CN112226425B - 一种亚洲小车蝗胞外蛋白酶erk及其编码基因与应用 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了一种亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK及其编码基因与应用。本申请首先从亚洲小车蝗中克隆亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK，并对亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK设计引物，合成用于干扰亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK的dsRNA，且运用注射法将dsRNA导入亚洲小车蝗对亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK进行RNAi。结果表明：dsRNA注射亚洲小车蝗后，存活率、生长速率、体重及总体表现力均显著降低，说明亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK在昆虫生长发育过程中起着重要作用。本申请为害虫的分子调控提供新的方法，也为深入理解昆虫生长发育机制、创制新的生物农药制剂提供理论基础。

Description

一种亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK及其编码基因与应用
技术领域
本申请涉及生物技术技术领域，特别涉及一种亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK及其编码基因与应用。
背景技术
近年来，草原害虫在草原上的危害程度呈明显的上升趋势，危及草场面积逐年上升，严重威胁农牧业生产，同时也为沙尘暴的发生埋下隐患。传统的虫害防治多以应急防控和化学防治为主，且防治手段过分依赖化学农药，这不仅危害环境，且农药残留等问题也是人民日益关注的重点话题，这都表现了现阶段农作物虫害防治存在相对滞后的弊端。因此虫害的防治是一个漫长的过程，需要在不断的探索、改进和总结中进行，引进新的虫害防治技术并不代表完全抛弃传统防治方式，只有做到新技术与传统防治方式相结合，才能在虫害防治上取得新的突破。
发明内容
本申请的目的在于提供一种亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK及其编码基因与应用，用以解决通过化学农药防治虫害带来的危害环境的问题。
第一方面，根据本申请的实施例，提供了一种亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK，包括：
氨基酸序列是SEQ ID No.2所示的蛋白质，或者，在SEQ ID No.2所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质。
第二方面，根据本申请的实施例，提供了一种亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK基因，由SEQ ID No.1所示的核苷酸编码所得。
第三方面，根据本申请的实施例，提供了一种生物材料，包括：
用于编码所述亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK的核酸分子，
或者，含有所述核酸分子的表达盒；
或者，含有所述核酸分子的重组载体；
或者，含有所述表达盒的重组载体；
或者，含有所述核酸分子的重组微生物；
或者，含有所述表达盒的重组微生物；
或者，含有所述核酸分子的重组载体的重组微生物；
或者，含有所述表达盒的重组载体的重组微生物。
进一步地，所述核酸分子为SEQ ID No.1所示的cDNA分子。
第四方面，根据本申请的实施例，提供了所述的亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK或所述的生物材料在调控亚洲小车蝗生长发育，制备调控亚洲小车蝗生长发育的产品，防治亚洲小车蝗，制备防治亚洲小车蝗的产品，降低亚洲小车蝗存活率，制备降低亚洲小车蝗存活率的产品，降低亚洲小车蝗体重增加量，制备降低亚洲小车蝗体重增加量的产品，降低亚洲小车蝗生长速率，和/或制备降低亚洲小车蝗生长速率的产品上的应用。
第五方面，根据本申请的实施例，提供了一种抑制亚洲小车蝗生长发育的方法，包括降低亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的表达量和/或活性。
进一步地，所述降低亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的表达量和/或活性包括：
将抑制亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的编码基因表达的物质导入亚洲小车蝗。
进一步地，所述抑制亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的编码基因表达的物质包括抑制亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的编码基因表达的dsRNA。
进一步地，所述抑制亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的编码基因表达的dsRNA为由SEQID No.1所示的核苷酸和其反向互补序列所示的核苷酸组成的双链RNA。
进一步地，所述导入的方式为注射。
由以上技术方案可知，本申请首先从亚洲小车蝗中克隆亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK，并对亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK设计引物，合成了用于干扰亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK的dsRNA，且运用注射法将dsRNA导入亚洲小车蝗对亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK进行RNAi。结果表明：dsRNA注射亚洲小车蝗后，存活率、生长速率、体重及总体表现力均显著降低，说明亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK在昆虫生长发育过程中起着重要作用。本发明为害虫的分子调控提供了新的方法，也为深入理解昆虫生长发育机制、创制新的生物农药制剂提供理论基础。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为根据本申请实施例示出的亚洲小车蝗存活率的柱状图；
图2为根据本申请实施例示出的雌性亚洲小车蝗体重增加量的柱状图；
图3为根据本申请实施例示出的雄性亚洲小车蝗体重增加量的柱状图；
图4为根据本申请实施例示出的雌性亚洲小车蝗生长速率的柱状图；
图5为根据本申请实施例示出的雄性亚洲小车蝗生长速率的柱状图；
图6为根据本申请实施例示出的雌性亚洲小车蝗总体表现力的柱状图；
图7为根据本申请实施例示出的雄性亚洲小车蝗总体表现力的柱状图。
具体实施方式
本申请提供的胞外蛋白酶来源于亚洲小车蝗，结合基因命名法，将其命名为ERK。
本申请实施例提供一种亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK，包括：a)或b)或c)或d)的蛋白质。
a)氨基酸序列是SEQ ID No.2所示的蛋白质；
或者，b)在SEQ ID No.2所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质。
为了使a)中的蛋白质便于纯化，可在序列表中SEQ ID No.2所示的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。
表1
Figure BSA0000218704420000031
c)亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK还包括将SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质；
上述c)中的亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK，所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。
上述c)中的亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。
上述c)中的亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK的编码基因可通过将SEQ ID No.1所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。
d)与SEQ ID No.2所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的蛋白质。
本申请实施例提供了一种亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK基因，由SEQ ID No.1所示的核苷酸编码所得。
本申请实施例提供了一种生物材料，包括下述A1)至A8)中的任一种：
A1)编码亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK的核酸分子；
A2)含有A1)所述核酸分子的表达盒；
A3)含有A1)所述核酸分子的重组载体；
A4)含有A2)所述表达盒的重组载体；
A5)含有A1)所述核酸分子的重组微生物；
A6)含有A2)所述表达盒的重组微生物；
A7)含有A3)所述重组载体的重组微生物；
A8)含有A4)所述重组载体的重组微生物。
上述生物材料中，A1)所述核酸分子为如下1)或2)或3)所示的基因：
1)其编码序列是SEQ ID No.1所示的cDNA分子或基因组DNA分子；
2)与1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码ERK蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子；
3)在严格条件下与1)或2)限定的核苷酸序列杂交，且编码ERK蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子。
其中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。
其中，SEQ ID No.1由1113个核苷酸组成，SEQ ID No.2为SEQ ID No.1的氨基酸序列。
本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本申请的编码ERK蛋白质的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本申请分离得到的ERK的核苷酸序列75％或者更高同一性的核苷酸，只要编码ERK且具有相同功能，均是衍生于本申请的核苷酸序列并且等同于本申请的序列。
这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本发明的编码SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。
上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％或95％以上的同一性。
本申请提供了亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK或上述生物材料在如下a1)-a12)中任一种中的应用：
a1)调控亚洲小车蝗生长发育；
a2)制备调控亚洲小车蝗生长发育的产品；
a3)防治亚洲小车蝗；
a4)制备防治亚洲小车蝗的产品；
a5)降低亚洲小车蝗存活率；
a6)制备降低亚洲小车蝗存活率的产品；
a7)降低亚洲小车蝗体重增加量；
a8)制备降低亚洲小车蝗体重增加量的产品；
a9)降低亚洲小车蝗生长速率；
a10)制备亚洲小车蝗生长速率的产品；
a11)降低亚洲小车蝗总体表现力；
a12)制备降低亚洲小车蝗总体表现力的产品。
其中，总体表现力是指亚洲小车蝗的发育进度和存活情况，所述调控为抑制。
本申请实施例，提供了一种抑制亚洲小车蝗生长发育的方法，包括降低亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的表达量和/或活性。
本申请通过降低亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的表达量和/或活性来实现抑制亚洲小车蝗生长发育。
进一步地，所述降低亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的表达量和/或活性包括：
将抑制亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的编码基因表达的物质导入亚洲小车蝗。
进一步地，所述抑制亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的编码基因表达的物质包括抑制亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的编码基因表达的dsRNA。
进一步地，所述抑制亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的编码基因表达的dsRNA为由SEQID No.1所示的核苷酸和其反向互补序列所示的核苷酸组成的双链RNA。
进一步地，所述导入的方式为注射。
为了证明抑制亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的编码基因表达的dsRNA导入亚洲小车蝗后可抑制亚洲小车蝗生长发育，本申请做了以下实验：
需要说明的是，本申请实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。本申请实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。本申请实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
本申请实施例中的供试虫源：锡林浩特市采集3龄亚洲小车蝗胞外蛋白酶(发育一致)，在智能人工气候箱中进行饲养，饲养条件如下：温度26℃，湿度70％，光照黑暗比为16h∶8h，统一以克氏针茅饲喂。
本申请实施例中实施例中的主要试剂及试剂：
Figure BSA0000218704420000051
RNA分离试剂(invitrogcn原装)，RNA spin column(全式金)，胶回收试剂盒(Axygen)，EX Taq DNA聚合酶(Takara)，T4DNA连接酶(Takara)，pGEM-T Easy Vector Systems(Promega)，无水乙醇、异丙醇、丙三醇等试剂均为国产分析醇。
本申请实施例中的主要仪器：超净工作台(上海***实业有限公司)、东胜龙ETC-811 PCR仪(北京东胜创新生物科技有限公司)、德国Sigma 3K15冷冻离心机(德国希格玛离心机有限公司)、NanoPhotometer微量分光光度计(德国IMPLEN公司)、HPX-9052 MBE数显电热培养箱(上海***实业有限公司)、THZ-D台式恒温振荡器(华美生化仪器厂)、漩涡振荡器QL-901(海门市其林贝尔仪器制造)、高压灭菌锅YXQ-LS-50SII(上海***实业有限公司医疗设备厂)。
实施例1、亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK及其编码基因的获得
1、亚洲小车蝗总RNA的提取
用
Figure BSA0000218704420000062
RNA分离试剂提取亚洲小车蝗组织样品的RNA。具体步骤如下：
1)2mL匀浆器放于烘箱中，160℃，3个小时灭菌，冷却至室温备用。
2)将匀浆器置于冰上，加入1mL
Figure BSA0000218704420000061
RNA分离试剂和100-200mg亚洲小车蝗组织，研磨。
3)将匀浆液转移至1.5mL离心管中，室温静置5min。4℃，13000r离心5min。
4)将上清转移至干净的1.5mL离心管中，加入200μL氯仿，漩涡震荡15s。室温放置5min。4℃，13000r离心10min。
5)吸取400μL上清转移至新的1.5mL离心管中，加入200μL氯仿，漩涡震荡30s。室温放置5min。4℃，13000r离心10min。
6)吸取300μL上清，加入300μL异丙醇，漩涡震荡30s，转移至RNA spin column中，冰上静置10min。
7)4℃，13000r离心2min，弃滤液。
8)加入600μL RNA washsolution，吸打使沉降物洗涤，4℃，13000r离心2min，弃滤液。再次加入600μL RNA washsolution，吸打使沉降物洗涤，4℃，13000r离心2min，弃滤液。4℃，13000r空离3min，除去多余乙醇，空气吹干3min。
9)更换一个新的收集管，向RNA spin column中加入50μL 65℃预热的RNase-free-water，余热下热置5min，4℃，13000r离心3min。
10)收集滤出液，用NanoPhotometer微量分光光度计检测RNA浓度和OD260/280值，确认RNA质量。同时，取2μL提取的RNA，琼脂糖凝胶电泳检测，剩余RNA储存于-20℃备用。
2、反转录
用PrimeScriptTM 1st strand cDNA Synthesis Kit反转录试剂盒反转录获得cDNA。具体步骤如下：
1)配置10μL体系：Oligo dT Primer(50μM)1μL、dNTP Mixture(10mM each)1μL、total RNA＜5μL、RNase Free dH2O补足体系至10μL。
2)65℃保温5min后，冰上迅速冷却。
3)配置20μL反应液：5×PrimeScript Buffer 4μL、RNase Inhibitor(400U/μL)0.5μL(20units)、PrimeScript RTase(200U/μL)1μL(200units)、RNase Free dH2O补足体系至20μL。
4)缓慢混匀。
5)42℃保温30-60min。
6)95℃保温5min，使酶失活，冰上放置，-20℃保存cDNA。
3、亚洲小车蝗胞外蛋白酶及其编码基因的获得
1)引物设计
根据前期获得的亚洲小车蝗转录组得到ERK基因序列，利用DNAMAN8设计ERK基因全长引物或片段引物。设计的引物如下：
ERK-F：5’-GAACTGAGCAACGACCACA-3’；
ERK-R：5’-GAGCGTCTTCAACAACTATCC-3’。
2)PCR反应
以亚洲小车蝗cDNA为模板，以引物ERK-F/ERK-R进行PCR扩增，得到PCR产物。
PCR反应体系如下(总体积50μL)：cDNA模板1μL、dNTP 4μL、10×Buffer 5μL、前引物1μL、后引物1μL、Taq酶0.25μL、ddH2O 38μL。
PCR反应条件如下：95℃ 3min；95℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 1min30s，35个循环；72℃ 10min；4℃保存。
3)PCR产物回收、克隆、测序
3-1)将PCR产物在TAE配制的1％的琼脂糖凝胶上进行电泳，当目标带分离较好时，用刀片切下目标带所在的胶块放入无菌的离心管中。再用胶回收试剂盒(Axygen)回收纯化目标带，回收纯化过程参照试剂盒说明书进行。
3-2)PCR产物回收后连接pGEM-T Easy载体，得到重组载体。连接体系如下：T4 DNAligase 1μL、2×buffer 5μL、pGEM-T Easy 1μL、PCR回收产物3μL。连接条件：室温下连接6个小时。
3-3)感受态细胞的制备与转化
在1.5mL离心管中，加入33.3μL Trans1-t1感受态细胞，冰上放置15min，42℃水浴90s，冰上放置10min。在每个1.5mL离心管中加入500μL的液体LB培养液，37℃，200rpm摇菌2h。摇菌后，吸取100μL菌液至1‰AMP LB固体培养基中，37℃培养过夜。挑选单菌落于2mL的离心管中，管中有1mL的1‰AMP LB液体培养基。37℃，200rpm摇菌3-6h，观察生长情况。
3-4)菌液PCR
对3-3)中的菌液进行PCR验证，菌液PCR反应体系(总体积50μL)如下：菌液1μL、dNTP 4μL、10×Buffer 5μL、前引物1μL、后引物1μL、Taq酶0.25μL、ddH2O 38μL。
反应条件如下：95℃ 3min；95℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 1min30s，35个循环；72℃10min；4℃保存。
将阳性克隆菌株送到上海生工生物工程技术服务有限公司进行序列测定并对测序结果进行分析。
测序结果表明：PCR扩增得到大小为1113bp的DNA片段，其核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示，将SEQ ID No.1所示的基因命名为亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK，其编码的胞外蛋白酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，将SEQ ID No.2所示的氨基酸序列命名为亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK。
实施例2、亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK的dsRNA及其在防治害虫中的应用
一、dsRNA的合成
采用T7 RiboMAX TM Express RNAi System试剂盒合成dsRNA。具体步骤如下：
1)dsRNA引物的合成
根据已克隆出的基因片段设计引物，扩增目的片段为500bp左右，在引物的5′端引入T7启动子。引物序列如下：
erk-2F：5’-TAATACGACTCACTATAGGAACTGAGCAACGACCACA-3’；
erk-2R：5’-TAATACGACTCACTATAGGGAGCGTCTTCAACAACTATCC-3’。
2)DNA模板的制备
用试剂盒提取菌液质粒，以含基因片段的质粒(实施例1中的重组载体)为模板，采用ERK-2F和ERK-2R进行PCR扩增，得到含有T7启动子序列的目的片段。
PCR反应体系如下(总体积50μL)：质粒1μL、dNTP 4μL、10×Buffer 5μL、前引物1μL、后引物1μL、Taq酶0.25μL、ddH2O 38μL。
PCR反应条件如下：95℃ 3min；95℃ 30s，55℃ 30s，72℃ 1min，35个循环；72℃10min；4℃保存。
回收PCR产物，并用NanoPhotometer微量分光光度计检测目标DNA浓度，回收浓度需大于150ng/μL。
3)dsRNA的合成
采用T7 RiboMAX TM Express RNAi System试剂盒将回收的DNA体外转录合成亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK的dsRNA，并用NanoPhotometer微量分光光度计检测dsRNA浓度，dsRNA浓度需要大于1000ng/μL。再将dsRNA浓度调整为1ng/μL，得到dsRNA溶液(溶剂为Nucleause free water)。
本申请获得的亚洲小车蝗蛋白酶基因ERK的dsRNA为双链RNA，由正义链和反义链组成。上述亚洲小车蝗蛋白酶基因ERK的dsRNA也可通过人工合成的方法获得。将亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK的dsRNA命名为dsERK。
4)对照GFP的dsRNA
按照上述方法合成对照GFP的dsRNA，将对照GFP的dsRNA命名为dsGFP，得到浓度为1ng/μL的dsGFP溶液。对照GFP的dsRNA为双链RNA，由正义链和反义链组成。合成GFP dsRNA的引物如下：
GFP-1F：5’-TAATACGACTCACTATAGGTACGACTCACTATAGGAGTAAAGG-3’；
GFP-1R：5’-TAATACGACTCACTATAGGTAGGTTTGTATAGTTCATCCATACC-3’。
二、dsRNA在防治害虫中的应用
1、实验方法
将dsRNA导入亚洲小车蝗体内。具体步骤如下：用10μL的微量注射器吸取5μL浓度为1ng/μL的dsERK溶液(实验组)和dsGFP溶液(dsGFP对照组)，分别从蝗虫腹部的第二腹节和第三腹节之间的节间膜注射进入，注射器的针头和腹部平行，避免损伤蝗虫的内部器官组织。设置注射3μL Nucleause free water的空白对照组(CK)，每处理重复5次，每重复处理20头3龄亚洲小车蝗(雌雄比1∶1)。注射后将其在智能人工气候箱中进行饲养，饲养条件如下：温度26℃，湿度70％，光照黑暗比为16h∶8h，每天观察亚洲小车蝗生长发育情况，进入成虫阶段后取样统计存活率、体重增加量、生长速率及总体表现力。统计天数D，各处理组存活数S，存活率＝S/20；实验前各处理组平均体长为A1，进入成虫阶段后各处理组平均体长为A2，体长增加量＝A2-A1；实验前各处理组平均体重为B1，进入成虫阶段后各处理组平均体重为B2，体重增加量＝B2-B1；生长速率＝(B2-B1)/D；总体表现力＝(S/20)×[(B2-B1)/D]。
2、实时荧光定量PCR
注射后72h提取实验组和对照组(dsGFP对照组和空白对照组)的亚洲小车蝗虫体的总RNA，Takara反转录试剂盒合成cDNA，检测ERK基因表达量。以actin基因作为内参基因。ERK基因引物序列如下：A-ERK-146-F：CAGACATACTGTCAAAGGACG和A-ERK-121-R：GTCTCCATAAGGCATTGCAC；actin基因引物序列为A-actin-119-F：CAGAAGGAAATCACCGCC，A-actin-119-R：TGGAAGGTGGACAGCGAA。
结果表明：与对照组(dsGFP对照组和空白对照组)相比，dsERK实验组的亚洲小车蝗中的ERK基因的表达量显著降低，说明dsERK成功干扰了亚洲小车蝗中ERK基因的表达。dsGFP对照组和空白对照组结果无显著性差异。
3、存活率、体重增加量、生长速率及总体表现力检测结果
结果如图1至图7所示，ERK基因RNAi后的亚洲小车蝗存活率、体重增加量、生长速率及总体表现力与对照组(dsGFP对照组和空白对照组)有显著差异(P＜0.05，干扰ERK基因后的亚洲小车蝗各项指标都显著低于对照组，dsGFP对照组和空白对照组结果无显著性差异。说明ERK基因RNAi对亚洲小车蝗的生长发育起着抑制作用。
由以上技术方案可知，本申请首先从亚洲小车蝗中克隆亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK，并对亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK设计引物，合成了用于干扰亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK的dsRNA，且运用注射法将dsRNA导入亚洲小车蝗对亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK进行RNAi。结果表明：dsRNA注射亚洲小车蝗后，存活率、生长速率、体重及总体表现力均显著降低，说明亚洲小车蝗胞外蛋白酶基因ERK在昆虫生长发育过程中起着重要作用。本发明为害虫的分子调控提供新的方法，也为深入理解昆虫生长发育机制、创制新的生物农药制剂提供理论基础。
本领域技术人员在考虑说明书及实践这里公开的申请后，将容易想到本申请的其它实施方案。本申请旨在涵盖本申请的任何变型、用途或者适应性变化，这些变型、用途或者适应性变化遵循本申请的一般性原理并包括本申请未公开的本技术领域中的公知常识或惯用技术手段。说明书和实施例仅被视为示例性的，本申请的真正范围和精神由下面的权利要求指出。
应当理解的是，本申请并不局限于上面已经描述并在附图中示出的精确结构，并且可以在不脱离其范围进行各种修改和改变。本申请的范围仅由所附的权利要求来限制。
Figure ISA0000218704440000011
Figure ISA0000218704440000021
Figure ISA0000218704440000031

Claims (9)

1.一种亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
2.一种亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
3.一种生物材料，其特征在于，包括A1）至A8）中的任一种：
A1）编码权利要求1所述亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK的核酸分子；
A2）含有A1）所述核酸分子的表达盒；
A3）含有A1）所述核酸分子的重组载体；
A4）含有A2）所述表达盒的重组载体；
A5）含有A1）所述核酸分子的重组微生物；
A6）含有A2）所述表达盒的重组微生物；
A7）含有A3）所述重组载体的重组微生物；
A8）含有A4）所述重组载体的重组微生物。
4.根据权利要求3所述的生物材料，其特征在于，A1）所述核酸分子为SEQ ID No.1所示的cDNA分子。
5.权利要求1所述的亚洲小车蝗胞外蛋白酶ERK或权利要求3或4所述的生物材料在调控亚洲小车蝗生长发育，制备调控亚洲小车蝗生长发育的产品，防治亚洲小车蝗，制备防治亚洲小车蝗的产品，降低亚洲小车蝗存活率，制备降低亚洲小车蝗存活率的产品，降低亚洲小车蝗体重增加量，制备降低亚洲小车蝗体重增加量的产品，降低亚洲小车蝗生长速率，和/或制备降低亚洲小车蝗生长速率的产品上的应用。
6.一种抑制亚洲小车蝗生长发育的方法，包括降低权利要求1所述亚洲小车蝗中胞外蛋白酶ERK的表达量。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述降低亚洲小车蝗中胞外蛋白酶ERK的表达量包括：
将抑制所述亚洲小车蝗中胞外蛋白酶ERK的编码基因表达的物质导入亚洲小车蝗。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述抑制亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的编码基因表达的物质包括抑制亚洲小车蝗中胞外蛋白酶的编码基因表达的dsRNA。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述导入的方式为注射。
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