CN112415193B - 基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶的快检新方法 - Google Patents
基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶的快检新方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112415193B CN112415193B CN202011195106.3A CN202011195106A CN112415193B CN 112415193 B CN112415193 B CN 112415193B CN 202011195106 A CN202011195106 A CN 202011195106A CN 112415193 B CN112415193 B CN 112415193B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- pda
- test strip
- detection
- detected
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 85
- 229920001690 polydopamine Polymers 0.000 title claims abstract description 80
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 67
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims abstract description 32
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 31
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims abstract description 27
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims abstract description 27
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 claims abstract description 24
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 19
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 16
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 16
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 16
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 15
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 15
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 14
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 13
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 9
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 7
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 7
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 7
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 7
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 claims description 7
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims description 7
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 claims description 5
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 5
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CTENFNNZBMHDDG-UHFFFAOYSA-N Dopamine hydrochloride Chemical compound Cl.NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 CTENFNNZBMHDDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 3
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 claims description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 3
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 3
- 229960001149 dopamine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 3
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 claims description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 claims description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 2
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 claims description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 claims description 2
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 claims description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 claims description 2
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 claims description 2
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 claims 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 claims 1
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Substances [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 41
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 9
- MBMQEIFVQACCCH-UHFFFAOYSA-N trans-Zearalenon Natural products O=C1OC(C)CCCC(=O)CCCC=CC2=CC(O)=CC(O)=C21 MBMQEIFVQACCCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 4
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 4
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 4
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 4
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 4
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 4
- 241001333951 Escherichia coli O157 Species 0.000 description 3
- 241001646719 Escherichia coli O157:H7 Species 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 238000002558 medical inspection Methods 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 239000003575 carbonaceous material Substances 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 229960004407 chorionic gonadotrophin Drugs 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 2
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 2
- DSVGQVZAZSZEEX-UHFFFAOYSA-N [C].[Pt] Chemical class [C].[Pt] DSVGQVZAZSZEEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012984 biological imaging Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 1
- UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N methane;palladium Chemical class C.[Pd] UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910000510 noble metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000005580 one pot reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- MBMQEIFVQACCCH-QBODLPLBSA-N zearalenone Chemical compound O=C1O[C@@H](C)CCCC(=O)CCC\C=C\C2=CC(O)=CC(O)=C21 MBMQEIFVQACCCH-QBODLPLBSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/56916—Enterobacteria, e.g. shigella, salmonella, klebsiella, serratia
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
- G01N33/5761—Hepatitis B
- G01N33/5764—Hepatitis B surface antigen
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/76—Human chorionic gonadotropin including luteinising hormone, follicle stimulating hormone, thyroid stimulating hormone or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/24—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- G01N2333/245—Escherichia (G)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Virology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明开发了一种基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶的快检新方法,在免疫层析试纸条底板上依次搭接粘贴滤纸、样本垫、喷涂有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水纸,制成免疫层析试纸条,然后在离心管底固定Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体复合物,通过磁分离富集目标物,之后以试纸条定量检测样本中的待测物浓度,该方法可超灵敏检测待检物,同时减少样品基质的干扰。
Description
技术领域
本发明属于医学检验和食品安全检测领域,具体涉及一种基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶(Fe3O4@PDA@Pd/Pt)的快检新方法,来定量检测样本中的待测物浓度。
背景技术
免疫层析技术是一种基于抗原抗体特异性反应的检测方法,具有检测速度快、特异性好、操作简单和费用低等优点,相比于其它方法更能满足现场大批量检测的需求,因此近年来发展迅猛,被广泛应用于食品安全、医学检验和环境污染物监测等领域。其中胶体金免疫层析试纸条是应用最广泛的一种免疫层析产品,但其灵敏度较差且易受基质干扰。因此近年来的免疫层析技术主要有三个发展方向:一是采用免疫磁分离富集技术从复杂基质中分离浓缩目标物以避免样品基质的干扰;二是通过信号放大***(如生物素-链霉亲和素***等)以提高免疫层析方法的灵敏度;三是采用新型标记物(如荧光微球),提高信号输出或转变信号输出类型,以达到提高灵敏度的目的。
纳米酶是一类具有酶催化性质的纳米材料,例如贵金属纳米材料、金属氧化物和碳基材料等。相比于传统生物酶,其具备超高的稳定性及酶催化活性,因而广泛应用于临床诊断、生物成像及生物传感器领域。经典的金属纳米酶往往以单一金属组成,例如铂纳米酶和钯纳米酶等,之后又发展了一系列的以碳基材料作为载体的铂碳、钯碳等。近期研究发现,基于双金属协同效应,可大大提高纳米酶的催化活性。
基质效应是影响实际检测准确性的重要因素。磁分离技术是一种通过免疫磁珠捕获目标物,在外加磁场下磁分离后再分散于一定体积的PBS中的样本前处理方法。通过该技术可以同时达到减弱基质效应和富集目标物的目的。
基于上述情况,发明人通过一锅法合成了一种基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶(Fe3O4@PDA@Pd/Pt)作为探针,应用于医学检验和食品安全快速检测等领域并提高试纸条稳定性和检测灵敏度。目前,尚未有将Fe3O4@PDA@Pd/Pt作为探针应用于免疫层析法中的相关报道。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶Fe3O4@PDA@Pd/Pt的快检新方法。
本发明的另一个目的是提供预固定Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体离心管的制备方法。
为了实现上述目的,本发明采取的技术方案如下:
本发明提供了一种基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶Fe3O4@PDA@Pd/Pt的快检新方法,它包括预固定Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体离心管的制备和免疫层析试纸条的制备。其中,所述离心管固定有Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体复合物,该离心管的制备方法包括如下步骤:
(1)Fe3O4@PDA@Pd/Pt的制备:将1.0mg Fe3O4(50~500nm)分散于1mL Tris-HCl缓冲溶液(0.01~0.1M,pH 7~10)中,加入0.2~2.0mg盐酸多巴胺,搅拌反应10~24h后磁分离洗涤得Fe3O4@PDA,然后将Fe3O4@PDA复溶至1mL聚乙烯吡咯烷酮溶液(0.5%)中,加入100μL抗坏血酸(1~100mg/mL)、100μL氯钯酸钠(1~100mM)和100μL氯铂酸钾(1~100mM),50~90℃加热反应15~45min,磁分离洗涤即得Fe3O4@PDA@Pd/Pt;
(2)Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体的制备:向制得的Fe3O4@PDA@Pd/Pt中加入待标记抗体,混匀后,室温搅拌反应2h,之后,加入封闭剂,室温反应2h,离心取沉淀,得到的沉淀复溶,制成Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体复合物;
(3)预固定Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体的离心管:取制得的Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体复合物滴加至离心管中,30℃真空干燥即可。
进一步的,所述预固定Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体的离心管中的待标记抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、纳米抗体、噬菌体表达抗体。
进一步的,步骤(2)中所述Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体的制备包括如下具体步骤:取Fe3O4@PDA@Pd/Pt超声1~10min,再用0.01~0.5M pH 6.0~8.0的硼酸盐缓冲液调节纳米酶浓度至0.01~0.1mg/mL,加入待标记抗体使其终浓度为1~100μg/mL,振荡混匀后,室温搅拌反应2h,之后,加入封闭剂,使其终浓度为0.1~1%,室温反应2h,然后磁分离去上清,沉淀用0.01~0.1M pH 7.4~8.0的磷酸盐缓冲液复溶为起始体积的1/10,制成Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体复合物于4℃保存备用;
进一步的,本发明的硝酸纤维素膜上包被有待测物人工偶联抗原或待测物抗体作为检测线,包被有抗鼠抗体或抗兔抗体(二抗)作为质控线;其中,该硝酸纤维素膜的制备方法,包括如下步骤:
(1)使用0.01~0.5M pH 6.0~8.0的PBS(磷酸盐缓冲溶液)溶液分别调节包被物待测物人工偶联抗原或待测物抗体、抗鼠抗体或抗兔抗体至浓度为0.01~10.0mg/mL;
(2)将调整浓度后的待测物人工偶联抗原或待测物抗体喷涂于硝酸纤维素膜上部,作为检测线,将抗鼠抗体或抗兔抗体喷涂于硝酸纤维素膜下部,作为质控线;其中,检测线和质控线之间间隔一定距离,二者的喷量均为0.25~0.74μL/cm;
(3)将喷涂有检测线和质控线的硝酸纤维素膜于37℃过夜烘干处理后,在室温干燥的环境下保存备用。
进一步的,所述的待测物人工偶联抗原是指小分子待测物与大分子蛋白质通过化学偶联方法制备的具有免疫原性和反应原性的全抗原;其中,所述的小分子待测物涵盖医学检验领域和食品安全检测领域所需要检测的所有小分子物质;所述的偶联方法包括重氮法、碳二亚胺法、戊二醛法、混合酸酐法、琥珀酸酐法;所述的偶联大分子蛋白包括牛血清白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白;所述的偶联比为1:5~1:200,偶联后透析纯化,得到所需的人工偶联抗原。
进一步的,所诉待测物抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、纳米抗体。
进一步的,所述的免疫层析试纸条的组装,包括以下步骤:
(1)在底板上搭接粘贴下述材料:滤纸、样本垫、喷涂有待测物偶联人工抗原或抗体作为检测线和抗鼠抗体/抗兔抗体作为质控线的硝酸纤维素膜和吸水纸,即组装成本发明使用的免疫层析试纸条大板。
(2)组装好的试纸条大板,通过切刀切成需要的宽度,即成本发明使用的免疫层析试纸条,该试纸条可以直接使用,也可以装入塑料卡壳中使用。
本发明提供的一种基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶Fe3O4@PDA@Pd/Pt的快检新方法的检测过程包括:
经过处理后的检测样本加样到本发明制备的免疫层析试纸条,加样体积为50~200μL/条,反应时间为3~20分钟,之后,在试纸条上滴加10~100μL萘乙酸/二氨基联苯胺(CN/DAB,5.5mM)显色液,避光显色1~5min,可以通过读取该试纸条上检测线和质控线的灰度数据,内置标准曲线计算检测样本浓度来实现定量检测,也可以通过肉眼观察检测线和质控线有无显色条带来实现定性判断。
本发明的有益效果是:
本发明制备的免疫层析试纸条首次以Fe3O4@PDA@Pd/Pt作为信标载体,相比于传统的胶体金和HRP酶其稳定性高且信号强,制备得到的免疫层析试纸条稳定性高且检测灵敏度高。
附图说明
图1是基于Fe3O4@PDA@Pd/Pt的快检方法原理图,其中,1Fe3O4@PDA@Pd/Pt-mAb、2磁铁、3PVC底板、4吸水纸、5质控线、6NC膜、7检测线、8样本垫、9滤纸、10目标物、11氧化态DAB;
图2为合成的Fe3O4@PDA@Pd/Pt透射电镜表征图。
图3为基于Fe3O4@PDA@Pd/Pt的快检方法检测人绒毛膜***(HCG)实物图,其中a为直接结果,b为加CN/DAB显色液后的结果,浓度单位为mIU/mL。
图4为基于Fe3O4@PDA@Pd/Pt的快检方法检测大肠杆菌O157:H7(E.coli O157:H7)实物图,其中a为直接结果,b为加CN/DAB显色液后的结果,浓度单位为CFU/mL。
如图1所示,Fe3O4@PDA@Pd/Pt-mAb复合物捕获目标物,外加磁场下磁分离富集目标物,转移加样至免疫层析试纸条,试纸条显色稳定后,加CN/DAB显色液与Fe3O4@PDA@Pd/Pt作用增强显色。该免疫层析试纸条的构成为:在PVC底板3上,依次搭接地粘贴喷涂有检测线7和质控线5的NC膜6、样本垫8、滤纸9和吸水纸4,粘贴好后通过切条机切成4×55mm的试纸条,装入塑料卡壳中,即为一张完整的检测试纸条。
如图3和4所示,加入CN/DAB显色液后显色强度大大强于直接显色结果,可以大大提高检测方法灵敏度。
具体实施方式
实施例1:Fe3O4@PDA@Pd/Pt的制备:
一、Fe3O4@PDA的制备:将1.0mg Fe3O4(100nm)分散于1mL Tris-HCl缓冲溶液(0.05M,pH 8.5)中,加入1mg盐酸多巴胺,搅拌反应15h后磁分离洗涤得Fe3O4@PDA;
二、Fe3O4@PDA@Pd/Pt的制备:将Fe3O4@PDA复溶至1mL聚乙烯吡咯烷酮溶液(0.5%)中,加入100μL抗坏血酸(10mg/mL)、100μL氯钯酸钠(10mM)和100μL氯铂酸钾(10mM),65℃加热反应20min,磁分离洗涤即得Fe3O4@PDA@Pd/Pt。
实施例2:一种使用Fe3O4@PDA@Pd/Pt为信标载体制备的检测人绒毛膜***(HCG)的夹心法免疫层析试纸条的制备
一、免疫层析试纸条的制备工艺
1.硝酸纤维素膜的制备;
抗HCG多抗和抗鼠抗体包被到硝酸纤维素膜上:用0.01M pH 7.4的PBS稀释抗HCG多抗的浓度为0.5mg/mL,所得的溶液在膜上喷涂作为检测线;稀释抗鼠抗体的浓度为0.5mg/mL,所得的溶液在膜上喷涂作为质控线,两线的喷量均为0.74μL/cm,检测线与膜顶边间隔10mm,两线中间间隔5mm,37℃烘干12小时,放置于干燥柜中保存备用。
2.Fe3O4@PDA@Pd/Pt-抗体复合物包被离心管的制备:
取0.5mg Fe3O4@PDA@Pd/Pt超声(实施例1制备得到)1分钟,用pH 6.0的0.1M硼酸盐缓冲液调节Fe3O4@PDA@Pd/Pt浓度为0.05mg/mL,振荡混匀后,1mL Fe3O4@PDA@Pd/Pt中加入6μg HCG单克隆抗体,充分混合后,4℃搅拌反应2h,加入终浓度为0.5%的牛血清白蛋白,室温封闭2h,8000r/min离心30min,沉淀用0.01M pH 7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)复溶为起始体积的1/10,按照5μL/个滴加至离心管中,30℃真空干燥2h。
3.组装试纸条:
(1)滤纸和样本垫规格为1×30cm;
(2)喷涂有检测线和质控线的硝酸纤维素膜,规格为2.5×30cm;
(3)吸水纸,规格为1.2×30cm;
(4)PVC底板,规格为5.5×30cm。
将以上材料按照试纸条结构示意图中各组分位置进行依次粘贴,组装好后用切刀裁切成4×55mm的试纸条,装入塑料卡壳中,压紧后装入铝箔袋,加入干燥剂后,封口保存,室温环境保质期为12个月。
二、定量检测样本中的HCG
用上述的免疫层析试纸条检测样本中HCG的方法,包括如下的步骤:
1.在试纸条加样孔中加入人血清样本100μL,反应15min,再加入50μL CN/DAB(5.5mM),避光反应2min;
2.将试纸条***试纸条读取仪的检测窗口,检测线和质控线显色的强弱会以数值的高低在显示器上显示,根据仪器中已经录入的标准曲线,即可计算出样本中HCG的含量,实现样本中HCG的定量检测。
3.建立标准曲线:在阴性基质中加标,标准曲线中HCG浓度为:0、1、2、4、6、8、10、15、20、50mIU/mL,R2为0.9921,线性回归方程式为:y=0.2516ln(x)+0.1775。
实施例3:一种使用Fe3O4@PDA@Pd/Pt为信标载体制备的检测玉米赤霉烯酮(ZEN)的竞争法免疫层析试纸条的制备
一、免疫层析试纸条的制备工艺
1.硝酸纤维素膜的制备;
⑴制备ZEN人工抗原(ZEN-BSA):
偶联方法为混合酸酐法,偶联蛋白为牛血清白蛋白(BSA),偶联比为1:100,偶联后透析纯化,得到ZEN-BSA。
⑵检测线和质控线的制备:
ZEN-BSA偶联物和抗鼠抗体包被到硝酸纤维素膜上:用0.01M pH 7.4的PBS稀释ZEN-BSA偶联物的浓度为6mg/mL,所得的溶液在膜上喷涂作为检测线;稀释抗鼠抗体的浓度为0.5mg/mL,所得的溶液在膜上喷涂作为质控线,两线的喷量均为0.74μL/cm,检测线与膜顶边间隔10mm,两线中间间隔5mm,37℃烘干12h,放置于干燥柜中保存备用。
2.Fe3O4@PDA@Pd/Pt-抗体复合物包被离心管的制备:
取0.5mg Fe3O4@PDA@Pd/Pt超声(实施例1制备得到)1分钟,用pH 7.4的0.2M硼酸盐缓冲液调节纳米酶浓度为0.05mg/mL,振荡混匀后,1mL Fe3O4@PDA@Pd/Pt中加入10μg ZEN单克隆抗体,充分混合后,4℃搅拌反应2h,加入终浓度为0.5%的酪蛋白,室温封闭2h,8000r/min离心30min,沉淀用0.01M pH 7.4的PBS复溶为起始体积的1/10,按照5μL/个体积滴加至离心管中,30℃真空干燥2h。
3.组装试纸条:
(1)滤纸和样本垫规格为1×30cm;
(2)喷涂有检测线和质控线的硝酸纤维素膜,规格为2.5×30cm;
(3)吸水纸,规格为1.2×30cm;
(4)PVC底板,规格为5.5×30cm。
将以上材料按照试纸条结构示意图中各组分位置进行依次粘贴,组装好后用切刀裁切成4×55mm的试纸条,装入塑料卡壳中,压紧后装入铝箔袋,加入干燥剂后,封口保存,室温环境保质期为12个月。
二、定量检测样本中的ZEN
用上述的免疫层析试纸条检测样本中ZEN的方法,包括如下的步骤:
1.称取饲料或粮食样本2g,加入10mL提取液后震荡1分钟,取上清液检测;
2.在试纸条加样孔中加入110μL样本,反应5min,再加入50μL CN/DAB(5.5mM),避光反应2min;
3.将试纸条***试纸条读取仪的检测窗口,检测线和质控线显色的强弱会以数值的高低在显示器上显示,根据仪器中已经录入的标准曲线,即可计算出样本中ZEN的含量,实现阳性样本的定量检测。
4.建立标准曲线:在阴性基质中加标,标准曲线中ZEN浓度为:0、0.5、1、2、4、8ppb,计算R2为0.9912,线性回归方程式为:y=-896.9ln(x)+1678.3。
实施例4:一种使用Fe3O4@PDA@Pd/Pt为信标载体制备的检测乙肝表面抗原(HBsAg)的夹心法免疫层析试纸条的制备
一、免疫层析试纸条的制备工艺
1.硝酸纤维素膜上检测线和质控线的制备:
HBsAg多克隆抗体和抗鼠抗体包被到硝酸纤维素膜上:用0.01M pH 7.4的PBS稀释HBsAg多克隆抗体的浓度为2mg/mL,所得的溶液喷涂在膜上作为检测线;稀释抗鼠抗体的浓度为0.5mg/mL,所得的溶液喷涂在膜上作为质控线,两线的喷膜量均为0.74μL/cm,检测线与膜顶边间隔10mm,两线中间间隔5mm,37℃烘干12h,放置于干燥柜中保存备用。
2.Fe3O4@PDA@Pd/Pt-抗体复合物玻璃纤维垫的制备:
取0.5mg Fe3O4@PDA@Pd/Pt(实施例1制备得到)超声1分钟,用pH 6.0的0.01M PBS缓冲液调节纳米酶浓度为0.1mg/mL,振荡混匀后,1mL Fe3O4@PDA@Pd/Pt中加入50μg HBsAg单克隆抗体,充分混合后,4℃搅拌反应2h,加入终浓度为0.5%的牛血清白蛋白,室温封闭2h,8000r/min离心30min,沉淀用0.01M pH 7.4的PBS复溶为起始体积,按照7μL/个体积滴加至离心管中,30℃真空干燥2h。
3.组装试纸条:
(1)滤纸和样本垫规格为1×30cm;
(2)喷涂有检测线和质控线的硝酸纤维素膜,规格为2.5×30cm;
(3)吸水纸,规格为1.2×30cm;
(4)PVC底板,规格为5.5×30cm。
将以上材料按照试纸条结构示意图中各组分位置进行依次粘贴,组装好后用切刀裁切成4×55mm的试纸条,装入塑料卡壳中,压紧后装入铝箔袋,加入干燥剂后,封口保存,室温环境保质期为12个月。
二、定量检测样本中的HBsAg
用上述的免疫层析试纸条检测样本中HBsAg的方法,包括如下的步骤:
1.在试纸条加样孔中加入人血清样本100μL,反应20min,再加入50μL CN/DAB(5.5mM),避光反应2min;
2.将试纸条***试纸条读取仪的检测窗口,检测线和质控线显色的强弱会以数值的高低在显示器上显示,根据仪器中已经录入的标准曲线,即可计算出样本中HBsAg的含量,实现样本中HBsAg的定量检测。
3.调节标准曲线:在阴性基质中加标,加标标准曲线中HBsAg浓度为:0、10、20、40、80、160ppb,计算R2为0.9946,线性回归方程式为:y=-429.9ln(x)+4341.3。
实施例5:一种使用Fe3O4@PDA@Pd/Pt为信标载体制备的检测大肠杆菌O157:H7的夹心法免疫层析试纸条的制备
一、免疫层析试纸条的制备工艺
1.硝酸纤维素膜上检测线和质控线的制备:
大肠杆菌O157:H7多克隆抗体和抗鼠抗体包被到硝酸纤维素膜上:用0.01M pH7.5的PBS稀释O157:H7多克隆抗体的浓度为2mg/mL,所得的溶液喷涂在膜上作为检测线;稀释抗鼠抗体的浓度为0.5mg/mL,所得的溶液喷涂在膜上作为质控线,两线的喷量均为0.74μL/cm,检测线与膜顶边间隔10mm,两线中间间隔5mm,37℃烘干12h,放置于干燥柜中保存备用。
2.Fe3O4@PDA@Pd/Pt-抗体复合物包被离心管的制备:
取0.5mgFe3O4@PDA@Pd/Pt(实施例1制备得到)超声1分钟,用pH 8.0的0.2M硼酸盐缓冲液调节纳米酶浓度为0.05mg/mL,振荡混匀后,1mL Fe3O4@PDA@Pd/Pt中加入20μg大肠杆菌O157:H7单克隆抗体,充分混合后,4℃搅拌反应2h,加入终浓度为0.5%的酪蛋白,室温封闭2h,8000r/min离心30min,沉淀用0.01M pH 7.4的PBS复溶为起始体积的1/10,按照9μL/个体积滴加至离心管中,30℃真空干燥2h。
3.组装试纸条:
(1)滤纸和样本垫规格为1×30cm;
(2)喷涂有检测线和质控线的硝酸纤维素膜,规格为2.5×30cm;
(3)吸水纸,规格为1.2×30cm;
(4)PVC底板,规格为5.5×30cm。
将以上材料按照试纸条结构示意图中各组分位置进行依次粘贴,组装好后用切刀裁切成4×55mm的试纸条,装入塑料卡壳中,压紧后装入铝箔袋,加入干燥剂后,封口保存,室温环境保质期为12个月。
二、定量检测样本中的大肠杆菌O157:H7
用上述的免疫层析试纸条检测样本中大肠杆菌O157:H7的方法,包括如下的步骤:
1.样本前处理:样本按照国标方法进行增菌培养,培养后检测;
2.在试纸条加样孔中加入110μL样本,反应5min,再加入50μL CN/DAB(5.5mM),避光反应2min;
3.将试纸条***试纸条读取仪的检测窗口,检测线和质控线显色的强弱会以数值的高低在显示器上显示,根据仪器中已经录入的标准曲线,即可计算出样本中大肠杆菌O157:H7的含量,实现样本的定量检测。
4.调节标准曲线:在阴性基质中加标,标准曲线中大肠杆菌O157:H7浓度为:0、102、103、104、105、106CFU/mL,计算出R2为0.9965,线性回归方程式为:y=654.3ln(x)+5120.4。
以上所述仅表达了本发明的优选实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形、改进及替代,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (5)
1.一种基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶的快检新方法,包括免疫层析试纸条和预固定Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体复合物的离心管,其特征在于:所述的预固定Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体复合物的离心管的制备方法包括如下步骤:
(1)Fe3O4@PDA@Pd/Pt的制备:将Fe3O4分散于Tris-HCl缓冲溶液中,加入盐酸多巴胺,搅拌反应后磁分离洗涤得Fe3O4@PDA,然后将Fe3O4@PDA复溶至聚乙烯吡咯烷酮溶液中,加入抗坏血酸、氯钯酸钠和氯铂酸钾,加热反应,磁分离洗涤即得Fe3O4@PDA@Pd/Pt;
(2)Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体的制备:将步骤(1)得到的Fe3O4@PDA@Pd/Pt超声1~10min,再用0.01~0.5 M pH 6.0~8.0的硼酸盐缓冲液调节Fe3O4@PDA@Pd/Pt浓度至0.01~0.1 mg/mL,加入待标记抗体,混匀后,4℃反应过夜,之后,加入封闭剂,室温反应2 h,磁分离取沉淀,得到的沉淀复溶,制成Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体复合物;
(3)预固定Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体复合物的离心管:取上述步骤制得的Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记抗体复合物加入至离心管中,30℃下真空干燥即可;
所述步骤(2)中加入待标记抗体后的抗体终浓度为1~100 μg/mL,加入封闭剂后封闭剂的终浓度为0.1~1%,且所述封闭剂选自酪蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白、聚乙二醇、脱脂牛奶中的任意一种;
所述步骤(2)中磁分离后的沉淀用0.01~0.1 M pH 6.0~9.0的磷酸盐缓冲液复溶为起始体积的1倍至1/10倍,即可制成聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶标记抗体复合物,并可于4℃保存备用;
硝酸纤维素膜上包被有待测物人工偶联抗原或待测物抗体作为检测线,包被有抗鼠抗体或抗兔抗体作为质控线,该硝酸纤维素膜上的制备方法,包括如下步骤:
(1)使用0.01~0.5 M pH 6.0~8.0的PBS溶液分别调节包被物、待测物、人工偶联抗原或待测物抗体、抗鼠抗体或抗兔抗体至浓度为0.01~5.0 mg/mL;其中,该待测物抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、纳米抗体;
(2)将调整浓度后的待测物人工偶联抗原或待测物抗体喷涂于硝酸纤维素膜上部,作为检测线,将抗鼠抗体或抗兔抗体喷涂于硝酸纤维素膜下部,作为质控线;其中,检测线和质控线之间间隔一定距离,二者的喷膜量均为0.25~0.74 μL/cm;
(3)将喷涂有检测线和质控线的硝酸纤维素膜于37℃过夜烘干处理后,在室温干燥的环境下保存备用。
2.根据权利要求1所述的一种基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶的快检新方法,其特征在于,所述Fe3O4@PDA@Pd/Pt标记的抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、纳米抗体。
3.根据权利要求1所述的一种基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶的快检新方法,其特征在于,所述步骤(1)中所述的待测物人工偶联抗原是指小分子待测物与大分子蛋白质通过化学偶联方法制备的具有免疫原性和反应原性的全抗原;其中,该小分子待测物涵盖医学检验领域和食品安全检测领域所需要检测的所有小分子物质;偶联方法包括重氮法、碳二亚胺法、戊二醛法、混合酸酐法、琥珀酸酐法;该偶联的大分子蛋白包括牛血清白蛋白、酪蛋白、卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白;偶联比为1:5~1:200,偶联后透析纯化,得到所需的人工偶联抗原。
4.根据权利要求1~3任一所述的一种基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶的快检新方法,其特征在于,试纸条的组装包括以下步骤:
(1)在底板上搭接粘贴下述材料:滤纸、样本垫、喷涂有待测物偶联人工抗原或抗体作为检测线和抗鼠抗体/抗兔抗体作为质控线的硝酸纤维素膜和吸水纸,即组装成本发明使用的免疫层析试纸条大板;
(2)组装好的试纸条大板,通过切刀切成需要的宽度,即为本发明使用的免疫层析试纸条,该试纸条可以直接使用,也可以装入塑料卡壳中使用。
5.根据权利要求1~3任一所述的一种基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶的快检新方法的应用,其特征在于,该试纸条的检测过程包括如下步骤:经过处理后的检测样本加样到以聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶为信标载体制备的免疫层析试纸条上,加样体积为50~200 μL,反应时间为3~20分钟,然后在试纸条上滴加10~100 μL萘乙酸/二氨基联苯胺显色液,避光显色1~5 min,通过读取试纸条灰度数据后由内置标准曲线计算检测样本浓度来实现定量检测,或者通过肉眼观察检测线和质控线有无显色条带来实现对检测样本的定性判断。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011195106.3A CN112415193B (zh) | 2020-10-30 | 2020-10-30 | 基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶的快检新方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011195106.3A CN112415193B (zh) | 2020-10-30 | 2020-10-30 | 基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶的快检新方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112415193A CN112415193A (zh) | 2021-02-26 |
CN112415193B true CN112415193B (zh) | 2024-05-31 |
Family
ID=74827263
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202011195106.3A Active CN112415193B (zh) | 2020-10-30 | 2020-10-30 | 基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶的快检新方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN112415193B (zh) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113252902B (zh) * | 2021-04-23 | 2023-04-28 | 西北农林科技大学 | 一种探针、检测试纸条及其应用 |
CN114441779B (zh) * | 2022-02-14 | 2023-05-16 | 上海交通大学 | 一种针对胃泌素17的双模态免疫层析试剂盒及其检测方法 |
CN114720515B (zh) * | 2022-03-07 | 2024-04-09 | 华中农业大学 | 一种线性范围可调、聚多巴胺介导的免修饰便携式电导率免疫传感器的构建方法及应用 |
CN116218253A (zh) * | 2022-12-28 | 2023-06-06 | 佰诺全景生物技术(北京)有限公司 | 一种显色染料和制备方法及其用途 |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102866251A (zh) * | 2012-06-19 | 2013-01-09 | 深圳市艾瑞生物科技有限公司 | 基于磷光发光技术的免疫荧光试纸条及其制备方法和应用 |
CN103698510A (zh) * | 2012-12-21 | 2014-04-02 | 欧普图斯(苏州)光学纳米科技有限公司 | 用基于纳米结构的光谱检测法分析化学物和生化物的方法 |
CN104258909A (zh) * | 2014-08-01 | 2015-01-07 | 曲阜师范大学 | 一种Fe3O4-聚多巴胺-Au纳米复合材料及其制备方法和应用 |
CN104634973A (zh) * | 2015-02-11 | 2015-05-20 | 曲阜师范大学 | 一种纳米金复合材料免疫传感器的制备方法及应用 |
CN105879881A (zh) * | 2016-04-29 | 2016-08-24 | 盐城师范学院 | PtPd/Fe3O4纳米催化剂的制备及其在HECK反应中的应用 |
CN108709996A (zh) * | 2018-05-17 | 2018-10-26 | 山东理工大学 | 一种金钯复合纳米酶免疫传感器的制备方法及应用 |
CN109692972A (zh) * | 2019-03-01 | 2019-04-30 | 河北工业大学 | PtPd纳米花制备方法及利用PtPd纳米花催化反应的过氧化氢浓度检测方法 |
CN111438368A (zh) * | 2020-04-29 | 2020-07-24 | 西南大学 | 利用丝素蛋白溶液制备金铂双金属纳米酶及其应用 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11307198B2 (en) * | 2016-04-26 | 2022-04-19 | Washington State University | Compositions and methods for antigen detection incorporating inorganic nanostructures to amplify detection signals |
US20210055259A1 (en) * | 2018-06-29 | 2021-02-25 | Beijing Savant Biotechnology Co., Ltd. | Electrochemical Detection Method Based on Tracers Labeling |
-
2020
- 2020-10-30 CN CN202011195106.3A patent/CN112415193B/zh active Active
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102866251A (zh) * | 2012-06-19 | 2013-01-09 | 深圳市艾瑞生物科技有限公司 | 基于磷光发光技术的免疫荧光试纸条及其制备方法和应用 |
CN103698510A (zh) * | 2012-12-21 | 2014-04-02 | 欧普图斯(苏州)光学纳米科技有限公司 | 用基于纳米结构的光谱检测法分析化学物和生化物的方法 |
CN104258909A (zh) * | 2014-08-01 | 2015-01-07 | 曲阜师范大学 | 一种Fe3O4-聚多巴胺-Au纳米复合材料及其制备方法和应用 |
CN104634973A (zh) * | 2015-02-11 | 2015-05-20 | 曲阜师范大学 | 一种纳米金复合材料免疫传感器的制备方法及应用 |
CN105879881A (zh) * | 2016-04-29 | 2016-08-24 | 盐城师范学院 | PtPd/Fe3O4纳米催化剂的制备及其在HECK反应中的应用 |
CN108709996A (zh) * | 2018-05-17 | 2018-10-26 | 山东理工大学 | 一种金钯复合纳米酶免疫传感器的制备方法及应用 |
CN109692972A (zh) * | 2019-03-01 | 2019-04-30 | 河北工业大学 | PtPd纳米花制备方法及利用PtPd纳米花催化反应的过氧化氢浓度检测方法 |
CN111438368A (zh) * | 2020-04-29 | 2020-07-24 | 西南大学 | 利用丝素蛋白溶液制备金铂双金属纳米酶及其应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN112415193A (zh) | 2021-02-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN112415193B (zh) | 基于聚多巴胺介导的磁性双金属纳米酶的快检新方法 | |
CN109633144B (zh) | 一种以聚集诱导发光荧光微球为信标载体制备的荧光免疫层析试纸条 | |
CN101893627B (zh) | 金磁微粒标记免疫层析快速检测方法 | |
US20190219569A1 (en) | Fluorescence immunochromatographic detection card and a preparation method therefor and use thereof | |
CN111426844A (zh) | 一种新型冠状病毒SARS-CoV-2 IgG-IgM抗体联检的荧光免疫层析试纸条 | |
US6686170B1 (en) | Assay devices with mobile control reagents | |
CN107976541A (zh) | 同步检测玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素b1的试纸卡、制备及检测方法 | |
TW200420883A (en) | Flow-through assay devices | |
CN102023211A (zh) | 一种全程定量检测c反应蛋白的免疫层析试纸条及其制备方法 | |
JPH0224548A (ja) | 免疫反応の電気的検出 | |
CN111024956A (zh) | 一种检测ptx3的时间分辨荧光免疫层析试剂盒 | |
CN112345753A (zh) | 一种以聚多巴胺包菊花金纳米粒子为信标载体制备的免疫层析试纸条 | |
CN111596065B (zh) | 一种基于金磁纳米酶免疫探针的侧向流免疫层析检测试纸及其制备方法和应用 | |
US20200326338A1 (en) | Detection agent for bioassay and signal amplification method using same | |
WO1994006940A1 (en) | Multiple assay test strip devices | |
JP3609240B2 (ja) | 免疫学的検査法および免疫学的検査用キット | |
IE47482B1 (en) | Immunochemical testing using tagged reagents | |
CN106526166A (zh) | 猪肉中瘦肉精的快速检测 | |
WO2018177445A1 (zh) | 一种离心分离免疫层析检测方法及装置 | |
CN113970635B (zh) | 一种免疫层析试纸及其制备方法和应用 | |
JPH0552849A (ja) | 検体の特異的検出および特異的分離方法 | |
CN114720437A (zh) | 基于Fe-PDAN的高效荧光淬灭试纸条及其制备方法和检测方法 | |
CN115598343A (zh) | 一种基于bsa校准***的荧光免疫定量检测试剂条及试剂卡 | |
JP3930970B2 (ja) | 免疫学的検査方法および免疫学的検査用キット | |
CN102353787A (zh) | 一种半定量检测人血清中gfap浓度的胶体金试纸条 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |