CN112326976B - 孕酮、***和β-人绒毛膜***荧光定量检测试剂盒 - Google Patents
孕酮、***和β-人绒毛膜***荧光定量检测试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供孕酮、***和β‑人绒毛膜***荧光定量检测试剂盒，涉及体外诊断技术领域。该试剂盒包括试纸条，所述试纸条包括衬底和衬底上依次粘贴的样品垫、CP垫、NC膜和吸收垫；所述CP垫包被有鼠抗孕酮单克隆抗体、鼠抗***单克隆抗体、鼠抗β‑人绒毛膜***单克隆抗体和鸡IgY的荧光素标记偶合物；NC膜上分别设有包被有孕酮抗原、***抗原、β‑HCG单克隆抗体的检测线和包被有兔抗鸡IgY单克隆抗体的质控线。本发明试剂盒，能够实现一次取样同时快速，准确定量检测三种早期妊娠指标，为动态检测妊娠早期激素水平变化以及预测早期先兆流产患者妊娠结局提供更为准确的参考依据。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及孕酮、***和β-人绒毛膜***荧光定量检测试剂盒。
背景技术
孕酮、β-人绒毛膜***和***在早期妊娠中有着极其重要的地位。孕酮(progesterone,缩写为Prog)是在妊娠早期由黄体产生的甾体类激素，β-人绒毛膜***(human choronic gonadotrophin,缩写为β-HCG)是由合体滋养细胞分泌的一种糖蛋白，而***(Estrodiol，缩写为E2)是由卵巢成熟滤泡分泌的一种自然甾体***。
妊娠早期，孕酮主要由卵巢妊娠黄体产生，8～10周后由胎盘合体滋养细胞接替，因此孕酮水平反映卵巢妊娠黄体和胎盘的功能。妊娠7周前，妊娠黄体产生的孕激素对于是否能够继续妊娠起着关键作用。8～10周是卵巢黄体和胎盘功能的转换期，孕激素水平可能稍有下降，12周后，胎盘取代卵巢妊娠黄体，孕激素水平又有所回升。妊娠早期孕酮的分泌主要依靠卵巢妊娠黄体，当某种原因导致黄体分泌孕激素水平不足时，将可能导致早期自然流产，合适的孕酮水平有利于早期妊娠的维持。孕酮水平影响子宫平滑肌细胞的通透性，调节细胞内钠钾离子浓度，使子宫平滑肌兴奋性降低，同时降低妊娠子宫对外界的敏感性，使子宫收缩减少，从而保证受精卵的着床生长发育稳定。在妊娠早期，孕酮水平相对稳定，与孕周无相关性。大量研究表明，正常妊娠和出现早期先兆流产后可继续妊娠孕酮的界点为30nmol/L(10ng/mL)。孕酮虽然在早期妊娠和预测早期宫内妊娠结局中起着至关重要的作用，但在后者中，其特异性并不高，孕酮常常要与其它血性激素配合预测宫内早期妊娠结局。
***与孕酮相同，在妊娠早期也是由卵巢黄体产生，妊娠10周后主要由胎儿-胎盘单位合成。至妊娠末期，***及雌酮值为非孕期妇女的100倍。有研究表明，人类黄体虽可产生大量***，但胚胎的成功植入需要的时孕酮而不是***。适当的***水平对于早期妊娠的维持有重要意义，若***水平过低妊娠则难以维持，而且***水平的快速升高反映了胎儿存活正常，胎盘功能良好。多数学者临床研究都认同正常宫内早孕或出现早期先兆流产可继续的患者***水平应随孕周增加而升高，若呈平台或出现下降趋势则提示可能继续妊娠失败的观点。***在预测早期妊娠结局方面比传统的孕酮、β-HCG更有意义，特异性更高。
人绒毛膜***是一种糖蛋白，β-HCG亚基酸基端最后24个氨基酸延长部分为其所特有，故临床利用其特异性测定母体血清β-HCG。母体受精后第6日滋养细胞开始分泌微量β-HCG，第10日即可从母体血清中测出，妊娠至8～10周浓度达高峰值约为50-100KU/L，持续约10d迅速下降。β-HCG的主要作用是使月经黄体得以维持并使之增大为妊娠黄体，增加甾体激素的分泌以促进绒毛发育和胎盘形成，所以早期妊娠胚胎发育快慢的活力与β-HCG的高低呈正比关系；同时β-HCG还可以使胚胎滋养层免于被母体淋巴细胞攻击。由于血清β-HCG在同一孕周波动幅度较大，目前一般通过观察β-HCG的翻倍率来预测孕早期宫内发育情况。孕期β-HCG呈倍式增长，妊娠周数越小，增幅越大，孕周为6周以下时，周间递增≥4.8倍，7周为3倍，8周为1.3倍，9周为0.5倍，9～10周增幅不明显，10周开始下降，从孕10周到>12周均值下降32％。由于β-HCG浓度同一孕周的检测波动幅度较大，且单一检测准确度不高，临床上大多采用联合孕激素检测以提高预测的准确度。
孕酮、***和β-人绒毛膜***三者间密切相关，相辅相成。孕酮与***在孕早期作用相当，没有***，孕酮对生殖器官的作用大为减弱，***对保持黄体妊娠的期限也有很大的影响；β-HCG通过作用于黄体促进孕激素的分泌以维持妊娠，而***在妊娠早期也是由卵巢黄体产生。因此，动态检测孕酮、***和β-人绒毛膜***妊娠早期的水平变化，可以及早预测早期先兆流产患者妊娠结局，对于临床指导治疗具有重要意义。
现有技术中仅有孕酮、***和β-人绒毛膜***的单检试剂盒，缺乏能够同时高效检测孕酮、***和β-人绒毛膜***的试剂盒。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种孕酮、***和β-人绒毛膜***荧光定量检测试剂盒，能够实现一次取样同时快速，准确定量检测三种早期妊娠指标孕酮、***和β-人绒毛膜***，为动态检测妊娠早期激素水平变化以及预测早期先兆流产患者妊娠结局提供更为准确的参考依据。
孕酮、***和β-人绒毛膜***荧光定量检测试剂盒，包括试纸条，所述试纸条包括衬底和衬底上依次粘贴的样品垫、CP垫、NC膜和吸收垫；所述CP垫包被有鼠抗孕酮单克隆抗体、鼠抗***单克隆抗体、鼠抗β-人绒毛膜***单克隆抗体和鸡IgY的荧光素标记偶合物；NC膜上分别设有包被有孕酮抗原、***抗原、β-HCG单克隆抗体的检测线和包被有兔抗鸡IgY单克隆抗体的质控线。
在本发明中，所述CP垫包被有鼠抗孕酮单克隆抗体、鼠抗***单克隆抗体、鼠抗β-人绒毛膜***单克隆抗体的荧光素标记偶合物分别为Meridian公司产品编号E82321M的鼠抗Prog单克隆抗体、Hytest公司产品编号为2E2的鼠抗E2单克隆抗体和Hytest公司产品编号为27E8的鼠抗β-HCG单克隆抗体的荧光素标记偶合物。
在本发明中，NC膜上包被的孕酮抗原来源于Biospacific公司，产品编号V56050；***抗原来源于Medix公司，产品编号710050；β-HCG单克隆抗体来源于Medix公司，产品编号100004。
在本发明中，所述鸡IgY来源于武汉原谷生物科技有限责任公司，编号为BCB005的；兔抗鸡IgY单克隆抗体是武汉原谷生物科技有限责任公司编号AB-038B的抗体。
在本发明中，所述试纸条外侧设有卡壳，所述卡壳包括相互卡接的上卡壳和下卡壳，所述下卡壳设有放置试纸条的卡槽，所述上卡壳对应于试纸条的样品垫处设有加样口、对应于试纸条的NC膜处设有观测口，NC膜上的检测线和质控线均暴露于观测口处。
在本发明中，所述试剂盒还包括带有孕酮、***和β-人绒毛膜***标准曲线的U盘。
有益效果：本发明孕酮、***和β-人绒毛膜***荧光定量检测试剂盒，能够实现一次取样同时快速、准确定量检测三种早期妊娠指标孕酮、***和β-人绒毛膜***，避免对孕妇多次取样，减少刺激孕妇发生宫缩或者感染的几率，为动态检测妊娠早期激素水平变化以及预测早期先兆流产患者妊娠结局提供更为准确的参考依据。
附图说明
图1卡壳的结构示意图，其中1-上卡壳，2-下卡壳，3-加样口，4-观测口，5-卡槽。
图2试纸条的结构示意图，6-衬底，7-样品垫，8-CP垫，9-NC膜，10-吸收垫。
图3是孕酮标准曲线，横坐标为孕酮浓度(ng/ml)，纵坐标为荧光信号强度值。
图4***标准曲线，横坐标为***浓度(pg/ml)，纵坐标为荧光信号强度值。
图5是β-人绒毛膜***标准曲线，横坐标为β-人绒毛膜***浓度(mIU/ml)，纵坐标为荧光信号强度值。
图6显示了孕酮检测的相关性，纵坐标瑞莱是指本发明试剂盒检测到的孕酮的浓度，横坐标为罗氏cobas e411电化学发光全自动免疫分析***检测到的孕酮的浓度。
图7显示了***检测的相关性，纵坐标瑞莱是指本发明试剂盒检测到的***的浓度，横坐标为罗氏cobas e411电化学发光全自动免疫分析***检测到的***的浓度。
图8显示了β-人绒毛膜***检测的相关性，纵坐标瑞莱是指本发明试剂盒检测到的β-人绒毛膜***的浓度，横坐标为罗氏cobas e411电化学发光全自动免疫分析***检测到的β-人绒毛膜***的浓度。
具体实施方式
实施例1孕酮、***和β-人绒毛膜***荧光定量检测试剂盒
1.试剂盒的组成及制备方法
孕酮、***和β-人绒毛膜***荧光定量检测试剂盒，包含：测试卡、带有标准曲线的U盘。
(1)测试卡的结构
结合下图1和图2，说明测试卡的结构。
测试卡包括卡壳和设于卡壳内的试纸条。
试纸条包括衬底6和衬底上依次粘贴的样品垫7、CP垫8、NC膜9和吸收垫10。样品垫、CP垫、NC膜和吸收垫相邻的端部互相搭接。
卡壳包括相互卡接的上卡壳1和下卡壳2，下卡壳2的内表面设置有用于放置试纸条的卡槽5，上卡壳对应于试纸条的样品垫处设有加样口3、对应于试纸条的NC膜处设有观测口4，NC膜上的T1检测线、T2检测线、T3检测线和质控线C均暴露于观测口处。
卡壳不仅保护了试条，避免其受损污染，还起到固定的作用，使得试条不易出现滑动，影响测定。上下卡壳能够将试纸条固定且压紧，CP垫上的标记抗体和样品能够同步运行，保证液体流速均匀，从而进一步降低CV系数，提高精密度和准确性，同时操作方便，放平直接加样即可快速测试，对操作人员无硬性技术要求。另外该卡壳与检测设备能够配套使用，将测试卡***该检测设备(瑞莱生物生产的免疫荧光检测仪，TZ310或TZ320)相应的通道，然后自动稳定送样检测，进一步提高检测结果的准确性，蛋白含量测定值更加精确。
(2)测试卡的制备
①NC膜的制备
自样品垫至吸收垫方向，NC膜(硝酸纤维素膜)上依次等间隔设置有T1检测线、T2检测线、T3检测线和质控线C，T1检测线上包被有Prog抗原(Progesterone-11-BovineSerum Albumin Conjugate，购自Biospacific公司，产品编号V56050)，包被浓度为1mg/mL；T2检测线上包被E2抗原(E2(Estradiol)6-HS antigen，购自Medix公司，产品编号710050)，包被浓度为1mg/mL；T3检测线上包被β-HCG单克隆抗体(购自Medix公司，产品编号100004)，包被浓度为1mg/mL；质控线C上包被兔抗鸡IgY单克隆抗体(购自武汉原谷生物科技有限责任公司，产品编号AB-038B)，包被浓度为0.5mg/mL。
T1检测线与T2检测线之间、T2检测线与T3检测线之间、T3检测线与质控线C之间的距离均相同，便于划线，检测效果也好。T1检测线用于检测Prog，T2检测线用于检测E2，T3检测线用于检测β-HCG。划线浓度一般为0.6μl/cm进行划线，划线后需37℃烘干，即得到了包被T1、T2、T3、C线的NC膜。
采用以上浓度包被质控线C、T1、T2、T3检测线，T、C线也更加均匀，确保不会出现深浅不统一或不连续的现象，同时使用的包被抗体用量最少，降低成本，经济效益好。
②CP垫的制备
将鼠抗Prog单克隆抗体(购自meridian公司，产品编号E82321M)、鼠抗E2单克隆抗体(购自Hytest公司，产品编号2E2)、鼠抗β-HCG单克隆抗体(购自Hytest公司，产品编号27E8)和鸡IgY(Chicken IgY Polyclonal antibody，购于武汉原谷生物科技有限责任公司，编号为BCB005)标记生物素后与Dylight800标记的链霉亲合素相偶联，然后喷涂于玻璃纤维滤膜上，得到了CP垫。
按照如下方法将鼠抗Prog单克隆抗体(购自meridian公司，产品编号E82321M)与生物素进行偶合，得到生物素-Prog mAb偶合物溶液，具体方法如下：在DPBS(杜氏磷酸盐缓冲液，购自HyClone，产品编号SH30028.02)中加入鼠抗Prog单克隆抗体，然后加入生物素，使反应体系中鼠抗Prog单克隆抗体浓度为2mg/ml，生物素浓度为120mg/ml。加好后旋涡混匀，迅速放入恒温培养振荡器中在25℃、600rpm条件下孵育一小时进行反应。反应结束后，将反应产物采用截留分子量为30KDa的超滤管进行超滤，取截留液，得到生物素-Prog mAb偶合物溶液。
按照如下方法将鼠抗E2单克隆抗体(购自Hytest公司，产品编号2E2)与生物素进行偶合，得到生物素-E2 mAb偶合物溶液，具体方法如下：在DPBS中加入鼠抗E2单克隆抗体，然后加入生物素，使反应体系中鼠抗E2单克隆抗体浓度为2mg/ml，生物素浓度为100mg/ml。加好后旋涡混匀，迅速放入恒温培养振荡器中在25℃、600rpm条件下孵育一小时进行反应。反应结束后，将反应产物采用截留分子量为30KDa的超滤管进行超滤，取截留液，得到生物素-E2 mAb偶合物溶液。
按照如下方法将鼠抗β-HCG单克隆抗体(购自Hytest公司，产品编号27E8)与生物素进行偶合，得到生物素-β-HCG mAb偶合物溶液，具体方法如下：在DPBS中加入鼠抗β-HCG单克隆抗体，然后加入生物素，使反应体系中鼠抗β-HCG单克隆抗体浓度为2mg/ml，生物素浓度为200mg/ml。加好后旋涡混匀，迅速放入恒温培养振荡器中在25℃、600rpm条件下孵育一小时进行反应。反应结束后，将反应产物采用截留分子量为30KDa的超滤管进行超滤，取截留液，得到生物素-β-HCG mAb偶合物溶液。
按照如下方法将鸡IgY(购自武汉原谷生物科技有限责任公司，编号为BCB005)与生物素进行偶合，得到生物素-鸡IgY偶合物溶液，具体方法如下：在DPBS中加入鸡IgY，然后加入生物素，使反应体系中鸡IgY浓度为2mg/ml，生物素浓度为80mg/ml。加好后旋涡混匀，迅速放入恒温培养振荡器中在25℃、600rpm条件下孵育一小时进行反应。反应结束后，将反应产物采用截留分子量为30KDa的超滤管进行超滤，取截留液，得到生物素-鸡IgY偶合物溶液。
采用Thermo scientific PierceTM Biotin Quantitation Kit检测生物素-ProgmAb偶合物溶液、生物素-E2 mAb偶合物溶液、生物素-β-HCG mAb偶合物溶液和生物素-鸡IgY偶合物溶液中平均每个抗体分子上标记的生物素的个数。结果如下：生物素-Prog mAb偶合物溶液浓度为1mg/ml，平均每个鼠抗Prog单克隆抗体上标记的生物素的个数是6；生物素-E2 mAb偶合物溶液浓度为1mg/ml，平均每个鼠抗E2单克隆抗体上标记的生物素的个数是7；生物素-β-HCG mAb偶合物溶液浓度为1mg/ml，平均每个鼠抗β-HCG单克隆抗体上标记的生物素的个数是8；生物素-鸡IgY偶合物溶液浓度为1mg/ml，平均每个鸡IgY上标记的生物素的个数是7。
将生物素-Prog mAb偶合物与Dylight800标记的链霉亲合素(购自Thermoscientific,产品编号46421)进行偶合，具体方法如下：在DPBS中，加入生物素-Prog mAb偶合物，在25℃、500rpm条件下震荡，然后迅速加入Dylight800标记的链霉亲合素，得到ProgmAb标记偶合物。反应体系中生物素-Prog mAb偶合物的浓度为0.56mg/ml，Dylight800标记的链霉亲合素的浓度为0.3mg/ml。
采用上述相同方法，将生物素-E2 mAb偶合物、生物素-β-HCG mAb偶合物和生物素-鸡IgY偶合物分别与Dylight800标记的链霉亲合素偶合，分别得到E2 mAb标记偶合物、β-HCG mAb标记偶合物和鸡IgY标记偶合物。反应体系中生物素-抗体偶合物浓度均为0.56mg/ml，Dylight800标记的链霉亲合素浓度均为0.3mg/ml。
以QC-buffer为溶剂，配制含有0.1mg/ml的Prog mAb标记偶合物、0.1mg/ml的E2mAb标记偶合物、0.15mg/ml的β-HCG mAb标记偶合物和0.05mg/ml的鸡IgY标记偶合物，得到CP包被液。使用BIODOT包被机将CP包被液包被在玻璃纤维垫上(尺寸是10mm×280mm)，喷量是2.2ul/cm，放入真空干燥箱内处理至少24h，得到CP垫。其中QC-buffer是含有5％(质量百分浓度)人血清白蛋白、0.1％(质量百分浓度)PVP90、2％(质量百分浓度)海藻糖、0.5％(质量百分浓度)叠氮钠的水溶液。
③样品垫
处理液是含有6.055mg/ml Tris base(三羟甲基氨基甲烷),1.2mg/ml EDTA-Na2,2mg/ml Casein(酪蛋白),8％(体积百分浓度)Tween-20和5％(质量百分浓度)海藻糖的水溶液，pH 7.2。
采用处理液浸泡处理聚酯纤维膜，烘干后制得样品垫。
该种方法制得的样品垫使用效果最好，阳性和阴性对照效果较好，使用检测设备进行测定，Prog、E2和β-HCG的阳性样本均能很好的与阴性样本区分开。
④组装
将样品垫、CP垫、NC膜和吸收垫依次粘贴在衬底上，切条制成试纸条，并与相配套的卡壳组装。然后装入铝箔袋，再取一袋干燥剂装入铝箔袋中，用热封机封好铝箔袋。最终完成测试卡的制备。
其中吸收垫的材质为玻璃纤维和棉绒混合(购自Ahlstrom公司，货号：320)，衬底的材质为聚氯乙烯。
(3)带有标准曲线的U盘
U盘上带有孕酮标准曲线、***标准曲线和β-人绒毛膜***标准曲线。
各物质标准曲线制作方法如下：
孕酮标准曲线的制作：用PBS(10mM，pH 7.2)将孕酮国家标准物质(57-83-0)配制成浓度为0.25ng/ml、0.5ng/ml、2.5ng/ml、10ng/ml、40ng/ml、160ng/ml、300ng/ml的标准品。将各浓度的孕酮标准品分别滴入测试卡的加样孔内，然后放进瑞莱生物生产的免疫荧光检测仪(TZ310或TZ320)内，在18℃下反应8min。反应结束后，通过上述免疫荧光检测仪(TZ310或TZ320)，在激发光波长777nm、接收光波长794nm条件下，扫描T1、质控线C，获得荧光信号强度值，以孕酮的浓度为横坐标，荧光信号强度值为纵坐标，制作标准曲线，如图3，方程为y＝1.0922x+0.9297，R2＝0.9995，x为孕酮浓度，y为荧光信号强度值。测试卡对孕酮检测的线性范围为0.25ng/ml-300ng/ml。
***标准曲线制作：将***高浓度样本采用罗氏Estradiol II检测试剂盒(罗氏cobas e411电化学发光全自动免疫分析***赋值)定值，用阴性血清稀释至5pg/ml、20pg/ml、80pg/ml、320pg/ml、640pg/ml、1280pg/ml、2560pg/ml、3000pg/ml的***标准品。将各浓度的***标准品分别滴加到测试卡的加样孔内，然后放进瑞莱生物生产的免疫荧光检测仪(TZ310或TZ320)内，在18℃下反应8min。反应结束后，通过上述免疫荧光检测仪(TZ310或TZ320)，在激发光波长777nm、接收光波长794nm条件下，分别扫描T2、质控线C，获得荧光信号强度值，以***的浓度为横坐标，荧光信号强度值为纵坐标，制作标准曲线，如图4，方程为y＝1.1208x-5.4193，R2＝0.9978，x为***浓度，y为荧光信号强度值。测试卡对***检测的线性范围为5-3000pg/ml。
β-人绒毛膜***标准曲线的制作：用PBS(10mM，pH 7.2)将β-人绒毛膜***标准物质(75/551)稀释为浓度2mIU/ml、20mIU/ml、200mIU/ml、20000mIU/ml的β-人绒毛膜***标准品。将各浓度的β-人绒毛膜***标准品分别滴入测试卡的加样孔内，然后放进瑞莱生物生产的免疫荧光检测仪(TZ310或TZ320)内，在18℃下反应8min。反应结束后，通过上述免疫荧光检测仪(TZ310或TZ320)，在激发光波长777nm、接收光波长794nm条件下，分别扫描T3、质控线C，获得荧光信号强度值，以β-人绒毛膜***的浓度为横坐标，荧光信号强度值为纵坐标，制作标准曲线，如图5，方程为y＝1.0192x+80.128，R2＝0.9978，x为β-人绒毛膜***浓度，y为荧光信号强度值。检测的线性范围为2-20000mIU/ml。
2.试剂盒的使用方法
测试时，将待检样本滴入测试卡的加样口内，将测试卡放入瑞莱生物生产的免疫荧光检测仪(TZ310或TZ320)内，在18℃反应8min，然后通过免疫荧光检测仪(TZ310或TZ320)，在激发光波长777nm、接收光波长794nm条件下，检测T1、T2和T3检测线的荧光信号强度值，再根据保存在U盘上的标准曲线计算，得到待检样本中孕酮、***和β-人绒毛膜***的浓度。只有当质控线C处的荧光信号强度值大于0.2的情况下，检测结果才算可信。
按照常规方法，得到本发明试剂盒对孕酮的检出限为0.1ng/mL，对***的检出限为3pg/ml，对β-人绒毛膜***的检出限为1mIU/ml。
采用本发明试剂盒分别检测Prog、E2和HCG的高、中、低浓度和阴性样本，各水平重复测定10次，计算变异系数(CV)，结果如下：发现变异系数均小于4％。
实施例2本发明试纸条与其他试纸条的效果对比
制备对照试纸条1-3。
按照本发明试纸条的制备方法，制备对照试纸条1，不同之处在于将CP垫上的ProgmAb标记偶合物中的Prog抗体(购自Meridian，产品编号E82321M)替换为Hytest公司，产品编号为HPRO-2的Prog抗体。
按照本发明试纸条的制备方法制备对照试纸条2，不同之处仅在于将NC膜上Medix公司产品编号为710050的E2抗原替换为Biospacific公司编号为V56110的E2抗原，将CP垫上的E2 mAb标记偶合物中的E2抗体(Hytest，2E2)替换为Holmes公司产品编号为HM177A-1177A的E2抗体。
按照本发明试纸条的制备方法制备对照试纸条3，不同之处仅在于将NC膜上Medix公司产品编号为100004的β-HCG抗体替换为Hytest公司产品编号为28A4的β-HCG抗体。
具体见表1。
检测本发明试纸条和对照试纸条对Prog、E2和HCG检测时的线性检测范围和检出限。从表2可以看到各对照试纸条对Prog、E2和HCG检测时的线性检测范围和检出限，本发明试纸条在线性检测范围和检出限显著优于对照试纸条。
表1各试纸条的组成
注表格中各物质是按照“购买来源，产品编号”的形式给出的。
表2各试纸条的检出限和线性检测范围
实施例3采用本发明试剂盒检测具体血清样本
按照本发明试纸条的制备方法制备一批检测试剂盒，与罗氏cobas e411电化学发光全自动免疫分析***赋值的血清样本进行相关性比对。孕酮、***和β-人绒毛膜***各检测50例样本，以罗氏cobas e411电化学发光全自动免疫分析***的检测结果为对照组，比对本发明检测结果与其相关性，结果如图6-8。可见，本发明试剂盒检测结果是极为准确的。
Claims (5)
1.孕酮、***和β-人绒毛膜***荧光定量检测试剂盒，其特征在于包括试纸条，所述试纸条包括衬底和衬底上依次粘贴的样品垫、CP垫、NC膜和吸收垫；所述CP垫包被有鼠抗孕酮单克隆抗体、鼠抗***单克隆抗体、鼠抗β-人绒毛膜***单克隆抗体和鸡IgY的荧光素标记偶合物；NC膜上分别设有包被有孕酮抗原、***抗原、β-人绒毛膜***单克隆抗体的检测线和包被有兔抗鸡IgY单克隆抗体的质控线；所述CP垫包被有鼠抗孕酮单克隆抗体、鼠抗***单克隆抗体、鼠抗β-人绒毛膜***单克隆抗体的荧光素标记偶合物分别为Meridian公司产品编号E82321M的鼠抗孕酮单克隆抗体、Hytest公司产品编号为2E2的鼠抗***单克隆抗体和Hytest公司产品编号为27E8的鼠抗β-人绒毛膜***单克隆抗体的荧光素标记偶合物。
2.根据权利要求 1所述试剂盒 ，其特征在于 N C膜上包被的孕酮抗原来源于Biospacific公司，产品编号V56050；***抗原来源于Medix公司，产品编号710050；β-人绒毛膜***单克隆抗体来源于Medix公司，产品编号100004。
3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于所述鸡IgY来源于武汉原谷生物科技有限责任公司，编号为BCB005；兔抗鸡IgY单克隆抗体是武汉原谷生物科技有限责任公司编号AB-038B的抗体。
4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于所述试纸条外侧设有卡壳，所述卡壳包括相互卡接的上卡壳和下卡壳，所述下卡壳设有放置试纸条的卡槽，所述上卡壳对应于试纸条的样品垫处设有加样口且对应于试纸条的NC膜处设有观测口，NC膜上的检测线和质控线均暴露于观测口处。
5.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括带有孕酮、***和β-人绒毛膜***标准曲线的U盘。
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