CN112067605A - 用于改变钙反应测定曲线的试剂及方法 - Google Patents

用于改变钙反应测定曲线的试剂及方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于改变钙反应测定曲线的试剂及方法，所述试剂的组成成分包括磷酸盐、醋酸钠、8‑羟基喹啉、偶氮胂Ⅲ以及离子络合剂。本发明的改变钙反应测定曲线的方法包括以下步骤：利用全自动生化分析仪，单试剂终点法测定；将蒸馏水、待测样品以及校准品放置于所述全自动生化分析仪的对应位置处，打开全自动生化分析仪进行检测；其中，所述蒸馏水、待测样品以及校准品中分别加入所述试剂。本发明用于改变钙反应测定曲线的试剂及方法，可通过纠正钙反应曲线的形状，使得钙反应曲线更能符合人们的认知习惯，以及契合反应原理，准确地反应其化学反应的趋势，同时提高钙检测的准确性。

Description

用于改变钙反应测定曲线的试剂及方法
技术领域
本发明涉及检测试剂技术领域，具体涉及一种用于改变钙反应测定曲线的试剂及方法。
背景技术
血清钙的检测方法有很多，有比色法，例如，常用邻甲酚酞络合酮法、甲基麝香草酚蓝法、偶氮胂III法、火焰光度法、原子吸收分光光度法、滴定法、放射性核素稀释质谱法等。偶氮胂III比色法由于具有试剂稳定、本底吸光度低、无强碱、适于手工操作和自动化分析仪等优点，近年来发展迅速，被广泛应用。偶氮胂III比色法的原理是游离偶氮胂III与钙离子形成紫色复合物，在波长660nm处有较大吸收峰，在一定范围内吸光度与钙浓度成正比，从而求出血清钙含量。偶氮胂Ⅲ法钙试剂检测血清钙的反应为正反应，在加入样本后，其反应曲线应为快速上升，然后反应趋缓，最终到达反应终点。
目前，市场上的一些钙测定试剂盒检测样本的反应曲线，在加入样本后，反应曲线快速下降，然后趋缓，最后达到反应终点，这与偶氮胂Ⅲ法的检测原理相悖。容易引起人们对于反应原理的质疑以及存在一定的检测偏差。
发明内容
为此，本发明提供一种用于改变钙反应测定曲线的试剂及方法。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
用于改变钙反应测定曲线的试剂，所述试剂的组成成分包括磷酸盐、醋酸钠、8-羟基喹啉、偶氮胂Ⅲ以及离子络合剂。
本发明的一个实施例中，所述离子络合剂为乙二胺四乙酸及、乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸及其盐类中的一种或几种。
本发明的一个实施例中，所述试剂中，磷酸盐缓冲液的浓度为200-500mmol/L，醋酸钠的摩尔浓度为50-100mmol/L，8-羟基喹啉的质量浓度为0.1-2g/L，离子络合剂的质量百分数为0.1％-4％，偶氮胂Ⅲ的质量浓度为3g/L-10g/L。
本发明的一个实施例中，所述磷酸盐缓冲液的浓度为300mmol/L，醋酸钠的摩尔浓度为75mmol/L，8-羟基喹啉的质量浓度为1g/L，离子络合剂的质量百分数为2.5％，偶氮胂Ⅲ的质量浓度为5g/L。
本发明还提供一种改变钙反应测定曲线的方法，其包括以下步骤：
利用全自动生化分析仪，采用单试剂终点法测定；
将蒸馏水、待测样品以及校准品放置于所述全自动生化分析仪的对应位置处，打开全自动生化分析仪进行检测；
其中，所述蒸馏水、待测样品以及以及校准品中分别加入权利要求1所述的试剂。
本发明的一个实施例中，所述全自动生化分析仪设置条件为：反应温度为37℃，测定主波长为660nm，副波长为750nm。
本发明的一个实施例中，所述全自动生化分析仪为日立7180全自动分析仪。
本发明的一个实施例中，所述试剂中，磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为200-500mmol/L，醋酸钠的摩尔浓度为50-100mmol/L，8-羟基喹啉的质量浓度为0.1-2g/L，离子络合剂的质量百分数为0.1％-4％，偶氮胂Ⅲ的质量浓度为3g/L-10g/L。
本发明具有如下优点：
本发明用于改变钙反应测定曲线的试剂及方法可通过纠正钙反应曲线，使得钙反应测定曲线更能符合人们的认知习惯，并且契合钙反应原理，准确反应钙化学反应的趋势，同时提高钙检测的准确性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。
本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。
图1为现有技术的钙检测试剂中不含有离子络合剂的钙反应测定曲线；
图2为本发明提供的钙检测试剂中含有EDTA络合剂的钙反应测定曲线。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例提供一种用于改变钙反应测定曲线的试剂，该试剂包括磷酸盐溶液的摩尔浓度为200mmol/L，醋酸钠的摩尔浓度为50mmol/L，8-羟基喹啉的质量浓度为0.1g/L，离子络合剂质量百分浓度为0.1％，偶氮胂Ⅲ质量浓度为5g/L。8-羟基喹啉溶液是8-羟基喹啉溶于浓度为5g/L二甲基亚砜制成，离子络合剂溶液是将离子络合剂溶于质量浓度为0.4g/LNaOH溶液中制成。
其中，母液的配制方法为：磷酸盐缓冲液是由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠制成；8-羟基喹啉溶液是用二甲基亚砜溶解8-羟基喹啉制成；EDTA溶液是取EDTA离子络合剂溶于0.1mol/L的NaOH溶液中制成。
实施例2
本实施例提供的一种用于改变钙反应测定曲线的试剂，该试剂中，磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为300mmol/L，醋酸钠的摩尔浓度为75mmol/L，8-羟基喹啉的质量浓度为1g/L，EDTA离子络合剂质量百分浓度为2.5％，偶氮胂Ⅲ溶液质量浓度为6g/L。8-羟基喹啉溶液是8-羟基喹啉溶于质量浓度为15g/L二甲基亚砜制成，离子络合剂溶液是将离子络合剂溶于浓度为0.4g/L NaOH溶液中制成。
其中，母液配制方法为：磷酸盐缓冲液是由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠制成；8-羟基喹啉溶液是用二甲基亚砜溶解8-羟基喹啉制成；EDTA溶液是将EDTA溶于0.1mol/L的NaOH溶液中制成。
实施例3
本实施例提供一种用于改变钙反应测定曲线的试剂，该试剂中磷酸盐缓冲液的浓度为500mmol/L，醋酸钠的摩尔浓度为100mmol/L，8-羟基喹啉的质量浓度为2g/L，离子络合剂EDTA的质量百分浓度为4％，偶氮胂Ⅲ质量浓度为8g/L。8-羟基喹啉溶液是8-羟基喹啉溶于质量浓度为20g/L二甲基亚砜制成，离子络合剂溶液是将离子络合剂溶于质量浓度为0.4g/L NaOH溶液中制成。
母液配制方法为：磷酸盐缓冲液是由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠制成；8-羟基喹啉溶液是用二甲基亚砜溶解8-羟基喹啉制成；EDTA溶液是将EDTA溶于0.1mol/L的NaOH溶液中制成。配置的母液中，磷酸盐缓冲液的浓度为500mmol/L，8-羟基喹啉的质量浓度为2g/L，离子络合剂EDTA的质量浓度为40g/L。
实施例4
本实施例提供一种用于改变钙反应测定曲线的试剂，该试剂中，磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为500mmol/L，醋酸钠摩尔浓度为100mmol/L，8-羟基喹啉的质量浓度为0.5g/L，离子络合剂EDTA的质量百分数为3.5％，偶氮胂Ⅲ的质量浓度为6g/L。
其中，母液配制方法为：磷酸盐缓冲液是由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠制成；8-羟基喹啉溶液是用二甲基亚砜溶解8-羟基喹啉制成；EDTA溶液是将EDTA溶于0.1mol/L的NaOH溶液中制成。
上述实施例中，离子络合剂可为乙二胺四乙酸、乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸及其盐类中的一种或几种。
实施例5
本实施例提供一种改变钙反应测定曲线的方法，包括以下步骤：
步骤一、配置实施例1的试剂：称取磷酸氢二钠、磷酸二氢钠制成摩尔浓度为200mmol/L的磷酸盐缓冲液；用二甲基亚砜溶解8-羟基喹啉，制成质量浓度为0.1g/L的8-羟基喹啉溶液；取EDTA溶于0.1mol/L的NaOH溶液中制成质量百分浓度为0.1％EDTA溶液，偶氮胂Ⅲ的质量浓度为5g/L。
试剂配制过程中，在磷酸盐缓冲液中加入醋酸钠，混合摇匀，再依次加入8-羟基喹啉溶液、偶氮胂Ⅲ、EDTA溶液，混匀后制成实施例1的用于改变钙反应测定曲线的试剂。
步骤二、采用全自动生化分析仪，如日立7180全自动分析仪等，利用单试剂终点法进行测定，在样品盘的对应位置放置蒸馏水、Randox复合校准品和待测样品，其中，蒸馏水、Randox复合校准品和待测样品中分别加入制备的实施例1的试剂，测定条件如表1所示，具体的操作如表2所示。
表1
Figure BDA0002619848610000051
表2
Figure BDA0002619848610000061
本实施例的改变钙反应测定曲线的方法，在样本加入后，其反应曲线表现正常，钙反应测定曲线如图2所示。由图2可知，在钙反应试剂中加入离子络合剂能有效改善钙反应测定的反应曲线，呈现明显的正反应趋势。
对比例1
本对比例中，其所有实验过程和条件均与实施例4相同，其区别仅在于，所采用的钙检测试剂为市场销售的钙检测试剂(偶氮砷Ⅲ法)，规格型号：1*40ml，该钙检测试剂中不含有离子络合剂。具体的，如如图1所示，为市场在售钙试剂的钙反应测定曲线。
本发明钙反应测定的实验检测原理具体为：
本发明中，钙离子反应过程为：
Figure BDA0002619848610000062
偶氮砷Ⅲ-Ca复合物在660nm有特征吸收峰，吸光度与样品中钙离子浓度成正比。
Figure BDA0002619848610000063
复合物，在样品溶液中，EDTA、偶氮胂Ⅲ均能和钙离子结合，EDTA与钙离子结合的能力比偶氮胂Ⅲ和钙离子结合能力更强。
由于钙检测试剂为单试剂，在未加入络合剂EDTA之前，偶氮胂Ⅲ与Ca2+离子结合生成蓝紫色复合物，反应迅速，由于该反应为可逆反应，之后一段时间内反应会向左进行，即负反应方向进行，偶氮砷Ⅲ-Ca复合物发生解离，致使吸光度值下降，在达到解离平衡时，偶氮胂Ⅲ与Ca2+离子结合生成蓝紫色复合物的正反应与偶氮砷Ⅲ-Ca复合物解离生成偶氮胂Ⅲ和Ca的负反应达到平衡状态，吸光度也达到了稳定。
当钙检测试剂中加入EDTA络合剂后，由于EDTA与钙离子的结合能力更强，所以在体系中钙离子优先与EDTA反应，由于加入的EDTA量较少，所以富余的钙离子就会与偶氮砷Ⅲ反应。在钙离子与EDTA的反应过程中，也存在着解离平衡，在达到解离平衡前，钙离子与EDTA反应向着负反应方向进行，即钙离子生成的方向。钙离子Ca2+的不断生成就会促进偶氮胂Ⅲ与Ca2+结合反应不断向正反应方向进行，从而使吸光度升高，在达到平衡时，吸光度也就达到了稳定。其反映在反应曲线上，其图线的形状如2中的测定曲线形状。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (8)

1.用于改变钙反应测定曲线的试剂，其特征在于，所述试剂的组成成分包括磷酸盐、醋酸钠、8-羟基喹啉、偶氮胂Ⅲ以及离子络合剂。
2.如权利要求1所述的用于改变钙反应测定曲线的试剂，其特征在于，
所述离子络合剂为乙二胺四乙酸及、乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸及其盐类中的一种或几种。
3.如权利要求1所述的用于改变钙反应测定曲线的试剂，其特征在于，
所述试剂中，磷酸盐缓冲液的浓度为200-500mmol/L，醋酸钠的摩尔浓度为50-100mmol/L，8-羟基喹啉的质量浓度为0.1-2g/L，离子络合剂的质量百分数为0.1％-4％，偶氮胂Ⅲ的质量浓度为3g/L-10g/L。
4.如权利要求3所述的用于改变钙反应测定曲线的试剂，其特征在于，
所述磷酸盐缓冲液的浓度为300mmol/L，醋酸钠的摩尔浓度为75mmol/L，8-羟基喹啉的质量浓度为1g/L，离子络合剂的质量百分数为2.5％，偶氮胂Ⅲ的质量浓度为5g/L。
5.一种改变钙反应测定曲线的方法，其特征在于包括以下步骤：
利用全自动生化分析仪，采用单试剂终点法测定；
将蒸馏水、待测样品以及校准品放置于所述全自动生化分析仪的对应位置处，打开全自动生化分析仪进行检测；
其中，所述蒸馏水、待测样品以及以及校准品中分别加入权利要求1所述的试剂。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，
所述全自动生化分析仪设置条件为：反应温度为37℃，测定主波长为660nm，副波长为750nm。
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，
所述全自动生化分析仪为日立7180全自动分析仪。
8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，
所述试剂中，磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为200-500mmol/L，醋酸钠的摩尔浓度为50-100mmol/L，8-羟基喹啉的质量浓度为0.1-2g/L，离子络合剂的质量百分数为0.1％-4％，偶氮胂Ⅲ的质量浓度为3g/L-10g/L。
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