CN112083161A - 一种降钙素原(pct)荧光检测试剂盒及其制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒及其制备工艺,一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒,包括NC膜和荧光垫,所述NC膜与所述荧光垫部分重叠;一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒的制备工艺,包括以下步骤:S101、预准备:准备样品垫、吸样垫和PVC底板以及抗降钙素原(PCT)单克隆抗体、荧光微球溶液和羊抗鼠IgG;S103、荧光垫制备。有益效果:本发明通过双抗体夹心法免疫荧光层析技术,与配套荧光免疫层析读数仪使用,实现对血清中降钙素原(PCT)的定量检测,通过检测线荧光的强弱在一定范围内能够反应样本中降钙素原(PCT)的含量,不仅操作简便,而且准确度和稳定性好,抗干扰性强,可以满足临床需求。
Description
技术领域
本发明涉及生化检测技术领域,具体来说,涉及一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒及其制备工艺。
背景技术
降钙素原(PCT)是一种蛋白质,当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时它在血浆中的水平升高。自身免疫、过敏和病毒感染时降钙素原(PCT)不会升高。局部有限的细菌感染、轻微的感染和慢性炎症不会导致其升高。细菌内毒素在诱导过程中担任了至关重要的作用。
降钙素原(PCT)反映了全身炎症反应的活跃程度。影响降钙素原(PCT)水平的因素包括被感染器官的大小和类型、细菌的种类、炎症的程度和免疫反应的状况。另外,降钙素原(PCT)只是在少数患者的大型外科术后1-4d可以测到。降钙素原(PCT)水平的升高出现在严重休克、全身性炎症反应综合征(SIRS)和多器官功能紊乱综合征(MODS),即使没有细菌感染或细菌性病灶。但是,在这些病例中降钙素原(PCT)水平通常低于那些有细菌性病灶的患者。从肠道释放细胞因子或细菌移位可能引起诱导。
目前,测定降钙素原(PCT)常用方法有放射免疫学分析法、ELISA法、免疫比浊法等。其中放射免疫学分析法检测耗时长(19~22h),而且有放射性元素的污染使用受到限制;ELISA法,操作繁琐,灵敏度低,检测结果多为定性;免疫比浊法,操作简单、使用方便,但灵敏度和稳定性较差,线性范围比较窄。
针对相关技术中的问题,目前尚未提出有效的解决方案。
发明内容
针对相关技术中的问题,本发明的目的是提出一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒及其制备工艺,通过双抗体夹心法免疫荧光层析技术,与配套荧光免疫层析读数仪使用,实现对血清中降钙素原(PCT)的定量检测,通过检测线荧光的强弱在一定范围内能够反应样本中降钙素原(PCT)的含量,不仅操作简便,而且准确度和稳定性好,抗干扰性强,可以满足临床需求,以克服现有相关技术所存在的上述技术问题。
本发明的技术方案是这样实现的:
根据本发明的一方面,提供了一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒。
一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒,包括NC膜和荧光垫,所述NC膜与所述荧光垫部分重叠,其中;
所述NC膜下部包被抗降钙素原(PCT)单克隆抗体形成检测线;
所述NC膜上部包被羊抗鼠IgG抗体形成质控线;
所述荧光垫为抗降钙素原(PCT)单克隆抗体与荧光微球溶液吸附结合的标记荧光微球制备的荧光垫干样。
进一步的,还包括PVC底板、样品垫和吸样垫,其中;
所述NC膜、所述荧光垫、所述样品垫和所述吸样垫分别位于所述PVC底板的上方;
所述荧光垫位于所述样品垫和所述NC膜之间,且所述荧光垫和所述样品垫部分重叠;
所述NC膜位于所述荧光垫和所述吸样垫之间,且所述NC膜和所述吸样垫部分重叠;
所述检测线相靠近所述样品垫一侧。
根据本发明的一方面,提供了一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒的制备工艺。
一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒的制备工艺,包括以下步骤:
S101、预准备:准备样品垫、吸样垫和PVC底板以及抗降钙素原(PCT)单克隆抗体、荧光微球溶液和羊抗鼠IgG;
S103、荧光垫制备:将抗降钙素原(PCT)单克隆抗体加入到荧光微球溶液中,抗降钙素原(PCT)单克隆抗体和荧光微球吸附结合,形成标记荧光微球,然后将标记的荧光微球制备成荧光垫干样,制备荧光垫;
S105、NC膜包被:NC膜上将配对的抗降钙素原(PCT)单克隆抗体包被到NC膜的下部,形成检测线(T线),并且羊抗鼠IgG包被在NC膜的上部,形成质控线(C线),制备NC包被膜;
S109、组装切割:将NC包被膜、荧光垫、样品垫和吸样垫组装于PVC底板上,且样品垫与荧光垫之间有部分重叠,荧光垫与NC包被膜之间有部分重叠,NC包被膜与吸样垫之间有部分重叠,组装完成后切割成荧光免疫层析试纸条,获取成品。
本发明的有益效果:本发明通过双抗体夹心法免疫荧光层析技术,与配套荧光免疫层析读数仪使用,实现对血清中降钙素原(PCT)的定量检测,通过检测线荧光的强弱在一定范围内能够反应样本中降钙素原(PCT)的含量,不仅操作简便,而且准确度和稳定性好,抗干扰性强,可以满足临床需求。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是根据本发明实施例的降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒的结构示意图;
图2是根据本发明实施例的降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒的应用示意图;
图3是根据本发明实施例的降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒的制备工艺的流程示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
根据本发明的实施例,提供了一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒。
实施例一:
如图1-2所示,本发明的实施例一为:一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒,包括NC膜2和荧光垫1,所述NC膜2与所述荧光垫1部分重叠,其中;
所述NC膜2下部包被抗降钙素原(PCT)单克隆抗体形成检测线3;
所述NC膜2上部包被羊抗鼠IgG抗体形成质控线4;
所述荧光垫1为抗降钙素原(PCT)单克隆抗体与荧光微球溶液吸附结合的标记荧光微球制备的荧光垫干样。
实施例二:
如图1-2所示,本发明的实施例二为:一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒,在实施例一的基础上,还包括PVC底板7、样品垫5和吸样垫6,其中;
所述NC膜2、所述荧光垫1、所述样品垫5和所述吸样垫6分别位于所述PVC底板7的上方;
所述荧光垫1位于所述样品垫5和所述NC膜2之间,且所述荧光垫1和所述样品垫5部分重叠;
所述NC膜2位于所述荧光垫1和所述吸样垫6之间,且所述NC膜2和所述吸样垫6部分重叠;
所述检测线3相靠近所述样品垫5一侧。
根据本发明的实施例,还提供了一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒的制备工艺。
一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒的制备工艺,包括以下步骤:
S101、预准备:准备样品垫、吸样垫和PVC底板以及抗降钙素原(PCT)单克隆抗体、荧光微球溶液和羊抗鼠IgG;
S103、荧光垫制备:将抗降钙素原(PCT)单克隆抗体加入到荧光微球溶液中,抗降钙素原(PCT)单克隆抗体和荧光微球吸附结合,形成标记荧光微球,然后将标记的荧光微球制备成荧光垫干样,制备荧光垫;
S105、NC膜包被:NC膜上将配对的抗降钙素原(PCT)单克隆抗体包被到NC膜的下部,形成检测线(T线),并且羊抗鼠IgG包被在NC膜的上部,形成质控线(C线),制备NC包被膜;
S107、组装切割:将NC包被膜、荧光垫、样品垫和吸样垫组装于PVC底板上,且样品垫与荧光垫之间有部分重叠,荧光垫与NC包被膜之间有部分重叠,NC包被膜与吸样垫之间有部分重叠,组装完成后切割成荧光免疫层析试纸条,获取成品。
借助于上述技术方案,本试剂盒运用双抗体夹心法免疫荧光层析技术,与配套荧光免疫层析读数仪使用,实现对血清中降钙素原(PCT)的定量检测。在上样垫处加入100µl的样本,若标本中含有降钙素原(PCT)时,则其会先与标记有荧光微球的抗降钙素原(PCT)单克隆抗体形成荧光微球复合物 (即荧光微球-抗PCT抗体- PCT),在层析作用下,该荧光微球复合物会沿NC膜(硝酸纤维素膜)移动,当其遇到包被有抗PCT抗体的检测区(T线)时,其会被该区捕获住,在紫外灯下形成一条荧光色带。部分未结合荧光微球会继续移动,当其移动至包被有羊抗鼠IgG的质控区(C线)时,与羊抗鼠IgG抗体形成抗原-抗体结合物,在质控区显荧光。若样本中没有PCT,则T线不显荧光而C线显荧光。这样利用该试剂盒检测阳性样本时,会有两条荧光色带(T线、C线),阴性样品只有一条荧光色带C线。如果C线不显荧光,说明纸条失效或检测失败。T线荧光的强弱在一定范围内能够反应样本中降钙素原(PCT)的含量。检测时,通过配套荧光免疫层析读数仪可精确计算出样本中PCT的含量。
在一个实施例中,最低检测限:分别检测PCT浓度为0.05 ng/mL、0.10 ng/mL、0.20ng/mL的最低检出限参考品,用配套仪器测定,最低检出限应不高于0.2 ng/mL。阴性特异性:用含50 ng/mL C反应蛋白(CRP)、1 IU/mL白细胞介素6(IL-6)、60 ng/mL人降钙素(calcitonin)、30 ng/mL人抗钙素(katacalcin)的0 ng/mL PCT液进行检测,用配套仪器测定,结果应均小于0.1ng/mL。阳性特异性:用含50ng/mL CRP、1IU/mL IL-6、60ng/mL人降钙素、30ng/mL人抗钙素的0.2ng/mL PCT液进行检测,用配套仪器测定,计算特异性参考品测定结果的均值,相对偏差应≤±20%。线性范围:取浓度范围在0.05ng/ml~30ng/ml内的5个以上不同浓度的PCT参考品(用PCT阴性血清稀释的重组人PCT校准品或阳性参考血清),配套专用免疫层析定量读数仪测定,标本线性范围是0.1ng/ml~30ng/ml,得到线性相关系数r均≥0.99。准确度:测定0.5~30 ng/ml范围内的高低两个浓度的血清参考品,用配套仪器测定,计算各特异性参考品测定结果的均值,相对偏差应≤±20%。批内重复性(批内差):用同一批试剂盒(n=10),测定同一浓度的参考血清10次,CV批内应≤15%。批间重复性(批间差):任意3个批次的试剂盒,测定同一浓度的参考血清各10次, CV批间应≤20%。结果判断:20分钟时通过分析仪检测定量结果。阳性:出现一条检测线和一条质控线,且检测浓度高于正常参考值;阴性:只出现一条质控线或检测浓度小于等于正常参考值。
综上所述,借助于本发明的上述技术方案,可实现如下效果:
本发明通过双抗体夹心法免疫荧光层析技术,与配套荧光免疫层析读数仪使用,实现对血清中降钙素原(PCT)的定量检测,通过检测线荧光的强弱在一定范围内能够反应样本中降钙素原(PCT)的含量,不仅操作简便,而且准确度和稳定性好,抗干扰性强,可以满足临床需求。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒,其特征在于,包括NC膜(2)和荧光垫(1),所述NC膜(2)与所述荧光垫(1)部分重叠,其中;
所述NC膜(2)下部包被抗降钙素原(PCT)单克隆抗体形成检测线(3);
所述NC膜(2)上部包被羊抗鼠IgG抗体形成质控线(4);
所述荧光垫(1)为抗降钙素原(PCT)单克隆抗体与荧光微球溶液吸附结合的标记荧光微球制备的荧光垫干样。
2.根据权利要求1所述的一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒,其特征在于,还包括PVC底板(7)、样品垫(5)和吸样垫(6),其中;
所述NC膜(2)、所述荧光垫(1)、所述样品垫(5)和所述吸样垫(6)分别位于所述PVC底板(7)的上方;
所述荧光垫(1)位于所述样品垫(5)和所述NC膜(2)之间,且所述荧光垫(1)和所述样品垫(5)部分重叠;
所述NC膜(2)位于所述荧光垫(1)和所述吸样垫(6)之间,且所述NC膜(2)和所述吸样垫(6)部分重叠;
所述检测线(3)相靠近所述样品垫(5)一侧。
3.一种降钙素原(PCT)荧光检测试剂盒的制备工艺,其特征在于,包括以下步骤:
S101、预准备:准备样品垫、吸样垫和PVC底板以及抗降钙素原(PCT)单克隆抗体、荧光微球溶液和羊抗鼠IgG;
S103、荧光垫制备:将抗降钙素原(PCT)单克隆抗体加入到荧光微球溶液中,抗降钙素原(PCT)单克隆抗体和荧光微球吸附结合,形成标记荧光微球,然后将标记的荧光微球制备成荧光垫干样,制备荧光垫;
S105、NC膜包被:NC膜上将配对的抗降钙素原(PCT)单克隆抗体包被到NC膜的下部,形成检测线(T线),并且羊抗鼠IgG包被在NC膜的上部,形成质控线(C线),制备NC包被膜;
S107、组装切割:将NC包被膜、荧光垫、样品垫和吸样垫组装于PVC底板上,且样品垫与荧光垫之间有部分重叠,荧光垫与NC包被膜之间有部分重叠,NC包被膜与吸样垫之间有部分重叠,组装完成后切割成荧光免疫层析试纸条,获取成品。
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