CN112326812A - 同位素稀释-OnlineSPE-HRMS同时检测地下水中五种农药的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种同位素稀释‑Online SPE‑HRMS分析地下水中五种农药的方法，水样经0.45μm玻璃纤维滤膜过滤去除悬浮杂质，取过滤水样10.0mL至大体积进样瓶。水样经在线固相萃取柱进行自动化富集净化。水样富集溶剂为千分之一甲酸水，净化溶剂为6％甲醇和百分之94％甲酸水。通过6通2位阀切换，五种待测目标物被洗脱至分析柱，洗脱溶剂为乙腈和千分之一甲酸水。同时采用同位素内标法进行定量。本发明将该方法应用到地下水水样分析，通过检测发现部分样品中检出克百威，检出浓度在2.33～12.33ng/L。

Description

同位素稀释-OnlineSPE-HRMS同时检测地下水中五种农药的 方法

技术领域

本发明涉及一种地下水的水样检测方法，更具体的，涉及一种同位素稀释-在线固相萃取-液相色谱高分辨质谱(Online SPE-HRMS)同时检测地下水中五种农药的方法。

背景技术

我国是农业生产大国，随着粮食和其他农产品的需求日益增加，为了提高农作物产量，大量不同种类农药被用于防治病虫害。农药在施用过程中，容易进入地下水、地表水和土壤等不同区域并造成污染，其环境问题已引起人们的关注。五氯酚、2,4,6-三氯酚、2,4-滴、克百威、滴灭威五种农药属于高效、广谱的杀菌剂、杀虫剂和除草剂，且这几种农药在我国农业生产中的使用量较大、使用范围较广。五氯酚、2,4,6-三氯酚，广泛存在水环境中，是应用范围较广的氯酚类物质，可用作杀菌剂、杀虫剂、木材防腐剂等，由于其毒性较强、具有三致作用、污染面广、难以降解，被我国国家环保总局列为优先控制污染物。涕灭威、克百威是广谱的氨基甲酸酯类杀菌剂，具有易降解、残留期短、低毒等优点，被广泛用于粮食、蔬菜等农业生产中。2,4-滴是我国使用量较大的一类氯代苯氧羧酸类除草剂，由于其价格低廉、高效、低毒等，主要用来防治单子叶植物小麦、玉米、高梁等田间的除草生长。

目前在国内外文献中，检测水中这五种农药的方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法等多种方法，其中GC、GC-MS需衍生化，其过程较为复杂、耗时。多采用液相色谱-质谱联用法。但在多残留分析中，低分辨质谱因分辨率低、扫描速度慢等，在高通量的检测具有一定的局限性。最近几年发展起来的一种新型的四极杆/静电场离子轨道阱高分辨率质谱仪(UPLC/Q Orbitrap)分辨率可高达280000，通过一级扫描可获得精确质量数且相对质量偏差在1～10×10^-6之间，具有良好的定性定量分析能力，在痕量化合物检测分析和筛查确证中具有明显优势。

地下水是人类重要的饮用及工农业用水资源，所以建立地下水中农药残留分析方法具有重要科学意义。目前，对地下水中农药残留分析方法已有相关研究，多采用液液萃取、加速溶剂萃取和固相萃取等方法，这些传统前处理方法较为复杂、耗时，且大都采用外标或一般内标法进行定量检测。对于用外标法定量，其准确性易受仪器条件、基质效应等因素的影响。一般内标定量，在一定程度上无法满足多组分的定量且也易受多种因素的影响。而同位素稀释法(Isotope Dilution,ID)是国际公认的化学计量方法，在试样处理前，向溶液中加入待测目标物的同位素，通过利用同位素比值变化来定量测定待测目标物浓度的方法。与传统定量方法相比，该方法能够准确地定量，在一定程度上弥补了外标法或一般内标法的不足，提高了定量结果的准确性和可靠性。

对于这五种农药，五氯酚和2,4,6-三氯酚地下水质量标准中推荐使用HJ 744-2015《水质酚类化合物的测定气相色谱质谱法》，2,4-滴、克百威和滴灭威推荐使用GB/T23214-2008《饮用水中农药及相关化学品残留量测定液相色谱串联质谱法》，针对这五种农药残留同时自动化分析方法还未见报道。

发明内容

针对现有技术中没有同时检测五种农药残留的缺陷，本研究采用同位素技术结合在线固相萃取，建立了一种同时检测地下水中五种农药的超高效液相色谱-串联质谱方法，具体方案如下：

本发明提供一种同位素稀释-Online SPE-HRMS同时检测地下水中五种农药的方法，所述五种农药为五氯酚、2,4,6-三氯酚、2,4-滴、克百威、滴灭威，包括以下步骤：

1)地下水样品预处理方法

水样静置，取上清液，经0.45μm玻璃纤维滤膜过滤去除悬浮杂质，准确量取10mL水样过滤，随至加入10μL同位素内标混合溶液，摇匀，涡旋1min后，将所述水样转移至10mL进样瓶中，供上机分析；

所述同位素内标混合溶液为五氯酚-¹³C、2,4,6-三氯酚-¹³C、2,4-滴-d₃、克百威-d₃、涕灭威-d₃这五种同位素内标，浓度为100ng/mL；

2)富集、净化和洗脱分离方法：

包含两条流路分别进行自动化富集净化和洗脱分离，其中第一流路：从所述进样瓶抽取所述水样，用千分之一甲酸水溶液泵送所述水样至在线固相萃取柱进行富集，每次泵送2.5ml，泵送3次,累计泵送所述水样体积共7.5mL，完成富集；后用94％千分之一甲酸水和6％甲醇混合溶液冲洗在线固相萃取柱五分钟完成净化，净化完成后切换6通2位阀，第一流路以100％甲醇冲洗在线固相萃取柱，完成在线固相萃取柱再生，后流动相变回100％千分之一甲酸水平衡在线固相萃取柱。第二流路：在阀切换前是平衡色谱柱，阀切换后以一定梯度将富集在在线固相萃取柱上的目标物洗脱至色谱柱进行分离，具体洗脱梯度为5-6min，流动相保持10％甲醇和90％千分之一甲酸；6-11min，甲醇由10％升至70％；11-12min，甲醇比例由70％升至100％保持8min后甲醇降至10％保持6.6min等待下一针进样；

3)用预设的质谱条件进行分析

其中质谱条件：

离子源：电喷雾加热离子源；质量分析器：离子阱质量分析器(Orbitrap)；离子源温度：450℃；离子传输金属毛细管温度：320℃；喷雾电压：4.0kV；透镜电压：55kV；鞘气流速：55arb，辅助气流速：15arb；扫描模式：FullMS-ddMS2；采集范围：m/z100-1000；一级全扫描分辨率为70000FWHM；C-trap最大容量(ACGtarget)：3×106；C-trap最大注时间100ms；数据依赖二级子离子全扫描(dd-MS2)分辨率：17500FWHM；C-trap最大容量(ACGtarget)1×105；C-trap最大注入时间50ms；归一化碰撞能量(NCEs)：50eV；动态排除：10s；柱温：40℃。

进一步地，所述在线固相萃取柱尺寸为50mm×0.5mm，60μm；所述色谱柱的尺寸为2.1×100mm，3.0μm。

进一步地，所述同位素内标混合溶液的配制：以甲醇为稀释液配制与目标物一一对应的五种同位素内标，浓度为100ng/mL，配置完成后，放置-4℃保存。

进一步地，在步骤3)之前还包括：混合标准工作液的配制：分别移取10、20、50、100、150、200μL混合标准储备液和10μL同位素内标混合溶液至10.0mL超纯水五种农药配制成10、20、50、100、150、200ng/L的混合标准工作溶液，现配现用。

进一步地，其中混合标准储备液含有五氯酚、2,4,6-三氯酚、2,4-滴、克百威和涕灭威这五种物质，浓度为10ng/mL。

本申请的方法与传统离线固相萃取-液相质谱方法相比，样品无需繁琐的手动浓缩富集，通过直接进样，实现快速自动化分析，具有自动化程度高，绿色安全，快速准确等优点，同时结合静电场离子轨道阱高分辨质谱的超高分辨率以及所能获取的精确质量数，可最大程度地减少基质干扰，提高了检测的准确度、减少了假阳性，为地下水中农药多残留的定性和定量检测提供了新技术，具有较强的实用和经济价值。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为在线涡流固相萃取-液相色谱-质谱联用示意图；

图2为五种标准溶液的提取离子图；

图3为不同PH条件下5种极性农药的峰面积对比图；

图4为某一样品中克百威的提取离子流图和一级、二级质谱。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

1方法步骤：

本发明提供一种同位素稀释-Online SPE-HRMS同时检测地下水中五种农药的方法，所述五种农药为五氯酚、2,4,6-三氯酚、2,4-滴、克百威、滴灭威，包括以下步骤：

1)地下水样品预处理方法

水样静置，取上清液，经0.45μm玻璃纤维滤膜过滤去除悬浮杂质，准确量取10mL水样过滤，随至加入10μL同位素内标混合溶液，摇匀，涡旋1min后，将所述水样转移至10mL进样瓶中，供上机分析；

所述同位素内标混合溶液为五氯酚-¹³C、2,4,6-三氯酚-¹³C、2,4-滴-d₃、克百威-d₃、涕灭威-d₃这五种同位素内标，浓度为100ng/mL；

2)富集、净化和洗脱分离方法：

包含两条流路分别进行自动化富集净化和洗脱分离，其中第一流路：从所述进样瓶抽取所述水样，用千分之一甲酸水溶液泵送所述水样至在线固相萃取柱进行富集，每次泵送2.5ml，泵送3次,累计泵送所述水样体积共7.5mL，完成富集；后用94％千分之一甲酸水和6％甲醇混合溶液冲洗在线固相萃取柱五分钟完成净化，净化完成后切换6通2位阀，第一流路以100％甲醇冲洗在线固相萃取柱，完成在线固相萃取柱再生，后流动相变回100％千分之一甲酸水平衡在线固相萃取柱。第二流路：在阀切换前是平衡色谱柱，阀切换后以一定梯度将富集在在线固相萃取柱上的目标物洗脱至色谱柱进行分离，具体洗脱梯度为5-6min，流动相保持10％甲醇和90％千分之一甲酸；6-11min，甲醇由10％升至70％；11-12min，甲醇比例由70升至100％保持8min后甲醇降至10％保持6.6min等待下一针进样。3)用预设的质谱条件进行分析。

2实验部分

2.1试剂与材料

试剂：乙腈(色谱级，美国Phillipsburg公司)、甲醇(色谱级，美国Phillipsburg公司)、甲酸(色谱级，美国Dikma Technology INC公司)、超纯水由Milli-Q***(德国Millipore公司)制成、其它试剂均为分析纯。

标准品：2,4-滴(GBW(E)060552)、2,4,6-三氯酚(GBW(E)080473)、克百威(GBW(E)060225)、涕灭威(GBW(E)082611)、五氯酚(GBW(E)080475)标样购自中国计量科学研究院。2,4-滴-d₃购自中国FirstStandard公司、涕灭威-d₃、克百威-d₃、2,4,6-三氯酚-¹³C、五氯酚-¹³C购自加拿大TRC公司。

2.2仪器设备

UltiMate^TM 3000双三元***组件(美国Thermo Fisher Scientific公司)：WPS-3000TSL自动进样器配有2.5mL大体积进样环、TCC-3200柱温箱配有六通阀切换装置、DGP3600M双三元梯度泵和SRD 3600溶剂架(带真空脱气机)、Q Executive plus四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪(美国Thermo Fisher公司)、涡旋振荡器(上海青浦沪西仪器厂)、Milli-Q超纯水器(Advantage-10/Elix，美国Millipore公司)。

2.3标准溶液的配制

同位素内标混合溶液：利用甲醇为稀释液将100μg/mL与目标物一一对应的五种内标配置成1.0μg/mL的混合标准溶液，并稀释至100ng/mL同位素内标混合溶液，配置完成后，放置-4℃保存。

混合标准工作液：利用甲醇为稀释液将100μg/mL五种农药的标准溶液配制成1.0μg/mL的混合标准溶液，逐级稀释获得10.0ng/mL混合标准储备液，分别吸取10、20、50、100、150、200μL 10.0ng/mL的混合标准储备液和10μL 100ng/mL同位素内标混合溶液至10.0mL超纯水，配制成10、20、50、100、150、200ng/L混合标准工作液，现配现用。

2.4样品前处理

水样静置，取上清液，经0.45μm玻璃纤维滤膜过滤去除悬浮杂质，准确量取10mL水样过滤，随至加入10μL同位素内标混合溶液，摇匀，涡旋1min后，将所述水样转移至10mL进样瓶中，供上机分析。

2.5仪器分析条件

自动化在线固相萃取与分析：自动进样器每次吸取2.5mL水样，样品在流动相(泵1，100％甲酸溶液(1:1000，V/V))高流速带动下于在线固相萃取柱(Turboflow Cyclone(50mm×0.5mm，60μm)Thermo Fisher Scientific公司)上自动化富集，重复吸取富集样品三次，总进样量为7.5mL。水样自动富集后，左泵流速降为0.50mL/min，流动相比例不变，保持5.0min清洗在线固相萃取柱。后切换六通阀至2号位，此时右泵的流动相(60％甲酸溶液，40％乙腈)将目标物反洗脱并进入至分析柱(AcclaimTM PolarAdvantag II C18(PA2)(2.1×100mm，3.0μm)，Thermo Fisher Scientific公司)，洗脱时间为7.0min。反洗脱完成后六通阀切回1号位，泵1流动相以4.0ml/min，95％乙腈保持10.0min进行在线固相萃取柱再生。泵2流路完成液相分离和质谱检测，泵2分离梯度程序为：0.0～6.0min 10％乙腈，然后在5min内将乙腈比例增加至70％，后又在1min内进一步增加至100％保持6min。最后流动相回到初始条件等待下一次进样。在线固相萃取液相色谱-质谱联用***如图1所示。

自动化富集净化和洗脱分离，在线固相萃取柱：Turboflow Cyclone(50mm×0.5mm，60μm)；左泵流动相：A为0.1％甲酸水；B为甲醇，色谱分离柱：Acclaim^TM PolarAdvantage II C18(PA2)(2.1×100mm，3.0μm)；右泵流动相：A为0.1％甲酸水；B为乙腈，具体梯度洗脱程序见表1。

表1在线固相萃取梯度洗脱程序

Table 1 The online SPE-UHPLC-MS/MS gradient elution and valveswitching programs

质谱条件：离子源：电喷雾加热离子源(HESI)；质量分析器：离子阱质量分析器(Orbitrap)；离子源温度：450℃；离子传输金属毛细管温度：320℃；喷雾电压：4.0kV；透镜电压：55kV；鞘气流速：55arb，辅助气：15arb；扫描模式：Full MS-ddMS2；采集范围：m/z100-1000；一级全扫描分辨率为70000FWHM；C-trap最大容量(ACG target)：3×10⁶；C-trap最大注入时间100ms；数据依赖二级子离子全扫描(dd-MS2)分辨率：17500FWHM；C-trap最大容量(ACG target)1×10⁵；C-trap最大注入时间50ms；归一化碰撞能量(NCEs)：50eV；动态排除：10s；柱温：40℃。

3结果与讨论

3.1质谱条件的选择

采用电喷雾加热离子源(HESI)，由于目标待测物的电离性质差异，一级质谱全扫描采用正负同时扫描模式在设定的采集范围内(100-1000m/z))进行质谱采集，通过提取在目标列表中母离子精确质量数所得的色谱峰面积进行定量，通过自动触发获得的二级子离子和保留时间进行定性。对高分辨质谱而言，质量准确度是影响定性和定量准确的重要因素之一，当所测的实测质量数越接近理论质量数时，表明两者之间的相对质量偏差也就越小，其准确度就越高^[15-16]。如表2所示各农药的相对质量偏差小于1.8×10^-6，符合高分辨质谱定性的质量准确度误差5.0×10^-6要求。因此，可利用该方法得到的精确质量数对目标化合物进行定性和定量分析。

表2五种农药质谱方法参数

Table 2 The optimized MRM parameters for tandem mass spectrometry

3.2液相色谱分析与在线固相萃取柱选择

本实验选定乙腈-千分之一甲酸水溶液作为洗脱液，比较了Thermo Accucore aQ(2.1×150mm，2.6μm)、Acclaim PA2(100mm×2.1mm,3μm)、Waters acquity BEH C18(100mm×2.1mm,1.7μm)三种色谱柱对目标化合物的分离效果。在各自最佳分离条件下，三种色谱柱对目标化合物均有所保留，但C18柱分离时，五氯酚、2,4,6-三氯酚并没有出峰；同时与在线SPE柱相连柱压很高，超过柱压设定阈值。对于AQ柱和PA2柱，五种物质均出峰，但PA2柱的峰型好、响应高、峰无开叉脱尾现象。同时为了得到较好的分离效果，结合固相萃取和梯度洗脱有效保证了目标物的基线分离。选定甲醇-千分之一甲酸水溶液作为上样液，比较了Cyclone和Cyclone-P两款在线固相萃取柱，发现Cyclone-P柱极性加强，对目标物富集能力强，导致洗脱后有峰展宽现象。为此，在线固相萃取柱选择Cyclone柱(50mm×0.5mm，60μm)、色谱分析柱选择Acclaim PA2(150mm×3.0mm,3μm)。对五种化合物的分离，选择梯度洗脱程序，在26.5min内所有化合物都能够得到较好的分离。五种标准溶液的提取离子图参见图2。

3.3在线固相萃取条件优化

在线固相萃取可分为上样、清洗、再生三个过程，对于上样过程，流速是控制目标化合物在SPE柱保留的关键因素，为此，本研究通过比较不同上样流速2、3、4和5mL/min下目标物响应，当上样流速为4mL/min时，目标物可得到较高的峰面积和相对稳定的结果。

此外，对清洗时间进行优化，保持流动相条件(6％MeOH)和上样速率(0.5mL/min)，比较清洗时间为1.0min,2.0min,5.0min,6.0min时目标化合物的响应值，当清洗时间为6.0min时，五种目标化合物的响应值迅速减少。为此，最佳清洗条件为6％MeOH保持5.0min。同时也对再生过程考察了不同洗脱时间3.0、4.0、5.0、7.0、8.0、9.0min下目标物响应强度的变化。结果表明洗脱时间为7.0min时即可实现目标物的完全洗脱。

3.4水样酸碱度优化

通过在线固相萃取测定地下水中的目标待测物，其前处理较为简单，去除悬浮杂质后，加入内标，就可以上机分析。尽管本前处理方法简捷，但建立固相萃取方法，需要考虑到影响萃取效果的因素。对地下水，基质相对较为简单，其影响因素有水样的pH、悬浮颗粒以及实验操作等。同时，对于农药，有研究显示，某些农药在碱性条件下易水解，酸性条件下性质也会发生改变。因此，需对水样的酸碱度进行优化，以考察水样在不同pH条件下对目标物的影响。其结果见图3所示，由图3可知：五种农药峰面积随水样酸碱度的改变而改变，当水样的pH为7.0时，除2,4-滴外，其他目标物可得到较高的峰面积和稳定的结果，当继续增大溶液的pH时，各目标物的峰面积降低，且下降很快。因此，本实验选择水样的PH为7.0。

3.5在线涡流固相萃取对地下水基质的适用性

地下水样品基质相对简单，选择的在线涡流固相萃取柱的填料特点是结合了体积排阻和反相色谱的保留特性，由于填料颗粒物尺寸较大(60μm)，样品在高流速状态下呈湍流状态，可能去除样品中潜在的大分子基质及其他悬浮颗粒、杂质等，保留小分子。为此，通过连续进样考查在线涡流固相萃取柱对地下水样品基质出去效果。通过模拟实验，在最优条件下，进样量为7.5mL，重复进样(n＝5)，结果表明柱压没明显变化。因此，在最优条件下，在线涡流固相萃取柱可有效去除地下水中基质，可以重复使用。同时，本实验通过对批量地下水样品的进行分析检测，结果表明，近1000组样品柱压上升仅200psi。

3.6方法线性范围、回收率与检出限

采用纯甲醇配制一系列浓度梯度的混合标准工作液，以同位素内标法定量，在优化条件下进行测定。以目标特征离子的色谱峰面积为纵坐标，对应工作溶液浓度(ng/L)为横坐标，绘制标准曲线，目标物在10～200ng/L浓度范围内呈良好线性，相关系数(R)均大于0.9950。在不含待测组分的阴性样品中添加待测物的标准溶液，以3倍信噪比(S/N＝3)对应的浓度为定义为方法检出限(LOD)，10倍信噪比(S/N＝10)对应的浓度为定量限(LOQ)，结果显示检出限(S/N＝3)在0.5～10ng/L之间，定量限(S/N＝10)在1.0ng/L～10ng/L之间。此外，也在空白样品中进行加标实验，加标浓度水平分别为10和100ng/mL时，回收率在90.0％～110％之间，相对标准偏差在3.1％～8.9％之间(n＝5)，准确度和精密度符合相关要求。

3.7实际样品检测

将本实验建立的方法应用于实际地下水样品的检测分析，测定了实验室平时抽检或送检的地下水，共检测19份水样。结果发现，部分水样中存在克百威污染，其含量范围在2.33～12.33ng/L之间。某一样品中克百威的提取离子流图和一级、二级质谱图参见图4。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (6)

1.一种同位素稀释-Online SPE-HRMS同时检测地下水中五种农药的方法，所述五种农药为五氯酚、2,4,6-三氯酚、2,4-滴、克百威、滴灭威，其特征在于，包括以下步骤：

1)地下水样品预处理方法

水样静置，取上清液，经0.45μm玻璃纤维滤膜过滤去除悬浮杂质，准确量取10mL水样过滤，随至加入10μL同位素内标混合溶液，摇匀，涡旋1min后，将所述水样转移至10mL进样瓶中，供上机分析；

所述同位素内标混合溶液为五氯酚-¹³C、2,4,6-三氯酚-¹³C、2,4-滴-d₃、克百威-d₃、涕灭威-d₃这五种同位素内标，浓度为100ng/mL；

2)富集、净化和洗脱分离方法：

包含两条流路分别进行自动化富集净化和洗脱分离，其中第一流路：从所述进样瓶抽取所述水样，用千分之一甲酸水溶液泵送所述水样至在线固相萃取柱进行富集，每次泵送2.5ml，泵送3次,累计泵送所述水样体积共7.5mL，完成富集；后用94％千分之一甲酸水和6％甲醇混合溶液冲洗在线固相萃取柱五分钟完成净化，净化完成后切换6通2位阀，第一流路以100％甲醇冲洗在线固相萃取柱，完成在线固相萃取柱再生，后流动相设为100％千分之一甲酸水平衡在线固相萃取柱；第二流路：在阀切换前是平衡色谱柱，阀切换后以一定梯度将富集在在线固相萃取柱上的目标物洗脱至色谱柱进行分离，具体洗脱梯度为5-6min，流动相保持10％甲醇和90％千分之一甲酸；6-11min，甲醇由10％升至70％；11-12min，甲醇比例由70％升至100％保持8min后甲醇降至10％保持6.6min等待下一针进样；

3)用预设的质谱条件进行分析

其中质谱条件为：离子源：电喷雾加热离子源；质量分析器：离子阱质量分析器(Orbitrap)；离子源温度：450℃；离子传输金属毛细管温度：320℃；喷雾电压：4.0kV；透镜电压：55kV；鞘气流速：55arb，辅助气流速：15arb；扫描模式：FullMS-ddMS²；采集范围：m/z100-1000；一级全扫描分辨率为70000FWHM；C-trap最大容量(ACGtarget)：3×10⁶；C-trap最大注入时间100ms；数据依赖二级子离子全扫描(dd-MS²)分辨率：17500FWHM；C-trap最大容量(ACGtarget)1×10⁵；C-trap最大注入时间50ms；归一化碰撞能量(NCEs)：50eV；动态排除：10s；柱温：40℃。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述在线固相萃取柱尺寸为50mm×0.5mm，60μm；所述色谱柱的尺寸为2.1×100mm，3.0μm。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述在线固相萃取柱为聚合物填料，色谱柱填料为极性加强的聚合物，色谱柱极性略强于在线固相萃取柱，通过这两种填料类型的极性匹配将保证目标物的峰型，提高分析的准确度。

4.根据权利要求1-3之一所述的方法，其特征在于，所述同位素内标混合溶液的配制：以甲醇为稀释液配制与目标物一一对应的五种同位素内标包括五氯酚-¹³C、2,4,6-三氯酚-¹³C、2,4-滴-d₃、克百威-d₃、涕灭威-d₃混合溶液，浓度为100ng/mL，配置完成后，放置-4℃保存。

5.根据权利要求1-4之一所述的方法，其特征在于，在步骤3)之前还包括：混合标准工作液的配制：分别移取10、20、50、100、150、200μL混合标准储备液和10.0μL同位素内标混合溶液至10.0mL超纯水五种农药配制成10、20、50、100、150、200ng/L的混合标准工作溶液，现配现用。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，混合标准储备液含有五氯酚、2,4,6-三氯酚、2,4-滴、克百威、涕灭威这五种物质，浓度为10.0ng/mL。

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