CN112138001A - 一种槲皮素-低分子肝素-紫杉醇结合物、制备方法及应用 - Google Patents

一种槲皮素-低分子肝素-紫杉醇结合物、制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明具体涉及一种槲皮素‑低分子肝素‑紫杉醇结合物、制备方法及应用。槲皮素、紫杉醇具有良好的抗肿瘤活性，但二者的水溶性差，生物利用度低，导致临床应用状况不甚理想。本发明提供了一种紫杉醇‑低分子肝素‑槲皮素结合物，以低分子肝素钠作为骨架，通过共价键连接紫杉醇及槲皮素。该结合物作为一种抗肿瘤活性成分有效的改善了紫杉醇、槲皮素溶解度差的缺陷。并且依据本发明制备方法得到的结合物，基本不破坏紫杉醇与槲皮素的活性结构，很好的保留了两者的药理活性，应用于抗肿瘤药物，有望实现“双管齐下”的治疗效果，具有重要的临床治疗意义。

Description

一种槲皮素-低分子肝素-紫杉醇结合物、制备方法及应用
技术领域
本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种槲皮素-低分子肝素-紫杉醇结合物，所结合物的制备方法记载制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
紫杉醇(PTX)，一种从裸子植物红豆杉的树皮分离提纯的二萜生物碱类化合物，在临床上主要用于卵巢癌、小细胞肺癌和乳腺癌等的治疗；对其它类型的癌症，如***癌、鼻咽癌等也有一定的疗效。然而，PTX在水中溶解度小于4μg/mL，极大程度限制了其应用。目前，临床上广泛使用的紫杉醇注射剂泰素(Taxol)是由聚氧乙烯蓖麻油/乙醇为助溶载体制得的，但聚氧乙烯蓖麻油会引起严重的过敏反应，给患者造成了不便。
槲皮素(QT)，一种从天然植物中提取的多酚黄酮类化合物，具有广泛的药理作用，可作为有效的抗氧化剂，用于炎症、肿瘤、病毒感染等疾病的治疗。研究表明槲皮素是一种广谱抗癌药物，对多种癌症如肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌等均具有良好的抑制作用。然而，槲皮素的水溶性极低(水中溶解度为1μg/mL)，在胃肠道中不稳定，口服生物利用率低，在临床上的应用受到了极大的限制。
肝素是一种天然的，非均一的多糖，在临床上用作为一种抗凝血药物已经有几十年的历史。然而，肝素的使用常常会带来许多不良反应，如过敏反应、出血性并发症和血小板减少症等，为了避免这些问题，临床上常使用低分子肝素(LWMH)作为肝素的替代用药。低分子肝素是一类由普通肝素解聚而成的分子量较低的肝素的总称，其具有生物利用度髙、毒作用少等优点。近年来，将肝素/低分子肝素作为载体材料构建各类用于肿瘤治疗的纳米载体成为了一种新的趋势。其中的原因主要取决于肝素的以下特性：(1)无毒性，较好的生物相容性；(2)抗肿瘤活性；(3)抗肿瘤转移活性；(4)靶向性。
发明内容
依据本领域目前的研究结果，采用不同机制的化疗药物共同治疗，可以有效的提高肿瘤杀伤效果，降低肿瘤耐药性发生概率。本发明在于提供一种同时递送紫杉醇和槲皮素的给药***，改善紫杉醇和槲皮素的不良生物特性、提高其溶解度和生物利用度，同时还能够发挥“多管齐下”的抗肿瘤效果。基于该技术目的，本发明设计了紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物，将两种药物同时连接到低分子肝素骨架上，得到两亲性结合物，该结合物可以在水中自组装成为具有核-壳结构的纳米粒，该发明一方面提高了两种药物的溶解度，另一方面，两种药物可以发挥联合抗肿瘤的效果。
基于上述目的，本发明提供以下技术方案：
本发明第一方面，提供一种紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物，所述结合物以低分子肝素作为骨架，所述紫杉醇、槲皮素通过共价键与低分子肝素连接。
本发明第二方面，提供第一方面所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：分别合成己二酸二酰肼修饰低分子肝素(LWMH-ADH)、槲皮素-NHS酯(QT-NHS)及羧基化紫杉醇(PTX-COOH)，将己二酸二酰肼修饰低分子肝素及槲皮素-NHS酯作为原料合成低分子肝素-槲皮素(LWMH-QT)；将低分子肝素-槲皮素与羧基化紫杉醇混合反应得到所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物(PTX-LWMH-QT)。
本发明第三方面，提供第一方面所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明第四方面，提供一种抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物包括第一方面所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物及药学上所必须的辅料。
以上一个或多个技术方案的有益效果是：
槲皮素、紫杉醇水溶性差,在胃肠道中不稳定,口服生物利用度低,极大的限制了其临床应用，因而研发具有良好溶解性能的槲皮素给药***备受关注。肝素水溶性强，以其作为载体，在提高药物水溶性的同时，还能延长药物在体内的滞留时间，实现制剂对肿瘤的靶向治疗作用。本发明研究首次同时将槲皮素、紫杉醇与肝素相结合，是一种可以有效提高药物溶解度并增强其抑瘤效果的槲皮素-肝素-紫杉醇共轭物制剂。
此外，本发明所采用的制备方法,简单易行,且条件温和，有效地避免了剧烈反应条件对槲皮素、紫杉醇药物活性的破坏。且该方法具有良好的通用性，可普遍用于以肝素为载体与其他药物相结合的制备工艺之中。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为实施例1所述PTX-LWMH-QT的合成方式示意图；
其中，(1)为QT-NHS的合成；(2)为PTX-Phe的合成，(3)为PTX-LWMH-QT的合成。
图2为实施例2中所述PTX-LWMH-QT的1H-NMR图谱。
图3为实施例3中MCF-7细胞经游离PTX，QT或PTX-LWMH-QT处理后的活死细胞染色结果；
其中，图3(A)为游离药物组染色结果；图3(B)为PTX-LWMH-QT溶液组染色结果图。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
术语解释：
EDCI：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，CAS号：25952-53-8。
HOBt：1-羟基苯并***，CAS号：2592-95-2。
DMAP:4-二甲氨基吡啶，CAS号：1122-58-3。
NHS：N-羟基丁二酰亚胺，CAS号：6066-82-6。
正如背景技术所介绍的，针对槲皮素、紫杉醇溶解度低、生物利用度低，临床应用受限的问题，本发明提出了一种紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物，该结合物制备方法简便，能够良好的保留槲皮素、紫杉醇的药物活性，并且具有良好的主动靶向性，具有良好的临床治疗意义。
本发明第一方面，提供一种紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物，所述结合物以低分子肝素作为骨架，所述紫杉醇、槲皮素通过共价键与低分子肝素连接。
优选的，所述低分子肝素的分子量为4000～4500Da；进一步优选的，所述低分子肝素的分子量为4350Da。
本发明第二方面，提供第一方面所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：分别合成己二酸二酰肼修饰低分子肝素(LWMH-ADH)、槲皮素-NHS酯(QT-NHS)及羧基化紫杉醇(PTX-COOH)，将己二酸二酰肼修饰低分子肝素及槲皮素-NHS酯作为原料合成低分子肝素-槲皮素(LWMH-QT)；将低分子肝素-槲皮素与羧基化紫杉醇混合反应得到所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物(PTX-LWMH-QT)。
优选的，所述己二酸二酰肼修饰低分子肝素合成方法如下：向低分子肝素的水溶液中加入己二酸而酰胺(ADH)、EDCI，HOBt，加入碱液调节所述溶剂体系pH值至6～7，室温下搅拌得到粗产品，经透析后得到所述LWMH-ADH。
进一步优选的，所述低分子肝素与ADH质量比为1：2～16。
进一步优选的，所述低分子肝素与EDCI质量比为1:1～4。
进一步优选的，所述低分子肝素与HOBt质量比为1:1～4。
进一步优选的，所述室温下搅拌反应时间为12～48h。
进一步优选的，所述透析为对水透析，时间为2.5～3天，每6h换水一次。
优选的，所述槲皮素-NHS酯的合成方法如下：向槲皮素和丁二酸酐的四氢呋喃溶液中加入催化剂，惰性气体氛围下反应得到槲皮素半琥珀酸中间体，将所述中间体溶于乙腈，加入N-羟基丁二酰亚胺磷酸二苯酯(SDPP)和催化剂后在惰性气体氛围下搅拌反应得到所述丁二酸酐修饰的槲皮素，即QT-NHS酯粗品。
进一步优选的，所述槲皮素与丁二酸酐的摩尔比例为1:1～5。
进一步优选的，所述槲皮素与四氢呋喃的用量为1～5mg/mL。
进一步优选的，所述槲皮素与催化剂的摩尔比例为1:1～20。
进一步优选的，所述催化剂选自吡啶、三乙胺、碳二亚胺盐酸盐中的任一种或几种的混合。
进一步优选的，所述合成方法还包括对中间体进行纯化的步骤，所述纯化操作依次为去除溶剂、碱洗、乙酸乙酯提取、饱和食盐水洗、加入无水Na2SO4干燥、过滤、蒸除溶剂的步骤。
进一步优选的，所述中间体与SDPP的摩尔比为1:1～5。
进一步优选的，所述中间体与乙腈的用量为1～5mg/L。
进一步优选的，所述中间体与催化剂的摩尔比例为1:1～10。
优选的，所述低分子肝素-槲皮素(LWMH-QT)合成方法如下：向LWMH-ADH的磷酸盐缓冲液中加入QT-NHS酯，惰性气体氛围、室温下反应一段时间后将反应液透析得到所述低分子肝素-槲皮素。
进一步优选的，所述QT-NHS与LWMH-ADH的质量比为1：3～20。
进一步优选的，所述反应时间为24～48h。
进一步优选的，所述反应结束后对DMSO透析2天，每6h换液一次，然后对水透析3天，每6h换水一次。
优选的，所述羟基化紫杉醇的合成方式如下：将紫杉醇、丁二酸酐和DMAP共同溶解于有机溶剂中，惰性气体氛围、室温条件下反应，反应结束后除去有机溶剂得到所述产物，洗涤所述产物即为PTX-COOH。
进一步优选的，所述紫杉醇与丁二酸酐质量比为1～2：1。
进一步优选的，所述紫杉醇与DMAP质量比20～50：1。
进一步优选的，所述反应时间为12～48h。
优选的，所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物(PTX-LWMH-QT)合成方法如下：将LWMH-QT的甲酰胺溶液中加入PTX-COOH、EDCI、NHS，室温下搅拌反应得到所述PTX-LWMH-QT。
进一步优选的，所述PTX-COOH与LWMH-QT的质量比为1：3～20。
进一步优选的，所述PTX-COOH与EDCI和NHS的摩尔比为1：1～5：1～5。
进一步优选的，所述反应时间为12～48h。
进一步优选的，合成反应结束后还包括采用DMF/H2O混合溶剂对产物进行对水透析的步骤。
本发明效果较好的一些实施方式中，所述制备方法具体步骤如下：
(1)己二酸二酰肼修饰低分子肝素(LWMH-ADH)的合成：
称取一定量的低分子肝素并将其溶于蒸馏水，搅拌使其充分溶解后加入ADH，EDCI，HOBt。用0.1M NaOH溶液将体系pH调至6.8，室温下搅拌反应一段时间后得粗产物，对水充分透析，将透析液过滤后冻干，即得到LWMH-ADH。
(2)槲皮素-NHS酯(QT-NHS)的合成：
将槲皮素和丁二酸酐溶于四氢呋喃中,加入催化剂，N2保护下室温搅拌反应1～3天，除杂纯化处理得到反应中间体槲皮素半琥珀酸将所得中间体溶于乙腈中，加入N-羟基丁二酰亚胺磷酸二苯酯(SDPP)和催化剂，N2保护下室温搅拌反应2～10h，将反应液后处理得丁二酸酐修饰的槲皮素，即QT-NHS酯粗品。
(3)低分子肝素-槲皮素(LWMH-QT)的合成：
将一定量的LWMH-ADH溶于磷酸盐缓冲液中，加入QT-NHS酯。N2保护下室温搅拌反应后一段时间后，将反应液对DMSO透析2-3天后，对纯水充分透析，透析后的溶液过滤后冻干，即得到LWMH-QT。
(4)羧基化紫杉醇(PTX-COOH)的合成：
将紫杉醇、丁二酸酐和DMAP共同溶解于DCM中，氮气保护下室温反应。反应结束后，旋蒸除去DCM，将产物溶解于乙酸乙酯，分别用稀盐酸和水洗涤产物，向有机相中加无水硫酸钠，过滤，旋蒸除去乙酸乙酯后将产物真空干燥，即得到PTX-COOH。
(5)紫杉醇-低分子肝素-槲皮素共轭物(PTX-LWMH-QT)的合成
称取一定量的LWMH-QT，加入甲酰胺，磁力搅拌下溶解，加入PTX-COOH，EDCI，NHS，磁力搅拌下在室温反应1-2天，得到PTX-LWMH-QT粗产物。该粗产物先对DMF/H2O混合溶剂透析，再对蒸馏水充分透析。过滤透析后得到的液体，冻干，即得到PTX-LWMH-QT。
本发明第三方面，提供第一方面所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
优选的，所述抗肿瘤药物为包括但不限于口服剂型、胃肠外给药剂型、外用剂型和直肠给药剂型。
进一步优选的，所述抗肿瘤药物为口服的片剂、胶囊、丸剂、粉剂、缓释制剂、溶液或悬浮液。
进一步优选的，所述抗肿瘤药物为胃肠外注射的无菌溶液、悬浮液或乳液。
优选的，所述抗肿瘤药物中，所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物为纳米粒制剂。
进一步优选的，所述纳米粒制剂制备方法如下：将PTX-LWMH-QT分散于缓冲盐溶液中，超声一段时间过滤得到所述纳米粒制剂。
更进一步的，所述PTX-LWMH-QT溶于PBS(pH＝7.4,10mM)中，浓度为0.1～10mg/mL。
更进一步的，所述超声采用探头超声，探头超声功率为30～40W，脉冲为2s开/4s关，超声时间为2～30min。
更进一步的，超声后的样品经0.45或0.8μm微孔滤膜过滤，得到PTX-LWMH-QT自组装纳米粒溶液。
本发明第四方面，提供一种抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物包括第一方面所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物及药学上所必须的辅料。
优选的，所述抗肿瘤药物由第一方面所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物及药学上所必须的辅料组成。
进一步优选的，所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物占抗肿瘤药物总量的1～99％，所述抗肿瘤药物为适合单次施予精确剂量的单位剂型。
上述优选技术方案的一些实施方式中，所述所述抗肿瘤药物的量在约0.001mg/kg体重/天-约1000mg/kg体重/天的范围内。
在其它实施方式中，所述抗肿瘤药物的量的范围为约0.5mg/kg体重/天-约50mg/kg体重/天。
在一些实施方式中，所述抗肿瘤药物的量为约0.001g/天-约7g/天。
在其它实施方式中，所述抗肿瘤药物的量为约0.002g/天-约6g/天。
在其它实施方式中，所述抗肿瘤药物的量为约0.005g/天-约5g/天。
在其它实施方式中，所述抗肿瘤药物的量为约0.01g/天-约5g/天。
在其它实施方式中，所述抗肿瘤药物的量为约0.02g/天-约5g/天。
在其它实施方式中，所述抗肿瘤药物的量为约0.05g/天-约2.5g/天。
在其它实施方式中，所述抗肿瘤药物的量为约0.1g/天-约1g/天。
在其它实施方式中，低于上述范围下限的剂量水平可能已经是足够的。
在其它实施方式中，可能需要高于上述范围上限的剂量水平。
优选的，所述抗肿瘤药物包括第一方面所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物及药学上所必须的辅料，还包括其他具有抗肿瘤活性或具有辅助抗肿瘤活性的成分。
进一步优选的，所述其他具有抗肿瘤活性的成分，包括槲皮素、紫杉醇具有不同治疗机制的化学实体。
进一步优选的，所述具有辅助抗肿瘤活性的成分，包括但不限于国家健康保险目录中规定的肿瘤辅助药物、免疫调节药物、抗炎药物、放射增敏药物、止吐药物等。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。
实施例1 PTX-LWMH-QT的制备
1.LWMH-QT的合成
(1)称取0.25g LWMH并将其溶于50mL蒸馏水，搅拌使其充分溶解后加入ADH 4g，EDCI 0.48g，HOBt 0.48g。用0.1M NaOH溶液将体系pH调至6.8，室温下搅拌反应24h后得粗产物，对水透析3天，每6h换水一次，将透析液过滤后冻干，即得LWMH-ADH。
(2)称取QT 302mg，丁二酸酐200mg，共同溶解于10mL四氢呋喃中，加入805μL吡啶，在氮气保护下反应3天。旋蒸除去反应液中的溶剂，碱洗，饱和食盐水洗，干燥，过硅胶柱后得到中间体槲皮素半琥珀酸。
(3)将1.15g N-羟基丁二酰亚胺溶于6mL二氯甲烷中，在冰浴下向其中加入1.4mL三乙胺，再逐滴加入2.7mg溶于二氯甲烷的氯磷酸二苯酯，在冰浴下反应2h后，用乙酸乙酯溶解产物，水洗，干燥，过滤后得到N-羟基丁二酰亚胺磷酸二苯酯(SDPP)
(4)将(2)中所得槲皮素半琥珀酸230mg溶于15mL乙腈，加入260mg SDPP和280μL三乙胺，在氮气保护下避光反应8h后，用乙酸乙酯溶解产物，水洗，干燥，过滤，蒸去有机溶剂后得到QT-NHS酯。
(5)称取50mg LWMH-ADH，溶于50mL磷酸盐缓冲液(pH6.5)；将6mg QT-NHS溶于100mL DMSO。将QT-NHS的DMSO溶液加入LWMH-ADH溶液中，在氮气保护下反应2天，先对DMSO透析2天，再对蒸馏水透析3天，透析后的液体经过滤后冷冻干燥，即得到LWMH-QT固体。
2.PTX-LWMH-QT的合成
(1)将100mg紫杉醇，65mg丁二酸酐和3mg DMAP共同溶解于5mL DCM中，氮气保护下室温反应一天。反应结束后，旋蒸除去DCM，将产物溶解于乙酸乙酯，分别用稀盐酸和水洗涤产物(分别洗涤3次)，向有机相中加无水硫酸钠，过滤，旋蒸除去乙酸乙酯后将产物置于真空干燥箱过夜，即得到PTX-COOH。
(2)称取LWMH-QT 100mg，加40mL甲酰胺溶解。称取PTX-COOH 20mg，加40mL DMF溶解，加入PTX-COOH 3倍摩尔当量的EDCI和NHS，搅拌30min后，加入上述LWMH-QT甲酰胺溶液，室温下反应2天，反应液先对DMSO透析2天，再对蒸馏水透析3天，透析后的液体经过滤后冷冻干燥，即得到PTX-LWMH-QT固体。
实施例2 PTX-LWMH-QT自组装纳米粒的制备
称取5mg PTX-LWMH-QT，将其分散在3mL PBS中(pH＝7.4,10mM)，搅拌均匀后对样品进行探头超声处理(40W，2s开/4s关，共4min)。将超声后的样品经0.8μm微孔滤膜过滤后，即可得到PTX-LWMH-QT自组装纳米粒溶液。
称取10mg PTX-LWMH-QT，用d6-DMSO/D2O混合溶剂将其溶解，进行1H-NMR分析，得到图2所示图谱，出现了PTX和QT的特征吸收峰，证明聚合物成功合成。
实施例3 PTX-LWMH-QT细胞毒性考察
按照实施例2项下描述制得PTX-LWMH-QT溶液，将所得溶液稀释至PTX浓度为5μg/mL；另配相同浓度的游离PTX，QT溶液。分别用PTX-LWMH-QT溶液或游离PTX，QT溶液孵育MCF-7细胞12h后，利用Calcein-AM/PI活细胞/死细胞双染试剂盒对细胞进行染色，在倒置荧光显微镜下观察，拍照(结果见图3)。结果表明，PTX-LWMH-QT可以增强药物的细胞毒性。
从图3中可以看出，游离药物孵育一段时间后，活细胞数量显著多于PTX-LWMH-QT赋予组，证明PTX-LWMH-QT相比游离药物具有更强的肿瘤细胞毒性。
实施例4
称取15mg PTX-LWMH-QT，将其分散在3mL PBS中(pH＝7.4,10mM)，搅拌均匀后对样品进行探头超声处理(40W，2s开/4s关，共10min)。将超声后的样品经0.8μm微孔滤膜过滤后，即可得到PTX-LWMH-QT自组装纳米粒溶液。经HPLC测定PTX浓度为275μg/mL，经紫外分光光度法测定QT浓度为262μg/mL。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物，其特征在于，所述结合物以低分子肝素作为骨架，所述紫杉醇、槲皮素通过共价键与低分子肝素连接。
2.如权利要求1所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物，其特征在于，分子量为4000～4500Da；进一步优选的，所述低分子肝素的分子量为4350Da。
3.权利要求1或2所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：分别合成己二酸二酰肼修饰低分子肝素、槲皮素-NHS酯及羧基化紫杉醇，将己二酸二酰肼修饰低分子肝素及槲皮素-NHS酯作为原料合成低分子肝素-槲皮素；将低分子肝素-槲皮素与羧基化紫杉醇混合反应得到所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物。
4.权利要求3所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物的制备方法，其特征在于，所述己二酸二酰肼修饰低分子肝素合成方法如下：向低分子肝素的水溶液中加入己二酸而酰胺、EDCI，HOBt，加入碱液调节所述溶剂体系pH值至6～7，室温下搅拌得到粗产品，经透析后得到所述LWMH-ADH；
优选的，所述低分子肝素与ADH质量比为1：2～16；
优选的，所述低分子肝素与EDCI质量比为1:1～4；
优选的，所述低分子肝素与HOBt质量比为1:1～4；
优选的，所述室温下搅拌反应时间为12～48h；
优选的，所述透析为对水透析，时间为2.5～3天，每6h换水一次。
5.权利要求3所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物的制备方法，其特征在于，所述槲皮素-NHS酯的合成方法如下：向槲皮素和丁二酸酐的四氢呋喃溶液中加入催化剂，惰性气体氛围下反应得到槲皮素半琥珀酸中间体，将所述中间体溶于乙腈，加入N-羟基丁二酰亚胺磷酸二苯酯和催化剂后在惰性气体氛围下搅拌反应得到所述丁二酸酐修饰的槲皮素，即QT-NHS酯粗品；
优选的，所述槲皮素与丁二酸酐的摩尔比例为1:1～5；
优选的，所述槲皮素与四氢呋喃的用量为1～5mg/mL；
优选的，所述槲皮素与催化剂的摩尔比例为1:1～20；
优选的，所述催化剂选自吡啶、三乙胺、碳二亚胺盐酸盐中的任一种或几种的混合；
优选的，所述合成方法还包括对中间体进行纯化的步骤，所述纯化操作依次为去除溶剂、碱洗、乙酸乙酯提取、饱和食盐水洗、加入无水Na2SO4干燥、过滤、蒸除溶剂的步骤；
优选的，所述中间体与SDPP的摩尔比为1:1～5；
优选的，所述中间体与乙腈的用量为1～5mg/L；
优选的，所述中间体与催化剂的摩尔比例为1:1～10。
6.权利要求3所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物的制备方法，其特征在于，所述低分子肝素-槲皮素合成方法如下：向LWMH-ADH的磷酸盐缓冲液中加入QT-NHS酯，惰性气体氛围、室温下反应一段时间后将反应液透析得到所述低分子肝素-槲皮素；
进一步优选的，所述QT-NHS与LWMH-ADH的质量比为1：3～20；
进一步优选的，所述反应时间为24～48h；
进一步优选的，所述反应结束后对DMSO透析2天，每6h换液一次，然后对水透析3天，每6h换水一次。
7.权利要求3所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物的制备方法，其特征在于，所述羟基化紫杉醇的合成方式如下：将紫杉醇、丁二酸酐和DMAP共同溶解于有机溶剂中，惰性气体氛围、室温条件下反应，反应结束后除去有机溶剂得到所述产物，洗涤所述产物即为PTX-COOH；
进一步优选的，所述紫杉醇与丁二酸酐质量比为1～2：1；
进一步优选的，所述紫杉醇与DMAP质量比20～50：1；
进一步优选的，所述反应时间为12～48h。
8.权利要求3所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物的制备方法，其特征在于，所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物合成方法如下：将LWMH-QT的甲酰胺溶液中加入PTX-COOH、EDCI、NHS，室温下搅拌反应得到所述PTX-LWMH-QT；
优选的，所述PTX-COOH与LWMH-QT的质量比为1：3～20；
优选的，所述PTX-COOH与EDCI和NHS的摩尔比为1：1～5：1～5；
优选的，所述反应时间为12～48h；
优选的，合成反应结束后还包括采用DMF/H2O混合溶剂对产物进行对水透析的步骤。
9.权利要求1或2所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物在制备抗肿瘤药物中的应用；
优选的，所述抗肿瘤药物为包括但不限于口服剂型、胃肠外给药剂型、外用剂型和直肠给药剂型；
进一步优选的，所述抗肿瘤药物为口服的片剂、胶囊、丸剂、粉剂、缓释制剂、溶液或悬浮液；
进一步优选的，所述抗肿瘤药物为胃肠外注射的无菌溶液、悬浮液或乳液；
或，优选的，所述抗肿瘤药物中，所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物为纳米粒制剂；
进一步优选的，所述纳米粒制剂制备方法如下：将PTX-LWMH-QT分散于缓冲盐溶液中，超声一段时间过滤得到所述纳米粒制剂；
更进一步的，所述PTX-LWMH-QT溶于PBS中，浓度为0.1～10mg/mL；
更进一步的，所述超声采用探头超声，探头超声功率为30～40W，脉冲为2s开/4s关，超声时间为2～30min；
更进一步的，超声后的样品经0.45或0.8μm微孔滤膜过滤，得到PTX-LWMH-QT自组装纳米粒溶液。
10.一种抗肿瘤药物，其特征在于，所述抗肿瘤药物包括权利要求1或2所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物及药学上所必须的辅料；
优选的，所述抗肿瘤药物由第一方面所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物及药学上所必须的辅料组成；
进一步优选的，所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物占抗肿瘤药物总量的1～99％，所述抗肿瘤药物为适合单次施予精确剂量的单位剂型；
或，优选的，所述抗肿瘤药物包括权利要求1或2所述紫杉醇-低分子肝素-槲皮素结合物及药学上所必须的辅料，还包括其他具有抗肿瘤活性或具有辅助抗肿瘤活性的成分；
进一步优选的，所述其他具有抗肿瘤活性的成分，包括槲皮素、紫杉醇具有不同治疗机制的化学实体；
进一步优选的，所述具有辅助抗肿瘤活性的成分，包括但不限于国家健康保险目录中规定的肿瘤辅助药物、免疫调节药物、抗炎药物、放射增敏药物、止吐药物。
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