CN112219714B - 一种繁殖孢子体隐性雄性核不育的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种繁殖孢子体隐性雄性核不育的方法，步骤如下：将孢子体雄性可育基因Y，内源性配子体雄性可育基因下调表达元件Xi，除草剂A抗性基因A^R，除草剂B抗性基因下调元件Bi和花青素基因C或其下调元件Ci连锁转入所述孢子体可育基因Y的不育突变体，用阳性株给不育株授粉以繁殖孢子体核不育系。该方法具有通用性，适用于所有植物，可获得不育株率为100％的孢子体核不育系；并且可降低分离不育系和保持系的成本；可早期，直观，快速，准确和经济地进行纯度鉴定；纯度不合格的不育系可早期、迅速、经济、彻底地提升纯度，继续用于制种；相关调控元件可全部选择内源性核酸片段。

Description

一种繁殖孢子体隐性雄性核不育的方法

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一种孢子体核雄性不育的繁殖方法，该方法能够繁殖出不育株率为100％的孢子体核雄性不育系，有利于孢子体核不育运用于杂交种子生产，充分利用杂种优势。

背景技术

杂种优势是杂种一代在产量、品质和/或抗性等方面比双亲优越的现象，在生物界广泛存在。杂交种是由两个不同的亲本杂交所产生的杂种一代，是利用杂种优势选育出的品种。杂交种的种子生产需要两个亲本异交授粉，与之相对应的常规种的种子生产不需要异交授粉。在水稻、玉米和油菜等作物中，利用杂种优势是实现高产、高抗和高品质的重要策略，而雄性不育系是杂种优势利用的主要途径。对温光等环境不敏感的隐性雄性核不育是一种重要的不育类型，相比于质核互作不育和温光敏核不育有如下优点：配组自由，凡是可育材料均可与之组配出育性正常的杂种一代，利于充分利用杂种优势；育性稳定，不受温光等自然环境影响，种子生产无风险。但由于自然状态下的这种温光不敏感的隐性核不育不能产生不育株率为100％的不育群体，难以运用于杂交种生产。先锋公司将玉米中靶向淀粉体的导肽的核苷酸序列，连接于玉米的一个淀粉酶基因前端，置于花粉特异启动子PG47下，能使含有该成分的花粉失活；连入一个外源荧光蛋白基因，便于机器识别和分拣不育和可育种子；再连入一个孢子体可育基因，能恢复相关孢子体不育突变体的育性；从而在水稻、玉米等作物中用于孢子体核不育的繁殖(Chang et al.,2016；Wu et al.,2016)。为了减少外源基因使用，降低不育株和可育株区分成本，提升不育系纯度，增加孢子体不育繁殖方法，有必要设计和鉴定更多的、新的孢子体不育繁殖元件和方法，加速和扩大孢子体雄性核不育在杂交种选育中的应用。这对于充分利用杂种优势，进一步提高粮食的产量、品质和抗性等具有十分重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种新的繁殖孢子体不育的方法，并鉴定和提升所繁殖的孢子体不育系的纯度。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、一种繁殖孢子体隐性雄性核不育的方法，包括如下步骤：

(1)在孢子体不育突变体中转入一个同时含有除草剂A抗性基因A^R、除草剂B抗性基因的下调序列Bi、恢复孢子体不育突变体育性的孢子体雄性可育基因Y、内源性配子体雄性可育基因的下调序列Xi和控制花青素合成元件C/Ci的表达盒，获得雄性可育转基因植株；

(2)将雄性可育转基因植株进行自交，分别喷施除草剂A和除草剂B，其中抗除草剂A的植株作为父本(保持系)与抗除草剂B的母本(不育系)进行杂交，收获杂交种子即为繁殖的孢子体核不育系。也可通过颜色有无选出保持系和不育系进行杂交繁殖不育系。

所述孢子体不育突变体y可自发产生或通过诱变产生，诱变包括射线、EMS、基因编辑等物理、化学、基因工程等手段，本发明优选为以OsABCG15基因自然产生的雄性不育突变体为不育供体，中九B为轮回亲本，经回交产生孢子体不育材料中九B-osabcg15；所述孢子体雄性可育基因为水稻花粉发育必须基因OsABCG15基因；所述内源性配子体雄性不育干涉序列为配子体雄性不育相关基因OsPTD1基因干涉序列。

本发明中OsPTD1(Loc_Os05g40740)基因(其起始密码到终止密码间的基因组序列如SEQ ID NO.1)，下调方案为RNAi，RNAi的启动子为花粉表达启动子，优选花粉特异启动子，更优选为本身启动子，本发明实施例选用OsPTD1本身启动子(序列如SEQ ID NO.2)，干涉靶点序列如SEQ ID NO.3，茎环序列为OsMYB76第一内含子(序列如SEQ ID NO.4)，终止子为Tnos(序列如SEQ ID NO.5)；除草剂A抗性基因可为抗Basta(草铵膦)的Bar基因(Biolaphos Resistance)、抗氟乐灵的OsTubA2基因等的任一抗除草剂基因，本发明实施例选用Bar基因(序列如SEQ ID NO.6)；孢子体雄性可育基因，本发明实施例选用OsABCG15基因(基因组序列如SEQ ID NO.7)；除草剂B抗性基因的干扰序列可为对某除草剂B敏感的干涉序列，本发明实施例选用的除草剂为苯达松，其敏感元件为内源性Bel基因(序列如SEQID NO.8)的干涉靶点(序列如SEQ ID NO.9)，干涉的启动子为Bel本身启动子(序列如SEQID NO.10)。上述元件排列顺序优选为不同部位和时期表达的元件相间排列，以免同时、同部位表达的元件相互影响表达。

本发明中，所述Bar基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述OsABCG15基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示；所述内源性除草剂B抗性基因的干涉序列如SEQ IDNO.18所示；所述OsPTD1基因干涉序列如SEQ ID NO.20所示。

本发明中，花青素基因可为任一能表现颜色的花青基因或其下调元件，本发明实施例选用花青素必须基因OsMYB76的改造基因OsMYB76R(序列如SEQ ID NO.11)。

本发明还包括不育系纯度鉴定和纯化，具体方法如下：利用色素性状，调查无色株的比率即为不育系纯度鉴定结果；对不达标不育系，于苗期(秧田期)用苯达松去杂以提升不育系纯度。

本发明还包括保持系繁殖，具体为收集杂交父本种子，后代喷施除草剂A后存活下来的植株即为保持系。

不育系繁殖及纯度控制原理：中九B-osabcg15由于基因OsMYB76突变表现所有器官无花青素颜色，转入带正常OsMYB76R基因后在芽鞘、叶鞘和柱头等器官表现紫色，据此可判断转基因阳性株；由于配子体雄性核不育元件，同孢子体雄性可育基因连锁转入，凡是有颜色的植株均产生花粉，其中一半花粉功能正常，一半花粉无授精能力。如果用有颜色的植株给无颜色突变体授粉，只有不带转基因成分的那部分花粉能产生后代，理论上这种后代由于缺少正常的OsABCG15基因，全部表现孢子体不育；由于除草剂B的敏感元件(比如Bel基因的干涉元件Bi)的连锁转入，还可通过对转基因后代喷施除草剂B(比如苯达松)，杀死带转基因成分的可育株，存活下来的由于无正常的OsABCG15基因表现孢子体不育，从而获得孢子体不育系；由于抗除草剂A的基因(比如Bar基因)的连锁转入，还可通过对转基因后代喷施除草剂A(比如Basta)，杀死不带转基因成分的不育株，存活下来的即为可育株，从而获得孢子体不育的保持系；用除草剂A筛选出来的保持系给除草剂B筛选出来的不育株授粉，即可产生的大量的不育株率为100％的孢子体不育系，从而实现孢子体不育的繁殖；由于机械混杂或配子体不育不彻底，会使繁殖出来的孢子体不育系中含有保持系，导致不育系纯度下降，此时可根据不育系中无花青素颜色的植株所占的比例鉴定不育系的纯度，并通过喷施除草剂B杀死杂株，最终获得不育株率为100％的孢子体不育系。

保持系繁殖的原理：由于配子体雄性可育干涉序列是基于花粉特异表达基因的调控元件，其转基因后代的全部雌配子正常可育(转基因和非转基因雌配子各占一半)，都能受精结实，而雄配子体花粉则只有一半花粉有授精能力(不带转基因的花粉)；而且配子体雄性不育元件与除草剂A的抗性基因连锁，其自交后代有一半植株带转基因成分，且同时表现有颜色、孢子体雄性可育和配子体雄性不育，因而可通过颜色或喷施除草剂A筛选出保持系。

作为一个总的技术方案，本发明所述方法具有通用性，可应用于水稻、玉米和油菜等多种植物；所述方法包括了孢子体不育系的繁殖、纯度鉴定与提升的方法，相关载体的主要元件是孢子体可育和配子体不育元件，其他元件为辅助增效性作用元件，在缺失时也能实现繁殖孢子体不育系的目的，因此减少这些元件的使用不偏离本发明权利要求书所限定的范围；所述方法涉及的主要和辅助性调控元件可灵活选用同功性元件；基因下调表达的方式可为干涉、反义和miRNA等，为了提高下调效率，可同时下调冗余基因、同功基因，下调表达的靶点，拷贝数可变；各种片段载入的先后顺序和相对位置可根据具体情况调整。另外，在方法陈述中所用的载体名称仅仅是为了陈述方便而使用，并不限制在实际应用中使用其他符号来表示相关载体。因而，上述可选内容的实际采用不表明同本发明有实质性差异，从而不影响本发明的保护。

本发明的有益效果在于：本发明所述方法具有通用性，可在水稻、玉米和油菜等多种植物中繁殖不育株率为100％的孢子体核不育系；可通过喷施不同的除草剂，早期、快速、准确、经济地筛选不育系和保持系；可利用色素性状早期，直观，快速，准确和经济地进行不育系的纯度鉴定；对杂株超标的不育系可通过苗期(秧田期)喷施除草剂快速、经济地杀死杂株，使不育株率达到100％，从而减少损失；涉及核酸片段可全为内源性片段，以减少转基因担忧。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：

图1为载体多克隆位点改造图谱。

图2为孢子体雄性核不育繁殖方法示意图。

具体实施方式

实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如分子克隆实验指南(第四版，冷泉港实验室出版)或精编分子生物学实验指南(第五版，科学出版社)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。相关核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。

实施例1、载体构建过程

1)OsMYB76R基因载入pCAMBIA1301

根据在先研究表明OsMYB76基因是水稻花青素合成必须基因，在水稻中九B等材料中，由于OsMYB76基因发生功能缺失突变，所有器官不表现花青素颜色(张毅，2009)。对OsMYB76基因进行优化并去除常用酶切位点后人工合成得OsMYB76R基因(SEQ ID NO.11)，以OsMYB76R为模板，用引物JCF1(SEQ ID NO.12)/JCR2(SEQ ID NO.13)扩出目的片段回收备用，用NcoI和BstEII彻底切去pCAMBIA1301中的GUS基因，回收骨架备用；通过同源重组方式将OsMYB76R载入pCAMBIA1301得载体1301-JC。

2)1301-JC多克隆位点改造

为了方便载入各种调控元件，重新设计多克隆位点的酶切位点和顺序(图1)，人工合成新的多克隆位点Y9755Gn(SEQ ID NO.14)，以Y9755Gn为模板，用引物RSF1(SEQ IDNO.15)/RSR1(SEQ ID NO.16)扩出目的片段回收备用，用EcoRI+HindIII酶切1301-JC，回收骨架备用；将目的片段重组进骨架得载体RSVMJC。

3)Bar基因载入RSVMJC

人工合成Basta抗性Bar基因(SEQ ID NO.6)，用BstXI+XhoI从Bar中切出953bp目的片段回收备用，同时用Bst XI+XhoI酶切RSVMJC回收骨架备用；将目的片段和骨架连接得载体RSVMA^RJC。

4)OsABCG15载入RSVMA^RJC

研究表明OsABCG15基因为水稻花粉发育必须基因，其突变体表现无花粉型孢子体雄性核不育(Wu et al.,2014)。对OsABCG15基因(SEQ ID NO.7)进行优化、去除部分内含子和常用酶切位点后人工合成得其改造序列TDS(SEQ ID NO.17)，用SacI+SalI从TDS切出目的片段5853bp回收备用，同时用SacI+SalI酶切RSVMA^RJC回收骨架备用，将目的片段同骨架连接得载体pA^R-Y-C。

5)Bel干涉元件载入pA^R-Y-C

水稻Bel基因(SEQ ID NO.8)对苯达松具有明显的抗性，Bel基因突变后易被苯达松杀死(Pan et al.,2006)。一次性人工合成苯达松抗性基因Bel的干涉元件：Bel本身启动子(序列如SEQ ID NO.10)+Bel基因干涉靶点(序列如SEQ ID NO.9)+Tnos(序列如SEQ IDNO.5)，其完整序列Bi如SEQ ID NO.18，用SpeI+BamHI(不完全酶切)从Bi中切出目标片段3023bp回收备用，同时用SpeI+BamHI酶切pA^R-Y-C回收骨架备用，将目的片段同骨架连接得载体pA^R-Y-Bi-C。

6)OsPTD1干涉元件载入pA^R-Y-Bi-C

目前的研究发现OsPTD1基因为配子体雄性不育相关基因，基因组序列如SEQ IDNO.1所示，在花粉中特异表达。一次性人工合成苯达松抗性基因OsPTD1的干涉元件：OsPTD1本身启动子(序列如SEQ ID NO.2)+OsPTD1基因干涉靶点正向序列(序列如SEQ ID NO.3)+茎环序列(序列如SEQ ID NO.4)+OsPTD1基因干涉靶点反向序列(序列如SEQ ID NO.19)+Tnos(序列如SEQ ID NO.5)，其完整序列Xi如SEQ ID NO.20，用SalI+EcoRI从Xi中切出目标片段2935bp回收备用，同时用SalI+EcoRI酶切p A^R-Y-Bi-C回收骨架备用，将目的片段同骨架连接得终载体pA^R-Xi-Y-Bi-C。

实施例2、繁殖孢子体隐性雄性核不育的方法

1、孢子体不育材料中九B-osabcg15的选育

以OsABCG15基因自然产生的雄性不育突变体(Wu et al.,2014)为不育供体，中九B为轮回亲本，经多次回交产生孢子体不育材料中九B-osabcg15。

2、pA^R-Xi-Y-Bi-C转入中九B-osabcg15

在育性分离的群体中，选择不育的中九B-osabcg15植株，取其幼穗诱导愈伤组织，用根癌农杆菌的方法将终载体pA^R-Xi-Y-Bi-C转染前述愈伤，分化成苗，生根移栽后选出表现花青素颜色的8株为阳性株，全部表现雄性可育(图2)。

3、孢子体雄性核不育中九B-osabcg15的繁殖与纯度控制

1)不育系的繁殖

(1)选结实最好的一株T₀代阳性株收种，种植自交后代，观察颜色和育性后，平均分成两部分，分别喷施除草剂Basta(0.3％)和苯达松(0.24％)，结果发现，自交后代有色:无色；可育:不育；Basta抗:Basta不抗和苯达松不抗:苯达松抗均接近1:1，且有色、可育同抗Basta或苯达松敏感共分离，无色、不育同不抗Basta或抗苯达松共分离。说明转入的各元件均起作用，阳性株为孢子体可育，其产生花粉的能力得以恢复，同时表现雄配子体不育，所产生的花粉有一半无授精能力(带转基因成分)。

(2)用喷施Basta后存活下来的植株为父本同喷施苯达松存活下来的植株杂交，共获得杂交种子854粒，同时收获喷施Basta后存活下来的植株的自交结实种子。分别播种杂交种子(作母本，称为不育系)和自交结实种子(作父本，称为保持系)，秧田期母本喷施苯达松杀死杂株，父本喷施Basta杀死其中的不育株，然后按母本5行，父本1行的比例进行相间栽插，花期进行人工辅助授粉。成熟期分别收获母本和父本上的种子，共获得不育系1.4Kg，保持系0.8Kg。

2)不育系纯度鉴定

将前述收获的不育系30g播种于泥盘，调查1000株芽鞘的色素表现情况，发现969株芽鞘无色，31株芽鞘紫色，无色所占比例为96.9％；将上述调查颜色后的植株按颜色有无分开移栽，开花期调查育性，发现所有无色株均为不育，所有紫色株均为可育，不育系纯度为96.9％；上述结果说明紫色性状同可育性状共分离，可以用表达时期很早的芽鞘紫色性状来鉴定本发明所繁殖的不育系纯度。

3)不育系纯度提升

另行播种前述收获的不育系30g于泥盘，共获得1213株秧苗，于3叶期喷施苯达松，14天后发现个别植株完全枯死，将存活下来的1164株移栽，开花期调查育性，发现所有存活下来的植株全部不育；对前述不育系纯度鉴定分开种植的969株无色不育株和有色可育株，待育性调查后，同时喷施苯达松后发现，所有无色不育株对苯达松不敏感，正常生长，而有色可育株最后全部枯死。上述结果说明可以通过喷施苯达松杀死混入不育系中的保持系，从而提升不育系的纯度，获得不育株率为100％的不育系。

4)保持系繁殖：对前述从父本植株上收获的种子播种，一部分秧苗于秧田期喷施Basta，发现大约一半的植株枯死，移栽存活下来的植株，开花期调查育性和颜色，发现所有植株均表现雄性可育和在叶鞘等部分表现紫色；另一部分全部移栽，返青后拔去无紫色植株，开花期调查育性，发现所有保留的紫色株均雄性可育。上述结果说明可以通过喷施Basta或根据颜色有无筛除不育株，从而实现保持系的繁殖。

综上所述，本实施例说明了本发明设计的方法不但可用于繁殖孢子体雄性核不育，而且能够早期、快速、准确、经济地进行不育系纯度鉴定，能早期早期、快速、彻底、经济地提升不育系纯度，避免纯度不达标的不育系报废。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

序列表

<110> 云南大学

<120> 一种繁殖孢子体隐性雄性核不育的方法

<160> 20

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2235

<212> DNA

<213> 水稻(oryza.sativa l. )

<400> 1

atgacgacga cgacgcgagt ggcggccgcc gccgccggcg tgctgctggt ggcggcggcg 60

ctggccggcg tggcgcgcgg cgaggacccg tacgtgttct tcgagtggaa ggtgacgtac 120

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cccaaggacc agatcggcag cttcttctac ttcccgtcgc tggggatgca ccgcgccgcc 420

ggcggctacg gcgggatcag cgtcgtcagc cgcctgctca tcccggtccc gttcgacccg 480

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gccaagatgc tcgacgccgg caagagcttc ggccgcccgc acggggtggt catcaacggc 600

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cggctccgcg tctgcaacgt cggcatcaag gcgtcgctca acttccgcat ccagggccac 720

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gacgtccacg tcggccactg cctctccgtc ctcgtcgacg ccgaccagaa gcccggcgac 840

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aacgtcatca ccgccgagtt ccgcaccttc atcgagatca tcttcgagaa ccccgagaag 1320

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tcgcccccca ttactactac ctccattaac cttttattaa agataggctt ggccattcat 1440

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gtgtgcttta aacataattt gatttttttt atatttgcat aaaaaattga atattatgaa 1560

tgatgtatat gatctgatac tactgttaac taacttactg atgcgcataa taataaaatt 1620

ttttaataag acgaatgata taaaaaaagt tttttaaatt acctccattt ataatatacg 1680

atgttttttt tacttttaac attcgtttat aatatatgtt ttttcacaaa cgtttgagtt 1740

ttgaccattt attttattta aaaataatta tgcagttatc atctatttta ttgtaatttt 1800

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<212> DNA

<213> 水稻(oryza.sativa l. )

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tgatgcggtt gatcttgagc gatccgggac gccacaagca ccgatgggtt ctgggagttc 960

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ccaaatccca gcaacgagat cgccagggac tagtagtacg tacagcagtg gtgatttgtc 1200

atataggtgt atatcggctg ttttcgcatc tcaaggcctc aagcagtgtg tgcaatctgg 1260

agtagtatat aaatatgtaa aatgttcatt tcgatatact gtcaaatgcg tgtaaattaa 1320

ccaatgctaa aacaacacac tgtgactaaa tttactgagt tggatgatga ggatgattat 1380

gttgcgtgca cacctgatca ggaggacata taatataggc catttgggcc gtcttggaca 1440

ccaccgtttg atttgtatga agttgggccg aactatgcaa gcccagaggc gctgcctctg 1500

tgccacggcc cacgggcatc gctggatggt caagcaggtg atcggtggag cgccaatggc 1560

ggcggcgaga cacacagcgc ggcgcgcgcg cgaacgtgcg gacgcgcgcg ccccggccac 1620

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aacccgggac gtcttccatg gccgccgccg ccgccgcccc cgcctactaa accaccctac 1800

ccaccccctc caaactccca cacattacat ccttcaaaga gagcatcaca cacacacaca 1860

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<212> DNA

<213> 水稻(oryza.sativa l. )

<400> 3

gcagaaggtg atcctgatca acggcgagtt cccgggcccg cggatcaact gctcgtccaa 60

caacaacatc gtggtgaacg tgttcaacca gctggacgag ccgctgctct tcacctggaa 120

cgggatgcag caccgcaaga actcgtggca ggacggcctc gccgggacgc agtgccccat 180

cgcgccgggc accaactaca cgtacaagtg gcagcccaag gaccagatcg gcagcttctt 240

ctacttcccg tcgctgggga tgcaccgcgc cgccggcggc tacggcggga tcagcgtcgt 300

cagccgcctg c 311

<210> 4

<211> 150

<212> DNA

<213> 水稻(oryza.sativa l. )

<400> 4

acgagctggt gagctagcta ttacctaatc gatcgatggt catcgatcat gagatgatga 60

tgatgagatt tgtacttaat tgtgatctgt atggatgctg ttgttgatca agttcttgcg 120

atcgatcgat ctgaattttc aggtttgagg 150

<210> 5

<211> 270

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gctcgaattt ccccgatcgt tcaaacattt ggcaataaag tttcttaaga ttgaatcctg 60

ttgccggtct tgcgatgatt atcatataat ttctgttgaa ttacgttaag catgtaataa 120

ttaacatgta atgcatgacg ttatttatga gatgggtttt tatgattaga gtcccgcaat 180

tatacattta atacgcgata gaaaacaaaa tatagcgcgc aaactaggat aaattatcgc 240

gcgcggtgtc atctatgtta ctagatcggg 270

<210> 6

<211> 1254

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

gaattcctgc agccaccatg ttggtgagat ttttcaaatc agtgcgcaag acgtgacgta 60

agtatccgag tcagttttta tttttctact aatttggtcg tttatttcgg cgtgtaggac 120

atggcaaccg ggcctgaatt tcgcgggtat tctgtttcta ttccaacttt ttcttgatcc 180

gcagccatta acgacttttg aatagatacg ctgacacgcc aagcctcgct agtcaaaagt 240

gtaccaaaca acgctttaca gcaagaacgg aatgcgcgtg acgctcgcgg tgacgccatt 300

tcgccttttc agaaatggat aaatagcctt gcttcctatt atatcttccc aaattaccaa 360

tacattacac tagcatctga atttcataac caatctcgat acaccaaatc gaatcgatga 420

gcccagaacg acgcccggcc gacatccgcc gtgccaccga ggcggacatg ccggcggtct 480

gcaccatcgt caaccactac atcgagacaa gcacggtcaa cttccgtacc gagccgcagg 540

aaccgcagga gtggacggac gacctcgtcc gtctgcggga gcgctatccc tggctcgtcg 600

ccgaggtgga cggcgaggtc gccggcatcg cctacgcggg tccctggaag gcacgcaacg 660

cctacgactg gacggccgag tctaccgtgt acgtctcccc ccgccaccag cggacgggac 720

tgggctccac gctctacacc cacctgctga agtccctgga ggcacagggc ttcaagagcg 780

tggtcgctgt catcgggctg cccaacgacc cgagcgtgcg catgcacgag gcgctcggat 840

atgccccccg cggcatgctg cgggcggccg gcttcaagca cgggaactgg catgacgtgg 900

gtttctggca gctggacttc agcctgccgg tcccgccccg tccggtcctg cccgtcaccg 960

agatttgact cgagaatctt ggactcccat gttggcaaag gcaaccaaac aaacaatgaa 1020

tgatccgctc ctgcatatgg ggcggtttga gtatttcaac tgccatttgg gctgaattga 1080

agacatgctc ctgtcagaaa ttccgtgatc ttactcaata ttcagtaatc tcggccaata 1140

tcctaaatgt gcgtggcttt atctgtcttt gtattgtttc atcaattcat gtaacgtttg 1200

cttttcttat gaattttcaa ataaattatc agatccggta ccgagctcaa gctt 1254

<210> 7

<211> 8543

<212> DNA

<213>水稻(oryza.sativa l. )

<400> 7

gaattctagt ttggattccc tctctaacct tttcgtgggg ttaaccgtta aattcatatt 60

aaaaagtcca tttttccttt cagtatagag gaacatatat atatatatat atatatttgt 120

gagtttgtta tacgagatat tatttatgac aaaatttatt taaaaatatg atatagaaaa 180

taatatttat ttatctgtta ttaaaaattg tttacgtagg atataaatag atttgtctta 240

tactacaatc aaaataatac agtacttata taatttttaa taactaaaaa aataaatatt 300

attctttcat gtcatatata aaaataaatt ttatcgtaaa taatattttt cataacaaat 360

acataaatat aaaagtctcg tacaataaat ttttatactc caataatata ctcataccaa 420

aaggtaaaat ggacttttga ttaagaattt aatggtcaac taacggaaaa gttatgaaag 480

ggatctaaac taaaatttag aagtatgcaa ggaaataagc aaaacttagt accacataag 540

agattagaca aagtcttata ggtacataag aaatttctct tatttttggg aagcactagt 600

agtgtcgttt gtggagtcgt aggtgcatga ctccacccac catgctttaa atcctgatgc 660

ccacgaatat tacgcacatg catgtgaact ttcaatagga ctttagtgag acgctggttt 720

ccgtctctaa gagcatgtgt taggagacac atttgttggg gtgtgagtat ggtgttacgt 780

gtgtagtggt gtgtgtctgc ggtataatct taaaaaaaag ttctcttatt tttgtggtgc 840

ataatttttg acatggaaga cctttttctc gtcacagaca agcaccaccg ggcaccgact 900

gatttctgaa gtcgtcactg gttgtccctc gtgaatcgtc gtcacctgct aagcccaaat 960

atccacagaa agttagtggt atcaaattat gttatctcca ttcgatattt tgggtttatt 1020

ttaagtcaaa tatattaagt ttgatcgagt ttgtagaaaa acgtagcaac atctataaca 1080

tcaaattagt tttattgaat ccacgattga atatgtttta tagtatattt gttatgtgtt 1140

aaaaatattg ctatattttt ttataaattt tagtttgact tatgacaaat ccaaaatgtt 1200

ttacaatata cgcgtatgac aatctttgag gtgtaggaga ttaaattctt tgcatttgat 1260

tgtttataca tctagttttg tcacatgaaa taacacacag ttctgatttt caaagaaaaa 1320

aagtaacaga taattctgat gtgcatacat ggaaggttct cttctgaaag cccttagaaa 1380

gattgtgggt caccaaacaa ggtgcagaaa aaaaacaaga acacaacagt atatatatat 1440

aacaaagtag gcatgctctt ggttggttac tagtggttct gtttctcatg ctcatccatg 1500

catttcttgc tacctgatta aaaggagaga agggcagtct gcttggcgct ctctctctga 1560

acctgtcact ctttttttct gtgtctcttg gaggagatga tggagatcag cagcaatgag 1620

gagatgatgg agatggccat tgttgagcag ctgcctcctt cctctcatca tctcaatggt 1680

ggcagtgttg aggttgacat ggaggaggat catgtgtggc caaccaaaga tggccctctc 1740

cctatattcc ttaaggtgtg tatatctatc tcttcttcca tttttcggta tgcgcgaaaa 1800

cagatcaagt ttatccttgt tgatgttcaa gaaagtgttt taatccctcg tttatggtta 1860

tgaaaaatta tgaaaacaat aaatagatta tccctataag cttttatagg taagtggata 1920

catatgtgca tgtttgtagg tatgtgaaaa gattaatcag aatgcttaca catgttgatg 1980

ttctccctat gtagtgtgtg tatatatgtg catgtttgat gtttgtagca actgaacaat 2040

ttagttctac taagcagagt ttgaaaaaga tcgatattac taccaggatt tattaagata 2100

ctaaaggttt taccgtgatt aatcatgaaa tcatgaaaaa aagtttgtat taattatttc 2160

ttatgcattt tatagagtct aattttgaac tcagagatgc aaaaaatgcc aaacaaagga 2220

aacgacctga aatagacata cttaaggagg gaaggtacaa gttagttggt tggcaatttg 2280

catgtctcat tgctcaacag tttcttatct aattgcaaaa acttcttgca tggtgttttt 2340

acttctttgg catgcaatat agctaacaaa aaaggagcaa attcctggtc taaatttttg 2400

cttgatatat aaatattttt ttttggaaag tgcagtttga gaatgtggag tacaaggtga 2460

agctgactcc aaagaaccca ctaacagctg caagggtggc atttgcatct cacaagagca 2520

ctgaggatca gggcagctgc aagcacatcc tcaaggggat aggaggcagt gttgaccctg 2580

gtgagatcct ggcactgatg ggcccatctg gcagtggcaa gaccacgctg ctcaagatac 2640

ttggaggcag gctcagtggt ggtgtcaagg gccagatcac ctacaatgac accccctaca 2700

gtccctgcct caaaagaagg tattccctct atttcatatt ataagtcgtt ttgacttttt 2760

cttatttaaa cattattaag tttaactaag tttataaaaa tagcaatgtt ttaaacacca 2820

aattagtttc attaaattta gcatcgaata tattttgata atatgtttgt ttaattcttt 2880

tgtgttaaaa atattactat atttttctat aaacttactt aaacgtaaag aaatttaact 2940

agaaaaaaaa gttaaaatga cttataatat gaaatagaga gagtaactgt ataaagtcat 3000

agtggatatt aattagtatg atttatgtaa tgagaaaggt ccggggtctt ccgactagca 3060

cgataaggtg tgggttagtt gatcaagttc aagcctcatc tctcttaata aattttgata 3120

taaaagttat ttctctcata tctagtgttt ttttttattt atggtagtta ttgtaagacc 3180

ataaggtatg ggttaggccc tgtttagttt ccaaaaactt ttcgaaaaaa catcacatcg 3240

aatctttaga cacatgtatg gatcattaaa tatagataaa aataaaaact aattacacag 3300

tttgtatgta aatcgcgaga cgaatctttt gagcctaatt agcccatgat tagccataag 3360

tgttacagta actcacatgt actaatgccg gcttaattag gctcaaaaca ttcgtctcgc 3420

ggtttggcga gttatgaaat tagttttttc attcgtgtcc gaaaacccct tccgacatcc 3480

ggtcaaacgt ccgatgtgac acccaaaaat tttcatttca ccaactaaat aggcccttag 3540

ttattgtaag atagaatttt tgcatagtta tgctatcttt cgtaaactag tggagtagat 3600

tgagtaaaac cagtatgtct tcaaagagaa tttacaggca cgcaaatgac tgacaaactg 3660

cttagtgttt actgcaatct tcagataaga gagaacatgt attggcatgc caaattaagc 3720

agtgtagttg cattgttctg caggtatcaa ttaaagtgga aaaattaagt aatcaagact 3780

aattattttc ttttgatgaa aacaggattg gatttgtgac acaggacgac gtccttttcc 3840

ctcagttgac agtggaggag acccttgtgt tcgctgcctt cttgagactc cccgctcgca 3900

tgtcaaagca gcagaagcgc gacagagttg acgccatcat aactgagcta aatctagaga 3960

ggtctgtaag tatattttca tcaaaggaaa aaaaaaacta caccgatttt actaatataa 4020

gttgtcaaac caacaatctg cagcttaaca caaacccacg tgaagcaaaa tagcatacaa 4080

aataaaatca tgactaatag cataaatctg ttttttttct gaaattcgaa taagaaaatg 4140

caaagaaacg caaatatcgc atcttaaagt acagtggtgc attagaatta ctcttgattt 4200

ttctcgacca acctacatga catacctact gaacgtgcac tttcatttca aaagagaaat 4260

tttacagttc ttaaagagtt attatatttt gtagtgcaaa tcaaaattta cattagaaaa 4320

aaaatgatat cttttaacgg tcacaaaatt actcatctta aaaatggtgg gtcatacggc 4380

aatggtatac ccattgaaca gtgtttacga tttcggaaaa ttttggaccc tggcacaaaa 4440

ctacttcact gaattatttt tccctttttt ttcatgaatt tgatcgaaaa tttgttcaaa 4500

acctaataaa tagtttttaa atatccaata tctcggaaaa tttcgctacc caggacccac 4560

gacacaaatg ctgaaaacga aaaggactac ctattaaact tttggtacat ttataacttt 4620

gaatcttaca taattttcaa ctaatagata tatagcccgt tttaaatgaa atagaaaaaa 4680

aagagacaaa catgtcaaaa aaaaaaccgt aaatctaact taaaataaaa tgttgtgaaa 4740

aaaattctaa tgtttgtaca cgattgcaaa actctgcagg tgccggcaca ccaagatcgg 4800

cggcgcgttc gtgcgcggcg tgtcgggcgg cgagaggaag cggacgagca tcgggtacga 4860

gatcctcgtc gacccgtcgc tgctgctcct cgacgagccc acctcgggcc tcgactccac 4920

gtcggcggcg aagctcctcg tcgtgctccg ccgcctcgcc aggtcggcgg cccgccggac 4980

ggtgatcacc accatccacc agccctccag ccggatgttc cacatgttcg acaagctgct 5040

gctcgtcgcc gagggccacg ccatctacca cggcggcgcc cgcggctgca tgcgccactt 5100

cgccgccctc ggcttctccc ccggcatcgc catgaacccc gccgagttcc tcctcgacct 5160

cgccaccggc aacctcgacg gcatctcctc ccccgcctcc ctcctcctcc cctccgccgc 5220

cgccgcctcg ccggactccc ccgagttcag gtcccacgtc atcaaggtat gtgcgtgtct 5280

cgtgtcgagg gcccaagaat cactctcatg gcgttgtggg tgcagtactt gcaggcgagg 5340

cacagggcgg ccggcgagga ggaggcggcg gccgcggcgg cgagggaggg cggcggcgga 5400

ggtggcgcgg ggagggatga ggcggcgaag cagctgagaa tggcggtgag gatgaggaag 5460

gataggcggg gcggcatcgg ctggctggag cagttcaccg tgctgtcgcg gcgcacgttc 5520

cgggagcgcg ccgccgacta cctcgacaag atgcgcctcg cccagtccgt cggcgtcgcc 5580

ctcctcctcg gcctcctctg gtggaagtcc cagacctcca acgaggccca gctccgtgac 5640

caagtatgta cactagcttc ttcttcctcc tctcgacacc gccattgctg acgtcatcaa 5700

gaactcaaac tgtccgatca agaacacata cacaaaccca ccctctcctt cttcctcctc 5760

ctctcgacac cgccattgct gacgccattg tcaagaacat acattcctct tcttcctcct 5820

cctctcgaca ccgccattgc tgacgtcatc aagaactcaa actgtccggt caagaacaca 5880

caccctcttc ttcttcctcc tctcgatatc gccattttca agaacataca ctcctcttct 5940

tctttctcct cctttcgaca ccgccattgc tgacgtcatc aagaactcaa actgttcgat 6000

caagaacata cacataaact cctcttcttc ctcctcctct cgccaccacc attgctgacg 6060

tcatcaataa ctcaaaacac acacctcttc ttcctcctcc tcctctcgac accaccattc 6120

tcaagagtca agaacataca ctcctcatct tcttcctcct cctcctcctt gcacagttgc 6180

accgccatcg gcaagaagtc gaggtgatca agagtaatat gtgtgcgttt gcaggtgggg 6240

ttgatattct acatctgcat attctggacg tcgtcgtcgc tgttcgggtc ggtgtacgtg 6300

ttcccgttcg agaagctgta cctggtgaag gagaggaagg cggacatgta caggctgagc 6360

gcctactacg cgagcagcac ggtgtgcgac gcggtgccgc acgtcgtgta cccggtgctc 6420

ttcacggcca tcctctactt catggccgac ctgcgccgca ccgtgccctg cttctgcctc 6480

accctcctcg ccaccctcct catcgtcctc accagccagg gcaccggcga gctgctcggc 6540

gccgccatcc tcagcgtcaa gcgcgccggc gtcatggcct cgctcgtcct catgctcttc 6600

ctcctcaccg gcggctacta cgtccaggtg aatctcacaa atatcatctt ctgatttctg 6660

aattttggtt ctcgatcact ttcccgtgtt ctaaaacatg gtttaaatgt tgaagaaatc 6720

aaaagtattt tggaaggacg gatagaagtg aaattttgga ctagaaagca caaaattatc 6780

ttcttctagt ttctgaattt tgcttatcac aaacatggtt ataatattga gtaaattaga 6840

aacatttctt cttttagaaa aaaaaacaaa aagtatttca gaaacagagt ttgaacaagc 6900

aatttgtttg gctgaattta aacatgttct actcaaattt aaaaaaaact atttttttcg 6960

gttaaaataa tatctgggag gccatatacc caaaatttct aaaattcctt tccgaaaatt 7020

tcaaaaataa atttgctccg aaatgtgaac gaacagggcc aaaaaaaaca cacaaaatat 7080

tacatatcat tgtgcatgca tcgactattt atcgacatta tattcctaac ttttttcaca 7140

ccaaataagc tcggataaaa atgaaattga aatttgggat aattttgttt ggattgaaca 7200

aaaaacattg cagcatatac cgaagttcat aaggtggctc aagtacgtgt cgttcatgca 7260

ctacgggttc aacctgctgc tgaaggcgca gtaccacggc cacctgacct acaactgcgg 7320

cagccgcggc ggctgccagc ggctgcagtc ctcgccgtcg ttcggcaccg tcgacctcga 7380

cggcggcatg cgcgaggtct ggatcctcct cgccatggcc gtcgcctacc gcctcctcgc 7440

ctacctctgc ctccgcaagc ggatcagcct catgcccttg tagtccatcg atctgtcaga 7500

tcaggatcag ttggttcggg gaagaagacg actgatgtgg tagtgaattg caattgcgat 7560

tgatgatggt gaatgggcca ttgttggttt gggtgctgtg aattgtttca aacttgagtt 7620

cttttcttta tttgagaagt atttgaggct tgtctgctta gcaagttggg aaataatcaa 7680

ccccatcatt ttagcattca gcttgtaagc ataagcgaag atttatttaa aacttatttt 7740

taaagttaat tttaggtatc ttttcgtagt ttattttcta gcatttactt tttaatttgc 7800

tgagcatgta tattaaagtt ttacgtataa ttttttttaa aattattaat aagttgtttg 7860

tataagcgat tagtctgtct cgtcgtcgtg acaaaaagaa aaaccgatga gatggttggg 7920

agccgattaa ggttattgtt ttcctcgaaa agagaaggtg gaggggatgg ggtgaattta 7980

aatctccctg caaaaccatt tttggctttg agctcaaaat ttctcatttt ccgtttgtaa 8040

tggacatagt agtatgttct cctcagggcc tttgccctat taggcccaaa tctcctgccc 8100

gcaaaaaatg ggctgacaac gtcacgaacc acgaaccgcg ccgtaaatgg gccaaaaata 8160

ccaaggccca aatcctacag agcccaaagt agagggccat aatatgggcc tagaaattca 8220

acggcccgct ccaatgagaa gtggactcgg agcgggattc ccccaccaaa tccgtttcga 8280

cctcagaaaa tacgcctccg atcaggcgtt tacgcacact actaatattg acgagaaagc 8340

cacctcctct ctctcgctcg ctccgctctt cttgacaagg aagcaaaagc cgccgccgcc 8400

gacgccgacg agagaggaga gagagatcgc cgccgacgtc gcaggagggg gagggggaga 8460

tggcggcgga gggggaggac gcggcggccg cgcgacgccg cgcggcggcc accgactaca 8520

ggaagaagct cctcacctgc agg 8543

<210> 8

<211> 6592

<212> DNA

<213>水稻(oryza.sativa l. )

<400> 8

gatcacgacc tatgtaatca acctgttgtg ttgtgagcgt gtgtgcctga tttggttgcc 60

tgcaggtgtt gtcctggcca ccgacttcga agcaatctgt gcgccggttg gaggtggcgg 120

agcactggta ccgactctac aagacggaca atcaacgggt accacaatcc ggctccacct 180

cgacgcgatt gcggcaacca cgaaaacctc acgctccaat ctgtgccctc cgcccgtgct 240

cgctgcatct cgtgccaccg tctcggactc tcgatcctca tggcctgaat tatcctaatt 300

cttcgttacc agtttttttg agactaatat gactcccatc aaacaatgca gttgagagtg 360

agttcttacc tgtattatat agtacattgt atttaaacca tagtacatgg ggacagtggt 420

gcgttcatca atttatggat tgtggtaggc tggtagctgt ttgatttgtc actaaaattg 480

cacgacgaca acactttggc cctgtttaga ttctaacttt tttcttcaaa cttccaactt 540

ttccgtcaca tcgaactttt ctacacacac aaacttccaa ctttcccgtc accttcactt 600

taggttccta agtttaggtt accttcactt taggttccta aatttatcac taagtctgaa 660

atttatccct aaaccaaaat accaggtaca acggatccct caatctacaa aactcaatca 720

cccaagattg tagatagtat tatgtccggt tttaactgac gtgtcaagtt gagttaacgt 780

ggaatctatg cgggccccac atgtaagtgg ctagtacttt tttccacgtt ggacgaaacc 840

gtctcccaaa ccactaaagg aggcgatatg caccgatttt gatagatggg ggagacgtta 900

taccctgttt tattatcaag agatgtgatt caaccaggag caagagttga gagagcaaga 960

atagacttat tcgtgagccc acaggctaaa cccgccacgg cccacagact aagcccgcca 1020

actcgggccg ttcggcccag tttgcacgca tggtgggccg gaaactggaa tctccgaacc 1080

gcaacggaat cgacgacatc tgtagccaca gcgcgcactc gacggcgggc agcttcgtca 1140

ctggttcgag ctgtctgctg actcaacgac gaacacacgt actcctgctc ggtttcttcc 1200

tccgtgtcgc acaaaagtca aattgctctc tattagtatt cattattagc acttcaaacc 1260

tttctttacg ttttaaacga accaactaat caggttatga ggactataat aatcgaatcc 1320

agggatcttg ctggaagcaa ttgaataatc gcccaacgat tgagttcatt tcttgtctcc 1380

aaagctgtct cctgatagtc aacaggtctc ggtcctcgca gagtcgcact gcgatttggc 1440

ctctggaaac tggaaagaga tctcgatcca ccacaagaaa atgccaagca gcacgacgac 1500

gaagacgaca acgccttcca ggtacgtagc aattgaatac ggaatactct ctccgtttaa 1560

aacgtttgat tattttccta atcaaacttt atcatgtttg accaaattta tagaaaaaaa 1620

taacaacatc ttaaatataa aattagtata actaaatcta gcattggata tactttcata 1680

atatttgttt gttttatgtt aaaaatacta ctatattttt ctataagctt agtcaaattt 1740

aaatcaaatt aaagaagatt aattagaaaa atagccaaac gatttgtaat atgcaacgga 1800

gtgagtagaa gtaatcgccc agcctcgcca acgaggcaac gagacccgta atgcaacgat 1860

cgcatctgcg tttcaggcgt cagccatggc gtctgcagag atgcctggat tgtctccgca 1920

agatctgatc catttcatct ccttctagaa gcacaagcgc cgctcggtat aaaggcagac 1980

gcattgtcac aaatagctgc agtgcaccag agtcacagaa acacatcaca cattcgtgag 2040

ctcagcttag ccatggataa cgcctacatt attgccattc tctctgtagc tatcctcttc 2100

ttgctccact actacctcct cggccgcggc aatggcgggg cggcgcggct gccgccgggt 2160

ccaccggccg tcccgatcct gggacacctc cacctcgtca agaagccgat gcacgccacc 2220

atgtcccgcc tcgccgagcg gtacgggccg gtgttctcgc tgcgcctcgg gtcgcggcgc 2280

gccgtggtgg tgtcgtcgcc ggggtgcgcc agggagtgct tcaccgagca cgacgtgacc 2340

ttcgcgaacc ggcccaggtt cgagtcgcag ctgctggtct cgttcaacgg cgccgcgctc 2400

gccacggcga gctacggcgc gcactggcgc aacctccgcc ggatcgtcgc cgtgcagctg 2460

ctctccgcgc accgcgtcgg cctcatgtcg gggctcatcg ccggcgaggt ccgcgccatg 2520

gtgcggagga tgtaccgcgc cgcggccgcg tcccccgccg gcgccgcgcg catccagctg 2580

aagcggaggc tgttcgaggt ctccctcagc gtgctcatgg agaccatcgc ccacaccaag 2640

gcgacccgcc ccgagacgga cccggacacc gacatgtccg tggaagccca ggagtttaag 2700

caggtcgtcg acgagatcat cccgcacatc ggcgcggcca acctgtggga ctacttgccg 2760

gcgctccggt ggttcgacgt gttcggcgtc aggaggaaga tcctcgccgc tgtaagccgg 2820

agggacgcgt tccttcgccg cctgatcgac gcggagcggc ggaggctgga cgacggcgac 2880

gagggcgaga agaagagcat gatcgccgtg ctgctcactc tgcagaagac agagccggag 2940

gtgtacaccg ataacatgat cacagctcta acggcggtga gttcatcttc tgctgtttta 3000

cctttctgat atctgaattc tctcattggt gcgtaatttt ttttttttgg ctgtcatcgg 3060

tatagctttc ttaagcactc agtagccttg caattataaa aagaaaaaca atcagtagct 3120

ttttacatgc tttgagtcag tcagtagcag tgtggcacta tcagcattca gcagtattca 3180

tgttgtttgc taatcactat catggtttga gtcagcacaa tcagtagctt ttgacatggt 3240

ttgagtcagc agtatctttt ctaggaactg aattagttat tcatttagta caacttgttt 3300

gtctgtctat tgattgcttt aaattatttc ttctatgcaa ccctctaatc ctagtatagt 3360

actagccttt tatatgaaga atcatcaata attttcttct cactttcagt gtagctttac 3420

ttaatgaata ttttgaaaga tcgcctagtt gccttattat aattgtataa aaggaaaaca 3480

atcagtagcc ttttacatgg ttgagtcagc gagttatcag gagtactatt gtttatcatg 3540

gtagtagcac gatagactat tcaacccggg cgattaaaat ccttctccca aatttgtatt 3600

ctttgttttt tcctcaaaaa ttcaccaaac tcttggaact attatagttc agttttagac 3660

aaaaaaaaaa tgaaatctta gttccaccct cttgccgtgc agaacttgtt cggagcagga 3720

acagagacaa cctcgacgac atcagaatgg gcgatgtcgc tactgctgaa ccaccccgac 3780

acactcaaga aagcgcaagc cgagatcgac gcatccgtcg gcaactctcg cctgatcacc 3840

gccgacgacg tgactcgcct cggctacctc cagtgcatcg tcagggagac gctccgcctg 3900

taccccgccg cgccgatgct cctcccgcac gagtcctccg ccgactgcaa ggtcggcggc 3960

tacaacatcc cgcgcgggtc gatgttgctc atcaacgcgt acgccatcca ccgtgacccg 4020

gcggtgtggg aggagccgga gaagttcatg ccggagaggt tcgaggacgg cgggtgcgac 4080

ggcaatctct tgatgccgtt cgggatgggg aggcggaggt gccccggcga gacgctggcg 4140

ctgcgcacag tggggttggt gctgggcacg ctgatccagt gcttcgactg ggagagggtc 4200

gacggcgtgg aggtcgacat gactgaaggt ggcgggctca ccatccccaa ggtcgtgccg 4260

ttggaggcca tgtgcaggcc gcgcgacgcc atgggtggtg ttcttcgcga gctcgtctga 4320

atattttttg gcggcgtttg catctccagg acgaactcat gtattgaaag caccaaaagt 4380

aagtagcaaa taagcttctc gtgagcatac acataacaca tgtgagcttg taatgtggaa 4440

taaattacac gtagaggatt tggaagagag tgactgcgct agcaatcgct ctttgagagt 4500

tgtgttttac agttttagtg aggaaccaat ttgtatgaat gtgcaataat catgtataaa 4560

gtataattgt acacgccagg tatttcaatt tcatattgct tgtgtgatgt atgcgttcga 4620

atactataca gtcaacaaaa gagaacaaaa ttactatgag cttatacgac cagtgttcaa 4680

aataatagcc agtcaatggt caataaaaat taaaattaaa aaaaaagtct tacaaattcc 4740

tgattttcta tcgtttgaaa aaaaaaaaca acttcgggat attacacata ttacatattg 4800

atccaataat cgaatatttc aaatactttc ttaacgactt ctaacttggg aggaagggct 4860

ttctgctctt tggctcctgt ccatgcagac aagcagacaa cacaagcaaa aggggaaaaa 4920

agttcattta catccctcaa atatatgtcg agtttcaatt gcgtccctcg atcgcataac 4980

cagatataga gcaccgttga cttgtaaaac cacgtcagct agaaaagcat tcatccaaaa 5040

ccgccaagga ccatactctc tccgtttcag gttttaagac gttttgactt tagtcaaagt 5100

aaaactgttt caattttgac taagtttata gacaaatata gtaacattta taatactaaa 5160

ttagtttaat caaatcaata attgaatata ttttcataat aaatttgtat tgggttgaaa 5220

atgttactac ttttttctac agatttggtc aaacttaaag cagtttaact ttgaccaaag 5280

tcaaaaacat tttataacct gaaacgaagg tagtacttta cactgatttt acatgctacg 5340

gatgctccat atctgatttt tatacttgag ggattcgatt caaacacgat tcttgttgtg 5400

agggacctaa agtgaaccaa gtaaaatgcg ttcatctttt gcatgctttc atgggtcggg 5460

gcctcgggga gagaaacctc cgagccccac ggcccacagg cctaccccgc caattccaat 5520

cgttcggcct agaaatctcc gagccccacg gcccacgtcg gccaccgatg aattgtggcc 5580

ggcgacaacc atctctcatc ccctctcgac ggacgtcatc ggcgttcctt gaccttgtgg 5640

gtccagatcc cctagagttg ggtataactc taccgggtag agttggccaa atctgtgcca 5700

ttcggcatac gtcaagggct gggattaagc cacattaatt tatacttaaa accagtaact 5760

gaccatgcaa caaataaact tacatcaaca gcttgtcacg agatcattgt tactgtataa 5820

ttagcacaaa aaaaattcaa gattcatcta ttatttaaaa aatcatacac attattattg 5880

atatggttcg ttgtttgcat atatgtgaaa gcactatatt gatatacact gactgccgct 5940

ttagagttga tggactatat ctgttgtttg gggaataaca aaacgttgtt ctgttacatt 6000

ttttgggagt gagaacttaa tcaaatcact attatagagc agacacatga aaaaactaag 6060

tcataaccat taatttaagg agttaattta ttaggtgaaa tttcctttaa aaaatttatt 6120

aggttaaatt gatgaggaat gatctcagcc gtagaaaaca atagatagca cagatttgac 6180

taacttcacc cggtagagtt atactcaact tcaacttcag gggatccaga cccgaccttt 6240

gtgctctgct agcaaattaa ccgggggtga ggatttgctc taatccattg atcaatcatc 6300

gacacctcac gttacaaacg tgcacggatt ctttttctga ataaaaccaa gcaactacga 6360

ggccaaaaca tcgtactcca tgatccatcc gatgcagata tccaattatt ggactccatg 6420

acagcatgca ccgatcgctt ccatagacga cgtcacagat ggcgcacgca acactgtagc 6480

actgtaccac agcgatagac tagctctatc taccgctggg gaaagtgatt tcatcgctcg 6540

tgagaataac atctcgtttc gttcatggca tctaaatagt cataaaagtt tt 6592

<210> 9

<211> 772

<212> DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

gcagaaggtg atcctgatca acggcgagtt cccgcgcccg cggatcaact gctcgtccaa 60

caacaacatc gtggtgaacg tgttcaacct gctggacgag ccgctgctct tcacctggaa 120

cgggatgcag caccgcaaga actcgtggca ggacggcctc gccgggacgc agtgccccat 180

cgcgccgggc accaactaca cgtacaagtg gcagcccaag gaccagatcg gcagcttctt 240

ctacttcccg tcgctgggga tgcaccgcgc cgccggcggc tacggcggga tcagcgtcgt 300

cagccgcctg cacgagctgg tgagctagct attacctaat cgatcgatgg tcatcgatca 360

tgagatgatg atgatgagat ttgtacttaa ttgtgatctg tatggatgct gttgttgatc 420

aagttcttgc gatcgatcga tctgaatttt caggtttgag ggcaggcggc tgacgacgct 480

gatcccgccg tagccgccgg cggcgcggtg catccccagc gacgggaagt agaagaagct 540

gccgatctgg tccttgggct gccacttgta cgtgtagttg gtgcccggcg cgatggggca 600

ctgcgtcccg gcgaggccgt cctgccacga gttcttgcgg tgctgcatcc cgttccaggt 660

gaagagcagc ggctcgtcca gcaggttgaa cacgttcacc acgatgttgt tgttggacga 720

gcagttgatc cgcgggcgcg ggaactcgcc gttgatcagg atcaccttct gc 772

<210> 10

<211> 1975

<212> DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

ccaccgactt cgaagcaatc tgtgcgccgg ttggaggtgg cggagcactg gtaccgactc 60

tacaagacgg acaatcaacg ggtaccacaa tccggctcca cctcgacgcg attgcggcaa 120

ccacgaaaac ctcacgctcc aatctgtgcc ctccgcccgt gctcgctgca tctcgtgcca 180

ccgtctcgga ctctcgatcc tcatggcctg aattatccta attcttcgtt accagttttt 240

ttgagactaa tatgactccc atcaaacaat gcagttgaga gtgagttctt acctgtatta 300

tatagtacat tgtatttaaa ccatagtaca tggggacagt ggtgcgttca tcaatttatg 360

gattgtggta ggctggtagc tgtttgattt gtcactaaaa ttgcacgacg acaacacttt 420

ggccctgttt agattctaac ttttttcttc aaacttccaa cttttccgtc acatcgaact 480

tttctacaca cacaaacttc caactttccc gtcaccttca ctttaggttc ctaagtttag 540

gttaccttca ctttaggttc ctaaatttat cactaagtct gaaatttatc cctaaaccaa 600

aataccaggt acaacggatc cctcaatcta caaaactcaa tcacccaaga ttgtagatag 660

tattatgtcc ggttttaact gacgtgtcaa gttgagttaa cgtggaatct atgcgggccc 720

cacatgtaag tggctagtac ttttttccac gttggacgaa accgtctccc aaaccactaa 780

aggaggcgat atgcaccgat tttgatagat gggggagacg ttataccctg ttttattatc 840

aagagatgtg attcaaccag gagcaagagt tgagagagca agaatagact tattcgtgag 900

cccacaggct aaacccgcca cggcccacag actaagcccg ccaactcggg ccgttcggcc 960

cagtttgcac gcatggtggg ccggaaactg gaatctccga accgcaacgg aatcgacgac 1020

atctgtagcc acagcgcgca ctcgacggcg ggcagcttcg tcactggttc gagctgtctg 1080

ctgactcaac gacgaacaca cgtactcctg ctcggtttct tcctccgtgt cgcacaaaag 1140

tcaaattgct ctctattagt attcattatt agcacttcaa acctttcttt acgttttaaa 1200

cgaaccaact aatcaggtta tgaggactat aataatcgaa tccagggatc ttgctggaag 1260

caattgaata atcgcccaac gattgagttc atttcttgtc tccaaagctg tctcctgata 1320

gtcaacaggt ctcggtcctc gcagagtcgc actgcgattt ggcctctgga aactggaaag 1380

agatctcgat ccaccacaag aaaatgccaa gcagcacgac gacgaagacg acaacgcctt 1440

ccaggtacgt agcaattgaa tacggaatac tctctccgtt taaaacgttt gattattttc 1500

ctaatcaaac tttatcatgt ttgaccaaat ttatagaaaa aaataacaac atcttaaata 1560

taaaattagt ataactaaat ctagcattgg atatactttc ataatatttg tttgttttat 1620

gttaaaaata ctactatatt tttctataag cttagtcaaa tttaaatcaa attaaagaag 1680

attaattaga aaaatagcca aacgatttgt aatatgcaac ggagtgagta gaagtaatcg 1740

cccagcctcg ccaacgaggc aacgagaccc gtaatgcaac gatcgcatct gcgtttcagg 1800

cgtcagccat ggcgtctgca gagatgcctg gattgtctcc gcaagatctg atccatttca 1860

tctccttcta gaagcacaag cgccgctcgg tataaaggca gacgcattgt cacaaatagc 1920

tgcagtgcac cagagtcaca gaaacacatc acacattcgt gagctcagct tagcc 1975

<210> 11

<211> 819

<212> DNA

<213>水稻(oryza.sativa l. )

<400> 11

atgggacgca gggcttgctg tgcaaaggaa ggaatgaagc ggggtgcctg gacgtccaag 60

gaggacgatg tcctggcgag ctacattaag tctcacggag agggtaagtg gcgggaggtt 120

ccgcagagag ccggacttcg gagatgcggc aagtcctgtc gccttaggtg gttgaactat 180

ctccgcccaa atatcaagag gggcaacatt gacgatgacg aggaagagct gatcgtgcgg 240

cttcatacgc tcctggggaa tagatggtcc ctgatcgcag gccgccttcc gggaaggacc 300

gataacgaga ttaagaacta ctggaatagt acactctcca ggaagatcgg aacggccgcg 360

accgccgccg ccggctcacg cggcggctcc acccctgata cagccagggc gactgacgcg 420

gcttccagct cttcagtggt cccaccagga cagcaacagc aaccagcaag ccgggcggat 480

actgacaccg caaccgccgc cgccgccgcc gccgccacta caacgactgt ttgggctcct 540

aaggcagtgc ggtgcacgag aggcttcttt ttccacgata gagaaactgc accattggct 600

gctgcggcgc ctgctcccgc aggagagctg ggagacggag atgacgtgga ttgcgactac 660

tattgttctg gttcgagttc cgctgcaacc acaacctcct cctcctccct cccggttgtg 720

gtcgagccat gctttagtgc cggcgatgac tggatggatg acgtccgcgc cttggcgtca 780

ttcctcgaca cagatgacgc ttggaacctg tgtgcgtga 819

<210> 12

<211> 34

<212> DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

ggactcttga ccatgatggg acgcagggct tgct 34

<210> 13

<211> 35

<212> DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

attcgagctg gtcactcacg cacacaggtt ccaag 35

<210> 14

<211> 446

<212> DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

ttacaagctt cgtgcaggag aggacggtac ccacacaatc tgccctgtta accaaatttt 60

ctgtcagcct caggggagag ggtgaaggtg ggccccatac ggaaaactta ccatggcctt 120

aaatttattt gggcgcgccg gaaaactacc tgttcacgtg cacttgtcac tacttggtga 180

cctgttcaat gcttttcgag ctcacccaga tcatatgatc tagacacgac ttcttcaaga 240

ggcctcatgc ctgagggata cctgcaggag tgtatgagta aggtactgtc gacggagaca 300

ccctcgtccc tagggatcga gcttaaggga tttaaatatt tcaaggagga cggaattccg 360

gccacaagtt ggaactagta ctacaactcc cacaagcgct actagcagac cattaggatc 420

ccattgaaga tggaagagat ctggca 446

<210> 15

<211> 38

<212> DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

tgacatgatt acgaattaag cttcgtgcag gagaggac 38

<210> 16

<211> 39

<212> DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

gacggccagt gccaagctag atctcttcca tcttcaatg 39

<210> 17

<211> 5866

<212> DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

ggtcaccgag ctctctagac gaaatgctcg gttatatgtt ttccatgtaa tcgagaaaac 60

aaatacggag taataataca gtaattaaga gtagcaggag gcagccatag attgcagtcg 120

ccctccctat gttccatcac aatatcatga tatgattttc gcggttcatc tccaaactcc 180

agcgaaagct ccgatgcttt cggccggtgc gaatcgccgg tacatgacat ctgatcaacg 240

tgtgcaacgt ttacgtttgg gcctccaaaa tccagccaaa acatggaggt tttttttcac 300

actaatacaa cggcccatga acatctccgg tcctcagttg cttccataac tacaaggcga 360

aattattatt ttttttagaa aattctccat gtacctctaa aattttatcc aatttcttct 420

atatcagcac ttttgaactc attcctttat gtaccccgac ttctagtttg gattccctct 480

ctaacctttt cgtggggtca accgttaaat tcatattaaa aagtccattt ttcctttcag 540

tatagaggaa catatatata tatatatata tatttgtgag tttgttatac gagatattat 600

ttatgacaaa atttatttaa aaatatgata tagaaaataa tatttattta tctgttatta 660

aaaattgttt acgtaggata taaatagatt tgtcttatac tacaatcaaa ataatacagt 720

acttatataa tttttaataa ctaaaaaaat aaatattatt ctttcatgtc atatataaaa 780

ataaatttta tcgtaaataa tatttttcat aacaaataca taaatataaa agtctcgtac 840

aataaatttt tatactccaa taatatactc ataccaaaag gtaaaatgga cttttgatta 900

agaatttaat ggtcaactaa cggaaaagtt atgaaaggga tctaaactaa aatttagaag 960

tatgcaagga aataagcaaa acttagtacc acataagaga ttagacaaag tcttataggt 1020

acataagaaa tttctcttat ttttgggaag caccagtagt gtcgtttgtg gagtcgtagg 1080

tgcatgactc cacccaccat gctttaaatc ctgatgccca cgaatattac gcacatgcat 1140

gtgaactttc aataggactt tagtgagacg ctggtttccg tctctaagag catgtgttag 1200

gagacacatt tgttggggtg tgagtatggt gttacgtgtg tagtggtgtg tgtctgcggt 1260

ataatcttaa aaaaaagttc tcttattttt gtggtgcata atttttgaca tggaagacct 1320

ttttctcgtc acagacaagc accaccgggc accgactgat ttctgaagtc gtcactggtt 1380

gtccctcgtg aatcgtcgtc acctgctaag cccaaatatc cacagaaagt tagtggtatc 1440

aaattatgtt atctccattc gatattttgg gtttatttta agtcaaatat attaagtttg 1500

atcgagtttg tagaaaaacg tagcaacatc tataacatca aattagtttt attgaatcca 1560

cgattgaata tgttttatag tatatttgtt atgtgttaaa aatattgcta tattttttta 1620

taaattttag tttgacttat gacaaatcca aaatgtttta caatatacgc gtatgacaat 1680

ctttgaggtg taggagatta aattctttgc atttgattgt ttatacatct agttttgtca 1740

catgaaataa cacacagttc tgattttcaa agaaaaaaag taacagataa ttctgatgtg 1800

catacatgga aggttctctt ctgaaagccc ttagaaagat tgtggttcac caaacaaggt 1860

gcagaaaaaa aacaagaaca caacagtata tatatataac aaagtaggca tgctcttggt 1920

tggttactac tggttctgtt tctcatgctc atccatgcat ttcttgctac ctgattaaaa 1980

ggagagaagg gcagtctgct tggcgctctc tctctgaacc tgtcactctt tttttctgtg 2040

tctcttggag gagatgatgg agatcagcag caatgaggag atgatggaga tggccattgt 2100

tgagcagctg cctccttcct ctcatcatct caatggtggc agtgttgagg ttgacatgga 2160

ggaggatcat gtgtggccaa ccaaagatgg ccctctccct atattcctta aggtgtgtat 2220

atctatctct tcttccattt ttcggtatgc gcgaaaacag atcaagttta tccttgttga 2280

tgttcaagaa agtgttttaa tccctcgttt atggttatga aaaattatga aaacaataaa 2340

tagattatcc ctataatctt ttataggtaa gtggatacat atgtgcatgt ttgtaggtat 2400

gtgaaaagat taatcagaat gcttacacat gttgatgttc tccctatgta gtgtgtgtat 2460

atatgtgcat gtttgatgtt tgtagcaact gaacaattta gttctactaa gcagagtttg 2520

aaaaagatcg atattactac caggatttat taagatacta aaggttttac cgtgattaat 2580

catgaaatca tgaaaaaaag tttgtattaa ttatttctta tgcattttat agagtctaat 2640

tttgaactca gagatgcaaa aaatgccaaa caaaggaaac gacctgaaat agacatactt 2700

aaggagggaa ggtacaagtt agttggttgg caatttgcat gtctcattgc tcaacagttt 2760

cttatctaat tgcaaaaact tcttgcatgg tgtttttact tctttggcat gcaatatagc 2820

taacaaaaaa ggagcaaatt cctggtctaa atttttgctt gatatataaa tatttttttt 2880

tggaaagtgc agttcgagaa cgtcgagtac aaggtgaagt tgacaccaaa gaacccactg 2940

acagccgccc gggtcgcgtt cgcgtcacat aagtcaaccg aggatcaggg ctcatgcaag 3000

catattctta agggcattgg gggctccgtg gaccctgggg agattttggc ccttatgggg 3060

ccgtctgggt caggcaagac cacgctgctg aagatcctcg ggggcagact gtctggcggc 3120

gttaagggcc agatcaccta caacgataca ccgtactctc cgtgcctcaa gcgcagaatc 3180

ggcttcgtga cccaggacga tgtgcttttc ccacagctta cggtcgagga gaccctcgtt 3240

ttcgccgcgt ttcttcgctt gcctgccaga atgtcaaagc agcagaagcg cgatagagtg 3300

gatgcgatta ttaccgagct gaaccttgaa aggtgcaggc atacaaagat tgggggcgcg 3360

ttcgttagag gcgtgtctgg cggcgagcgc aagcggacgt ctatcggcta cgagattttg 3420

gttgatccat cacttctttt gttggatgag ccaacatctg ggctcgactc aacatcagcc 3480

gccaagctcc tcgtggtgct cagacgcctc gcccggtcag ccgcccggag aacagtgatc 3540

acaacaatcc accagccatc atctaggatg ttccatatgt tcgataagct cttgctggtt 3600

gccgagggcc acgcgattta ccacggcggc gccagaggct gcatgagaca tttcgccgcc 3660

cttggcttct cacctggcat tgccatgaac cctgcggagt tccttttgga tctcgcgacc 3720

gggaacttgg atggcattag ctctccagcg tcactgttgc tcccgtctgc ggccgcggcg 3780

tcccctgata gcccggagtt ccggtcccac gttattaagt acctccaggc cagacatcgc 3840

gccgccgggg aggaggaggc cgccgcggcc gccgcgagag agggcggggg cgggggcggc 3900

gccggcaggg acgaggccgc caagcagctt agaatggccg ttagaatgcg caaggataga 3960

agaggcggga ttgggtggct tgagcagttc acggtgttga gtagacgcac attcagggag 4020

agagccgcgg actacctgga taagatgaga cttgcccagt cagtcggggt tgcgctgctg 4080

ttgggcctct tgtggtggaa gtcacagaca tctaacgagg cgcagctcag ggaccaggtc 4140

gggttgattt tctacatttg catcttctgg acctcatcgt cgctcttcgg ctcagtgtac 4200

gttttcccat tcgagaaact ctacctggtg aaggagcgca aggccgatat gtacagactc 4260

tctgcgtact acgcgtcttc aacggtgtgc gacgcggtcc cacacgtagt ttaccctgtt 4320

ttgttcacag cgatccttta cttcatggcc gatcttagac gcacggtccc gtgcttctgc 4380

ctgacacttc ttgcgacact ccttattgtg ctgacatcgc agggcaccgg ggagttgctc 4440

ggcgccgcga ttctgtccgt taagagagcc ggggttatgg cctcactcgt gcttatgctg 4500

ttccttttga caggcggcta ctacgtccag catatcccta agttcattag gtggttgaag 4560

tacgtgtcat tcatgcacta cgggttcaac cttctcctga aggcccagta tcacgggcac 4620

ttgacataca actgcgggtc taggggcggg tgccaaaggt tgcagtcgtc tccatctttc 4680

ggcacagttg atctcgacgg cggcatgagg gaggtttgga ttctcctcgc gatggcggtc 4740

gcctacagac tccttgcgta cttgtgcctt agaaagagaa ttagcctgat gccactgtga 4800

tccatcgatc tgtcagatca ggatcagttg gttcggggaa gaagacgact gatgtggtag 4860

tgaattgcaa ttgcgattga tgatggtgaa tgggccattg ttggtttggg tgctgtgaat 4920

tgtttcaaac ttgagttctt ttctttattt gagaagtatt tgaggcttgt ctgcttagca 4980

agttgggaaa taatcaaccc catcatttta gcattcagct tgtaagcata agcgaagatt 5040

tatttaaaac ttatttttaa agttaatttt aggtatcttt tcgtagttta ttttctagca 5100

tttacttttt aatttgctga gcatgtatat taaagtttta cgtataattt tttttaaaat 5160

tattaataag ttgtttgtat aagcgattag tctgtctcgt cgtcgtgaca aaaagaaaaa 5220

ccgatgagat ggttgggagc cgattaaggt tattgttttc ctcgaaaaga gaaggtggag 5280

gggatggggt gaatttaact ctccctgcaa aaccattttt ggctttgaac tcaaaatttc 5340

tcattttccg tttgtaatgg acatagtagt atgttctcct cagtgccttt gccctattag 5400

gcccaaatct cctgcccgca aaaaatgggc tgacaacgtc acgaaccacg aaccgcgccg 5460

taaatgggcc aaaaatacca aggcccaaat cctacagagc ccaaagtaga gggccataat 5520

atgggcctag aaattcaacg gcccgctcca atgagaagtg gactcggagc gggattcccc 5580

caccaaatcc gtttcgacct cagaaaatac gcctccgatc aggcgtttac gcacactact 5640

aatattgacg agaaagccac ctcctctctc tcgctcgctc cgctcttctt gacaaggaag 5700

caaaagccgc cgccgccgac gccgacgaga gaggagagag agatcgccgc cgacgtcgca 5760

ggagggggag ggggagatgg cggcggaggg ggaggacgcg gcggccgcgc gacgccgcgc 5820

ggcggccacc gactacagga agaagctcct cacctgcagg gtcgac 5866

<210> 18

<211> 3037

<212> DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400> 18

ttacactagt ccaccgactt cgaagcaatc tgtgcgccgg ttggaggtgg cggagcactg 60

gtaccgactc tacaagacgg acaatcaacg ggtaccacaa tccggctcca cctcgacgcg 120

attgcggcaa ccacgaaaac ctcacgctcc aatctgtgcc ctccgcccgt gctcgctgca 180

tctcgtgcca ccgtctcgga ctctcgatcc tcatggcctg aattatccta attcttcgtt 240

accagttttt ttgagactaa tatgactccc atcaaacaat gcagttgaga gtgagttctt 300

acctgtatta tatagtacat tgtatttaaa ccatagtaca tggggacagt ggtgcgttca 360

tcaatttatg gattgtggta ggctggtagc tgtttgattt gtcactaaaa ttgcacgacg 420

acaacacttt ggccctgttt agattctaac ttttttcttc aaacttccaa cttttccgtc 480

acatcgaact tttctacaca cacaaacttc caactttccc gtcaccttca ctttaggttc 540

ctaagtttag gttaccttca ctttaggttc ctaaatttat cactaagtct gaaatttatc 600

cctaaaccaa aataccaggt acaacggatc cctcaatcta caaaactcaa tcacccaaga 660

ttgtagatag tattatgtcc ggttttaact gacgtgtcaa gttgagttaa cgtggaatct 720

atgcgggccc cacatgtaag tggctagtac ttttttccac gttggacgaa accgtctccc 780

aaaccactaa aggaggcgat atgcaccgat tttgatagat gggggagacg ttataccctg 840

ttttattatc aagagatgtg attcaaccag gagcaagagt tgagagagca agaatagact 900

tattcgtgag cccacaggct aaacccgcca cggcccacag actaagcccg ccaactcggg 960

ccgttcggcc cagtttgcac gcatggtggg ccggaaactg gaatctccga accgcaacgg 1020

aatcgacgac atctgtagcc acagcgcgca ctcgacggcg ggcagcttcg tcactggttc 1080

gagctgtctg ctgactcaac gacgaacaca cgtactcctg ctcggtttct tcctccgtgt 1140

cgcacaaaag tcaaattgct ctctattagt attcattatt agcacttcaa acctttcttt 1200

acgttttaaa cgaaccaact aatcaggtta tgaggactat aataatcgaa tccagggatc 1260

ttgctggaag caattgaata atcgcccaac gattgagttc atttcttgtc tccaaagctg 1320

tctcctgata gtcaacaggt ctcggtcctc gcagagtcgc actgcgattt ggcctctgga 1380

aactggaaag agatctcgat ccaccacaag aaaatgccaa gcagcacgac gacgaagacg 1440

acaacgcctt ccaggtacgt agcaattgaa tacggaatac tctctccgtt taaaacgttt 1500

gattattttc ctaatcaaac tttatcatgt ttgaccaaat ttatagaaaa aaataacaac 1560

atcttaaata taaaattagt ataactaaat ctagcattgg atatactttc ataatatttg 1620

tttgttttat gttaaaaata ctactatatt tttctataag cttagtcaaa tttaaatcaa 1680

attaaagaag attaattaga aaaatagcca aacgatttgt aatatgcaac ggagtgagta 1740

gaagtaatcg cccagcctcg ccaacgaggc aacgagaccc gtaatgcaac gatcgcatct 1800

gcgtttcagg cgtcagccat ggcgtctgca gagatgcctg gattgtctcc gcaagatctg 1860

atccatttca tctccttcta gaagcacaag cgccgctcgg tataaaggca gacgcattgt 1920

cacaaatagc tgcagtgcac cagagtcaca gaaacacatc acacattcgt gagctcagct 1980

tagccgcaga aggtgatcct gatcaacggc gagttcccgc gcccgcggat caactgctcg 2040

tccaacaaca acatcgtggt gaacgtgttc aacctgctgg acgagccgct gctcttcacc 2100

tggaacggga tgcagcaccg caagaactcg tggcaggacg gcctcgccgg gacgcagtgc 2160

cccatcgcgc cgggcaccaa ctacacgtac aagtggcagc ccaaggacca gatcggcagc 2220

ttcttctact tcccgtcgct ggggatgcac cgcgccgccg gcggctacgg cgggatcagc 2280

gtcgtcagcc gcctgcacga gctggtgagc tagctattac ctaatcgatc gatggtcatc 2340

gatcatgaga tgatgatgat gagatttgta cttaattgtg atctgtatgg atgctgttgt 2400

tgatcaagtt cttgcgatcg atcgatctga attttcaggt ttgagggcag gcggctgacg 2460

acgctgatcc cgccgtagcc gccggcggcg cggtgcatcc ccagcgacgg gaagtagaag 2520

aagctgccga tctggtcctt gggctgccac ttgtacgtgt agttggtgcc cggcgcgatg 2580

gggcactgcg tcccggcgag gccgtcctgc cacgagttct tgcggtgctg catcccgttc 2640

caggtgaaga gcagcggctc gtccagcagg ttgaacacgt tcaccacgat gttgttgttg 2700

gacgagcagt tgatccgcgg gcgcgggaac tcgccgttga tcaggatcac cttctgcgct 2760

cgaatttccc cgatcgttca aacatttggc aataaagttt cttaagattg aatcctgttg 2820

ccggtcttgc gatgattatc atataatttc tgttgaatta cgttaagcat gtaataatta 2880

acatgtaatg catgacgtta tttatgagat gggtttttat gattagagtc ccgcaattat 2940

acatttaata cgcgatagaa aacaaaatat agcgcgcaaa ctaggataaa ttatcgcgcg 3000

cggtgtcatc tatgttacta gatcggggga tccggca 3037

<210> 19

<211> 311

<212> DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400> 19

gcaggcggct gacgacgctg atcccgccgt agccgccggc ggcgcggtgc atccccagcg 60

acgggaagta gaagaagctg ccgatctggt ccttgggctg ccacttgtac gtgtagttgg 120

tgcccggcgc gatggggcac tgcgtcccgg cgaggccgtc ctgccacgag ttcttgcggt 180

gctgcatccc gttccaggtg aagagcagcg gctcgtccag ctggttgaac acgttcacca 240

cgatgttgtt gttggacgag cagttgatcc gcgggcccgg gaactcgccg ttgatcagga 300

tcaccttctg c 311

<210> 20

<211> 2949

<212> DNA

<213>人工序列(Artificial Sequence)

<400> 20

ttacgtcgac gtcccatgtc accgacagta ctaaatgggt aaagattgga taaagtatat 60

ggggtatttg tgaggtatta ttagaaaact tcgtgtggtt ttgatggacc tgttttatgt 120

gttgaaaata tgaatggtta tagggtgtgt ttgcaagtgc aggatgggaa ctcatccctc 180

ctgcacgcaa aacggagcgg ctttttaaca catgattaat taaatattag ctaatttttt 240

taaaaaaaat ggattaattt gattttttta agcaactttc atatagaaat tttttgcaaa 300

aaacacaccg tttaatagtt taaaaacgtg cgcgcgaaaa acgagggaga ggggttggga 360

acatgggttt gcaaacacaa ccatagtatt ggcgattcct tttcgtttga gtaaatttta 420

caaaactaca ggtattttga ccaaattatc acaaaactac agatttaagg agttgtatca 480

taaaactaca catttagcat caaatttatc acaaaactgc agattttagg ttaagtatca 540

caaaaataca tatttaatat tgaacttatc acaaaactat aacttttgga gtttaaatcc 600

ctagcaccat tgttatggtg gagctataaa cattattact ttgtgattaa attggttcta 660

aacctttagt tttatgataa tttagtaact aaacgtgtag ttttgtaaca cttcatcttt 720

aatatgtagt tttgtgctaa atttggtgct aaatgtgtaa ttttgtgata taattcctta 780

aatatgtagt tttgtgatag tttggttata atatctgtag ttttatgaaa tttactcttt 840

tcgttttcac tgcaatttgg aatgatggaa ttgactagat ccggcattac cgatgggctg 900

ccgaacgctg tgatgcggtt gatcttgagc gatccgggac gccacaagca ccgatgggtt 960

ctgggagttc atacggctgg tgcagcagtg tgtcaatagc agccgggatg tgcgcccaac 1020

catggtcgcc gtcgagagga ggatcgaaga catcctgaac tcggttgtca ggtcatccac 1080

caccgggttc atgactgccg gaggcgacac acccagcaac gagccaaatc gtgaagataa 1140

cggaaacgag ccaaatccca gcaacgagat cgccagggac tagtagtacg tacagcagtg 1200

gtgatttgtc atataggtgt atatcggctg ttttcgcatc tcaaggcctc aagcagtgtg 1260

tgcaatctgg agtagtatat aaatatgtaa aatgttcatt tcgatatact gtcaaatgcg 1320

tgtaaattaa ccaatgctaa aacaacacac tgtgactaaa tttactgagt tggatgatga 1380

ggatgattat gttgcgtgca cacctgatca ggaggacata taatataggc catttgggcc 1440

gtcttggaca ccaccgtttg atttgtatga agttgggccg aactatgcaa gcccagaggc 1500

gctgcctctg tgccacggcc cacgggcatc gctggatggt caagcaggtg atcggtggag 1560

cgccaatggc ggcggcgaga cacacagcgc ggcgcgcgcg cgaacgtgcg gacgcgcgcg 1620

ccccggccac ggccgccgcg ctcgtctcct ggcctcccgc gcccgctaca aatggcggcc 1680

ccggcgtccc ctcctcactc cgaagcttcc cggttgacga cctctccggt ctcccccctc 1740

accccaccgc aacccgggac gtcttccatg gccgccgccg ccgccgcccc cgcctactaa 1800

accaccctac ccaccccctc caaactccca cacattacat ccttcaaaga gagcatcaca 1860

cacacacaca caccagccta gcgatcacat ttccacggca gaaggtgatc ctgatcaacg 1920

gcgagttccc gggcccgcgg atcaactgct cgtccaacaa caacatcgtg gtgaacgtgt 1980

tcaaccagct ggacgagccg ctgctcttca cctggaacgg gatgcagcac cgcaagaact 2040

cgtggcagga cggcctcgcc gggacgcagt gccccatcgc gccgggcacc aactacacgt 2100

acaagtggca gcccaaggac cagatcggca gcttcttcta cttcccgtcg ctggggatgc 2160

accgcgccgc cggcggctac ggcgggatca gcgtcgtcag ccgcctgcac gagctggtga 2220

gctagctatt acctaatcga tcgatggtca tcgatcatga gatgatgatg atgagatttg 2280

tacttaattg tgatctgtat ggatgctgtt gttgatcaag ttcttgcgat cgatcgatct 2340

gaattttcag gtttgagggc aggcggctga cgacgctgat cccgccgtag ccgccggcgg 2400

cgcggtgcat ccccagcgac gggaagtaga agaagctgcc gatctggtcc ttgggctgcc 2460

acttgtacgt gtagttggtg cccggcgcga tggggcactg cgtcccggcg aggccgtcct 2520

gccacgagtt cttgcggtgc tgcatcccgt tccaggtgaa gagcagcggc tcgtccagct 2580

ggttgaacac gttcaccacg atgttgttgt tggacgagca gttgatccgc gggcccggga 2640

actcgccgtt gatcaggatc accttctgcg ctcgaatttc cccgatcgtt caaacatttg 2700

gcaataaagt ttcttaagat tgaatcctgt tgccggtctt gcgatgatta tcatataatt 2760

tctgttgaat tacgttaagc atgtaataat taacatgtaa tgcatgacgt tatttatgag 2820

atgggttttt atgattagag tcccgcaatt atacatttaa tacgcgatag aaaacaaaat 2880

atagcgcgca aactaggata aattatcgcg cgcggtgtca tctatgttac tagatcgggg 2940

aattcggca 2949

Claims (7)

1.一种繁殖孢子体隐性雄性核不育的方法，其特征在于：将孢子体雄性可育基因Y，内源性配子体雄性可育基因下调表达元件Xi，除草剂A抗性基因A ^R ，除草剂B抗性基因下调元件Bi和花青素基因C或其下调元件Ci连锁转入所述孢子体可育基因Y的不育突变体，用阳性株给不育株授粉以繁殖孢子体核不育系；所述花青素基因C为色素表达相关基因OsMYB76R；所述OsMYB76R基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

2.根据权利要求1所述繁殖孢子体隐性雄性核不育的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）构建同时含有除草剂A抗性基因A ^R 、除草剂B抗性基因下调元件Bi、孢子体雄性可育基因Y、内源性配子体雄性可育基因下调元件Xi和花青素基因C或其下调表达元件Ci的载体pA ^R -Xi-Y-Bi-C/Ci，转入孢子体可育基因Y的不育突变体，获得孢子体雄性可育的转基因植株；

（2）（2）将雄性可育转基因植株进行自交，收获自交种子后分成两份，分别喷施除草剂A和除草剂B，将抗除草剂A的植株作为父本与抗除草剂B的植株作为母本进行杂交，收获杂交种子获得不育系；也可根据花青素颜色有无，选出有色的植株为父本给无色的植株授粉，收获杂交种子得到不育系。

3.根据权利要求1所述繁殖孢子体隐性雄性核不育的方法，其特征在于：所述除草剂A抗性基因为抗Basta的Bar基因；所述除草剂B抗性基因为抗苯达松的Bel基因，下调元件为Bel基因的干涉序列；所述孢子体雄性可育基因为水稻花粉发育必须基因OsABCG15基因；所述孢子体可育基因Y的不育突变体为以OsABCG15基因自然产生的雄性不育突变体为不育供体，中九B为轮回亲本，经回交产生的孢子体不育材料中九B-osabcg15；所述内源性配子体雄性可育基因下调元件为配子体雄性不育相关基因OsPTD1基因的干涉序列；花青素基因C为色素表达相关基因OsMYB76R。

4.根据权利要求3所述繁殖孢子体隐性雄性核不育的方法，其特征在于：所述Bar基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述OsABCG15基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示；所述除草剂B抗性基因的干扰序列如SEQ ID NO.18所示；所述OsPTD1基因干扰序列如SEQID NO.20所示；所述OsMYB76R基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

5.根据权要求2~3任一项所述繁殖孢子体隐性雄性核不育的方法，其特征在于：包括不育系的繁殖，具体方法如下：将雄性可育转基因植株的自交种子分成两份，分别喷施Basta和苯达松，将抗Basta的植株作为父本与抗苯达松的植株作为母本进行杂交，收获杂交种子获得不育系。

6.根据权要求2~3任一项所述繁殖孢子体隐性雄性核不育的方法，其特征在于：还包括不育系纯度鉴定和纯度提升，具体方法如下：将不育系播种后，根据花青素颜色有无，调查无色株的比率即可获得不育系纯度，如果纯度不达标，喷施除草剂B杀死有色，不抗除草剂的杂株，即可获得不育株率为100%的不育系。

7.根据权要求2~3任一项所述繁殖孢子体隐性雄性核不育的方法，其特征在于：还包括保持系繁殖，具体为收集杂交父本自交种子，播种后选出有色株或喷施除草剂A后存活下来的植株即为保持系。

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