CN112469447A - 荧光标记的鼻内递送 - Google Patents
荧光标记的鼻内递送 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112469447A CN112469447A CN201980027922.2A CN201980027922A CN112469447A CN 112469447 A CN112469447 A CN 112469447A CN 201980027922 A CN201980027922 A CN 201980027922A CN 112469447 A CN112469447 A CN 112469447A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- marker
- fluorescent
- annexin
- fluorescent marker
- integrity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 74
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 claims abstract description 61
- 108050008874 Annexin Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 102000000412 Annexin Human genes 0.000 claims abstract description 43
- 208000015114 central nervous system disease Diseases 0.000 claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 24
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 12
- 150000001875 compounds Chemical group 0.000 claims abstract description 11
- 229960004657 indocyanine green Drugs 0.000 claims description 22
- MOFVSTNWEDAEEK-UHFFFAOYSA-M indocyanine green Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CCCCN1C2=CC=C3C=CC=CC3=C2C(C)(C)C1=CC=CC=CC=CC1=[N+](CCCCS([O-])(=O)=O)C2=CC=C(C=CC=C3)C3=C2C1(C)C MOFVSTNWEDAEEK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 22
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 claims description 16
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims description 15
- VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N curcumin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(\C=C\C(=O)CC(=O)\C=C\C=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N 0.000 claims description 14
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 13
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims description 13
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 12
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 claims description 12
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 claims description 10
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 claims description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 9
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 8
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims description 8
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 claims description 8
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 claims description 8
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 claims description 7
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 claims description 7
- 229940109262 curcumin Drugs 0.000 claims description 7
- 235000012754 curcumin Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000004148 curcumin Substances 0.000 claims description 7
- VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N diferuloylmethane Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C=CC(=O)CC(=O)C=CC=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- NJDNXYGOVLYJHP-UHFFFAOYSA-L disodium;2-(3-oxido-6-oxoxanthen-9-yl)benzoate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=CC(=O)C=C2OC2=CC([O-])=CC=C21 NJDNXYGOVLYJHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 7
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 claims description 6
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000004637 cellular stress Effects 0.000 claims description 6
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229940020947 fluorescein sodium Drugs 0.000 claims description 6
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 claims description 6
- UOHUELUXECWLFT-UHFFFAOYSA-N hypericin monocarboxylic acid Chemical compound OC1=CC(O)=C2C(=O)C3=C(O)C=C(C)C4=C3C3=C2C1=C(C(O)=CC(O)=C1C2=O)C1=C3C1=C2C(O)=CC(C(O)=O)=C14 UOHUELUXECWLFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical group [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 5
- 102100034283 Annexin A5 Human genes 0.000 claims description 5
- -1 antimyosin Chemical compound 0.000 claims description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 5
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 4
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 claims description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 4
- JVKBLHAUEXSZHN-NRFANRHFSA-N 1-[[4-(2-fluoroethoxy)phenyl]methyl]-5-[(2s)-2-(phenoxymethyl)pyrrolidin-1-yl]sulfonylindole-2,3-dione Chemical compound C1=CC(OCCF)=CC=C1CN1C2=CC=C(S(=O)(=O)N3[C@@H](CCC3)COC=3C=CC=CC=3)C=C2C(=O)C1=O JVKBLHAUEXSZHN-NRFANRHFSA-N 0.000 claims description 3
- KIHNTPDWZLWMNO-UHFFFAOYSA-N 2,3-dioxoindole-1-sulfonamide Chemical class C1=CC=C2N(S(=O)(=O)N)C(=O)C(=O)C2=C1 KIHNTPDWZLWMNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 3
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 claims description 3
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 claims description 3
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 3
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 claims description 3
- 230000003185 calcium uptake Effects 0.000 claims description 3
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 claims description 3
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 claims description 3
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 claims description 3
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 claims description 3
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 claims description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims description 3
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 claims description 3
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 claims description 3
- CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-N peroxynitrous acid Chemical compound OON=O CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 3
- 102100028118 Annexin A11 Human genes 0.000 claims 2
- 108050005845 Annexin A11 Proteins 0.000 claims 2
- 102100034613 Annexin A2 Human genes 0.000 claims 2
- 108090000668 Annexin A2 Proteins 0.000 claims 2
- 102100034278 Annexin A6 Human genes 0.000 claims 2
- 108090000656 Annexin A6 Proteins 0.000 claims 2
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- QLFZZSKTJWDQOS-YDBLARSUSA-N doramectin Chemical compound O1[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](OC)C[C@H](O[C@@H]2C(=C/C[C@@H]3C[C@@H](C[C@@]4(O3)C=C[C@H](C)[C@@H](C3CCCCC3)O4)OC(=O)[C@@H]3C=C(C)[C@@H](O)[C@H]4OC\C([C@@]34O)=C/C=C/[C@@H]2C)/C)O[C@H]1C QLFZZSKTJWDQOS-YDBLARSUSA-N 0.000 claims 2
- 229960003997 doramectin Drugs 0.000 claims 2
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-N hydroperoxyl Chemical compound O[O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 34
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 13
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 13
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 8
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 7
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 238000011746 C57BL/6J (JAX™ mouse strain) Methods 0.000 description 4
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- 208000003435 Optic Neuritis Diseases 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 206010008129 cerebral palsy Diseases 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 2
- 238000009521 phase II clinical trial Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000004233 retinal vasculature Effects 0.000 description 2
- 210000001210 retinal vessel Anatomy 0.000 description 2
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- PXQFDSYPKNILLI-SSEXGKCCSA-N CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O[C@H](CO)COP(O)(OCCN)=O)=O Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O[C@H](CO)COP(O)(OCCN)=O)=O PXQFDSYPKNILLI-SSEXGKCCSA-N 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 1
- OZLGRUXZXMRXGP-UHFFFAOYSA-N Fluo-3 Chemical compound CC1=CC=C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)C(OCCOC=2C(=CC=C(C=2)C2=C3C=C(Cl)C(=O)C=C3OC3=CC(O)=C(Cl)C=C32)N(CC(O)=O)CC(O)=O)=C1 OZLGRUXZXMRXGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010019196 Head injury Diseases 0.000 description 1
- 101000780122 Homo sapiens Annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000824268 Kuma Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010050081 Neonatal hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 241000519995 Stachys sylvatica Species 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 102000001317 Synaptotagmin I Human genes 0.000 description 1
- 108010055170 Synaptotagmin I Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000003161 choroid Anatomy 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 108010067071 duramycin Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- BTXNYTINYBABQR-UHFFFAOYSA-N hypericin Chemical compound C12=C(O)C=C(O)C(C(C=3C(O)=CC(C)=C4C=33)=O)=C2C3=C2C3=C4C(C)=CC(O)=C3C(=O)C3=C(O)C=C(O)C1=C32 BTXNYTINYBABQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940005608 hypericin Drugs 0.000 description 1
- PHOKTTKFQUYZPI-UHFFFAOYSA-N hypericin Natural products Cc1cc(O)c2c3C(=O)C(=Cc4c(O)c5c(O)cc(O)c6c7C(=O)C(=Cc8c(C)c1c2c(c78)c(c34)c56)O)O PHOKTTKFQUYZPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- SFWLDKQAUHFCBS-WWXQEMPQSA-N lancovutide Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCNC[C@H]4C(=O)N[C@@H](CC=5C=CC=CC=5)C(=O)NCC(=O)N5CCC[C@H]5C(=O)N[C@@H](CC=5C=CC=CC=5)C(=O)N[C@H]([C@@H](SC[C@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CSC3C)CSC2)C(=O)N4)C)C(=O)N1)C(O)=O)[C@@H](O)C(O)=O)=O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 SFWLDKQAUHFCBS-WWXQEMPQSA-N 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004898 mitochondrial function Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002577 ophthalmoscopy Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940097156 peroxyl Drugs 0.000 description 1
- 231100000760 phototoxic Toxicity 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- SSKVDVBQSWQEGJ-UHFFFAOYSA-N pseudohypericin Natural products C12=C(O)C=C(O)C(C(C=3C(O)=CC(O)=C4C=33)=O)=C2C3=C2C3=C4C(C)=CC(O)=C3C(=O)C3=C(O)C=C(O)C1=C32 SSKVDVBQSWQEGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 210000001116 retinal neuron Anatomy 0.000 description 1
- TUFFYSFVSYUHPA-UHFFFAOYSA-M rhodamine 123 Chemical compound [Cl-].COC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C(C=CC(N)=C2)C2=[O+]C2=C1C=CC(N)=C2 TUFFYSFVSYUHPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000006444 vascular growth Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
- A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0032—Methine dyes, e.g. cyanine dyes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0032—Methine dyes, e.g. cyanine dyes
- A61K49/0034—Indocyanine green, i.e. ICG, cardiogreen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
- A61K49/0013—Luminescence
- A61K49/0017—Fluorescence in vivo
- A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
- A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
- A61K49/0041—Xanthene dyes, used in vivo, e.g. administered to a mice, e.g. rhodamines, rose Bengal
- A61K49/0043—Fluorescein, used in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0043—Nose
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Otolaryngology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明提供了一种CNS疾病的诊断方法，包括向受试者施用视网膜完整性的荧光标记并生成受试者眼睛的图像，其中，还提供了通过鼻内给药递送荧光标记，以及在此方法中使用的鼻内给药的视网膜完整性的荧光标记。此外，本发明还提供了一种药物组合物，其包含结合至2kDa或更小的化合物的膜联蛋白或其功能性片段或衍生物，其中，药物组合物包含在浓度至少为mg/ml下结合的膜联蛋白或其功能性片段或衍生物。
Description
技术领域
本发明涉及用于诊断CNS疾病的荧光标记。
背景技术
视网膜评估可以提供关于许多***性疾病的存在和严重性的信息。例如，凋亡的视网膜细胞的检测(DARC)描述了一种监测视网膜细胞死亡速率的技术，最近完成了诊断青光眼的I期临床试验(科尔迪罗等，2017年)，目前正在一系列神经退行性疾病进行中的II期临床试验，包括青光眼、与年龄有关的黄斑变性、视神经炎和唐氏病(作为阿尔茨海默氏病的模型)。该技术目前包括静脉内施用一种称为Anx776的新型荧光剂，新型荧光剂包含内源蛋白Annexin A5的改良版，其与近红外荧光团Dy-776荧光结合(科尔迪罗等，2017)。
DARC利用眼睛的独特光学特性，可以使用荧光标记的人膜联蛋白V衍生物直接观察患者的单神经细胞凋亡。膜联蛋白V是一种人蛋白，其具有在存在钙的条件下与磷脂酰丝氨酸(PS)结合的能力。PS存在于每个细胞的质膜中，但是，凋亡细胞在质膜的外部小叶中表达PS。膜联蛋白V与暴露的PS结合，从而识别细胞凋亡。
对于DARC的I期和II期临床试验，Anx776均通过静脉给药。通过共聚焦扫描激光检眼镜(cSLO)成像用于检测视网膜疾病的其他荧光分子也主要通过静脉注射给药。例如，荧光素钠和吲哚菁绿(ICG)通常静脉给药以标记视网膜脉管***，以识别与年龄相关性黄斑变性(AMD)有关的异常血管生长(血管生成)和渗漏(约齐克等，2005)。
静脉给药的使用需要直接的医学监督，意味着除非怀疑可疑病理，否则不会对患者进行常规评估。因此，需要可用于评估视网膜的替代技术，以使患者能够更广泛地进行此类评估，并可能更早地诊断视网膜和神经退行性疾病。
发明内容
根据本发明的第一方面，本发明提供了视网膜完整性的荧光标记，用于诊断中枢神经***(CNS)疾病，其中，荧光标记通过鼻内给药递送。出人意料的是，本申请的发明人发现，鼻内施用荧光标记导致视网膜中荧光的快速积累，视网膜成像的结果与先前静脉施用相同荧光剂后获得的结果相同。
不受理论的束缚，发明人相信，鼻内递送的视网膜完整性的荧光标记被***吸收到循环中。由于局部给药，视网膜完整性的荧光标记可能需要减少剂量，且与相同试剂的全身给药相比起效更快。
如本说明书所用，视网膜完整性的荧光标记是指用于查询视网膜细胞的健康和/或视网膜细胞和/或血管的完整性的荧光标记。例如，荧光标记可以识别和/或区分凋亡和坏死细胞，或识别血管渗漏或血管生成的区域。响应于激发，荧光标记发光且可以具有约400nm至约1000nm，优选约500nm至约900nm的发射波长。
视网膜完整性的荧光标记优选以适合局部递送，尤其是鼻内递送的形式提供。视网膜完整性的荧光标记可以以药物组合物的形式提供，可以以适合吸入的溶液、悬浮液或干粉形式提供。包含视网膜完整性的荧光标记的药物组合物可以是无菌的，且可以包含一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。合适的载体和赋形剂是本领域技术人员所熟悉的，并且可以根据鼻内递送的预期途径进行优化。例如，包含视网膜完整性的荧光标记的组合物还可包含缓冲剂、粘合剂、防腐剂、增稠剂或抗氧化剂，如海藻糖。
在本发明的一些实施例中，视网膜完整性的荧光标记可以是视网膜血管完整性的荧光标记。通常，荧光标记将进入视网膜血管并在其中循环，从而易于观察到异常的血管生长(血管生成)和/或渗漏部位。
视网膜血管完整性的荧光标记可以具有约2kDa或以下，或1kDa或以下的分子量。在本发明的一些实施例中，视网膜血管完整性的荧光标记可具有约100Da、或约1kDa的分子量，优选约300Da至约800Da的分子量。
用于本发明的合适的视网膜血管完整性的荧光标记包括荧光团，特别优选的视网膜血管完整性的荧光标记包括荧光素钠和吲哚菁绿(ICG)。
如上所述，视网膜血管完整性的荧光标记将通过鼻内给药，且可以与相同标记静脉内给药的剂量相同或更少的剂量来给药。例如，荧光素钠可以约50mg/mL至约500mg/mL的浓度鼻内施用，优选约50mg/mL至约200mg/mL的浓度。在本发明的一些实施例中，荧光素钠可以约以100mg/mL浓度鼻内施用。可以以浓度为约1mg/mL至约100mg/mL，优选约25mg/mL至约100mg/mL鼻内施用ICG。在本发明的一些实施例中，ICG可以约50mg/mL鼻内施用。
在本发明的一些实施例中，视网膜完整性的荧光标记可以是视网膜细胞完整性的标记。通常，视网膜细胞完整性荧光标记包括荧光标签和细胞凋亡、坏死、细胞活性、细胞应激或蛋白质聚集中的一种或多种标记。
荧光标签是指响应激发而发光的化合物或分子(如荧光团)，其可以选择使用，因为信噪比提高，从而在遵守曝光安全标准的同时提高了图像分辨率和灵敏度，避免光毒作用。优选荧光标签在给药时几乎不引起炎症或不引起炎症。荧光标签可以具有红外或近红外范围的波长。荧光标签可以具有约400nm至约1000nm，优选约500nm至约900nm，更优选约700nm至约900nm的发射波长。
合适的荧光标签包括荧光素钠、吲哚菁绿(ICG)、姜黄素、IRDye700、IRDye800、Dy-776、Dy-488和D-781中的一种或多种。在本发明的优选实施例中，荧光标签是Dy-776。
可以使用用于将荧光标签与标记结合的标准技术来制备视网膜细胞完整性荧光标记。这样的标记可以从众所周知的来源获得，例如Dyomics。用于将标签与标记结合的适当技术是本领域已知的，并且可以由标签的制造商提供。
凋亡标记是指使经历凋亡的细胞与活细胞区分开的标记。此外，标记优选应能够从坏死细胞中区分凋亡细胞。例如，可以是特异性结合凋亡细胞但不结合活细胞或坏死细胞的化合物或分子。例如，凋亡标记包括膜联蛋白家族蛋白。膜联蛋白是在阳离子存在下可逆地结合到细胞膜上的蛋白质。特别地，膜联蛋白在钙存在的条件下能够结合磷脂酰丝氨酸(PS)。PS存在于每个细胞的质膜中，但是，凋亡细胞在质膜的外部小叶中表达PS。膜联蛋白与暴露的PS结合，从而识别细胞凋亡。可用于本发明的膜联蛋白可以是天然的或重组的。蛋白质可以是完整的，也可以是功能片段，也就是说，膜联蛋白的片段或部分特异性结合与整个蛋白质相同的分子。此外，可以使用此类蛋白质的功能性衍生物。特别地，膜联蛋白的功能片段或衍生物可以包括含有“膜联蛋白重复”的分子，是在单个膜联蛋白内和家族成员之间均保守的约70个氨基酸的结构域。可获得多种膜联蛋白，如美国专利申请公开号2006/0134001A中描述的膜联蛋白。优选的膜联蛋白是膜联蛋白5，其在本领域众所周知的。其他可以使用的膜联蛋白包括膜联蛋白11、2和6。其他凋亡标记在本领域中是已知的，例如，包括突触标签素I的C2A结构域、杜拉霉素、基于非肽的靛红磺酰胺类似物，例如WC-II-89和ApoSense、例如NST-732、DDC和ML-10(圣休伯特等，2009)。
在本发明的优选实施例中，凋亡的标记是膜联蛋白128(泰特等，2005)。膜联蛋白128是膜联蛋白5的变体，与野生型的区别在于两个单氨基酸突变。膜联蛋白128在N-末端包括一个暴露的硫醇基，从而提高了分子标签(如荧光标记)的结合效率。
在本发明的优选实施例中，视网膜细胞完整性荧光标记包括与Dy-776结合的膜联蛋白128，膜联蛋白128和Dy-776可以以1∶1的荧光拉贝克标记比率结合。
坏死标记是指使经历坏死的细胞与活细胞、经历凋亡的细胞区分开的标记。例如，可以是特异性结合坏死细胞但不结合活细胞或凋亡细胞的化合物或分子。坏死的标记包括碘化丙啶(PI)，一种与核酸结合而几乎没有或没有序列优先性的嵌入剂。其他坏死标记在本领域中是已知的，包括焦磷酸盐、抗肌球蛋白、葡糖酸盐、金丝桃素及其衍生物，如金丝桃素一元羧酸和棕榈酸，例如双-酰肼-双DTPA棕榈酸。特别地，使用了99mTc-焦磷酸盐、111-抗肌球蛋白、99mTc-葡萄糖酸盐和亚甲基蓝。
细胞活性的其他指示也可以用于鉴定凋亡或坏死的细胞。例如，可以观察到线粒体功能的变化，可以将活性氧(ROS)用作标记，可以将钙离子用作标记。细胞活性的标记可以包括膜染料、线粒体染料、自噬染料、坏死染料和钙流中的一种或多种。更特别地，细胞活性的标记可以包括Fluo-3，N-(荧光素-5-硫代氨基甲酰基)-1,2-二十六烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、JC-1，双发射JC-9、还原若丹明和罗米明、若丹明123和Di-8-ANePPS中的一种或多种。细胞应激的标记可以包括脂质过氧化、谷胱甘肽(GSH)或活性氧(ROS)(如超氧化物、过氧自由基、过氧化氢，羟基和过亚硝酸盐)中的一种或多种标记。
视网膜中的蛋白质聚集可以发生在视网膜神经元内或周围的细胞内或细胞外，但是，通常发生在视网膜脉管***之外。已知蛋白质聚集体的存在与经历神经变性的细胞相关。合适的蛋白质聚集标记包括刚果红、姜黄素或硫黄素S中的一种或多种。
如上所述，本发明提供了鼻内递送的视网膜完整性的荧光标记，用于诊断受试者的CNS病症。受试者优选是哺乳动物，包括人，可以是儿科病人或老年患者。可以通过分析视网膜完整性来识别CNS病症，参见WO2009/077750和WO2011/055121描述的方法。例如，视网膜完整性的荧光标记可用于通过标记凋亡和/或坏死细胞来显示视网膜中细胞死亡的分布，根据分布可以区分具有不同凋亡和/或坏死活性模式的不同神经退行性疾病。
中枢神经***疾病可能是炎性的(如关节炎或肉芽肿)、传染性的(如病毒、脑炎或细菌)、血管的(如血管生成、闭塞或代谢)，或退化性的(如青光眼、与年龄相关性黄斑变性(AMD)、阿尔茨海默氏病或帕金森氏病)。在本发明的一些实施例中，CNS病症可以是神经退行性疾病，尤其是眼神经退行性疾病。术语“眼神经退行性疾病”是本领域技术人员众所周知的，是指由眼神经元逐渐和进行性丧失引起的疾病，包括但不限于青光眼、AMD、视神经炎和糖尿病性视网膜病变。神经退行性疾病包括帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、亨廷顿氏病和弗里德里希共济失调。在本发明的一些实施例中，CNS病症可包括颅脑外伤、中风、脑瘫(如由新生儿缺氧引起的脑瘫)，和癌症(包括脑瘤)。
本发明还提供了一种用于诊断CNS疾病的方法，其包括向患者施用如本申请描述的视网膜完整性的荧光标记并生成患者视网膜的图像，其中，视网膜完整性的荧光标记是鼻内施用的。患者视网膜的图像优选在体内产生，可以使用cSLO成像获得。图像中荧光信号的存在或不存在可以指示CNS疾病的存在或不存在，从而使临床医生能够诊断疾病的存在或不存在。如果图像中存在荧光信号，则荧光的位置和分布可以使临床医生区分中枢神经***疾病的类型。例如，荧光信号可以指示血管生成或血管渗漏的部位。或者，荧光信号可以指示凋亡和/或坏死细胞的分布模式和/或数量。
本发明诊断方法还可以用于监测疾病的进展，例如，以评估治疗的有效性或对疾病进行分期。可以将患者眼睛的第一个体内图像与同一患者眼睛的后一个体内图像进行比较，后一个体内图像是在第一个图像后的几天、几周或几个月内拍摄的。荧光信号的变化可以指示疾病进展或有效的治疗方法。例如，荧光信号的增加可能表明凋亡细胞数量增加，可能表明疾病进展。可以根据WO2011/055121的描述，对图像进行分析。
在本发明的另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含上述视网膜细胞完整性的标记，其中，药物组合物包含与2kDa或更小的化合物结合的膜联蛋白或其功能性片段或衍生物，其中膜联蛋白或其功能性片段或衍生物以至少5mg/ml的浓度存在。当膜联蛋白以约2mg/ml或更高的浓度存在时，包含膜联蛋白的组合物会遇到沉淀问题。但是，本申请的发明人已经能够解决该问题，以便提供包含浓度为至少5mg/ml的膜联蛋白的组合物。在避光条件下，该组合物已证明在25℃下可稳定储存长达50天。不受理论的束缚，本申请的发明人相信，2kDa或更小的化合物与膜联蛋白的N-末端的结合可在空间上阻碍蛋白质聚集。
结合可以是静电的或共价的，化合物优选与膜联蛋白或其功能片段或衍生物的N-末端(即前30个氨基酸)结合。在本发明的一些实施例中，膜联蛋白或其功能片段或衍生物可以约5mg/ml至约20mg/ml，优选约5mg/ml至约10mg/ml的浓度存在。
化合物可以是有机化合物或无机化合物，且可以具有约100Da至约2kDa，优选约200Da至约1kDa，更优选约300Da至约800Da的尺寸。化合物可以是如上所述的荧光标记，或者可以是治疗剂。合适的荧光标记可以选自荧光素钠、吲哚菁绿(ICG)、姜黄素、IRDye700、IRDye800、Dy-776、Dy-488和D-781中的一种或多种。在本发明的优选实施例中，荧光标记是Dy-776。
在本发明的优选实施例中，药物组合物包含与Dy776结合的膜联蛋白128。出人意料的是，已经评估了几种浓缩视网膜细胞完整性的标记的方法，结果证明与Dy776结合的膜联蛋白128在高浓度下比膜联蛋白5更稳定。
药物组合物优选适合鼻内给药(如适合吸入的溶液、悬浮液或干粉)，且可以包含如上所述的合适的载体和/或赋形剂。药物组合物可以是冻干粉的形式，且可以以适合吸入的干粉的形式给予患者。或者，在施用前，可以将冻干粉再水化以形成悬浮液。
附图说明
以下将参考附图仅以举例的方式详细描述本发明。
图1.Anx776的鼻内给药迅速到达小鼠视网膜，并标记凋亡视网膜细胞。同一C57BL/6J小鼠眼睛在基线[A，B]，以及鼻内施用Anx776[C，D]和玻璃体内4％DMSO[B，D]3小时后的cSLO图像。请注意，仅在玻璃体内注射4％DMSO的情况下，才能在眼睛中看到凋亡的出现(白斑)[D]。[E]在基线和IN Anx776给药后3h整理的DARC点。[F]磷脂酰丝氨酸结合试验表明，与新鲜Anx776材料相比，冻干浓缩的Anx776在25℃储存50天同时避光(EC50比率<2)后，仍保持良好的PS结合活性。
图2.在C57BL/6J小鼠(488nm激发)中施用0.025mL荧光素钠(20％w/v)后的cSLO图像。
图3.在C57BL/6J小鼠中鼻内施用0.025mL吲哚菁绿(ICG)(795nm激发)。
实施例
实例a)Anx776鼻内给药后迅速到达循环和视网膜
膜联蛋白128以其马来酰亚胺形式与Dy-776结合，提供了视网膜细胞完整性的标记，记为Anx776。将目前用于临床的Anx776制剂(0.2mg/mL)在装有20mM柠檬酸钠、280mM葡萄糖，pH 6.2的注射用水的缓冲液中，用5kDa MWCO过滤器浓缩25倍至5mg/mL。
在体内对浓缩的Anx776(hiAnx776)进行测试。使用已成熟的模型[6]，向玻璃体腔内注射4％DMSO(1pL注射液，PBS缓冲液)以诱导视网膜细胞凋亡，同时向C57BL/6J小鼠鼻内给药hiAnx776(25pL)。图1[A-B]示出了在治疗前，在基线时视网膜的纯代表性cSLO图像(图1A)和DMSO-侵染(图1B)视网膜的代表性cSLO图像。用4％DMSO注射(图ID)和鼻内Anx776(图1C和图ID)治疗3小时后，对相同的眼睛成像。在经DMSO处理的眼睛中清晰可见DARC斑点(图ID)，提供了第一个证据表明：鼻内给药Anx776可以以与静脉内或玻璃体内给药DARC相似的方式，以足以标记凋亡性视网膜细胞的浓度到达视网膜。手动定量DARC点表明：玻璃体内DMSO损伤后眼睛凋亡增加，与先前在模型中玻璃体内注射DARC的观察结果一致(约齐克等，2005)。
我们假设Anx776吸入循环后会被***吸收，进入视网膜。我们用Anx776进行的实验和临床数据证实，静脉内给药后全身性Anx776可以到达视网膜(科尔迪罗等，2017)。
Anx776可以很容易地配制成冻干粉(用海藻糖作为防冻剂)，其在25℃下避光储存后最多可保留PS结合活性50天(图IF)。已经制备了含有至多10mg/mL的Anx776的Anx776粉末，其可以在IN递送之前被再水化，或者作为粉末制剂直接施用。
b)目前用于诊断视网膜疾病的小荧光分子迅速进入循环***，足以在鼻内应用后用于诊断
已经观察到鼻腔给药后，荧光蛋白Anx776(36kDa)进入循环，我们接下来试图确定目前静脉内给药以诊断视网膜疾病的小荧光分子(荧光素钠和ICG分别为376Da和775Da)是否也可以以这种方式递送。鼻内给药荧光素钠(图2)或ICG(图3)都导致视网膜血管和脉络膜中荧光的快速积累。通过cSLO获得的图像与先前静脉注射相同荧光剂后获得的图像相同(库玛等，2014)。由于局部给药，与***给药试剂的制剂相比，可能需要更少剂量并起效更快。
参考文献
M.F.Cordeiro,E.M.Normando,M.J.Cardoso,S.Miodragovic,S.Jeylani,B.M.Davis,L.Guo,S.Ourselin,R.A'Hern,P.A.Bloom,Brain 2017,274,61.
J.J.Jorzik,A.Bindewald,S.Dithmar,F.G.Holz,Retina 2005,25,405.
S.Kumar,Z.Berriochoa,A.D.Jones,Y.Fu,J.Vis.Exp.2014,e51061.
De Saint-Hubert M,Prinsen K,Mortelmans L,Verbruggen A,MottaghyFM.Methods.2009 Jun；48(2):178-87
JF.Tait,C.Smith,FG.Blankenberg.J Nucl Med May 1,2005 vol.46no.5 807-815
Claims (34)
1.一种用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标记通过鼻内给药递送。
2.根据权利要求1所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标记为粉末、悬浮液或溶液形式。
3.根据权利要求1或2所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标记为视网膜血管完整性的标记。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标记的分子量为约2kDa或更小。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标记选自荧光素钠或吲哚菁绿(ICG)中的一种或多种。
6.根据权利要求1或2所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标记是视网膜细胞完整性的标记。
7.根据权利要求1、2或6所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标记包括荧光标签和凋亡、坏死、细胞活性、细胞应激或蛋白质聚集中的一种或多种的标记。
8.根据权利要求6或7所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标签具有约400nm至约1000nm的发射波长。
9.根据权利要求6至8中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标签选自荧光素钠、吲哚菁绿(ICG)、姜黄素、IRDye700、IRDye800、Dy-776、Dy-488和D-781中的一种或多种。
10.根据权利要求6至9中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述凋亡标记选自膜联蛋白、突触素I的C2A结构域、杜拉霉素、基于非肽的靛红磺酰胺类似物，如WC-II-89和ApoSense，如NST-732、DDC和ML-10，中的一个或多个。
11.根据权利要求10所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述膜联蛋白选自膜联蛋白2、膜联蛋白5、膜联蛋白6、膜联蛋白11或膜联蛋白128中的一种或多种。
12.根据权利要求6至9中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，坏死标记选自碘化丙啶(PI)、焦磷酸盐、抗肌球蛋白、草酸盐、金丝桃素、金丝桃素一元羧酸、棕榈酸、双-酰肼-双-DTPA棕榈酸、99mTc-焦磷酸盐、111-抗肌球蛋白、99mTc-葡萄糖酸盐和亚甲基蓝。
13.根据权利要求6至9中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，细胞活性标记选自膜染料、线粒体染料、自噬染料、坏死染料和钙流中的一种或多种。
14.根据权利要求6至9中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，细胞应激的标记选自脂质过氧化、谷胱甘肽(GSH)或活性氧(ROS)中的一种或多种，如超氧化物、过氧自由基、过氧化氢、羟基、过氧亚硝酸盐。
15.根据权利要求6至9中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述蛋白质聚集的标记选自刚果红、姜黄素或硫黄素S中的一种或多种。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，CNS疾病是炎性的(如关节炎或肉芽肿)、感染性的(如病毒、脑炎或细菌)、血管的(如血管生成、闭塞或代谢)，或退化性的(如青光眼、与年龄相关的黄斑变性(AMD)、阿尔茨海默氏病，或帕金森氏病)。
17.一种诊断CNS疾病的方法，其包括对受试者施用视网膜完整性的荧光标记并生成受试者眼睛的图像，其中，所述荧光标记通过鼻内给药递送。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述荧光标记为粉末、悬浮液或溶液的形式。
19.根据权利要求17或18所述的方法，其中，所述荧光标记是视网膜血管完整性的标记。
20.根据权利要求17至19中任一项所述的方法，其中，所述荧光标记的分子量为约2kDa或更小。
21.根据权利要求17至20中任一项所述的方法，其中，所述荧光标记选自荧光素钠或吲哚菁绿(ICG)中的一种或多种。
22.根据权利要求17或18所述的方法，其中，所述荧光标记是视网膜细胞完整性的标记。
23.根据权利要求17、18或22所述的方法，其中，所述荧光标记包括荧光标签和凋亡、坏死、细胞活性、细胞应激或蛋白质聚集中的一种或多种的标记。
24.根据权利要求22或23所述的方法，其中，所述荧光标签具有约400nm至约1000nm的发射波长。
25.根据权利要求22至24中任一项所述的方法，其中，所述荧光标签选自荧光素钠、吲哚菁绿(ICG)、姜黄素、IRDye700、IRDye800、Dy-776、Dy-488和D-781中的一种或多种。
26.根据权利要求22至25中任一项所述的方法，其中，所述凋亡标记选自膜联蛋白、突触素I的C2A结构域、杜拉霉素、基于非肽的靛红磺酰胺类似物中的一个或多个，如WC-II-89和ApoSense、如NST-732、DDC和ML-10。
27.根据权利要求26所述的方法，其中，所述膜联蛋白选自膜联蛋白2、膜联蛋白5、膜联蛋白6、膜联蛋白11或膜联蛋白128中的一种或多种。
28.根据权利要求22至25中任一项所述的方法，其中，所述坏死标记选自碘化丙啶(PI)、焦磷酸盐、抗肌球蛋白、草酸盐、金丝桃素、金丝桃素一元羧酸、棕榈酸、双酰肼-双-DTPA棕榈酸、99mTc-焦磷酸盐、111-抗肌球蛋白、99mTc-葡萄糖酸盐和亚甲基蓝中的一种或多种。
29.根据权利要求22至25中任一项所述的方法，其中，所述细胞活性标记选自膜染料、线粒体染料、自噬染料、坏死染料和钙流中的一种或多种。
30.根据权利要求22至25中任一项所述的方法，其中，所述细胞应激的标记选自脂质过氧化、谷胱甘肽(GSH)或活性氧(ROS)中的一种或多种，如超氧化物、过氧自由基、过氧化氢，羟基、过氧亚硝酸盐。
31.根据权利要求22至25中任一项所述的方法，其中，所述蛋白质聚集的标记选自刚果红、姜黄素或硫黄素S中的一种或多种。
32.根据权利要求17至31中任一项的方法，其中，所述CNS病症是炎性的(如关节炎或肉芽肿)、感染性的(如病毒，脑炎或细菌)、血管的(如血管生成、闭塞或代谢)，或退化性的(如青光眼、与年龄相关的黄斑变性(AMD)、阿尔茨海默氏病或帕金森氏病)。
33.一种药物组合物，包含与2kDa或更小的化合物结合的膜联蛋白或其功能片段或衍生物，其中，药物组合物包含在浓度至少5mg/ml下结合的膜联蛋白或其功能性片段或衍生物。
34.根据权利要求33所述的药物组合物，其中，所述膜联蛋白或其功能片段或衍生物是膜联蛋白128，2kDa或以下的化合物是Dy776。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB1806581.3 | 2018-04-23 | ||
| GBGB1806581.3A GB201806581D0 (en) | 2018-04-23 | 2018-04-23 | Fluorescent Marker |
| PCT/GB2019/051119 WO2019207287A1 (en) | 2018-04-23 | 2019-04-23 | Intranasal delivery of fluorescent marker |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112469447A true CN112469447A (zh) | 2021-03-09 |
Family
ID=62236298
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201980027922.2A Pending CN112469447A (zh) | 2018-04-23 | 2019-04-23 | 荧光标记的鼻内递送 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20210228745A1 (zh) |
| EP (1) | EP3784293A1 (zh) |
| JP (1) | JP2021522215A (zh) |
| CN (1) | CN112469447A (zh) |
| AU (1) | AU2019259198A1 (zh) |
| CA (1) | CA3097661A1 (zh) |
| GB (1) | GB201806581D0 (zh) |
| SG (1) | SG11202010320RA (zh) |
| WO (1) | WO2019207287A1 (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020192162A1 (en) * | 2001-04-03 | 2002-12-19 | Thesus Imaging Corporation | Methods for using annexin for detecting cell death in vivo and treating associated conditions |
| CN1741811A (zh) * | 2002-03-29 | 2006-03-01 | 马克西姆医药公司 | Rom产生与释放抑制剂治疗和预防眼内损伤的用途 |
| CN101896208A (zh) * | 2007-12-14 | 2010-11-24 | Ucl商业股份有限公司 | 眼部细胞凋亡荧光标记物 |
| CN102690345A (zh) * | 2011-03-24 | 2012-09-26 | 江苏靶标生物医药研究所有限公司 | 人膜联蛋白v变体及其表达、制备和应用 |
| CN102712614A (zh) * | 2009-12-04 | 2012-10-03 | 拜奥蒂乌姆股份有限公司 | 杂环取代的呫吨染料 |
| US20150125396A1 (en) * | 2011-04-27 | 2015-05-07 | Adlyfe, Inc. | Ocular detection of amyloid proteins |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4937121B2 (ja) * | 2004-07-14 | 2012-05-23 | ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ | アポトーシスのモジュレーターを同定するためのｐ７５ＮＴＲスクリーニングアッセイ |
| US7871623B2 (en) * | 2005-12-21 | 2011-01-18 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Compositions and methods for imaging pain and stress in vivo |
-
2018
- 2018-04-23 GB GBGB1806581.3A patent/GB201806581D0/en not_active Ceased
-
2019
- 2019-04-23 CA CA3097661A patent/CA3097661A1/en active Pending
- 2019-04-23 SG SG11202010320RA patent/SG11202010320RA/en unknown
- 2019-04-23 WO PCT/GB2019/051119 patent/WO2019207287A1/en unknown
- 2019-04-23 EP EP19719610.8A patent/EP3784293A1/en active Pending
- 2019-04-23 AU AU2019259198A patent/AU2019259198A1/en active Pending
- 2019-04-23 US US17/050,121 patent/US20210228745A1/en active Pending
- 2019-04-23 JP JP2020558499A patent/JP2021522215A/ja active Pending
- 2019-04-23 CN CN201980027922.2A patent/CN112469447A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020192162A1 (en) * | 2001-04-03 | 2002-12-19 | Thesus Imaging Corporation | Methods for using annexin for detecting cell death in vivo and treating associated conditions |
| CN1741811A (zh) * | 2002-03-29 | 2006-03-01 | 马克西姆医药公司 | Rom产生与释放抑制剂治疗和预防眼内损伤的用途 |
| CN101896208A (zh) * | 2007-12-14 | 2010-11-24 | Ucl商业股份有限公司 | 眼部细胞凋亡荧光标记物 |
| CN102712614A (zh) * | 2009-12-04 | 2012-10-03 | 拜奥蒂乌姆股份有限公司 | 杂环取代的呫吨染料 |
| CN102690345A (zh) * | 2011-03-24 | 2012-09-26 | 江苏靶标生物医药研究所有限公司 | 人膜联蛋白v变体及其表达、制备和应用 |
| US20150125396A1 (en) * | 2011-04-27 | 2015-05-07 | Adlyfe, Inc. | Ocular detection of amyloid proteins |
Non-Patent Citations (7)
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20210228745A1 (en) | 2021-07-29 |
| AU2019259198A1 (en) | 2020-11-12 |
| CA3097661A1 (en) | 2019-10-31 |
| JP2021522215A (ja) | 2021-08-30 |
| WO2019207287A1 (en) | 2019-10-31 |
| SG11202010320RA (en) | 2020-11-27 |
| EP3784293A1 (en) | 2021-03-03 |
| GB201806581D0 (en) | 2018-06-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2014323563B2 (en) | Chlorotoxin conjugates and methods of use thereof | |
| DK2323696T3 (en) | OPTICAL PROCEDURE FOR DETECTING ALZHEIMER'S DISEASE | |
| EP2370110B1 (en) | Labeling composition for intraocular tissue, labeling method of intraocular tissue, and screening method | |
| JP5649450B2 (ja) | 眼における細胞死についての蛍光マーカー | |
| Xu et al. | Advances in the development of imaging probes and aggregation inhibitors for alpha-synuclein | |
| WO2008151749A2 (de) | Aktivierbare diagnostische und therapeutische verbindung | |
| Chubarov et al. | Design of protein homocystamides with enhanced tumor uptake properties for 19F magnetic resonance imaging | |
| Chen et al. | Anti-angiogenesis through noninvasive to minimally invasive intraocular delivery of the peptide CC12 identified by in vivo-directed evolution | |
| Sarkar et al. | Nanodiagnostics and Nanotherapeutics for age-related macular degeneration | |
| US20220152218A1 (en) | Human papillomavirus nanoparticle formulations | |
| US10488417B2 (en) | Compounds for use as imaging agents | |
| CN107847554A (zh) | 治疗性肽及其使用方法 | |
| CN112469447A (zh) | 荧光标记的鼻内递送 | |
| TW202003015A (zh) | Ｃ端腦部多巴胺神經滋養因子（ｃｄｎｆ）及中腦星狀細胞－衍生之神經滋養因子（ｍａｎｆ）片段、包含彼之醫藥組成物及其用途 | |
| US11541098B2 (en) | Peptide composition for treating excitatory neurotoxicity related injuries | |
| ES2674713T3 (es) | Cuantificación de la muerte celular | |
| US20180104361A1 (en) | Dye molecule and dye preparations, in particular for use in surgical methods of ophthalmic surgery and for dyeing proteins | |
| EP2046392A2 (de) | Röntgendichtes konjugat | |
| EP4186918A1 (en) | Inhibitory peptides for the diagnostic and/or treatment of tauopathies | |
| Berger et al. | In vivo monitoring the fate of Cy5. 5-Tat labeled T lymphocytes by quantitative near-infrared fluorescence imaging during acute brain inflammation in a rat model of experimental autoimmune encephalomyelitis | |
| WO2020205465A1 (en) | Ph-dependent composition matters useful for study and diagnosis of alzheimer's disease |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |