CN112175856B - 用于枯草芽孢杆菌发酵的固体培养基以及枯草芽孢杆菌固体菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

用于枯草芽孢杆菌发酵的固体培养基以及枯草芽孢杆菌固体菌剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物菌剂领域，公开了一种用于枯草芽孢杆菌发酵的固体培养基以及枯草芽孢杆菌固体菌剂及其制备方法和应用。其中，所述用于枯草芽孢杆菌发酵的固体培养基，其制备原料包括淀粉质原料粉碎产物、淀粉渣、淀粉质原料种皮和酵母浸粉。本发明中还提供了所述枯草芽孢杆菌固体菌剂的制备方法，该方法包括：将枯草芽孢杆菌菌种接种到上述固体培养基上进行发酵。使用本发明所述的用于枯草芽孢杆菌发酵的固体培养基通过固态发酵的方法生产枯草芽孢杆菌固体菌剂，制备得到的枯草芽孢杆菌固体菌剂菌体粗壮、染菌率低，混合均匀度变异系数小于5％；还使菌剂制备流程简化，减少了设备和能耗，大大减少了废水的产生，从而减少了环境负担。

Description

用于枯草芽孢杆菌发酵的固体培养基以及枯草芽孢杆菌固体 菌剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及微生物菌剂领域，具体地涉及一种用于枯草芽孢杆菌发酵的固体培养基以及枯草芽孢杆菌固体菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
枯草芽孢杆菌菌体能自身合成消化性酶类，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等；全日粮在发酵与储存期间，产生的酶系能使纤维、淀粉、蛋白质降解为更易被动物吸收利用的小分子物质，提高饲料的转化速率与转化率。枯草芽孢杆菌在消化道中与内源酶共同发挥作用，提高饲料消化率。在动物肠道内生长繁殖，能产生多种营养物质如维生素、氨基酸、有机酸、促生长因子等，参与动物机体的新陈代谢，为动物机体提供营养物质。
随着发酵饲料应用范围的普及，发酵饲料产量的提升迫在眉睫，而液态种子液的制备是制约产量的一个关键因素；液态种子液制备工艺复杂、保存周期短；因此，固体菌剂应用于发酵饲料，是一个突破性的进展，能解决设备、技术、人力等方向的限制，是稳定和提升产品质量和提高产量的重要因素。
目前，枯草芽孢杆菌固体菌剂的制备，通常是液态发酵、收集菌体、添加载体、烘干等步骤，该操作流程和使用设备复杂，生产过程产生大量废水，得到的产品易染菌、产品不均匀、混合变异系数高等问题。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的上述问题，提供一种用于枯草芽孢杆菌发酵的固体培养基及采用该固体培养基制备枯草芽孢杆菌固体菌剂的方法，实现操作过程少，基本不产生废水，降低产品染菌率，提升产品质量，节约设备和成本；制备的菌剂益生菌的混合均匀度变异系数小于5％的目的。
为了实现上述目的，本发明一方面提供一种用于枯草芽孢杆菌发酵的固体培养基，所述固体培养基的制备原料包括淀粉质原料粉碎产物、淀粉渣、淀粉质原料种皮和酵母浸粉。
本发明第二方面提供一种枯草芽孢杆菌固体菌剂的制备方法，该方法包括：将枯草芽孢杆菌菌种接种到上述固体培养基中进行发酵。
优选地，所述接种的方法包括：将所述枯草芽孢杆菌菌种与水混合得到接种液，然后将所述接种液与所述固体培养基进行混合，得到混合物料。
优选地，采取喷淋的方式将所述接种液与所述固体培养基混合。
本发明第三方面提供如上所述的枯草芽孢杆菌固体菌剂的制备方法制备的枯草芽孢杆菌固体菌剂。
本发明第四方面提供如上所述的枯草芽孢杆菌固体菌剂在制备动物饲料中的应用。
通过上述技术方案，使用本发明所述的用于枯草芽孢杆菌发酵的固体培养基通过固态发酵的方法生产枯草芽孢杆菌固体菌剂，使得菌剂制备流程简化，减少了设备和能耗，大大减少了废水的产生，从而减少了环境负担。本发明制备得到的枯草芽孢杆菌固体菌剂菌体粗壮、染菌率低，混合均匀度变异系数小于5％。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
在本发明中，淀粉质原料粉碎产物是指淀粉质原料直接粉碎得到的产物，比如含淀粉的种子或根茎粉碎后的产物。例如，玉米粉是指将玉米种粒直接粉碎得到的产物，红薯粉是指红薯根茎将直接粉碎得到的产物。
在本发明中，淀粉渣是指淀粉质原料生产淀粉过程中得到的副产品或下脚料。例如，玉米渣是指玉米淀粉生产过程中得到的副产品或下脚料。
在本发明中，淀粉质原料种皮是指淀粉质原料的种皮部分。具体的，以玉米皮为例，玉米皮的制备方法为玉米经过浸泡、破碎后分离出来的玉米皮。
第一方面，本发明提供了一种用于枯草芽孢杆菌发酵的固体培养基，其中，所述固体培养基的制备原料包括淀粉质原料粉碎产物、淀粉渣、淀粉质原料种皮和酵母浸粉。
在本发明中，所述淀粉质原料粉碎产物、淀粉渣、淀粉质原料种皮和酵母浸粉的质量比可以在较宽的范围内进行选择。优选地，在所述固体培养基的制备原料中，以干物质计，所述淀粉质原料粉碎产物、淀粉渣、淀粉质原料种皮和酵母浸粉的质量比可以为(25-35)：(15-25)：(5-15)：(1-5)；进一步优选地，所述淀粉质原料粉碎产物、淀粉渣、淀粉质原料种皮和酵母浸粉的质量比可以为(28-32)：(18-22)：(8-13)：(1.5-4)。
在本发明中，所述淀粉质原料粉碎产物的来源可以不受特别的限制，比如可以源自水稻、小麦、大麦、玉米、红薯、马铃薯及它们的组合中的一种或多种，优选为玉米。
在本发明中，所述淀粉渣的来源可以不受特别的限制，比如可以源自水稻、小麦、大麦、玉米、红薯、马铃薯及它们的组合中的一种或多种，优选为玉米。
在本发明中，所述淀粉质原料种皮的来源可以不受特别的限制，比如可以源自水稻、小麦、大麦、玉米及它们的组合中的一种或多种，优选为玉米。
本发明的发明人发现，当所述固体培养基组成为玉米粉、玉米淀粉渣、玉米皮和酵母浸粉，并使用该固体培养基进行固态发酵时，有助于菌体的生长，具体的，生长速度快，菌体更为粗壮，染菌率更低，最终获得的菌体密度更大。
在本发明中，所述固体培养基还可以包含水，所述水的加入形式无限制，例如，可以直接加入固体培养基中，可以与枯草芽孢杆菌菌体混合后加入固体培养基中，也可以是两种方法的结合。当所述水直接加入固体培养基中时，所述水可以为无菌水或有菌水；当所述水与枯草芽孢杆菌菌体混合时，所述水为无菌水。所述水的添加量以固体培养基湿润的程度为准，具体的，相对于100重量份的固体培养基，所述水可以为20-40重量份。
在本发明中，所述固体培养基的制备方法不受特别的限制，可以使用本领域常规的方法制备。优选地，将所述固体培养基的各组分均匀混合在一起，各组分的加入顺序并没有特别的限定，可含水或不含水，然后进行灭菌处理。在本发明中，所述固体培养基可采用本领域常规的手段进行灭菌或杀菌处理，例如，可以为干热灭菌、臭氧灭菌、湿热灭菌、辐照灭菌、超高压灭菌、微波灭菌等等。灭菌结束后，待固体培养基达到可接种的情况，将枯草芽孢杆菌菌种接种到固体培养基内。以湿热灭菌为例，可在灭菌后待温度降低至室温后接种。
第二方面，本发明提供了一种枯草芽孢杆菌固体菌剂的制备方法，该方法包括：将枯草芽孢杆菌菌种接种到如上所述的固体培养基上进行发酵。
在本发明中，可以采用本领域常规的技术手段进行接种。优选地，所述接种的方法可以包括：将所述枯草芽孢杆菌菌种与水混合得到接种液，然后将所述接种液与所述固体培养基进行混合，得到混合物料。优选地，采取喷淋的方式将所述接种液与所述固体培养基混合。
在本发明中，所述发酵可以在本领域常规使用的容器中进行，例如，可以为发酵车、发酵罐、发酵槽、呼吸袋。
在本发明中，相对于每克固体培养基，所述枯草芽孢杆菌的接种量可以在较宽的范围内选择，优选为1×105-1×109cfu，进一步优选为1×106-1× 108cfu。
在本发明中，所述枯草芽孢杆菌菌种可以采用本领域常规技术手段获得，例如，可以是液态发酵获得的种子液，可以为从种子液中收集的菌体，也可以为收集的菌体稀释到一定浓度得到的菌悬液。
在本发明中，发酵过程的条件，比如发酵温度等可以不受特别的限制，可以在本领域常规的条件内选择。优选地，在所述发酵过程中，发酵的温度为28-38℃，进一步优选为30-35℃。发酵的时间优选以物料中的枯草芽孢杆菌芽孢率达到95％以上时为发酵终点。其中，芽孢率可以通过取样镜检计数测定。优选地，在所述发酵的过程中，对物料进行搅拌或翻料处理。
在本发明中，所述方法还可以包括对发酵产物进行干燥处理，所述干燥处理可采用本领域常规的技术手段。优选地，所述干燥的温度为80-105℃，优选为90-100℃；所述干燥的时间为1-30min，优选为10min-20min。可以对发酵产物进行单次或多次干燥处理，便于发酵产物的粉碎。
在本发明中，所述方法还可以包括对干燥后的发酵产物进行粉碎处理，所述粉碎处理可采用本领域常规的技术手段，例如可以用固体粉碎机进行粉碎。可以根据需要，对发酵产物进行单次或多次粉碎处理。优选地，经过所述干燥、粉碎处理后，发酵产物的粒径小于2mm，更优选为0.001-1mm。
在本发明中，为了得到更加均一的发酵产物，还可以对粉碎后物料进行过筛，然后将筛上物再次粉碎后以得到预期的粒径，之后将再次粉碎的筛上物粉与筛下物混合。其中，筛上物是指过筛后在筛子里发酵产物，筛下物是指过筛后因粒径小于筛孔而被筛下的发酵产物。所述筛子的孔径的选择以使筛下物能够达到预期的粒径为准，比如，可以为10-200目。所述过筛处理可以与干燥、粉碎等步骤结合，可以单次或多次进行，以达到混合均匀度变异系数较低的水平。
第三方面，本发明提供一种如上所述的方法制备的枯草芽孢杆菌固体菌剂。
第四方面，本发明提供了如上所述的枯草芽孢杆菌固体菌剂在制备动物饲料中的应用。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
以下实施例和对比例中：
液体培养基中含有：1重量％蛋白胨，1重量％酵母浸粉，1重量％氯化钠，0.5重量％葡萄糖；调节pH至7.2±0.2。
有效活菌数是指料液中枯草芽孢杆菌数量，包括营养体和芽孢体，测定方法为：参照GBT 26428-2010饲用微生物制剂中枯草芽孢杆菌的检测，测定过程中稀释液不进行水浴，测定营养体与芽孢体总数。
杂菌率是指枯草芽孢杆菌固体菌剂中杂菌数占总菌数的百分比，其中除了目标菌以外的菌均视为杂菌。
保质期是指枯草芽孢杆菌菌剂在一定条件下放置，其有效活菌数仍符合标准要求的时间。在本发明的实施例中，以有效活菌数在200亿以上时为符合标准，即在保质期内。
混合均匀度：用变异系数CV％来表示，CV％＝标准差÷平均值×100％。
每一批饲料至少抽取10个有代表性的样品，每个样品测定枯草芽孢杆菌有效活菌数，计数分别为X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10，计算其平均值X、标准差S。
枯草芽孢杆菌获自安徽农业大学生命科学学院，编号为951NA4。
制备例1
本制备例用于制备下述实施例中使用的枯草芽孢杆菌种子液
将上述液体培养基在121℃下灭菌15min，冷却至室温。将2体积％的枯草芽孢杆菌菌液接入到200mL上述灭菌后的液体培养基中，在30℃， 100rpm培养18h，获得种子液。
其中，种子液的活菌数为2×1010cfu/mL。
实施例1
本实施例用于说明本发明的枯草芽孢杆菌固体菌剂的制备方法
取300g玉米粉、200g玉米淀粉渣、100g玉米皮、20g酵母浸粉，混合均匀，紫外灯(40w)灭菌10min；取50ml稀释后的种子液，加入330ml 水，混合均匀后喷入固体培养基，并混合均匀，使混合后的物料中活菌数为 1×108cfu/g；发酵起始物料自由装入发酵桶，表面覆盖滤布，放入35℃恒温培养箱发酵。发酵过程中，对物料进行搅拌处理。
对物料进行镜检，芽孢率在95％以上为发酵结束，记录发酵天数。
将物料在100℃烘干、粉碎，过80目筛，并对筛上物重复烘干、粉碎、过筛步骤，最终所有物料菌通过80目筛，得到固体菌剂。
测定固体菌剂的有效活菌数、杂菌率、混合均匀度变异系数(CV)和保质期，结果见表1。
实施例2
本实施例用于说明本发明的枯草芽孢杆菌固体菌剂的制备方法
取280g玉米粉、220g玉米淀粉渣、80g玉米皮、40g酵母浸粉，混合均匀，121℃湿热灭菌20min；取50ml稀释后的种子液，加入330ml水，混合均匀后喷入固体培养基，并混合均匀，使混合后的物料中活菌数为1× 107cfu/g；发酵起始物料自由装入发酵桶，表面覆盖滤布，放入32℃恒温培养箱发酵。发酵过程中，对物料进行搅拌处理。
对物料进行镜检，芽孢率在95％以上为发酵结束，记录发酵天数。
将物料在80℃烘干，过20目筛，并对筛上物重复烘干、粉碎、过筛步骤，最终所有物料菌通过20目筛，得到固体菌剂。
测定固体菌剂的有效活菌数、杂菌率、混合均匀度变异系数(CV)和保质期，结果见表1。
实施例3
本实施例用于说明本发明的枯草芽孢杆菌固体菌剂的制备方法
取320g玉米粉、180g玉米淀粉渣、130g玉米皮、15g酵母浸粉，混合均匀，200℃干热灭菌40min；取50ml种子液，加入330ml水，混合均匀后喷入固体培养基，并混合均匀，使混合后的物料中活菌数为1×106cfu/g；发酵起始物料自由装入发酵桶，表面覆盖滤布，放入38℃恒温培养箱发酵。对物料进行镜检，芽孢率在95％以上为发酵结束，记录发酵天数。
将物料在105℃烘干，过100目筛，并对筛上物重复烘干、粉碎、过筛步骤，最终所有物料菌通过100目筛，得到固体菌剂。
测定固体菌剂的有效活菌数、杂菌率、混合均匀度变异系数(CV)和保质期，结果见表1。
实施例4
本实施例用于说明本发明的枯草芽孢杆菌固体菌剂的制备方法
实施例4-1按照实施例1的方法进行，不同的是，固体培养基包含250g 玉米粉、250g玉米淀粉渣、150g玉米皮、10g酵母浸粉。
实施例4-2按照实施例1的方法进行，不同的是，固体培养基包含350g 玉米粉、150g玉米淀粉渣、50g玉米皮、50g酵母浸粉。
记录发酵天数，测定固体菌剂的有效活菌数、杂菌率、混合均匀度变异系数(CV)和保质期，结果见表1。
实施例5
本实施例用于说明本发明的枯草芽孢杆菌固体菌剂的制备方法
实施例5-1按照实施例1的方法进行，不同的是，混合后的物料中活菌数为1×105cfu/g。
实施例5-2按照实施例1的方法进行，不同的是，混合后的物料中活菌数为1×109cfu/g。
记录发酵天数，测定固体菌剂的有效活菌数、杂菌率、混合均匀度变异系数(CV)和保质期，结果见表1。
实施例6
本实施例用于说明本发明的枯草芽孢杆菌固体菌剂的制备方法
实施例6-1按照实施例1的方法进行，不同的是，所述固体培养基包含 300g小麦粉、200g小麦淀粉渣、100g麦麸、20g酵母浸粉、50ml稀释后的种子液和330ml水。
实施例6-2按照实施例1的方法进行，不同的是，所述固体培养基包含300g红薯粉、200g红薯淀粉渣、100g玉米皮、20g酵母浸粉、50ml稀释后的种子液和330ml水。
实施例6-3按照实施例1的方法进行，不同的是，所述固体培养基包含 300g小麦粉、200g玉米淀粉渣、100g玉米皮、20g酵母浸粉、50ml稀释后的种子液和330ml水。
记录发酵天数，测定固体菌剂的有效活菌数、杂菌率、混合均匀度变异系数(CV)和保质期，结果见表1。
实施例7
本实施例用于说明本发明的枯草芽孢杆菌固体菌剂的制备方法
按照实施例1的方法进行，不同的是，在发酵的过程中不进行搅拌处理。
记录发酵天数，测定固体菌剂的有效活菌数、杂菌率、混合均匀度变异系数(CV)和保质期，结果见表1。
对比例1
本对比例用于说明固体培养基组成对固体菌剂的影响
对比例1-1：本对比例的条件与实施例1相同，不同的是，所述固体培养基的组成为400g玉米淀粉渣、200g玉米皮、40g酵母浸粉。
对比例1-2：本对比例的条件与实施例1相同，不同的是，所述固体培养基的组成为450g玉米粉、150g玉米皮、30g酵母浸粉。
对比例1-3：本对比例的条件与实施例1相同，不同的是，所述固体培养基的组成为360g玉米粉、240g玉米淀粉渣、24g酵母浸粉。
记录发酵天数，测定固体菌剂的有效活菌数、杂菌率、混合均匀度变异系数(CV)和保质期，结果见表1。
对比例2
本对比例用于说明使用液态发酵法制备枯草芽孢杆菌固体菌剂
将液体培养基在121℃下灭菌15min，冷却至室温。接入2体积％制备例1制备的种子液，30℃、100rpm培养15小时。发酵结束后，得到的发酵液中活菌数为200亿cfu/ml，芽孢占95％以上。
发酵液离心分离得到含水量为90％的菌泥，取菌泥加入玉米粉640g和 360mL水，混合均匀，使最终的有效活菌数在500亿cfu/g以上。
将物料在100℃烘干、粉碎，过80目筛，并重复烘干、粉碎、过筛步骤，最终筛上物粉碎后与筛下物混合，得到固体菌剂。
测定固体菌剂的有效活菌数、杂菌率、混合均匀度变异系数(CV)和保质期，结果见表1。
对比例3
本对比例用于说明使用液态发酵法制备枯草芽孢杆菌固体菌剂
按照对比例2的方法制备固体菌剂，不同的是，发酵液离心分离得到含水量为90％的菌泥，取菌泥加入300g玉米粉、200g玉米淀粉渣、100g玉米皮、20g酵母浸粉和360mL水，混合均匀，使最终的有效活菌数在500亿 cfu/g以上。
测定固体菌剂的有效活菌数、杂菌率、混合均匀度变异系数(CV)和保质期，结果见表1。
表1
Figure BDA0002120878290000111
Figure BDA0002120878290000121
根据表1中实施例和对比例1的结果比较可看出，使用本发明所述的固体培养基，并将各组分比例控制在一定范围内，可以在更短的时间内获得更高的有效活菌数，杂菌率更低、混合均匀度变异系数更低，而且保质期有所延长。
根据实施例1、实施例4和实施例6的数据可看出，在使用的所述固体培养基包含玉米粉、玉米淀粉渣、玉米皮和酵母浸粉的条件下，可以进一步提高产品质量，而且根据镜检结果，使用所述固体培养基培养得到的菌体更为粗壮。
通过比较实施例1和实施例5的数据可看出，不同的接种量对菌体在固体发酵过程中的表现不同，当接种量在适宜范围内，可以取得更快的生长速率，从而缩短了发酵周期；且因为菌体生长旺盛，从而降低了杂菌率，进一步延长了保质期。
通过比较实施例1和实施例7的结果可看出，在固态发酵过程中进行搅拌或翻料处理，有助于菌体的生长，从而缩短了发酵周期。
通过比较实施例1和对比例2与3的数据可看出，相比于液态发酵法制备固体菌剂，使用固态发酵的方法得到的固体菌剂的杂菌率更低，混合均匀度变异系数有明显的降低，而且产品的保质期也有一定的延长。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型。包括各个具体技术特征以任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。但这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (17)

1.一种用于枯草芽孢杆菌发酵的固体培养基，其特征在于，所述固体培养基的制备原料由淀粉质原料粉碎产物、淀粉渣、淀粉质原料种皮和酵母浸粉组成；
其中，在所述固体培养基的制备原料中，以干物质计，所述淀粉质原料粉碎产物、淀粉渣、淀粉质原料种皮和酵母浸粉的质量比为(25-35)：(15-25)：(5-15)：(1-5)；
所述淀粉质原料粉碎产物源自小麦、玉米和红薯中的一种或多种，所述淀粉渣源自小麦、玉米和红薯中的一种或多种，所述淀粉质原料种皮源自小麦和/或玉米。
2.根据权利要求1所述的固体培养基，其中，所述淀粉质原料粉碎产物、淀粉渣、淀粉质原料种皮和酵母浸粉的质量比为(28-32)：(18-22)：(8-13)：(1.5-4)。
3.根据权利要求1所述的固体培养基，其中，所述淀粉质原料粉碎产物源自玉米；和/或
所述淀粉渣源自玉米；和/或
所述淀粉质原料种皮源自玉米。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的固体培养基，其中，所述固体培养基的制备原料还包括水。
5.一种枯草芽孢杆菌固体菌剂的制备方法，其特征在于，该方法包括：将枯草芽孢杆菌菌种接种到权利要求1-4中任意一项所述的固体培养基中进行发酵。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述接种的方法包括：将所述枯草芽孢杆菌菌种与水混合得到接种液，然后将所述接种液与所述固体培养基进行混合，得到混合物料。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，采取喷淋的方式将所述接种液与所述固体培养基混合。
8.根据权利要求5或6所述的方法，其中，相对于每克固体培养基，所述枯草芽孢杆菌的接种量为1×105-1×109cfu。
9.根据权利要求5所述的方法，其中，在所述发酵过程中，发酵的温度为28-38℃。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，在所述发酵过程中，发酵的温度为30-35℃。
11.根据权利要求9所述的方法，其中，在所述发酵的过程中，对物料进行搅拌或翻料处理。
12.根据权利要求5所述的方法，其中，所述方法还包括对发酵产物进行干燥和粉碎处理。
13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述干燥的温度为80-105℃，所述干燥的时间为1-30min。
14.根据权利要求12所述的方法，其中，所述粉碎处理后，发酵产物的粒径小于2mm。
15.根据权利要求13所述的方法，其中，所述粉碎处理后，发酵产物的粒径为0.001-1mm。
16.权利要求5-15中任意一项所述的方法制备的枯草芽孢杆菌固体菌剂。
17.权利要求16所述的枯草芽孢杆菌固体菌剂在制备动物饲料中的应用。
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001136959A (ja) * 1999-11-17 2001-05-22 Hiroyuki Sumi 枯草菌菌体および／またはその産生物を含む培養物、これに由来する水溶性ビタミンｋ誘導体、これらを含む医薬、食品および飼料ならびにこれらの製造方法
CN1449673A (zh) * 2002-11-07 2003-10-22 吉林省环宇饲料有限公司 一种单细胞蛋白质饲料及其加工工艺
CN102352334A (zh) * 2011-10-21 2012-02-15 山东省农业科学院高新技术研究中心 以固体发酵生产枯草芽孢杆菌活菌的方法
CN103819239A (zh) * 2014-03-04 2014-05-28 重庆圣沛农业科技有限公司 一种柑橘皮渣生物发酵方法
CN105995489A (zh) * 2016-05-30 2016-10-12 王文杰 食用菌发酵玉米粉及玉米制品
CN107683956A (zh) * 2017-10-18 2018-02-13 沈阳金博地生态环保科技有限公司 一种以玉米皮和秸秆废渣为原料的饲料及其制备方法
CN109722392A (zh) * 2017-10-30 2019-05-07 中粮生物化学（安徽）股份有限公司 能够促进枯草芽孢杆菌产芽孢的培养基及其应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6541522B2 (en) * 2000-08-16 2003-04-01 Insmed Incorporated Methods of using compositions containing hypotriglyceridemically active stilbenoids

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001136959A (ja) * 1999-11-17 2001-05-22 Hiroyuki Sumi 枯草菌菌体および／またはその産生物を含む培養物、これに由来する水溶性ビタミンｋ誘導体、これらを含む医薬、食品および飼料ならびにこれらの製造方法
CN1449673A (zh) * 2002-11-07 2003-10-22 吉林省环宇饲料有限公司 一种单细胞蛋白质饲料及其加工工艺
CN102352334A (zh) * 2011-10-21 2012-02-15 山东省农业科学院高新技术研究中心 以固体发酵生产枯草芽孢杆菌活菌的方法
CN103819239A (zh) * 2014-03-04 2014-05-28 重庆圣沛农业科技有限公司 一种柑橘皮渣生物发酵方法
CN105995489A (zh) * 2016-05-30 2016-10-12 王文杰 食用菌发酵玉米粉及玉米制品
CN107683956A (zh) * 2017-10-18 2018-02-13 沈阳金博地生态环保科技有限公司 一种以玉米皮和秸秆废渣为原料的饲料及其制备方法
CN109722392A (zh) * 2017-10-30 2019-05-07 中粮生物化学（安徽）股份有限公司 能够促进枯草芽孢杆菌产芽孢的培养基及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
枯草芽孢杆菌出芽培养条件优化;王法富等;《当代化工》;20180228;第47卷(第2期);摘要，第287页第2.2节，图2 *
枯草芽孢杆菌固体发酵条件优化;杨婷等;《饲料博览》;20151231(第3期);摘要，第6页第1.2.4节，表1 *

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