CN112111547B - 鱼溶浆酶解产物及其制备方法与应用 - Google Patents

鱼溶浆酶解产物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种鱼溶浆酶解产物，通过以下方法得到：利用Pf1al2蛋白酶酶解鱼溶浆，得酶解液，即为含鱼溶浆酶解产物的溶液，或：将含鱼溶浆酶解产物的溶液浓缩、干燥，得鱼溶浆酶解产物；所述Pf1al2蛋白酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的鱼溶浆酶解产物，是采用来源于海洋宏基因组文库的蛋白酶酶解得到的，富含功能性多肽与氨基酸，能够促进植物生长，并对炭疽病有防治作用，可用于制备植物生长促进剂，用于制备炭疽病防治剂。具体应用时，将含鱼溶浆酶解产物的溶液稀释或浓缩后，或将鱼溶浆酶解产物配制成溶液，喷洒于植株表面。本发明的鱼溶浆酶解产物在食品、医药、农业领域有着广泛的应用前景。

Description

鱼溶浆酶解产物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种鱼溶浆酶解产物及其制备方法与应用，属于蛋白水解技术领域。
背景技术
鱼溶浆是鱼粉加工过程中产生的副产物，鱼溶浆原料的价格低廉，各种营养成份保存比较完整，是水产品加工业的重要组成部分。鱼溶浆的主要营养成分是蛋白质，利用特殊蛋白水解技术以鱼溶浆为原料制备具有特殊功能的肽与游离氨基酸的蛋白水解物，有利于改善品质、提高附加值，促进其在食品、医药和农业中的应用。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种鱼溶浆酶解产物，及其制备方法与应用。本发明采用特殊的蛋白酶水解鱼溶浆，获得了具有高功能肽与游离氨基酸的蛋白水解物。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种鱼溶浆酶解产物的制备方法：利用Pf1al2蛋白酶酶解鱼溶浆，得酶解液，即为含鱼溶浆酶解产物的溶液，进一步的，浓缩、干燥，得鱼溶浆酶解产物；所述Pf1al2蛋白酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，来源于南海海域海洋宏基因组文库。
进一步的，制备方法包括以下步骤：
(1)取鱼溶浆，加适量水配制成底物液，加入Pf1al2蛋白酶，40℃～60℃下酶解10小时以上；
(2)酶解后，离心取上清，得鱼溶浆酶解液；
(3)鱼溶浆酶解液加热灭酶灭菌，得含鱼溶浆酶解产物的溶液，浓缩得浓缩液，或浓缩干燥得粉状酶解产物。
进一步的，所述步骤(1)中，底物液的浓度为10％～50％(w/v，g/mL)。
进一步的，所述步骤(1)中，Pf1al2蛋白酶以酶粉的形式加入，加入量为12000U/g鱼溶浆原料。
进一步的，所述步骤(2)中，离心条件为：8000rpm离心10min。
进一步的，所述步骤(3)中，灭酶灭菌条件为：121℃，20min。
利用上述方法制备得到的鱼溶浆酶解产物，富含功能性多肽与氨基酸，能够促进植物生长，并对炭疽病有防治作用，可用于制备植物生长促进剂，用于制备炭疽病防治剂。具体应用时，将含鱼溶浆酶解产物的溶液稀释或浓缩后，或将鱼溶浆酶解产物配制成溶液，喷洒于植株表面。
本发明的鱼溶浆酶解产物，是采用来源于海洋宏基因组文库的蛋白酶酶解得到的，富含功能性多肽与氨基酸，在促进植物生长、防治植物病虫害方面，效果明显优于其它蛋白酶(比如木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶)的酶解产物，其原因可能是特殊环境来源的海洋蛋白酶具有陆源蛋白酶不具备的特殊酶切活性，从而产生具有特定功能活性的功能性蛋白肽。本发明的鱼溶浆酶解产物在食品、医药、农业领域有着广泛的应用前景。
本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。
下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。
实施例1获得Pf1al2蛋白酶
本发明的发明人从来自我国东海海底污泥样品中提取宏基因组，构建亚克隆质粒并进行筛选，得到一段具有蛋白酶活性基因序列，序列如SEQ ID NO.2所示，所编码蛋白酶命名为Pf1al2(氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示)。在表达蛋白酶过程中该基因序列可由人工基因合成得到。
Pf1al2蛋白酶的氨基酸序列(SEQ ID NO.1所示)：
VDESKLAPKLLAKLQEVSPQELEAAPSIPVIIRYRPDVVRTHTVAEDVEATFVYELTPTVAASASGLQIGELTEDTRIEYVWLDEEIHTCLDRSPAQIDVPAVWSAGYQGTGIRVAIVDTGLDTQHPDFAGRVAAGASFVGGDSVDDNGHGTHVAGIAAGDGSASGGMYRGIAPEAVLYVAKVLDRDGSGSMSSVMAGVEWAVGQNVQIINLSLGGSGSSDGQDALSLTCNAAVARGTVVCAAAGNAGPGSRTIGSPGAAADVVTIGAVDRNDGIARFSSRGPTADGRTKPDVCLPGTDIRSARASGTTMGTPVNDRYTAASGTSMATPHASGVAALLLQAKPSLNPSDIKRLLMDTALDLGQDANAQGAGRAQAYHALQAALGQPIPTPEPPGEEPTPPEKPDGCLPTFLIPLVGR。
编码Pf1al2蛋白酶的基因的核苷酸序列(SEQ ID NO.2所示)：
5’-GTGGACGAAAGCAAACTTGCACCAAAGCTGCTGGCTAAACTGCAAGAGGTGAGCCCGCAGGAACTTGAGGCTGCGCCATCTATCCCGGTGATCATCAGATACCGGCCCGATGTGGTGCGTACGCACACCGTAGCTGAGGACGTCGAGGCGACCTTTGTGTACGAGCTCACACCGACAGTTGCCGCTAGTGCTTCGGGGCTGCAGATCGGTGAGCTGACTGAGGACACGCGTATCGAGTACGTCTGGCTGGACGAAGAGATCCATACCTGTTTGGACCGCTCCCCAGCGCAAATAGATGTCCCTGCTGTATGGTCGGCCGGCTATCAGGGTACCGGGATTAGAGTCGCCATCGTAGATACGGGCCTAGACACACAGCATCCTGATTTTGCCGGGCGCGTGGCTGCTGGGGCAAGTTTCGTCGGCGGCGACTCTGTTGATGACAATGGCCATGGCACACATGTGGCAGGCATTGCGGCCGGAGATGGCAGCGCCTCTGGTGGGATGTACCGTGGAATCGCGCCTGAGGCCGTCTTGTACGTTGCCAAAGTCCTCGACCGAGACGGGTCTGGATCAATGAGCAGTGTTATGGCTGGTGTGGAATGGGCAGTGGGTCAAAACGTACAGATCATCAATCTATCATTGGGCGGTTCAGGCTCCAGTGATGGACAGGATGCCTTGTCGCTAACGTGTAACGCAGCCGTGGCAAGAGGTACTGTCGTCTGTGCTGCGGCAGGTAATGCCGGACCGGGCTCTCGGACCATAGGGTCCCCGGGCGCCGCTGCCGATGTGGTTACGATCGGGGCTGTTGACCGTAATGATGGGATTGCACGGTTTTCCTCGCGAGGGCCGACTGCGGATGGGCGCACCAAGCCTGATGTCTGTTTGCCTGGCACCGACATCCGCTCGGCACGTGCGTCAGGGACGACGATGGGGACTCCGGTCAACGATCGGTACACGGCAGCGTCCGGAACTAGTATGGCTACACCCCATGCATCGGGGGTAGCAGCACTGCTTCTGCAGGCCAAGCCATCTCTGAATCCCTCTGATATCAAGCGATTGTTGATGGACACTGCGCTCGATCTAGGCCAGGACGCGAACGCTCAAGGGGCCGGACGTGCTCAGGCTTATCACGCTCTTCAGGCGGCGCTTGGTCAGCCGATTCCCACACCGGAGCCGCCTGGCGAGGAACCGACCCCACCGGAGAAACCGGATGGGTGTCTGCCGACATTCTTAATTCCTCTTGTTGGACGCTAG-3’。
制备Pf1al2蛋白酶：将人工合成的编码Pf1al2蛋白酶的基因片段重组于载体pET-28a(+)上，以大肠杆菌BL21为宿主进行异源表达。重组工程菌发酵培养，发酵结束后离心收集菌体，使用磷酸缓冲液重悬后，利用高压细胞破碎仪进行细胞破碎，破碎液冷冻离心，上清液加入辅料冷冻干燥，制得Pf1al2蛋白酶酶粉，酶粉比酶活经测定为50000U/g。
实施例2制备鱼溶浆水解液(Pf1al2蛋白酶酶解)
将鱼溶浆(购买自温州守诚化工科技有限公司，货号001，下同)称至摇瓶中加水，配成25％(w/v，g/mL，下同)底物液，混合均匀，分别按照1000U/mL、2000U/mL、3000U/mL、4000U/mL、5000U/mL加入Pf1al2蛋白酶，在40℃条件下，振荡酶解10h，酶解液于8000rpm离心10min，取上清，得到鱼溶浆水解液,分别采用DPPH清除率与牛津杯法测定鱼溶浆水解液抗氧化活性与抑菌性能(以金黄色葡萄球菌为指示菌)，结果表明在3000U/mL条件下水解制得的鱼溶浆水解液DPPH清除率可达到85.1％、抑菌圈直径为1.53cm，为活性最好的加酶量条件。
将鱼溶浆称至摇瓶中加水，配成25％(w/v)底物液，混合均匀，按照3000U/mL加入Pf1al2蛋白酶，分别在20℃、30℃、40℃、50℃、60℃条件下，振荡酶解10h，酶解液于8000rpm离心10min，取上清，得到鱼溶浆水解液,分别采用DPPH清除率与牛津杯法测定鱼溶浆水解液抗氧化活性与抑菌性能(以金黄色葡萄球菌为指示菌)，结果表明在50℃条件下水解制得的鱼溶浆水解液DPPH清除率可达到88.9％、抑菌圈直径为1.72cm，为活性最好的酶解温度条件。
将鱼溶浆称至摇瓶中加水，配成25％(w/v)底物液，混合均匀，按照3000U/mL加入Pf1al2蛋白酶，在50℃条件下，振荡酶解，分别在6h、8h、10h、12h、14h、16h，酶解液于8000rpm离心10min，取上清，得到鱼溶浆水解液,分别采用DPPH清除率与牛津杯法测定鱼溶浆水解液抗氧化活性与抑菌性能(以金黄色葡萄球菌为指示菌)，结果表明在酶解12h条件下水解制得的鱼溶浆水解液DPPH清除率可达到92.5％、抑菌圈直径为1.91cm，为活性最好的酶解时间条件。
将鱼溶浆称至摇瓶中加水，配成25％(w/v)底物液，混合均匀，按照3000U/mL加入Pf1al2蛋白酶，在50℃条件下，振荡酶解12h，酶解液于8000rpm离心10min，取上清，得到鱼溶浆水解液1。
实施例3制备鱼溶浆水解液(木瓜蛋白酶酶解)
将鱼溶浆称至摇瓶中加水，配成25％(w/v)底物液，混合均匀，按照3000U/mL加入木瓜蛋白酶(购买自南宁庞博生物工程有限公司，800000U/g规格)，在55℃条件下，振荡酶解12h，酶解液于8000rpm离心10min，取上清得到鱼溶浆水解液2。
实施例4制备鱼溶浆水解液(中性蛋白酶酶解)
将鱼溶浆称至摇瓶中加水，配成25％(w/v)底物液，混合均匀，按照3000U/mL加入中性蛋白酶(购买自南宁庞博生物工程有限公司，400000U/g规格)，在45℃条件下，振荡酶解12h，酶解液于8000rpm离心10min，取上清得到鱼溶浆水解液3。
实施例5制备鱼溶浆水解液(风味蛋白酶酶解)
将鱼溶浆称至摇瓶中加水，配成25％(w/v)底物液，混合均匀，按照3000U/mL加入风味蛋白酶(购买自郑州万博化工产品有限公司，100000U/g规格)，在40℃条件下，振荡酶解12h，酶解液于8000rpm离心10min，取上清得到鱼溶浆水解液4。
应用实例1鱼溶浆水解液对小白菜生长的影响
上述实施例2～5制备的鱼溶浆水解液1、2、3、4，加水稀释1000倍，分别制得液体肥1、2、3、4，备用。
使用小白菜作为实验植株，种植小白菜种子，实验地点为黄岛月季山生态园有限公司种植大棚内，实验日期为2019年10月11日-11月25日，大棚内温度控制为20℃-25℃，湿度50％-70％；种植3亩，幼苗出土后按照柱距20cm×20cm进行疏苗，平均分为6组：实验组1、2、3、4，对照组1、2。
过程：植株生长至2cm左右开始喷施，于下午5:00左右进行叶面喷施，以叶片有少量液体滴下为喷施控制程度，每隔5天施用一次。实验组1、2、3、4分别喷洒液体肥1、2、3、4；对照组1喷洒相同量的去离子水；对照组2喷洒相同量的未水解鱼溶浆溶液(鱼溶浆加水配成25％的溶液，再加水稀释1000倍)。实验结束时采集植株，进行相关指标测定，具体结果如表1所示。
表1
Figure BDA0002710026530000051
注：同一指标相互比较时，上标同一英文小写字母代表组间无显著性差异。
由小白菜施用实验可以看出，未水解鱼溶浆溶液可以促进小白菜的生长，但促生长效果弱于鱼溶浆水解液。在不同的水解鱼溶浆工艺实验组中，使用Pf1al2蛋白酶酶解制备的鱼溶浆水解液促生长效果最好，株高、根长、茎叶鲜重数值都明显高于使用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶与风味蛋白酶酶解制备的鱼溶浆水解液，有显著差异。
应用实例2鱼溶浆水解液在抗小白菜炭疽病中的应用
小白菜种植、分组、鱼溶浆使用方法同应用实例1，不同之处在于：播种前按土壤干重0.3％接入浓度为106CFU/mL的希金斯炭疽菌菌液。于小白菜生长第40天时观察并统计其病情，计算各组的发病率与防控效果，如表2所示。
表2
Figure BDA0002710026530000052
Figure BDA0002710026530000061
注：发病率(％)＝(发病株数/实验植株总数)×100％。
防治效果(％)＝[(对照组发病率-实验组发病率)/对照组发病率]×100％。
由实验结果可以看出，鱼溶浆水解液的使用可以有效降低小白菜炭疽病的发病率，其中使用Pf1al2蛋白酶酶解制备的鱼溶浆水解液防控效果最好，明显优于其他蛋白酶所制备的鱼溶浆水解液。
给本领域技术人员提供上述实施例，以完全公开和描述如何实施和使用所主张的实施方案，而不是用于限制本文公开的范围。对于本领域技术人员而言显而易见的修饰将在所附权利要求的范围内。
序列表
<110> 中国海洋大学
<120> 鱼溶浆酶解产物及其制备方法与应用
<141> 2020-09-25
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 417
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<400> 1
Val Asp Glu Ser Lys Leu Ala Pro Lys Leu Leu Ala Lys Leu Gln Glu
1 5 10 15
Val Ser Pro Gln Glu Leu Glu Ala Ala Pro Ser Ile Pro Val Ile Ile
20 25 30
Arg Tyr Arg Pro Asp Val Val Arg Thr His Thr Val Ala Glu Asp Val
35 40 45
Glu Ala Thr Phe Val Tyr Glu Leu Thr Pro Thr Val Ala Ala Ser Ala
50 55 60
Ser Gly Leu Gln Ile Gly Glu Leu Thr Glu Asp Thr Arg Ile Glu Tyr
65 70 75 80
Val Trp Leu Asp Glu Glu Ile His Thr Cys Leu Asp Arg Ser Pro Ala
85 90 95
Gln Ile Asp Val Pro Ala Val Trp Ser Ala Gly Tyr Gln Gly Thr Gly
100 105 110
Ile Arg Val Ala Ile Val Asp Thr Gly Leu Asp Thr Gln His Pro Asp
115 120 125
Phe Ala Gly Arg Val Ala Ala Gly Ala Ser Phe Val Gly Gly Asp Ser
130 135 140
Val Asp Asp Asn Gly His Gly Thr His Val Ala Gly Ile Ala Ala Gly
145 150 155 160
Asp Gly Ser Ala Ser Gly Gly Met Tyr Arg Gly Ile Ala Pro Glu Ala
165 170 175
Val Leu Tyr Val Ala Lys Val Leu Asp Arg Asp Gly Ser Gly Ser Met
180 185 190
Ser Ser Val Met Ala Gly Val Glu Trp Ala Val Gly Gln Asn Val Gln
195 200 205
Ile Ile Asn Leu Ser Leu Gly Gly Ser Gly Ser Ser Asp Gly Gln Asp
210 215 220
Ala Leu Ser Leu Thr Cys Asn Ala Ala Val Ala Arg Gly Thr Val Val
225 230 235 240
Cys Ala Ala Ala Gly Asn Ala Gly Pro Gly Ser Arg Thr Ile Gly Ser
245 250 255
Pro Gly Ala Ala Ala Asp Val Val Thr Ile Gly Ala Val Asp Arg Asn
260 265 270
Asp Gly Ile Ala Arg Phe Ser Ser Arg Gly Pro Thr Ala Asp Gly Arg
275 280 285
Thr Lys Pro Asp Val Cys Leu Pro Gly Thr Asp Ile Arg Ser Ala Arg
290 295 300
Ala Ser Gly Thr Thr Met Gly Thr Pro Val Asn Asp Arg Tyr Thr Ala
305 310 315 320
Ala Ser Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Ala Ser Gly Val Ala Ala
325 330 335
Leu Leu Leu Gln Ala Lys Pro Ser Leu Asn Pro Ser Asp Ile Lys Arg
340 345 350
Leu Leu Met Asp Thr Ala Leu Asp Leu Gly Gln Asp Ala Asn Ala Gln
355 360 365
Gly Ala Gly Arg Ala Gln Ala Tyr His Ala Leu Gln Ala Ala Leu Gly
370 375 380
Gln Pro Ile Pro Thr Pro Glu Pro Pro Gly Glu Glu Pro Thr Pro Pro
385 390 395 400
Glu Lys Pro Asp Gly Cys Leu Pro Thr Phe Leu Ile Pro Leu Val Gly
405 410 415
Arg
<210> 2
<211> 1254
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 2
gtggacgaaa gcaaacttgc accaaagctg ctggctaaac tgcaagaggt gagcccgcag 60
gaacttgagg ctgcgccatc tatcccggtg atcatcagat accggcccga tgtggtgcgt 120
acgcacaccg tagctgagga cgtcgaggcg acctttgtgt acgagctcac accgacagtt 180
gccgctagtg cttcggggct gcagatcggt gagctgactg aggacacgcg tatcgagtac 240
gtctggctgg acgaagagat ccatacctgt ttggaccgct ccccagcgca aatagatgtc 300
cctgctgtat ggtcggccgg ctatcagggt accgggatta gagtcgccat cgtagatacg 360
ggcctagaca cacagcatcc tgattttgcc gggcgcgtgg ctgctggggc aagtttcgtc 420
ggcggcgact ctgttgatga caatggccat ggcacacatg tggcaggcat tgcggccgga 480
gatggcagcg cctctggtgg gatgtaccgt ggaatcgcgc ctgaggccgt cttgtacgtt 540
gccaaagtcc tcgaccgaga cgggtctgga tcaatgagca gtgttatggc tggtgtggaa 600
tgggcagtgg gtcaaaacgt acagatcatc aatctatcat tgggcggttc aggctccagt 660
gatggacagg atgccttgtc gctaacgtgt aacgcagccg tggcaagagg tactgtcgtc 720
tgtgctgcgg caggtaatgc cggaccgggc tctcggacca tagggtcccc gggcgccgct 780
gccgatgtgg ttacgatcgg ggctgttgac cgtaatgatg ggattgcacg gttttcctcg 840
cgagggccga ctgcggatgg gcgcaccaag cctgatgtct gtttgcctgg caccgacatc 900
cgctcggcac gtgcgtcagg gacgacgatg gggactccgg tcaacgatcg gtacacggca 960
gcgtccggaa ctagtatggc tacaccccat gcatcggggg tagcagcact gcttctgcag 1020
gccaagccat ctctgaatcc ctctgatatc aagcgattgt tgatggacac tgcgctcgat 1080
ctaggccagg acgcgaacgc tcaaggggcc ggacgtgctc aggcttatca cgctcttcag 1140
gcggcgcttg gtcagccgat tcccacaccg gagccgcctg gcgaggaacc gaccccaccg 1200
gagaaaccgg atgggtgtct gccgacattc ttaattcctc ttgttggacg ctag 1254

Claims (9)

1.一种鱼溶浆酶解产物的制备方法，其特征在于：利用Pf1al2蛋白酶酶解鱼溶浆，得酶解液，即为含鱼溶浆酶解产物的溶液，或：将含鱼溶浆酶解产物的溶液浓缩、干燥，得鱼溶浆酶解产物；所述Pf1al2蛋白酶的氨基酸序列如下所示，如SEQ ID NO.1所示：
Pf1al2蛋白酶的氨基酸序列如下所示：
VDESKLAPKLLAKLQEVSPQELEAAPSIPVIIRYRPDVVRTHTVAEDVEATFVYELTPTVAASASGLQIGELTEDTRIEYVWLDEEIHTCLDRSPAQIDVPAVWSAGYQGTGIRVAIVDTGLDTQHPDFAGRVAAGASFVGGDSVDDNGHGTHVAGIAAGDGSASGGMYRGIAPEAVLYVAKVLDRDGSGSMSSVMAGVEWAVGQNVQIINLSLGGSGSSDGQDALSLTCNAAVARGTVVCAAAGNAGPGSRTIGSPGAAADVVTIGAVDRNDGIARFSSRGPTADGRTKPDVCLPGTDIRSARASGTTMGTPVNDRYTAASGTSMATPHASGVAALLLQAKPSLNPSDIKRLLMDTALDLGQDANAQGAGRAQAYHALQAALGQPIPTPEPPGEEPTPPEKPDGCLPTFLIPLVGR。
2.根据权利要求1所述的鱼溶浆酶解产物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）取鱼溶浆，加适量水配制成底物液，加入Pf1al2蛋白酶，40℃～60℃酶解10小时以上；
（2）酶解后，离心取上清，得鱼溶浆酶解液；
（3）鱼溶浆酶解液加热灭酶灭菌，得含鱼溶浆酶解产物的溶液，或：浓缩得浓缩液，或浓缩干燥得粉状酶解产物。
3.根据权利要求2所述的鱼溶浆酶解产物的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，底物液的浓度为10%～50%。
4.根据权利要求2所述的鱼溶浆酶解产物的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，Pf1al2蛋白酶以酶粉的形式加入，加入量为12000 U/g鱼溶浆原料。
5.根据权利要求2所述的鱼溶浆酶解产物的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，离心条件为：8000 rpm离心10 min。
6.根据权利要求2所述的鱼溶浆酶解产物的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中，灭酶灭菌条件为：121℃，20 min。
7.利用权利要求1～6中任一项所述的制备方法制备的得到的鱼溶浆酶解产物。
8.权利要求7所述的鱼溶浆酶解产物在促进小白菜生长中的应用，或/和：在制备促进小白菜生长的生长促进剂中的应用，或/和：在防治小白菜炭疽病中的应用，或/和：在制备防治小白菜炭疽病的防治剂中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：具体应用时，将含鱼溶浆酶解产物的溶液稀释或浓缩后，或将鱼溶浆酶解产物配制成溶液，喷洒于植株表面。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107089869A (zh) * 2017-06-01 2017-08-25 慈溪创璞食品科技有限公司 一种鱼溶浆蛋白肥的制备方法
CN107494886A (zh) * 2017-07-11 2017-12-22 浙江丰宇海洋生物制品有限公司 一种利用鱼溶浆生产的蛋白粉产品
CN111285719A (zh) * 2020-01-21 2020-06-16 浙江大学舟山海洋研究中心 一种基于二次发酵技术的鱼肽肥制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107089869A (zh) * 2017-06-01 2017-08-25 慈溪创璞食品科技有限公司 一种鱼溶浆蛋白肥的制备方法
CN107494886A (zh) * 2017-07-11 2017-12-22 浙江丰宇海洋生物制品有限公司 一种利用鱼溶浆生产的蛋白粉产品
CN111285719A (zh) * 2020-01-21 2020-06-16 浙江大学舟山海洋研究中心 一种基于二次发酵技术的鱼肽肥制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A novel thermostable serine protease from a metagenomic library derived from marine sediments in the East China Sea;Jianan Sun等;《Biotechnologically relevant enzymes and proteins》;20200923;第9229-9238页 *
高产酸性蛋白酶菌株筛选及酶解鱼溶浆制备氨基酸原液的工艺研究;杨城;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)工程科技Ⅰ辑》;20200315;B016-417 *

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