治苜蓿斑蚜的生物菌剂，所述菌剂包含权利要求1所述的球孢白僵菌(Beauveriabassiana ) IPPHBB094菌株。
4.权利要求1所述的球孢白僵菌(Beauveriabassiana ) IPPHBB094菌株防治苜蓿斑蚜的应用。
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