CN112316019A - 一种预防禽肿瘤性疾病的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种预防禽肿瘤性疾病的中药组合物，包括黄芪80‑160份、黄连50‑100份、黄柏100‑170份、黄芩100‑175份、栀子70‑135份、葛根30‑80份、桔梗30‑85份、甘草20‑40份、柴胡10‑65份，腐殖酸钠1‑15份；本发明还提供一种预防禽肿瘤性疾病的中药组合物的制备方法。本发明能够显著增强禽类的免疫力，具有高效抗肿瘤活性又无显著毒副作用，且耐药性低。

Description

一种预防禽肿瘤性疾病的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于预防肿瘤中药技术领域，具体涉及一种预防禽肿瘤性疾病的中药组合物及其制备方法。

背景技术

禽肿瘤性疾病作为世界范围发生的疾病，严重危害养禽业的发展，具有重要的经济意义。其中危害最严重的主要包括马立克氏病（Marek’s disease virus，MDV）、禽白血病（Avian leukosis viruses, ALV）和网状内皮组织增生症（Reticuloendotheliosisvirus, REV）。鸡群一旦发生这些肿瘤疾病，造成的经济损失是相当严重的。这三种肿瘤性疾病世界各地均有所流行，并且发生免疫失败和出现强毒性致病性毒株的报道不断增多，造成了巨大的经济损失。

禽白血病自从有报道以来，现在已经变成危害养禽业的全球性的疾病，由于该类病毒有多个亚群，不同亚群之间又可以相互作用，其不仅可以引起个体体内产生肿瘤，还会对机体产生严重的免疫抑制，引起个体生产性能的下降、身体消瘦等等，目前由于病毒的特性还没有有效的疫苗进行防控，只能通过筛查淘汰的方法加以净化。马立克氏病虽然在刚开始发现的时候，在鸡群中的感染率和发病一直处于较高的水平，疫苗研制成功以后，该病的发生率大幅下降，但是，疫苗的保护率不是100%，外界的影响以及个体自身的素质都会严重影响疫苗的保护效果。所以，马立克氏病在实际生产中仍常有发现。REV作为另一种反转录病毒，对养殖业也构成了极大的挑战，经常呈现隐性感染或者整合到其他病毒载体上，从而加剧了病情。

我国传统资源中草药，含有多种生物活性物质，能抗菌、消炎，增强机体免疫功能，提高免疫组织细胞活性，增加机体免疫细胞的生长及抗体的合成。中草药具有不易产生细菌耐药性，低毒，无残留或低残留等特点，并兼有药物与营养剂的双重功效，在防治肿瘤性疾病上有独特的优势。

发明内容

本发明的目的在于提供一种预防禽肿瘤性疾病的中药组合物及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种预防禽肿瘤性疾病的中药组合物，按照重量份计包括以下组分：黄芪80-160份、黄连50-100份、黄柏100-170份、黄芩100-175份、栀子70-135份、葛根30-80份、桔梗30-85份、甘草20-40份、柴胡10-65份，腐殖酸钠1-15份。

优选的是，按照重量份计包括以下组分：黄芪80份、黄连50份、黄柏100份、黄芩100份、栀子70份、葛根30份、桔梗30份、甘草20份、柴胡10份，腐殖酸钠1份。

优选的是，按照重量份计包括以下组分：黄芪120份、黄连70份、黄柏140份、黄芩140份、栀子100份、葛根55份、桔梗50份、甘草30份、柴胡35份，腐殖酸钠8份。

优选的是，按照重量份计包括以下组分：黄芪160份、黄连100份、黄柏170份、黄芩175份、栀子135份、葛根80份、桔梗85份、甘草40份、柴胡65份，腐殖酸钠15份。

一种预防禽肿瘤性疾病的中药组合物的制备方法，按照先后顺序包括以下步骤：

S1：将黄芪、黄连、黄柏、黄芩、栀子、葛根、桔梗、甘草、柴胡、腐殖酸钠投入到提取容器中，向容器中加入上述药物总重量4-10倍的水，加热提取容器，回流提取2-4h，同时收集提取过程中产生的挥发油，提取完成后过滤，得到一次提取液和一次滤渣；

S2：然后向上述步骤中的一次滤渣中加入滤渣重量3-8倍的水，继续提取1h-3h，同时收集提取过程中产生的挥发油，提取完成后过滤，得到二次提取液和二次滤渣；

S3：合并步骤S1中的一次提取液与步骤S2中的二次提取液，离心，取上清液；

S4：将上述步骤中的上清液进行旋转蒸发浓缩，浓缩至每毫升浓缩液含原生药量0.8-1.2g，得到浓缩液；

S5：然后将上述步骤中的浓缩液加载体并烘干，然后步骤S1、S2中收集的挥发油混合在一起，然后对混合后的挥发油加载体并烘干，接着将二者混合均匀，即得成品。

本发明的技术效果和优点：本发明的中药组合物在中医理论的指导下，采用不同药性的中药材，进行科学配伍，具有理想的抗肿瘤效果，且可以提高禽类的免疫力，对机体无毒无害，不会造成脏器的病理性损害，安全性高。本品可有效防治禽类肿瘤性疾病；

本发明的中药组合物解决禽类肿瘤性疾病防控难，无法医治，摆脱仅靠淘汰或净化来进行防治禽类肿瘤性疾病的局面。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

一种预防禽肿瘤性疾病的中药组合物，按照重量份计包括以下组分：黄芪80份、黄连50份、黄柏100份、黄芩100份、栀子70份、葛根30份、桔梗30份、甘草20份、柴胡10份，腐殖酸钠1份。

实施例2：

按照重量份计包括以下组分：黄芪120份、黄连70份、黄柏140份、黄芩140份、栀子100份、葛根55份、桔梗50份、甘草30份、柴胡35份，腐殖酸钠8份。

实施例3：

按照重量份计包括以下组分：黄芪160份、黄连100份、黄柏170份、黄芩175份、栀子135份、葛根80份、桔梗85份、甘草40份、柴胡65份，腐殖酸钠15份。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之类，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

本发明还提供一种预防禽肿瘤性疾病的中药组合物的制备方法，用来对实施例1、2、3中的中药组合物进行制备，得到成品。

一种预防禽肿瘤性疾病的中药组合物的制备方法，按照先后顺序包括以下步骤：

S1：将黄芪、黄连、黄柏、黄芩、栀子、葛根、桔梗、甘草、柴胡、腐殖酸钠投入到提取容器中，向容器中加入上述药物总重量4-10倍的水，加热提取容器，回流提取2-4h，同时收集提取过程中产生的挥发油，提取完成后过滤，得到一次提取液和一次滤渣；

S2：然后向上述步骤中的一次滤渣中加入滤渣重量3-8倍的水，继续提取1h-3h，同时收集提取过程中产生的挥发油，提取完成后过滤，得到二次提取液和二次滤渣；

S3：合并步骤S1中的一次提取液与步骤S2中的二次提取液，离心，取上清液；

S4：将上述步骤中的上清液进行旋转蒸发浓缩，浓缩至每毫升浓缩液含原生药量0.8-1.2g，得到浓缩液；

S5：然后将上述步骤中的浓缩液加载体并烘干，然后步骤S1、S2中收集的挥发油混合在一起，然后对混合后的挥发油加载体并烘干，接着将二者混合均匀，即得成品。

试验例1：

通过给肉鸡添加本发明制备的药物，研究本发明对肉鸡免疫功能的影响。

（1）试验设计

选取1日龄的AA肉鸡360只，随机分成3个处理组，每个处理6个重复，每个重复20只鸡，试验期42天。分组情况如下

表1 试验设计

分组	处理
		对照组	不作任何处理
试验组	实施例2，饮水使用，1g/羽（原生药量），全程
		抗生素组	抗生素拌料（全程）

（2）测定指标

1.外周血淋巴细胞转化率的测定

采用四唑盐比色法（MTT法），分别于21、42日龄，随机从每个重复中抽取2只鸡；于鸡颈静脉无菌采血2mL，加等量Hank’s液稀释，以2000 r/min离心10min；吸取淋巴细胞层，移入无菌离心管中，Hank’s液洗涤2次，RMPI－1640完全培养基（含10%小牛血清）悬浮沉淀；用台酚蓝染色计数活细胞数（应在85%以上），调整细胞浓度为5×106/mL。将细胞悬液分别加入96孔平底培养板中，每孔200μL，同时加50μL刀豆蛋白（ConA）液（相当于5μg/mL），各孔加入共250μL的细胞悬液和Hank’s液，每组做6个复孔。将培养板放入37℃、5%CO₂培养箱中培养72h，于终止培养前4小时每孔轻轻吸去上清液200μL后，再加入相同量的不含鸡血清的RPMI－1640培养液，同时每孔加入10mg/mL MTT溶液10μL，振荡混匀，继续培养4h。培养结束后，每孔加DMSO 100μL，充分振荡吹打后静置20 min，用酶标仪检测，在波长为570nm处测定吸光度值。

2.血清中细胞因子含量的测定

分别于21、42日龄，随机从每个重复中抽取2只鸡，颈静脉采血，离心制备血清，采用ELISA法测定血清中细胞因子IL－2、IFN－γ、TNF－α含量，具体操作步骤严格按照试剂盒说明书进行，试剂盒购自南京建成生物工程研究院。

（3）试验结果如下

1.外周血淋巴细胞转化率的测定

表2 肉鸡外周血淋巴细胞转化率的影响结果（OD570值）

分组	21日龄	42日龄
			对照组	0.353<sup>a</sup>±0.042	0.471<sup>b</sup>±0.080
试验组	0.384<sup>a</sup>±0.101	0.597<sup>b</sup>±0.078
			抗生素组	0.347<sup>a</sup>±0.068	0.503<sup>a</sup>±0.064

注：同行数据肩注字母不同者表示差异显著（P＜0.05），未标注或字母相同表示差异不显著（P＞0.05）。

由表2可知，在21日龄和42日龄试验组肉鸡的血淋巴细胞转化率均高于对照组和抗生素组，且差异显著（P＜0.05），而对照组和抗生素组之间无显著差异（P＞0.05）。

2.血清细胞因子水平的测定

表3 肉鸡血清细胞因子的影响结果（pg/mL）

注：同行数据肩注字母不同者表示差异显著（P＜0.05），未标注或字母相同表示差异不显著（P＞0.05）。

由表3可知：对于血清IL-2，21、42日龄，试验组显著高于对照组和抗生素组（P＜0.05）；21日龄，试验组的TNF-α、IFN-γ显著高于对照组和抗生素组（P＜0.05），42日龄时，对照组的TNF-α、IFN-γ显著低于试验组和抗生素组（P＜0.05）。

（4）结果讨论

细胞免疫主要由T淋巴细胞介导，淋巴细胞转化率是评价细胞免疫功能的一个重要指标。本发明能激活免疫器官的免疫功能，增强体液免疫及单核吞噬细胞***的吞噬功能，刺激T淋巴细胞和B淋巴细胞的功能，促进淋巴细胞增殖。

IL-2、TNF-α、IFN-γ是机体参与细胞免疫调节的重要因子，是由免疫细胞和某些非免疫细胞合成和分泌的一类具有高活性多功能的蛋白质多肽分子，具有调节血细胞生成、细胞生长及损伤组织修复等多种功能。细胞因子作为细胞间的信号传递分子，调控细胞的生长、分化、增殖及免疫效应的发挥，细胞因子有助于了解机体的免疫调节及其效应机制。其中IL-2能够促进多种细胞因子生成如IFN-γ、白细胞介素-6（IL-6）、TNF-α等，在机体免疫调节中发挥重要作用。上述试验结果表明，本发明能够提高血清中细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ的水平，提高禽的免疫力。

试验例2

免疫保护试验

1.试验动物1日龄SPF鸡80只。

2.本试验委托江苏省农科院家禽所进行试验，MDV1标准强毒株由农科院提供。

3.将80只1日龄SPF鸡随机分为4组,试验组、商品苗组、攻毒对照组及健康对照组。试验组饮水使用实施例3，1g/羽（原生药量）；商品苗组分别肌肉注射CVI988+FC126二价活疫苗，0.2mL/只；攻毒对照组免疫PBS乳化液,0.2mL/只，健康对照组不做任何处理。8日龄时除了健康对照组外的各组鸡经腹腔注射攻击MDV标准毒株,连续观察60天，记录鸡的发病情况,并对试验期间死亡的鸡逐个剖检﹐记录器官的大体病变。

保护率=[（攻毒对照组死亡率-疫苗免疫组死亡率）/攻毒对照组死亡率]×100%。

4.试验结果

表4 对SPF试验鸡的保护结果

结果如表4，PBS对照组在20日龄（攻毒后12天）出现第一只MD致死，直到试验结束，共死亡16只，死亡率为80%；商品苗组保护率为87.50%，本法明组的保护率为93.75%；剖检发病死亡鸡均表现为心脏、肝脏、脾脏、肾脏等内脏器官及神经的弥漫性肿瘤或结节性肿瘤，胸腺和法氏囊萎缩等变化。

上述试验结果表明，本发明可有效防治鸡马立克疾病。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明,任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的方法及技术内容作出些许的更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (5)

1.一种预防禽肿瘤性疾病的中药组合物，其特征在于：按照重量份计包括以下组分：黄芪80-160份、黄连50-100份、黄柏100-170份、黄芩100-175份、栀子70-135份、葛根30-80份、桔梗30-85份、甘草20-40份、柴胡10-65份，腐殖酸钠1-15份。

2.根据权利要求1所述的一种预防禽肿瘤性疾病的中药组合物，其特征在于：按照重量份计包括以下组分：黄芪80份、黄连50份、黄柏100份、黄芩100份、栀子70份、葛根30份、桔梗30份、甘草20份、柴胡10份，腐殖酸钠1份。

3.根据权利要求1所述的一种预防禽肿瘤性疾病的中药组合物，其特征在于：按照重量份计包括以下组分：黄芪120份、黄连70份、黄柏140份、黄芩140份、栀子100份、葛根55份、桔梗50份、甘草30份、柴胡35份，腐殖酸钠8份。

4.根据权利要求1所述的一种预防禽肿瘤性疾病的中药组合物，其特征在于：按照重量份计包括以下组分：黄芪160份、黄连100份、黄柏170份、黄芩175份、栀子135份、葛根80份、桔梗85份、甘草40份、柴胡65份，腐殖酸钠15份。

5.一种根据权利要求1所述的预防禽肿瘤性疾病的中药组合物的制备方法，其特征在于：按照先后顺序包括以下步骤：

S1：将黄芪、黄连、黄柏、黄芩、栀子、葛根、桔梗、甘草、柴胡、腐殖酸钠投入到提取容器中，向容器中加入上述药物总重量4-10倍的水，加热提取容器，回流提取2-4h，同时收集提取过程中产生的挥发油，提取完成后过滤，得到一次提取液和一次滤渣；

S2：然后向上述步骤中的一次滤渣中加入滤渣重量3-8倍的水，继续提取1h-3h，同时收集提取过程中产生的挥发油，提取完成后过滤，得到二次提取液和二次滤渣；

S3：合并步骤S1中的一次提取液与步骤S2中的二次提取液，离心，取上清液；

S4：将上述步骤中的上清液进行旋转蒸发浓缩，浓缩至每毫升浓缩液含原生药量0.8-1.2g，得到浓缩液；

S5：然后将上述步骤中的浓缩液加载体并烘干，然后步骤S1、S2中收集的挥发油混合在一起，然后对混合后的挥发油加载体并烘干，接着将二者混合均匀，即得成品。