CN112063593B - 一种致病性弧菌噬菌体VmYZU10474及其应用 - Google Patents

一种致病性弧菌噬菌体VmYZU10474及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种致病性弧菌噬菌体VmYZU10474及其应用，该噬菌体经鉴定具有独特的基因组结构特征，属于一种新型噬菌体，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2020年8月12日，保藏编号为CCTCC NO：M 2020417。本发明获得高效裂解弧菌的噬菌体，能够抑制各种基质中的致病性弧菌，如拟态弧菌、副溶血性弧菌、溶藻弧菌、河流弧菌等，可以应用于制备控制水产品及其环境中致病性弧菌污染的抑菌剂。本发明制备的抑菌剂能够在培养基、鱼汁、水产样品中有效控制致病性弧菌的生长，同时可以有效抑制设备、器皿等固体上致病性弧菌菌膜形成，并且制备简单，使用方便，可降低致病性弧菌传播和引发食源性疾病的风险。

Description

一种致病性弧菌噬菌体VmYZU10474及其应用
技术领域
本发明属于生物工程领域，具体涉及一种致病性弧菌噬菌体VmYZU10474及其作为抑菌剂在水产品及其暂养、贮藏环境中和设备中的抑菌应用。
背景技术
水产品因其味道鲜美和高营养价值深受广大消费者的青睐，随着人们对水产品需求的日益增加，水产品养殖业呈现飞速发展之势，据***粮农组织(FAO)估计，到2020年全球的海产品供应将有一半来自水产养殖业。然而，由于高密度水产养殖模式引发的细菌性疾病已经成为水产养殖业面临的重要问题之一。
弧菌是水产养殖中最为常见、分布最广、危害最为严重的细菌性病原之一，弧菌是一群菌体短小、杆状或弯曲成弧状的革兰氏阴性菌，广泛分布在自然界中，以海洋、河口和淡水***中水生动物体内寄生居多，随着水产养殖业的发展，弧菌病的爆发越来越频繁，传播速度加快，给世界水产养殖业带来了巨大的经济损失。弧菌属由14个分支中的100多种组成，随着多位点序列分析、荧光扩增片段长度多态性等细菌分类学新技术的引入，不断有新弧菌属物种被发现。目前已知有12种弧菌与人类肠内、肠外感染有关，近年来流行病学调查结果显示致病性弧菌是我国沿海沿江城市人群腹泻病的主要病原菌，其中危害最大、最常见的是副溶血弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌和拟态弧菌，其中O1型霍乱弧菌被WHO确定为检疫菌，霍乱弧菌和副溶血弧菌都是也是国际水产品的检测菌种。筛选廉价且环境友好的新型生物抗菌剂，减除动物养殖环境、食品加工与贮藏环境以及食品原料中拟态弧菌污染，对于控制该菌引起的疾病具有十分重要的意义。
目前水产养殖业主要应用抗生素等来抑制致病性弧菌的生长，然而滥用抗生素导致的细菌耐药性和超级细菌已成为全球最紧迫的公共卫生问题之一。虽然在食品生产环境中可用化学杀菌剂来控制细菌的生长，但化学杀菌剂残留对人畜安全和环境具有重要影响。致病性弧菌在适应自然环境生长过程中，极易在食品、加工器具的表面形成生物被膜，被膜内的细菌对常规保鲜剂、抑菌剂的抵抗能力可以提高数百倍，很难被清除，从而导致持续性污染，给水产食品安全带来严重危害。因此，亟需开发天然无害的生物抑菌剂替代抗生素及常规化学抑菌剂应用于养殖水体净化及水产食品安全控制。
噬菌体广泛存在于自然界中，对宿主具有专一性，对人畜机体无害，并且资源丰富、制备成本低廉，安全环保。近年来，新型噬菌体抑菌剂研发已受到广泛关注，世界各国在噬菌体资源、生物学特性以及在各种基质中的控菌方面开展了大量研究，在美国和欧洲国家已经形成沙门氏菌、李斯特菌等病原菌的商品化生物抑菌剂，在控制水产生物及生产环境中的病原菌感染传播中具有高效、廉价、安全等优势。国内外对致病性弧菌噬菌体的研究虽有不少报道，但高效、宽谱的致病性弧菌噬菌体报道较少。
发明内容
发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种对多种致病性弧菌具有强裂解作用的噬菌体，该噬菌体可以用于控制水产品及生产环境中致病性弧菌污染。
本发明还提供所述噬菌体在制备致病性弧菌及其生物膜抑制剂中的应用。该噬菌体可单独或复配成抑菌剂，用于控制水产品暂养和生产环境中致病性弧菌的生长及其生物被膜的形成，为水生动物和食品清洁生产提供一种安全、高效、廉价的生物抗菌产品。
技术方案：为了实现上述目的，本发明所述的一种致病性弧菌噬菌体VmYZU10474，是一种拟态弧菌噬菌体(Vibrio mimicus phage VmYZU10474)，其宿主为拟态弧菌(Vibriomimicus，CICC 10474)，经鉴定具有独特的基因组结构特征，属于一种新型噬菌体，本发明的噬菌体是从江苏省连云港市农贸市场污水样品中分离获得，具有高效裂解致病性弧菌功能的噬菌体VmYZU10474，保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏地址：武汉武汉大学；保藏编号：CCTCC NO：M 2020417；保藏日期：2020年8月12日。
本发明中致病性弧菌噬菌体VmYZU10474具有以下生物学特征：
(1)形态学特征：通过透射电镜观察，VmYZU10474头部对称，直径约为54.84nm，无尾，形态学特征归属盖噬菌体科。
(2)核酸类型：VmYZU10474为dsDNA噬菌体。
(3)基因组特征：VmYZU10474基因组全长为42883bp，其中编码基因总长度为39801bp，平均长度为884bp，占总长的92.81％，GC含量为49.38％，拥有45个开放阅读框(ORFs)，其中7个ORFs在数据库中未发现同源性基因，41个ORFs编码蛋白同源性序列中包括20个保守假设性噬菌体蛋白序列、21个已知蛋白功能的序列。不含有任何已知的毒力基因，基因组数据显示VmYZU10474是一株新的噬菌体。
(4)具有强烈裂解致病性弧菌功能。
(5)能够抑制致病性弧菌生物被膜形成。
本发明所述的噬菌体YZU.P.A-5在抑制致病性弧菌中的应用。
作为优选，所述致病性弧菌包括拟态弧菌、副溶血性弧菌、溶藻弧菌和河流弧菌。
作为优选，所述的噬菌体VmYZU10474在抑制水产品及其暂养、贮藏和生产环境与设施中致病性弧菌中的应用。
本发明所述的噬菌体VmYZU10474在制备致病性弧菌抑菌剂的应用。
其中，所述抑菌剂以噬菌体VmYZU10474分离物或培养物作为抑菌剂成分。
作为优选，所述抑菌剂用于清除水产品及暂养、贮藏和生产环境与设施中致病性弧菌及其生物膜污染。
其中，所述抑菌剂制备为：将噬菌体VmYZU10474与对数生长期的拟态弧菌混合，室温放置，然后加到LB液体培养基，恒温振荡过夜培养；将培养物转至灭菌离心管，离心收集上清液，过滤，收集噬菌体增殖液，加PEG 8000和NaCl，摇匀至溶解，过夜；离心去上清液；加SM缓冲液，室温反应；使用氯仿抽提；离心回收含VmYZU10474颗粒的亲水相，将获得的VMYZU10474颗粒与SM缓冲液混合，制成噬菌体抑菌剂母液。
本发明的噬菌体VmYZU10474抑菌剂用途是指：将如噬菌体抑菌剂母液用水稀释并制成喷洒液或淋洗液，单独或者配合其他杀菌剂使用，用于对暂养或贮藏水产品(包括淡水或者海水产品，如鱼、虾、贝、海藻等)及其各种环境或者设施的喷洒、浸泡或洗涤，减少水产品暂养或贮藏环境中致病性弧菌载量以及菌膜形成。
本发明的制备的制剂可以单独或复配作为抑菌剂的主要成分，暂养或贮藏水产品及其环境境中致病性弧菌的生长与代谢，为水产品的生产加工提供一种安全、高效、廉价的生物抗菌产品。
有益效果：与现有技术相比较，本发明分离获得能够高效裂解多种致病性弧菌的噬菌体VmYZU10474，具有独特的形态和基因组特征，是一种全新的、广谱的有效抑制致病性弧菌的噬菌体，该噬菌体可用于制备绿色、廉价的致病性弧菌抑制剂。
本发明的噬菌体对多种致病性弧菌具有高效裂解活性，制备形成的抑菌剂能够有效控制各种基质中致病性弧菌的生长及生物被膜形成，有效减除致病性弧菌污染和传播风险。具体的：本发明噬菌体制备形成的生物抑菌剂能够在培养基、鱼汁基质、暂养水产品等中有效控制致病性弧菌的生长，同时能够抑制生产设施表面致病性弧菌菌膜形成，并且制备简单，使用方便。通过传统方法很容易制备成喷洒液或淋洗液，对水产品暂养、贮藏环境中的致病性弧菌进行清除，减少该菌的污染；本发明涉及的噬菌体属于天然生物材料，基因组中不含任何毒力基因，没有毒副作用，可以作为水产品及其储放设备、器皿、环境、原料固体表面等抑菌剂，用于水产品及其暂养、贮藏和加工环境的除菌，降低致病性弧菌传播和引发食源性疾病的风险。
附图说明
图1噬菌体VmYZU10474噬菌斑形态。
图2噬菌体VmYZU10474透射电镜图片。
图3噬菌体VmYZU10474全基因组序列特征。
图4噬菌体VmYZU10474在培养基中对宿主菌的抑菌作用。图中黑色圆点数据线表示阴性对照，即未经噬菌体VmYZU10474处理的对照组；浅灰色正方形数据线表示宿主菌经噬菌体VmYZU10474处理的实验组。
图5噬菌体VmYZU10474对弧菌生物被膜形成的抑制作用。图5A表示不同浓度噬菌体VmYZU10474对4个弧菌种的代表菌株(拟态弧菌CICC10474、副溶血性弧菌CICC21617、溶藻弧菌CICC10484、河流弧菌CICC21612)混合培养物生物膜形成的抑制作用。图5B表示噬菌体VmYZU10474分别对4株弧菌(拟态弧菌CICC10474、副溶血性弧菌CICC21617、溶藻弧菌CICC10484、河流弧菌CICC21612)生物膜形成的抑制作用。图5A中黑色柱状图(Control)表示未经噬菌体VmYZU10474处理的对照组；白色柱状图(Blank)为未加菌液的空白对照组；柱A-E分别为106、107、108、109、1010PFU/mL浓度噬菌体处理的试验组。
图6噬菌体VmYZU10474在鱼汁基质中对4株弧菌(拟态弧菌、副溶血性弧菌、溶藻弧菌、河流弧菌)生长的抑制作用。图中正方形数据点(对照组)表示未加噬菌体VmYZU10474的各弧菌在25℃恒温培养过程中菌落变化；圆形数据点(试验组)为添加噬菌体VmYZU10474处理的各弧菌在25℃恒温培养过程中菌落总数的变化。
图7噬菌体VmYZU10474对市售水产样品在贮藏过程中弧菌的抑制作用。图中黑色正方形数据线表示水产样品在贮藏过程中TCBS平板菌落总数的变化，灰色圆点数据线表示水产样品经噬菌体VmYZU10474处理后在贮藏过程中TCBS平板菌落总数的变化。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
本发明中的原料和试剂如无特殊说明，均为商业化市售。
本发明试验用噬菌体宿主菌拟态弧菌(Vibrio mimicus，菌株号：CICC10474)，以及抑菌试验所用副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus,菌株号：CICC21617)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus，菌株号：CICC 10484)、河流弧菌(Vibrio fluvialis，菌株号：CICC 21612)均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(China Center of IndustrialCulture Collection,CICC)。
实施例1
噬菌体分离及纯化制备
噬菌体分离
污水样品采自江苏连云港市农贸市场。取30mL污水样品放入50mL离心管，5000×g离心10min，取5mL上清液加入到5mL LBS液体培养基(胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl35g、去离子水950mL，pH 7.0)中，同时加入100μL对数生长期的拟态弧菌菌株CICC10474，37℃、100rpm摇床培养过夜；将试管中培养物转至无菌离心管中，4℃，5000×g离心10min，取上清过0.22μm滤膜，得到的噬菌体原液。
用SM缓冲液(1L：NaCl 5.8g，MgSO4.7H2O 2.0g，1M Tris-HCl(pH7.4)50mL)对噬菌体原液按体积比进行10倍比梯度稀释，取100μL稀释后的噬菌体悬液与100μL对数生长期的拟态弧菌在室温下混合10min，再加入5mL LBS半固体培养基(胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 35g、琼脂粉5g、去离子水950mL，pH7.0)，混匀，快速倾倒在事先制好的LBS固体培养基(胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 35g、琼脂粉15g、去离子水950mL，pH 7.0)上，制成双层平板，凝固后倒置放在37℃恒温培养箱中培养。
在上述出现噬菌斑的双层平板上挑取透明单个空斑至1mL SM缓冲液中，混匀，4℃放置24h；次日用无菌的SM缓冲液对噬菌体液进行10倍梯度稀释(10-1-10-7)，分别取各稀释度的噬菌体液体100μL与100μL对数生长期的拟态弧菌在室温下混合10min，再加入5mL LBS半固体培养基，混匀，快速倾倒在事先制好的LBS固体培养基上，制成双层平板，凝固后倒置放在37℃恒温培养箱中培养。重复双层平板法的操作3次，得到的噬菌斑大小一致后，即认为分离到的是纯的噬菌体。采用双层平板检测纯化噬菌体裂解效果，挑取50个噬菌体空斑至1mL SM缓冲液中，混匀，4℃放置24h；于次日取上清液，用0.22μm微孔滤膜过滤，即得噬菌体分离液，4℃保存备用。在5mL融化好的LBS半固体培养基中加入100μL拟态弧菌培养物(即对数生长期的拟态弧菌菌株CICC10474菌液)，立即倾倒在底层LBS固体培养基上，在室温下放置10min，待培养基凝固后，在划分好的区域中分别滴加10μL各上述噬菌体分离液，在无菌操作台中吹干后将平板倒置于37℃培养箱中培养，筛选在菌株CICC10474平板上的裂解圈均明亮清澈的噬菌体，命名为VmYZU10474。
噬菌体的纯化
取100μL噬菌体VmYZU10474分离液(制备方法同上)与100μL对数期生长期的拟态弧菌CICC10474菌液混合，室温放置10min，然后加入10mL LBS液体培养基，37℃，150rpm恒温振荡培养过夜；将培养物转至灭菌离心管，5000×g离心10min后收集上清，通过0.22μm微孔滤膜过滤除菌；收集噬菌体增殖液，加0.93g PEG 8000，0.58g NaCl，摇匀至溶解，4℃放置过夜；4℃条件下10000×g离心20min，去上清，加0.5mL SM缓冲液，室温作用1h；加入等体积氯仿抽提30s；3000×g离心15min，回收含有噬菌体颗粒的亲水相，即为噬菌体纯化液；用双层平板检测纯化噬菌体滴度，具体程序为：用SM缓冲液对噬菌体纯化液进行10倍梯度稀释(10-1-10-7)，取各稀释度的噬菌体稀释液100μL与100μL对数生长期的拟态弧菌CICC10474菌液在室温下混合10min，再加入5mL LBS半固体培养基，混匀，倾倒在LBS固体培养基上，凝固后倒置放在37℃恒温培养箱中培养8h，对形成的空斑进行人工计数，计算滴度。结果显示纯化后VmYZU10474对菌株CICC10474滴度达到1011PFU/mL以上，在稀释平板上形成的噬菌斑明亮清澈、大小均一(如附图1所示)。
实施例2
噬菌体VmYZU10474特征分析
噬菌体形态特征
用透射电镜观察噬菌体微观形态特征。采用磷钨酸负染色法，将铜网有膜的一面朝上，取10μL实施例1中获得的噬菌体VmYZU10474纯化液(1011PFU/mL)滴于铜网上，吸附15min后吸干水分，取出铜网，自然干燥2-3min。然后在铜网上滴加2％的磷钨酸(PTA)水溶液进行染色，2min后取下，用吸水纸吸干水分，空气中干燥5min，用透射电镜观察，选取清晰的噬菌体图像进行拍照分析。VmYZU10474微观形态如图2所示，噬菌体VmYZU10474呈现头部对称，直径约为54.84nm，无尾，形态学特征归属盖噬菌体科。
噬菌体基因组特征
将上述制备的噬菌体VmYZU10474纯化液(1011PFU/mL)加DNase I至终浓度5μg/mL，RNase A至1μg/mL，37℃温育1h；加入EDTA(pH 8.0)至终浓度20mmol/L；加蛋白酶K至终浓度50μg/mL，加SDS至终浓度0.5％(mg/mL)，混匀，56℃孵育1h；加入等体积平衡酚(pH 8.0)振荡抽提，5000×g离心10min，收集上层水相；用等体积氯仿抽提，5000×g离心10min，收集上层水相；加入1/10体积3mol/L NaAc(pH 5.2)，再加入两倍体积的无水乙醇沉淀核酸，-20℃过夜；4℃，12000×g离心10min；沉淀用70％乙醇和无水乙醇各洗涤一次，沉淀在空气中干燥10min；用适量TE(pH 8.0)混悬沉淀，应用GeneQuant核酸定量仪进行噬菌体DNA定量，-20℃保存；提取获得的噬菌体DNA送至上海凌恩生物基因测序有限公司进行Illumina Hiseq测序。
噬菌体DNA测序结果(如图3所示)显示VmYZU10474基因组全长为42883bp，其中编码基因总长度为39801bp，平均长度为884bp，占总长的92.81％，GC含量为49.38％，拥有45个开放阅读框(ORFs)，其中7个ORFs在数据库中未发现同源性基因，41个ORFs编码蛋白同源性序列中包括20个保守假设性噬菌体蛋白序列、21个已知蛋白功能的序列，同源性在62.5％至100％之间。与GenBank数据库中噬菌体基因组数据比对显示VmYZU10474是一株新的噬菌体，且不含有任何已知的毒力基因。结合噬菌体的生理生化特征，初步鉴定为拟态弧菌噬菌体，命名为拟态弧菌噬菌体VmYZU10474(Vibrio mimicus phage VmYZU10474)。将该噬菌体保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏地址：武汉武汉大学；保藏编号：CCTCC NO：M 2020417；保藏日期：2020年8月12日。
实施例3
噬菌体VmYZU10474在培养基中对宿主菌的抑菌作用
取拟态弧菌CICC 10474菌液接种到10mL LBS液体培养基中，置于25℃培养箱中恒温培养至约107CFU/mL，噬菌体处理组加入100μL VmYZU10474(109PFU/mL)纯化液，阴性对照组中加入等体积SM缓冲液(0PFU/mL)，置恒温培养继续培养，每隔2h取样1mL，用分光光度计测量波长在600nm处的吸光值，每组设置3个平行，取平均值用于分析。
实施结果如图4所示，随着培养时间延长，阴性对照组OD600nm快速增长，8h时达到0.85，而添加噬菌体VmYZU10474处理组在8h内一直维持在原始浓度，表明本发明中噬菌体VmYZU10474在培养基中对宿主菌的生长起到显著抑制作用(P<0.001)。
实施例4
噬菌体VmYZU10474对弧菌生物被膜形成的抑制作用
分别取对数生长期的拟态弧菌CICC 10474、副溶血性弧菌CICC 21617、溶藻弧菌CICC 10484、河流弧菌CICC 21612，用LBS培养基稀释，调节最终浓度为1×108CFU/mL，并等体积混合制备成弧菌混合液。试验分成VmYZU10474处理组，阴性对照组，空白组。VmYZU10474处理组：在96孔板中每孔分别加入150μL浓度为108CFU/mL弧菌混合液和150μL噬菌体VmYZU10474纯化液(A、B、C、D、E处理中噬菌体使用浓度分别为105PFU/mL、106PFU/mL、107PFU/mL、108PFU/mL、109PFU/mL)混合均匀；阴性对照组：在无菌96孔板中每孔加入弧菌混合液(108CFU/mL)和SM缓冲液各150μL；空白组：每孔加300μL LBS培养基；37℃培养24h，取出96孔板，吸出悬浮菌液，用无菌PBS洗涤3次，充分除去浮游菌体；每孔加入200μL浓度为0.2％的结晶紫染色液，染色30min；吸出染色液，用PBS清洗96孔板至洗出液呈无色，室温吹干；每孔加入200μL的33％醋酸脱色剂，振荡溶解，利用酶标仪测定600nm处的OD值，每组平行测定5次，取平均值用于分析。
实施结果如图5A所示，加入105PFU/mL、106PFU/mL、107PFU/mL、108PFU/mL、109PFU/mL噬菌体VmYZU10474悬液的试验组(A、B、C、D、E处理组)的OD600nm均显著低于阴性对照组(p<0.001)，表明VmYZU10474显著抑制了弧菌生物膜的形成。
此外，采用上述方法分别测定噬菌体VmYZU10474(106PFU/mL)单独抑制拟态弧菌CICC 10474、副溶血性弧菌CICC 21617、溶藻弧菌CICC 10484、河流弧菌CICC 21612(菌液浓度均为1×108CFU/mL)生物被膜形成能力，实施结果如图5B所示，噬菌体VmYZU10474可以显著抑制各弧菌生物膜的形成，其中对副溶血性弧菌CICC 21617抑制最为明显。
实施例5
噬菌体VmYZU10474在鱼汁基质中的抑菌作用
将新鲜海洋带鱼宰杀后，去鱼骨，取鱼肉，剪成细条，称重，按水和鱼肉质量比例为2：1，加水煮沸5min后，用纱布过滤，重新添加水，恢复至第一次添加量，继续煮沸5min，用滤纸过滤，用NaOH将滤液pH调整为7，每升鱼汁中加入40mg L-半胱氨酸和40mg L-甲硫氨酸，分装至锥形瓶中，121℃灭菌15min。分别将100μL(107CFU/mL)的拟态弧菌CICC 10474、副溶血性弧菌CICC21617、溶藻弧菌CICC 10484、河流弧菌CICC 21612接种到30mL鱼汁中，实验组中加入100μL噬菌体VmYZU10474纯化液(109PFU/mL)，对照组中加入100μL SM缓冲液，接种物分别放置在25℃培养箱中恒温培养，每隔4h取样100μL，涂布TCBS平板，计算菌落总数，每组设置3个平行，取平均值用于分析。
实施结果如图6所示，噬菌体处理组的生长曲线明显低于阴性对照组，最多能使弧菌总数降低4个log值，表明本发明中噬菌体VmYZU10474在鱼汁基质中对4种不同的弧菌均能起到显著的抑制作用。
实施例6
噬菌体VmYZU10474对水产品中弧菌的抑制作用。
采集扬州市农贸市场在售鱼、虾、贝各5份。鱼、虾以及贝类取整只装入样品袋。鱼类取鳃、肠及其内容物、内脏等；虾类取整只；带壳贝类经自来水冲洗外壳后甩干表面水分后，贝类取全部贝肉和体液。所有样品按质量比1:1:1混合后用拍击式均质器拍击2min，加水按质量比制备成1:10的样品匀液并分成两份各0.9mL，一份加入100μL噬菌体VmYZU10474(PFU为109PFU/mL)，另一份加入100μL SM缓冲液，25℃下放置，分别于0h；6h；12h；24h取样100μL，涂布TCBS平板，计算菌落总数，每组设置3个平行，取平均值用于分析。
实施结果如图7所示，噬菌体处理组的生长曲线明显低于未处理组，最多能抑制弧菌总数约2个log值，表明本发明中噬菌体VmYZU10474能明显抑制水产样品中自身携带的致病性弧菌的生长。

Claims (8)

1.一种致病性弧菌噬菌体VmYZU10474，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2020年8月12日，保藏编号为CCTCC NO：M 2020417。
2.权利要求1所述的噬菌体VmYZU10474在抑制致病性弧菌中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述致病性弧菌包括拟态弧菌（Vibrio mimicus）、副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus）、溶藻弧菌（Vibrioalginolyticus）和河流弧菌（Vibriofluvialis）。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的噬菌体VmYZU10474在抑制水产品或其暂养、贮藏、生产环境或设施中致病性弧菌中的应用。
5.权利要求1所述的噬菌体VmYZU10474在制备致病性弧菌抑菌剂的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述抑菌剂以噬菌体VmYZU10474分离物或培养物作为抑菌剂成分。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述抑菌剂用于清除水产品或其暂养、贮藏、生产环境或设施中致病性弧菌及其生物膜污染中的应用。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述抑菌剂制备为：将噬菌体VmYZU10474与对数生长期的拟态弧菌混合，室温放置，然后加到LB液体培养基，恒温振荡过夜培养；将培养物转至灭菌离心管，离心收集上清液，过滤，收集噬菌体增殖液，加PEG 8000和NaCl，摇匀至溶解，过夜；离心去上清液；加SM缓冲液，室温反应；使用氯仿抽提；离心回收含VmYZU10474颗粒的亲水相，将获得的VMYZU10474颗粒与SM缓冲液混合，制成噬菌体抑菌剂母液。
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