CN112326835A - 午香草中绿原酸含量测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及午香草中绿原酸含量测定方法：取绿原酸对照品适量，加50％甲醇制成每1ml含4μg的溶液，取午香草干燥粉碎后的粉末0.5g，置具塞锥形瓶中，加入50％甲醇50ml，称定重量，53KHz超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本发明测定午香草中绿原酸含量，操作简便、方法可靠、结果准确、专属性强，可有效提高午香草的质量控制水平。

Description

午香草中绿原酸含量测定方法

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及午香草中绿原酸含量测定方法。

背景技术

午香草来源于菊科植物粘毛香青Anaphalis bulleyana(J.F.Jeffr.)Chang的干燥全草。味辛、微苦，温。归肺、胃经。祛风散寒，具有止咳化痰，和胃止泻的功效。用于风寒感冒，咳嗽多痰，咽痛；腹胀腹痛，泄泻，痢疾。

现行标准中没有午香草活性成分或指标性成分的检测，经检索也未发现有午香草成分分析的报道，这就导致午香草质量控制的针对性和准确性较差，难以有效控制药材质量。经过申请人长期研究检测，发现午香草中有效成分主要为绿原酸，因此进一步研究其药用效能的话，需要对其含量测定进行对应的研究，绿原酸的含量测定方法有许多种，但是由于许多物质同绿原酸分子结构近似，同存于午香草等药材中，因此在进行含量测定时常常难以分离，常用的测定方法包括紫外分光光度法、高效液相色谱法等，这些常规方法要么难以完全分离待测物质，要么易受干扰，或者分析时间长，效率低，因此需要针对午香草的特性开展适用于午香草的独特的绿原酸含量测定方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种适用于午香草特性的，独特的绿原酸含量测定方法，既能较为彻底的分离待测物质，也可以避免受到干扰，同时提高测定效率。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：午香草中绿原酸含量测定方法，具体包括以下步骤：

1)色谱条件与***适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.4％磷酸(13:87)为流动相，检测波长为328nm，理论板数按绿原酸峰计算应≥3000；

2)对照品溶液的制备：取绿原酸对照品，精密称定，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml含4μg的溶液；

3)供试品溶液的制备：取午香草粉末(过三号筛)0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入50％甲醇50ml，称定重量，53KHz超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得；

4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明的有益技术效果是：

午香草为彝族地区常用药材，标准收载于《云南省药材标准·2005年版Ⅱ彝族药》，标准中未规定有含量测定的项目，同时目前也未发现有午香草含量测定的相关内容。绿原酸具有抗菌及抗病毒、增强免疫力、抗消化性溃疡、保肝、抗炎^]等作用，与午香草的祛风散寒，具有止咳化痰，和胃止泻的功效和用于风寒感冒，咳嗽多痰，咽痛；腹胀腹痛，泄泻，痢疾的治疗作用呈正相关，为主要活性成分，通过研究，本方法可作为午香草主要质量指标，可用于午香草药材的质量控制以及午香草药材、饮片及相关制品的质量评价。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明实施例涉及样品以及试剂和设备说明如下：

1.样品来源：样品分别采自云南省楚雄州大姚县和大理州祥云县，经公司专业技术人员鉴定为午香草，并抽取鉴定合格样品送中国科学院昆明植物研究所鉴定为菊科植物粘毛香青，与午香草基源表述一致。

2.试剂来源：甲醇(分析纯，天津市风船化学试剂科技有限公司)、水(纯化水，公司自制)、乙醇(分析纯，天津市风船化学试剂科技有限公司)、磷酸(分析纯，天津市风船化学试剂科技有限公司)、冰醋酸(分析纯，天津市富宁精细化工有限公司)、甲醇(色谱纯，赛默飞世尔科技(中国)有限公司)、乙腈(色谱纯，西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司)。

3.主要仪器说明：高效液相色谱仪为安捷伦1100型(安捷伦美国)、电子天平为梅特勒AB204--N型和MS105型(梅特勒-托利多仪器有限公司)，双光束紫外可见光光度计为UV-1800APC型(上海美折仪器有限公司)，仪器均经检定合格，在有效期内。

实施例：

午香草中绿原酸含量测定方法，具体包括以下步骤：

1)色谱条件与***适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.4％磷酸(13:87)为流动相，检测波长为328nm，理论板数按绿原酸峰计算应≥3000；其中，

检测波长的选择：分别用乙腈-0.4％磷酸溶液(13:87)、甲醇-0.4％磷酸溶液、乙腈:0.5％冰醋酸溶液制备绿原酸溶液，用紫外分光光度计在200-400nm范围内扫描，均在328nm出有最大吸收，故选择328nm为检测波长；

流动相的选择：制取样品，分别用上述三种流动相进行测定，乙腈-0.4％磷酸溶液(13:87)杂质峰少、分离度好、测的含量高，故选择乙腈-0.4％磷酸溶液(13:87)为本方法的流动相；

2)对照品溶液的制备：取绿原酸对照品，精密称定，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml含4μg的溶液；

3)供试品溶液的制备：过取午香草粉末(三号筛)0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入50％甲醇50ml，称定重量，53KHz超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得；

4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实施例中样品制备方法的选择：本品药用部位为全草，故选择全株样品粉碎过三号筛，分别用水、甲醇和乙醇为溶剂，用冷浸法、回流法和超声提取法进行实验，最终为用50％甲醇超声处理40分钟测得含量高、分离度好、杂质峰少。

本发明所涉及实施例相关实验说明如下：

1、线性关系的考察

精密吸取绿原酸对照品溶液(4.232μg/ml)5、10、15、20、25、30、35、40、45μl分别注入液相色谱仪中，按预定色谱条件测定，以峰面积和进样量进行线性回归，以进样量(μg)为横坐标，对照品峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y＝2541.1x+17.68(r＝0.9990)，进样量范围：0.02116～0.19044ug之间线性良好。

对照品浓度(4.232μg/ml)

2、精密度试验

精密吸取对照品溶液10μl，按预定色谱条件连续重复进样5次，测定峰面积，计算RSD(％)＝0.61％。

对照品浓度(4.232μg/ml)

3、稳定性试验

称取午香草0.5g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备溶液，每隔2小时测定一次，测定7次，根据测定的峰面积计算RSD(％)。RSD＝0.014％。

4、重复性试验

称取午香草0.5g，各平行处理5份，精密称定，按供试品溶液的制备方法制备溶液，按预定的色谱条件进行测定，根据峰面积计算含量的RSD(％)。RSD＝0.08％。

5、加样回收率试验

称取午香草0.25g，平行处理9份，精密称定，加入绿原酸对照品溶液适量，按制备供试品溶液的方法制备溶液，按预定的色谱条件进行测定，回收率101.3％-106.8％、平均回收率＝104.5％、RSD＝1.74％，结果符合要求。

样品：粘毛香青，产地：大姚县批号20191108；测得含量：0.504％。

绿原酸对照品溶液：0.1326mg/ml

6、重现性实验

取午香草样品三批分别在在云南金碧制药中心化验室(色谱柱型号：ProsigyOOG-4252-EO Luna 5μm C18(2)100A LC Column 250×4.6mm月旭)、楚雄州食品药品检验所、楚雄医专药研所(岛津LC-2030高效液相色谱仪。色谱柱型号：Shim-pack VP-ODS分析柱，C18 5μl，4.6mm×25cm)按上述试验条件进行试验，计算含量，计算RSD(％)。RSD分别为1.93％、4.43％、3.57％，符合要求。

按测定方法进行测定不同产地共15批样品，根据测定结果，本品绿原酸含量限度规定为本品按干燥品计算，含绿原酸(C₁₆H₁₈O₉)不得少于0.18％。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.午香草中绿原酸含量测定方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

1)色谱条件与***适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.4％磷酸(13:87)为流动相，检测波长为328nm，理论板数按绿原酸峰计算应≥3000；

2)对照品溶液的制备：取绿原酸对照品，精密称定，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成每1ml含4μg的溶液；

3)供试品溶液的制备：取午香草粉末(过三号筛)0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入50％甲醇50ml，称定重量，53KHz超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置25ml棕色量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得；

4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。