CN112457383A - 一种多肽、制备方法及其医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种多肽、制备方法及其医药用途。地肤子为藜科植物地肤的干燥成熟果实。本发明提供了一种分子量介于3000u和5000u之间的地肤子碱性蛋白酶酶解多肽，活性测试显示该酶解多肽具有明显的抗血小板聚集活性，且这种活性随着地肤子酶解多肽浓度的升高而增强，可以用于开发成抗血小板聚集的药物。
Description
技术领域
本发明属于多肽领域，具体涉及一种多肽、制备方法及其医药用途。
背景技术
心脑血管疾病是指由高脂血症、高血压、血液黏稠、动脉粥样硬化等导致的心脏、大脑及全身组织发生的缺血性或出血性疾病，对人类健康造成严重威胁。近年来，随着我国老龄化的加重和生活节奏的加快，心脑血管发病率逐年上升，已成为致居民死亡的头号杀手。分子生物学研究表明，多数心脑血管疾病的发病与动静脉血栓形成有关，血小板聚集是导致血栓发生的主要因素之一(陈晓嫚等，丹皮酚酯类化合物的设计与抗血小板聚集活性研究，2020年8月)。开发抗血小板聚集药物能有效抑制血栓形成，减少心脑血管疾病发病率。
地肤子为藜科植物地肤的干燥成熟果实，味辛、苦，性寒，具有清热利湿、祛风止痒的功效，主产于河北、山西、山东，全国大部分地区亦有产。
目前，地肤子中多肽的分离和活性研究较少。
发明内容
本发明的目的在于提供一种多肽、制备方法及其医药用途。
实现本发明上述目的技术方案如下：
一种多肽，该多肽为一种分子量介于3000u和5000u间的地肤子酶解多肽。
上述多肽的制备方法为：先使用碱提酸沉从地肤子中提取地肤子总蛋白，再使用碱性蛋白酶对地肤子总蛋白进行酶解，最后使用超滤分离收集分子量介于3000u和5000u间的地肤子酶解多肽。
优选地，碱提、酸沉的pH分别为11.0、4.8。
优选地，酶解pH值为8.0。
优选地，酶解温度为50℃。
优选地，酶解时间为8h。
上述多肽用于制备抗血小板聚集药物的医药用途。
本发明的突出优点：
本发明提供了一种分子量介于3000u和5000u之间的地肤子碱性蛋白酶酶解多肽，活性测试显示该酶解多肽具有明显的抗血小板聚集活性，且这种活性随着地肤子酶解多肽浓度的升高而增强，可以用于开发成抗血小板聚集的药物。
附图说明
图1为扫描电子显微镜下观察地肤子酶解多肽的形貌；
图2为不同浓度地肤子酶解多肽对血小板聚集的抑制率。
具体实施方式
下面就结合实施例具体介绍本发明的实质性内容，由于篇幅原因，实验过程的描述无法做到非常详细，凡是实验中未详细描述的部分均为本领域技术人员熟知的常规操作。
实施例1
一、实验材料
将干燥的地肤子粉碎过60目筛，备用。
纯净水为娃哈哈桶装纯净水；碱性蛋白酶购自诺维信。
二、实验方法
步骤S1：碱提酸沉提取总蛋白
取地肤子1kg先用10L无水乙醇热回流提取3h，过滤挥干残留溶剂。加10L纯净水，用10％氢氧化钠溶液调节pH至11.0，常温搅拌提取6h。提取液先过滤收集滤液，再以4000r/min离心20min，取上清液，用10％盐酸溶液调节pH至4.8，静置2h，以4000r/min离心20min，收集沉淀，冷冻干燥，得到地肤子总蛋白。
步骤S2：蛋白酶酶解
取适量地肤子总蛋白用纯净水溶解配制成浓度为0.1mg/mL的溶液，加入碱性蛋白酶进行酶解，酶解参数如下：pH值，8.0；酶解温度，50℃；酶解时间，8h；酶添加量，2500U/g。酶解结束后，85℃水浴10min灭酶，冷却至常温，以9000r/min离心20min，取上清液，冷冻干燥，得到地肤子酶解蛋白。
步骤S3：超滤分离
取适量地肤子酶解蛋白用纯净水溶解配制成浓度为10mg/mL的溶液，依次使用截留分子量为5000u和3000u的超滤膜进行超滤，收集分子量介于3000u和5000u之间的组分，冷冻干燥即得地肤子酶解多肽。
扫描电子显微镜下观察地肤子酶解多肽的形貌，结果如图1所示。
实施例2
一、实验材料
地肤子酶解多肽按照实施例1方法制备。
新西兰雄性家兔体重(2±0.2)kg，适应性喂养一星期后备用。
二、实验方法
体外抗血小板聚集活性测定方法为Born比浊法，具体操作方法参考文献(汤泉等，吲哚布芬酰胺化合物的设计、合成与抗血小板聚集研究，2020年)：
用1％盐酸普鲁卡因对家兔局麻，颈动脉插管取血，至3.8％的枸橼酸钠溶液中(取血量与枸橼酸钠溶液的体积比为9:1)，1000r/min离心15min，取富血小板血浆(PRP)。以生理盐水为溶剂配制不同浓度的地肤子酶解多肽溶液。取不同浓度的多肽溶液各10μL分别加入到含180μLPRP的各微量管中，对照组PRP中加入10μL生理盐水，37℃下，温育3min，然后分别加入诱导剂ADP(10μg/mL)、AA(10μg/mL)10μL，用LG-PABER-1型血小板聚集仪检测血小板聚集率，每组重复测定6次，并计算平均值，根据如下公式计算抑制率。
抑制率(％)＝(对照组聚集率-多肽组聚集率)÷对照组聚集率×100％
三、实验结果
不同浓度地肤子酶解多肽对血小板聚集的抑制率如表1和图2所示。
表1不同浓度地肤子酶解多肽对血小板聚集的抑制率
上述实验结果表明，地肤子酶解多肽具有明显的抗血小板聚集活性，这种活性随着地肤子酶解多肽浓度的升高而增强，可以用于开发成抗血小板聚集的药物。
上述实施例是对本发明实质性内容的体现，用于更好地解释本发明，但本领域技术人员应当知晓，不应将本发明的保护范围局限于上述具体的实施例。
Claims (7)
1.一种多肽，其特征为：该多肽为一种分子量介于3000u和5000u间的地肤子酶解多肽。
2.权利要求1所述多肽的制备方法，其特征为：先使用碱提酸沉从地肤子中提取地肤子总蛋白，再使用碱性蛋白酶对地肤子总蛋白进行酶解，最后使用超滤分离收集分子量介于3000u和5000u间的地肤子酶解多肽。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征为：碱提、酸沉的pH分别为11.0、4.8。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征为：酶解pH值为8.0。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征为：酶解温度为50℃。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征为：酶解时间为8h。
7.权利要求1所述的多肽用于制备抗血小板聚集药物的医药用途。
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| CN110545850A (zh) * | 2017-03-10 | 2019-12-06 | 奎亚培格制药公司 | 可释放的缀合物 |
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