CN112369437A - 一种用于治疗柑橘类黄龙病的方法及其药剂 - Google Patents

一种用于治疗柑橘类黄龙病的方法及其药剂 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种用于治疗柑橘类黄龙病的方法及其药剂，属于物病害防治技术领域。药剂包括猕猴桃根茎提取液和植物生长激素；方法包括S1、配制植物生长激素溶液；S2、取猕猴桃根茎干料，配制猕猴桃根茎提取液；S3、将植物生长激素溶液和猕猴桃根茎提取液混合得到治疗药剂，采用树干输液的方法进行施药。本发明通过发掘传统中药价值，结合现代生长调节剂技术，能够明显改善受黄龙病菌为害的树体树势，对黄龙病有十分高效的治疗效果，并使植株获得对黄龙病的抗病性，治疗效果稳定可靠。

Description

一种用于治疗柑橘类黄龙病的方法及其药剂
技术领域
本发明涉及植物病害防治技术领域，尤其涉及一种用于治疗柑橘类黄龙病的方法及其药剂。
背景技术
柑橘黄龙病是柑橘生产上的毁灭性病害,是由一种限于韧皮部内寄生的革兰氏阴性细菌引起，能够侵染包括柑橘属、积属、金柑属和九里香等多种芸香科植物。
脐橙树感染黄龙病后，病菌寄生在韧皮部并通过输导组织传到根部，影响根部对营养的吸收，使树体严重衰退，树体的新陈代谢收到抑制，内环境发生逆向变化造成生理紊乱和不断的衰退中，直到死亡。黄龙病树都有致命的危害，主要表现有叶片有斑驳的黄化现象、异常开花(会出现夏季和秋季开花)、果实不能成熟(出现青鼻果，而且不能食用)、树体出现衰退至死亡。
柑橘黄龙病的防治主要是消除其传播媒介如柑橘木虱，使用抗生素直接杀灭病原细菌，使用植物激素或或营养调节改善树势等。黄龙病树经过防治后，效果不稳定，易复发，用药治疗过程繁琐。
发明内容
本发明目的在于实现柑橘类黄龙病的有效稳定的治疗，解决用药治疗过程繁琐、易复发等问题。
本发明的一个方面，提供了一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，包括猕猴桃根茎提取液和植物生长激素。
本发明首先探究其它植物不生黄龙病的原因，继而从植物免疫和治疗两方面入手研究其机理。猴桃根茎提取液，其内含物与树体内环境具有很高的相容性；其内含物中，2α,3α,24-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸、2α,3α-二羟基-12-烯-28-乌苏酸、2α,3α,19α-三羟基-12-烯-28-乌苏酸、熊果酸、β-谷甾醇和β-胡萝卜甙等具有治疗植物叶腐病的功能。利用中医的相生相克原理，因病态树体处于生长衰退状态下，在内分泌功能方面，其生长激素也处于非正常分泌状态，可用生长激素对植物生长起调节作用，促进药物对树体的治疗作用。
优选地，所述植物生长激素包括赤霉素、细胞***素和芸苔素内酯。赤霉素具有促进细胞快速***的功能，细胞***素具有促进叶绿素的合成作用，以及芸苔内脂具有增强内在抗病性的功能；三者协同作用，调节患病树体正常生长。
优选地，所述细胞***素为6-苄氨基嘌呤、激动素、玉米素、二氢玉米素、异戊烯腺嘌呤、玉米素核苷、异戊烯腺苷中的一种或多种。
优选地，所述赤霉素为GA1、GA3、GA4、GA9、GA20中的一种或多种。
优选地，所述赤霉素的浓度为5～80ppm。
优选地，所述细胞***素的浓度为5～80ppm。
优选地，所述芸苔素内酯的浓度为0.01～1ppm。
本发明的另一个方面，提供了一种用于治疗柑橘类黄龙病的方法，包括以下步骤：
S1、配制植物生长激素溶液；
S2、取猕猴桃根茎干料，配制猕猴桃根茎提取液；
S3、将植物生长激素溶液和猕猴桃根茎提取液混合得到治疗药剂，采用树干输液的方法进行施药。
本发明方法的原理：植物像动物和人体一样，存在自身免疫***，这也是某些植物天然存在对特定病原菌有抗病性的原因。外来物质的介入，可以激活植物的免疫***并调节植物的新陈代谢，从而增强植物抗病和抗逆能力。利用猕猴桃根茎的抗病菌、抗病毒、抗病虫的特性和治疗植物叶腐病的功能，以及利用植物生长调节剂，对植物生长起调节作用，促进药物对树体的治疗作用。本发明能够明显改善受黄龙病菌为害的树体树势，对黄龙病有十分高效的治疗效果，并使植株获得对黄龙病的抗病性，对黄龙病的治疗效果稳定可靠。
优选地，所述步骤S1中植物生长激素溶液的配制方法为：首先将植物生长激素溶解，再配制成一定浓度的溶液；
优选地，所述步骤S2中猕猴桃根茎提取液的配制方法为：取猕猴桃根茎干料，加入乙醇进行提取或加水煎煮。
优选地，所述步骤S3中将每棵树用量为3～18g猕猴桃根茎干料制备得到的猕猴桃根茎提取液，与植物生长激素溶液混合，然后稀释到所需浓度得到所述治疗药剂。
优选地，所述施药方法具体包括：在树主干高30～100cm钻孔，然后***输液针，将所述治疗药剂输入树主干进行治疗。
本发明可至少取得如下有益效果其中之一：
1、本发明通过发掘传统中药价值，利用猕猴桃根茎的抗病菌、抗病毒、抗病虫的特性和治疗植物叶腐病的功能，结合现代生长调节剂技术，获得具有防治柑橘病害的药剂配方，该配方能够明显改善受黄龙病菌为害的树体树势，对黄龙病有十分高效的治疗效果，并使植株获得对黄龙病的抗病性。使用本发明药剂处理后的植株，经过多年长期分子监测，未检出黄龙病病菌，说明该药剂配方对黄龙病的治疗效果稳定可靠。
2、本发明着眼免疫治疗，研究遴选出对黄龙病治疗与免疫的针对性药物，并利用植物生长激素对病树进行调节，药物和激素之间配合发挥出高效治疗作用；通过加入植物生长激素恢复树体的生长功能，促进药物的吸收，增强机体本身的新陈代谢功能，从而达到抑制、灭杀黄龙病病菌的作用。
3、本发明的治疗方法，用药治疗过程简单，治疗效果稳定、不复发，可在黄龙病治疗中推广应用。
具体实施方式
下面对本发明的实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一、试验方法
1、药剂配方
配方1：
一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，以每棵树用药量计，包括：3g猕猴桃根茎干料的提取液，10ppm的赤霉素GA1，65ppm的玉米素，0.01ppm的芸苔素内酯。
配方2：
一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，以每棵树用药量计，包括：10g猕猴桃根茎干料的提取液，70ppm的赤霉素GA20，15ppm的异戊烯腺苷，0.5ppm的芸苔素内酯。
配方3：
一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，以每棵树用药量计，包括：5g猕猴桃根茎干料的提取液，25ppm的赤霉素GA3，25ppm的6-苄氨基嘌呤，0.1ppm的芸苔素内酯。
配方4：
一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，以每棵树用药量计，包括：7g猕猴桃根茎干料的提取液，50ppm的赤霉素GA1，35ppm的玉米素，0.8ppm的芸苔素内酯。
配方5：
一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，以每棵树用药量计，包括：18g猕猴桃根茎干料的提取液，40ppm的赤霉素GA1，55ppm的玉米素，0.05ppm的芸苔素内酯。
配方6：
一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，以每棵树用药量计，包括：22g猕猴桃根茎干料的提取液，25ppm的赤霉素GA3，25ppm的6-苄氨基嘌呤，0.1ppm的芸苔素内酯。
配方7：
一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，以每棵树用药量计，包括：2g猕猴桃根茎干料的提取液，25ppm的赤霉素GA3，25ppm的6-苄氨基嘌呤，0.1ppm的芸苔素内酯。
配方8：
一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，以每棵树用药量计，包括：10ppm的茶皂素，25ppm的赤霉素GA3，25ppm的6-苄氨基嘌呤，0.1ppm的芸苔素内酯。
配方9：
一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，以每棵树用药量计，包括：10g菊三七干料的提取液，25ppm的赤霉素GA3，25ppm的6-苄氨基嘌呤，0.1ppm的芸苔素内酯。
2、治疗方法
一种用于治疗柑橘类黄龙病的方法，包括以下步骤：
S1、配制植物生长激素溶液：首先准确称取赤霉素、玉米素和芸苔素内酯，加水并搅拌使其溶解，然后分别配制成5.00g/kg的母液；
S2、取猕猴桃根茎干料，研磨成细粉末，加入乙醇提取48h，得到猕猴桃根茎提取液；
S3、准确称取赤霉素母液、玉米素母液和芸苔素内酯母液，将其和猕猴桃根茎提取液混合，加水稀释到所需浓度，得到治疗药剂；
S4、将治疗药剂装入输液袋中，在树主干高50cm钻孔，然后***输液针，将治疗药剂输入树主干进行治疗。
3、试验时间及地点
(1)试验地点：江西省于都县某典型示范脐橙园
(2)试验时间：2017年4月-2020年5月
(3)试验品种：纽荷尔脐橙，树龄6-8年
(4)病树分类：首先根据以下柑橘黄龙病病情分级标准，将黄龙病树分为5个病级，其中：
1级：树上有5～6梢叶片呈现斑驳黄化症状；
2级：部分侧枝或者主枝出现斑驳黄化症状，占全树的三分之一以下；
3级：带有斑驳黄化叶的侧枝或主枝占全树的1/3～2/3；
4级：带有黄龙病症状树枝占三分之二以上；
5级：全树接近死亡。
二、小试试验
在江西省于都县某典型示范脐橙园进行小试试验，选取10棵树龄相同田间发病程度基本接近的患有黄龙病的脐橙树(病情在4-5级的重症树)，对其中5株注射根治柑橘黄龙病的溶液，编号为治疗1、治疗2、治疗3、治疗4、治疗5，以配方3的治疗药剂及治疗方法连续治疗30天；剩余5株作为对照，其中2株不进行治疗，编号为对照1、对照2，剩余3株只使用猕猴桃根茎提取液作为治疗药剂。观察、拍照、记录结果。
荧光定量PCR检测：采用96实时荧光定量PCR仪对试验前、试验中、试验后的脐橙树叶片黄龙病病原含量情况进行动态检测。脐橙树叶片的选取方法为：在脐橙树的东南西北中随机各取一根尖端枝条，每根要保证有五片叶子可供检测。检测数据结果如表1所示。
表1
Figure BDA0002739284880000071
(注：当CT值大于35时，判定黄龙病原已经被全部清灭，为阴性)
治疗组的脐橙树均产生愈伤组织，说明未出现排异反应，具有良好的可容性效果。
与对照组1～5相比，经过本发明方法处理后黄龙病树PCR检测全部转为阴性。结果显示，本发明的治疗药剂及治疗方法，对黄龙病的治愈效果明显。
三、平行实验：
选取病情在4-5级的重症树，将脐橙树分成七组，每个组10棵病树，七组编号为治疗6、治疗7、治疗8、治疗9、治疗10、治疗11、治疗12、治疗13、治疗14，分别以配方1～9的治疗药剂及治疗方法连续治疗一段时间，并观察、拍照、记录结果(每组数据取10棵病树检测结果的平均值)，筛选出较好组方。
荧光定量PCR检测：采用96实时荧光定量PCR仪对试验前、试验中、试验后供示植株叶片黄龙病病原含量情况进行动态检测。检测数据如表1所示。
表2
Figure BDA0002739284880000081
(注：当CT值大于35时，判定黄龙病原已经被全部清灭，为阴性)
治疗11、治疗13和治疗14组治疗后的脐橙树出现排异反应，树干治疗部位产生胶状物质，治疗药剂的可容性差。茶皂素和菊三七虽然具有抗病菌、抗病毒、抗病虫的特性，但是在脐橙树体内的相容性差，不适合作为脐橙树黄龙病的治疗药剂。其余治疗组的脐橙树均产生愈伤组织，说明未出现排异反应，具有良好的可容性效果。
试验发现，配方1～5的治疗药剂对黄龙病的治疗效果较好，治疗1月后脐橙树中黄龙病原均被完全清灭。治疗结束1年和2年后，树体长势良好，春梢新生叶片全部为绿色，无黄化和斑驳现象；没有发现脐橙再次受黄龙病菌侵染的现象，仍未检出黄龙病病菌，没有产生复发和再次感染现象；说明该药剂配方对黄龙病的治疗效果稳定可靠。并且，治疗8组(配方3)治疗的该组病树，施药1月后的脐橙树中的黄龙病原即被全部清灭，黄龙病治愈效果最好。
四、验证实验：
1、纵向实验
选取患有不同程度黄龙病的脐橙树，分为三组：病情在4-5级的重症树、病情在2-3级的中症树、病情在1级的轻症树，每组10株树，三组编号分别为治疗15、治疗16、治疗17，均以配方3为治疗药剂进行治疗。荧光定量PCR检测各脐橙树黄龙病病原含量情况，结果列于表3。
表3
Figure BDA0002739284880000091
(注：当CT值大于35时，判定黄龙病原已经被全部清灭，为阴性)
结果表明，本发明的治疗药剂及治疗方法，对不同患病程度的脐橙病树均有很好的治疗效果；对黄龙病重症病树连续治疗1月，黄龙病原已经被全部清灭。分别于治疗结束1年后、2年后对所有治疗后的脐橙树检测黄龙病菌，观察树体树势。检测结果是：树体长势良好，春梢新生叶片全部为绿色，无黄化和斑驳现象；没有发现脐橙再次受黄龙病菌侵染的现象。
2、重复实验
每年都从当年新发病树重复做试验，治疗的脐橙树为病情在4-5级的重症树。治疗开始时间分别为：2017年4月15日、2018年5月5日和7月25日、2019年5月2日、2020年5月18日，分别命名为治疗18、治疗19、治疗20、治疗21、治疗22。结果列于表4。
表4
Figure BDA0002739284880000101
(注：当CT值大于35时，判定黄龙病原已经被全部清灭，为阴性)
结果表明，本发明的治疗药剂及治疗方法，对脐橙重症病树有很好的治疗效果；对黄龙病重症病树连续治疗1月，黄龙病原已经被全部清灭。分别于治疗结束1年后、2年后对所有治疗后的脐橙树检测黄龙病菌，观察树体树势。检测结果是：树体长势良好，春梢新生叶片全部为绿色，无黄化和斑驳现象；没有发现脐橙再次受黄龙病菌侵染的现象。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，其特征在于，包括猕猴桃根茎提取液和植物生长激素。
2.根据权利要求1所述的一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，其特征在于，所述植物生长激素包括赤霉素、细胞***素和芸苔素内酯。
3.根据权利要求2所述的一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，其特征在于，所述细胞***素为6-苄氨基嘌呤、激动素、玉米素、二氢玉米素、异戊烯腺嘌呤、玉米素核苷、异戊烯腺苷中的一种或多种。
4.根据权利要求2所述的一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，其特征在于，所述赤霉素为GA1、GA3、GA4、GA9、GA20中的一种或多种。
5.根据权利要求2所述的一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，其特征在于，所述赤霉素的浓度为5～80ppm。
6.根据权利要求2所述的一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，其特征在于，所述细胞***素的浓度为5～80ppm。
7.根据权利要求2所述的一种用于治疗柑橘类黄龙病的药剂，其特征在于，所述芸苔素内酯的浓度为0.01～1ppm。
8.一种用于治疗柑橘类黄龙病的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、配制植物生长激素溶液；
S2、取猕猴桃根茎干料，配制猕猴桃根茎提取液；
S3、将植物生长激素溶液和猕猴桃根茎提取液混合得到治疗药剂，采用树干输液的方法进行施药。
9.根据权利要求8所述的一种用于治疗柑橘类黄龙病的方法，其特征在于，所述步骤S2中猕猴桃根茎提取液的配制方法为：取猕猴桃根茎干料，加入乙醇进行提取或加水煎煮。
10.根据权利要求8所述的一种用于治疗柑橘类黄龙病的方法，其特征在于，所述步骤S3中将每棵树用量为3～18g猕猴桃根茎干料制备得到的猕猴桃根茎提取液，与植物生长激素溶液混合，然后稀释到所需浓度得到所述治疗药剂。
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