CN112521524B - 一种枸杞多糖和海地瓜功能肽协同降血糖的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种以枸杞多糖和海地瓜多肽为主要有效成分的具有辅助降血糖功效的组合物，该组合物对链脲佐菌素引起的Ⅱ型糖尿病大鼠具有保护及改善作用。本发明所制备的组合物具有协同增效作用，可用于辅助降血糖的食品、功能食品、特殊医学用途食品和药品。本发明中采用枸杞作为原料制备具有降血糖功能的枸杞多糖，成本低廉、绿色环保；添加海地瓜功能肽后，枸杞多糖和海地瓜功能肽组合物的降血糖活性明显高于单一的枸杞多糖和海地瓜多肽的活性，具有广阔的药用价值和应用前景。

Description

一种枸杞多糖和海地瓜功能肽协同降血糖的组合物

技术领域

本发明属于活性物质提取应用技术领域，具体涉及一种枸杞多糖和海地瓜功能肽协同降血糖的组合物。

背景技术

随着社会的发展，人们饮食习惯的改变，糖尿病已逐渐发展成为继心血管疾病、肿瘤之后第三大危害人类身体健康的慢性常见内分泌代谢疾病。我国糖尿病患者人数居世界第二，是影响国民身体健康的一大负担。由于糖尿病的慢性病特征，长期的辅助治疗对病情的控制非常重要。因此，当今糖尿病的治疗方案，各国均十分推崇饮食疗法，强调在饮食疗法基础上配合运动治疗、药物治疗的整体治疗方案，其中饮食治疗应该是这套车的驾辕之马,对糖尿病控制最为重要。因此，研制有关辅助降血糖保健食品，是减少糖尿病危害的重要途径。

枸杞多糖是枸杞中最主要的活性成分，已有研究显示枸杞多糖可以促进肝糖原转化、合成和存贮作用，缓解糖尿病临床症状。海地瓜含有丰富的蛋白质、多糖、必需氨基酸、微量元素等多种活性物质，作为低值海参，价格低廉、产量大，可大规模开发利用，且具有降血糖、降脂等活性。国内具有辅助降血糖功能的保健食品大多都以一种或两种降血糖功能因子作为产品的功效成分。开发以枸杞多糖和海地瓜多肽两种降血糖功能因子产生协同作用的复方产品具有现实而重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种以枸杞多糖和海地瓜多肽为主要有效成分的具有辅助降血糖功效的组合物。经动物实验表明，该组合物对链脲佐菌素引起的Ⅱ型糖尿病大鼠具有保护及改善作用。本发明所制备的组合物具有协同增效作用，可用于辅助降血糖的食品、功能食品、特殊医学用途食品和药品。

本发明首先提供一种具有降血糖功效的枸杞多糖，其制备方法包括如下的步骤：

1)将枸杞加入纯水进行剪切，剪切液用去离子水进行提取；提取液离心后获得提取液Ⅰ；

2)将提取液Ⅰ通过分子量为100万的微滤膜***，收集透过微滤膜的提取液，得提取液Ⅱ；

3)将提取液Ⅱ通过分子量为1000的超滤膜***进行浓缩，收集超滤膜截留的提取液，得提取液Ⅲ；

4)将提取液Ⅲ在不高于60℃的条件下进行减压浓缩，然后加入乙醇，搅拌后静置沉淀，进行离心后，沉淀物进行干燥制得枸杞多糖；

所提供的枸杞多糖用于制备降血糖制品；

本发明另一个方面还提供一种降血糖组合物中，枸杞多糖和海地瓜功能肽按以下重量份进行配比：枸杞多糖10～90份，海地瓜功能肽10～90份。

作为优选，枸杞多糖和海地瓜功能肽的重量份数比为30:70。

所述的海地瓜多肽，其制备方法如下：

1)将原料海地瓜粉碎后，加入蒸馏水获得悬浊液；

2)在步骤1)的悬浊液中加入复合蛋白酶进行酶解，酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，离心取上清，得到总海地瓜多肽溶液；

其中蛋白酶为胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合酶，

酶解条件为时间1-5h，温度50℃，pH值6-8；

所述的离心条件如下：8000-12000rpm，离心10-30min；

3)将总海地瓜多肽溶液进行分离后得到海地瓜活性多肽溶液；所述的分离条件如下：先利用分子量1000Da的膜分离，再利用分子量360Da的膜进行分离，得到360-1000Da范围的多肽；

为了便于服用，将降血糖组合物按照药剂学的常规辅料和工艺制备成的内服制剂，如胶囊剂、片剂、颗粒剂等。

本发明采用枸杞作为原料制备具有降血糖功能的枸杞多糖，成本低廉、绿色环保；添加海地瓜功能肽后，枸杞多糖和海地瓜功能肽组合物的降血糖活性明显高于单一的枸杞多糖和海地瓜多肽的活性，具有广阔的药用价值和应用前景。

附图说明

图1：不同物质对Ⅱ型糖尿病大鼠口服葡萄糖耐量的影响图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细的描述。

实施例1枸杞多糖的制备

申请人在研究中发现，采用已有方法制备的枸杞多糖并没有显著的降血糖活性，其中已有方法制备枸杞多糖的步骤如下：

将5kg枸杞子粉碎，加入10倍纯水，加热煮沸4h，用纱布过滤，得到上清液，滤渣再加入10倍纯水，加热煮沸4h，用纱布过滤，得到上清液，合并两次上清液，减压干燥，当液体浓缩体积至枸杞子原料质量的2.5倍时，加入95％乙醇，一边搅拌一边加入，使其乙醇的浓度达到75％后，继续搅拌30min，静止8h，收集沉淀物鼓风干燥12h，干燥温度65℃，得到枸杞多糖。

上述方法制备的枸杞多糖的浸膏得率为23.2％，用苯酚硫酸法进行含量测定，枸杞多糖的含量为31.47％。

为了使制备的枸杞多糖具有明显的降血糖活性，申请人对制备方法进行了改进，建立了如下的制备方法：

将5kg枸杞子粉碎，加入10L纯水，用高速剪切机剪切4次，每次10min，获得枸杞子浸泡液，剪切的转速为10000rpm。将上述经剪切的枸杞子浸泡液转移到提取罐，再加入7倍体积的去离子水提取2h，提取温度60℃；第2次提取加入10倍量的去离子水。提取结束后用管式离心机离心，离心转速为16000rpm。2次提取后合并得到提取液Ⅰ。将上述提取液Ⅰ通过分子量为100万的微滤膜***，过膜温度50℃，压力为2bar。收集透过微滤膜的提取液，得提取液Ⅱ。将上述提取液Ⅱ通过分子量为1000的超滤膜***进行浓缩，过滤温度30℃，压力为10bar。收集超滤膜截留的提取液，得提取液Ⅲ。将提取液Ⅲ继续减压浓缩，温度小于60℃。当浓缩至体积为枸杞子原料质量的2.5倍时，将其置于醇沉罐。一边搅拌一边加入乙醇，使其乙醇的浓度达到75％后，继续搅拌30min。静止8h。分离并回收上清液，沉淀物鼓风干燥12h，干燥温度65℃。得棕色枸杞多糖。上述产品用苯酚硫酸法进行含量测定，枸杞多糖的含量为55.62％。该产品经动物实验检测，具有显著的降血糖活性。

实施例3海地瓜功能肽制备

将100g干海地瓜粉碎，加水制成悬浊液，其中海地瓜与水的质量比为1:6；然后加入2％胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合酶(质量比为1:1)酶解，酶解过程中使用磁力搅拌器，酶解时间4h，温度50℃，pH值7；酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，8000rpm离心20min后取上清，上清液经1000Da和360Da的膜进行过滤，收集360-1000分子量的浓缩液，浓缩液经活性炭脱色、脱腥，喷雾干燥后得到10.65g海地瓜多肽。该产品经动物实验检测，具有显著的降血糖活性。

实施例4：降血糖组合物的制备

将实施例1本发明建立方法制备的枸杞多糖和海地瓜功能肽进行复配，比例分别为按照重量份进行配比：枸杞多糖10～90份，海地瓜功能肽10～90份。经活性筛选分析，枸杞多糖：海地瓜功能肽＝30:70时，降血糖效果最好。

实施例5：胶囊剂的制备

原料配比(以重量百分比计)：降血糖组合物(枸杞多糖：海地瓜功能肽＝30:70)80份，微晶纤维素20份。制备工艺：将降血糖组合物、微晶纤维素混合制粒灌装胶囊。每粒100mg。

实施例6：片剂的制备

原料配比(以重量百分比计)：降血糖组合物(枸杞多糖：海地瓜功能肽＝30:70)80份，微晶纤维素20份。制备工艺：将降血糖组合物、微晶纤维素混合制粒混合制粒，压片。每粒100mg。

实施例7：颗粒剂的制备

原料配比(以重量百分比计)：降血糖组合物(枸杞多糖：海地瓜功能肽＝30:70)80份，微晶纤维素20份。制备工艺：将降血糖组合物、微晶纤维素混合制粒混合制粒，装袋。每粒100mg。

实施例8：动物实验

参照国家食品药品监督管理局保健食品功能评价文件：国食药监保化[2012]107号附件3辅助降血糖功能评价方法。

取60只Wistar雄性大鼠(180～220g)，室温保持25±0.5℃，相对湿度50±5％，并维持12h/12h的灯光/黑暗循环。所有小鼠给予相同量的基本膳食，并提供足够的饮用水适应性喂养一周。正常组给予普通饲料，糖尿病组给予高脂饮食(高脂饲料配方：66.5％基础饲料、2.5％胆固醇、20％蔗糖、10％猪油、1％胆盐)连续4周，各组实验大鼠自由饮食饮水。4周后，实验组大鼠注射28mg/kg·bw STZ(溶于柠檬酸盐缓冲液，pH 4.4)，正常对照组大鼠注射同剂量生理盐水。尾静脉采血测空腹血糖值，以血糖值≥11.1mmol/L者为造模成功，即为Ⅱ型糖尿病大鼠模型。按照实验分组持续灌胃4周。

随机取出十二只作正常对照组，剩余作糖尿病组。实验组分为模型对照组，组合物治疗组(每公斤大鼠所用海地瓜多肽和枸杞多糖组合物的多肽和多糖含量之和，低剂量：0.05g/kg·bw；中剂量：0.1g/kg·bw；高剂量：0.2g/kg·bw)，海地瓜多肽治疗组(0.1g/kg·bw)，枸杞多糖治疗组(0.1g/kg·bw)。连续34d直至实验结束，空白对照组及模型组灌胃同体积溶剂。

(1)空腹血糖(FGB)的测定

末次给药后，禁食不禁水5h，大鼠尾静脉取血20μl加入到0.4ml蛋白质沉淀剂中，混匀，室温静置7min，以7000r/min离心15min，取250μL上清液参照葡萄糖测定试剂盒说明书方法测定空腹血糖含量。

与空白对照组相比，模型组空腹血糖值显著降低，有统计学差异(P＜0.01)(表1)。与模型组相比，组合物低中高剂量组均能使Ⅱ型糖尿病大鼠的血糖水平降低，其中组合物高剂量组大鼠的血糖值显著降低(15.5±3.3mmol/L)(P＜0.01)。当枸杞多糖和海地瓜多肽单独使用时，其效果不如组合物，说明组合物中两者的协同作用增强了其降血糖的作用。

表1：空腹血糖值

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型对照比较^#P＜0.05，##P＜0.01。

(2)口服葡萄糖耐量测定

末次给药后，禁食不禁水5h，灌胃葡萄糖溶液2g/(kg bw)。灌胃后0、0.5、1和2h分别测定血糖含量，按公式计算曲线下面积(area under the curve，AUC)：AUC[mmol/(h·L)]＝0.5A+B+C+0.5D

由图1可知，从0min开始，各组大鼠的血糖均先升高后降低，与Ⅱ型糖尿病模型组大鼠相比，高、中、低剂量组合物组大鼠的血糖水平从60min时均有所降低，且葡萄糖AUC相较模型组显著降低(表2)，表明高、中、低剂量降血糖组合物均能抑制由葡萄糖诱导的血糖升高，从而减缓糖尿病大鼠糖耐量的降低，且降血糖作用与海地瓜多肽、枸杞多糖单独使用相比，作用更明显，说明组合物中两者的协同作用增强了其降血糖的作用。

表2对Ⅱ型糖尿病大鼠口服葡萄糖耐量的影响

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型对照比较^#P＜0.05，##P＜0.01。

(3)血清胰岛素测定：

末次给药后，禁食不禁水10h，大鼠经***麻醉，由腹主动脉取血，分离血清。参照试剂盒说明书测血清胰岛素含量。

如表3所示，与正常对照组比较，模型对照组血清胰岛素含量降低了29.81％(P＜0.05)，经组合物干预后，高剂量组糖尿病大鼠血清胰岛素水平均能够升至正常大鼠水平(P＜0.05)。

表3：对Ⅱ型糖尿病大鼠血清胰岛素的影响

注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型对照比较^#P＜0.05，##P＜0.01。

综上，本发明所提供的降血糖组合物能提升糖尿病大鼠的血清胰岛素水平，对Ⅱ型糖尿病大鼠胰岛素抵抗有改善作用。而海地瓜多肽和枸杞多糖单独使用的效果明显低于组合物，表明两者具有协同增效作用。

Claims (7)

1.一种降血糖组合物，其特征在于，所述的降血糖组合物中枸杞多糖和海地瓜功能肽的重量份组成如下：枸杞多糖10~90份，具有降血糖功效的海地瓜功能肽10~90份；

所述的枸杞多糖的制备方法如下：

1）将枸杞加入纯水进行剪切，剪切液用去离子水进行提取；提取液离心后获得提取液Ⅰ；

2）将提取液Ⅰ通过分子量为100万的微滤膜***，收集透过微滤膜的提取液，得提取液Ⅱ；

3）将提取液Ⅱ通过分子量为1000的超滤膜***进行浓缩，收集超滤膜截留的提取液，得提取液Ⅲ；

4）将提取液Ⅲ在不高于60℃的条件下进行减压浓缩，然后加入乙醇，搅拌

后静置沉淀，进行离心后，沉淀物进行干燥制得枸杞多糖。

2.如权利要求1所述的降血糖组合物，其特征在于，所述的组合物中枸杞多糖和海地瓜功能肽的重量份数比为30:70。

3.如权利要求1或2所述的降血糖组合物，其特征在于，所述的海地瓜功能肽，其制备方法如下：

1）将原料海地瓜粉碎后，加入蒸馏水获得悬浊液；

2）在步骤1) 的悬浊液中加入复合蛋白酶进行酶解，酶解结束后，加入乙醇进行多糖的沉淀，离心取上清，得到总海地瓜多肽溶液；所述的蛋白酶为胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的复合酶；

3）将总海地瓜多肽溶液进行分离后得到海地瓜功能肽溶液；所述的分离条件如下：先利用分子量1000Da的膜分离，再利用分子量360Da的膜进行分离，得到360-1000Da范围的多肽。

4.如权利要求3所述的降血糖组合物，其特征在于，所述的酶解条件为时间1-5 h，温度50℃，pH值6-8。

5.如权利要求3所述的降血糖组合物，其特征在于，所述的2）中离心条件如下：8000-12000rpm，离心10-30min。

6.如权利要求1所述的降血糖组合物，其特征在于，所述的降血糖组合物还包含有药剂学的常规辅料。

7.权利要求6所述的降血糖组合物为胶囊剂、片剂或颗粒剂。

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