CN112042521A - 一种根状茎植物试管苗移植方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种根状茎植物试管苗移植方法，包括以下步骤：S1.将根状茎植物组培苗进行炼苗培养；S2.对根状茎试管苗进行清洗消毒，晾苗；S3.根据根状茎试管苗的生长情况分级种植；S4.进行移植后的栽培管理；S5.根状茎试管苗成苗出圃。该方法在移植过程中引入杀菌生根粉，在多花黄精组织培养工厂化育苗根状茎试管苗移栽时使用，获得高的成活率和成苗率，并加速了根状茎的生根和芽的萌动生长，起到高效杀菌的作用，有效防止了根状茎腐烂的产生和地下害虫的咬食，保证了根状茎的生根成苗，提高了根状茎试管苗移植成活率，也可适用于其他根茎类分生繁殖的植物。

Description

一种根状茎植物试管苗移植方法
技术领域
本发明属于植物培育技术领域，更具体地，涉及一种根状茎植物试管苗移植方法。
背景技术
根茎类植物(如：多花黄精Polygonatumcyrtonema Hua、马铃薯Solanumtuberosum L.、姜Zingiber officinale、小黄姜DioscoreaZingiberensisC.H.Wright、淮山Dioscoreaoppositifolia L.)普遍开花而不结种，或结种很少，很难发芽。因而很难采用种子进行规模化种苗生产。目前，除马铃薯外，其它绝大部分品种，也无法采用植物组织培养技术进行种苗的大量繁殖。根茎分生繁殖是目前采用比较多的繁殖方法，但这一繁殖方法由于需要消耗大量的原有根茎材料，而且这一方法培育的种苗容易退化，且因病毒感染，严重影响种苗后续的生长速度和产品质量。另外，根茎分生繁殖采用的根茎由于切割时留下的伤口，极容易引起腐烂和地下害虫的咬食，从而严重影响其成苗率。因而，优质种苗规模化生产成为这类植物的共同难题。
多花黄精(Polygonatumcyrtonema Hua)甘，平，归脾、肺、肾经，具有补气养阴，健脾，润肺，益肾之功效。始载于《名医别录》。按《中华人民共和国药典》规定，药用黄精为百合科植物滇黄精、黄精或多花黄精的干燥根茎。黄精也是国家卫健委批准的药食两用的中药材。黄精具有很高经济价值与药用价值，可广泛应用于新药生产的原料以及化工领域等，其市场需求量越来越大。但是野生黄精的生长繁育缓慢，成活率低，故野生资源稀缺，近些年野生黄精遭到了过度的人工采挖，其生长环境也遭到破坏，乱引乱种等问题，导致其野生优质资源日益减少。近些年黄精因长期的追求产量，人为盲目挖采过度、人工种植不规范，导致野生黄精面临种源稀少，品质逐年下降。优良种质资源的短缺已成为黄精产业发展所面临的最大瓶颈，黄精野生资源的保护与利用已成为亟待解决的问题，育种与规范化栽培尤为迫切与重要，是解决黄精产业发展问题的重要手段。
采用组织培养根状茎工厂化育苗是解决这一瓶颈唯一而有效的方法。但目前还没有人开展成功过，主要是因为多花黄精类植物的形态结构比较特殊，根状茎肉质生长在土壤里，外植体很难消毒而变为无菌繁殖材料，根状茎含有丰富的多糖和其他代谢次生物质，容易褐变，加上多花黄精有休眠的生物学特性，想要像大部分植物组织培养采用芽增殖方式，不断扩大其芽的数量，难度很大。因此，科学合理且效果佳的根状茎组培及根茎分生规模化育苗方法函待进一步研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种根状茎植物试管苗移植方法。
本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一个方面，提供一种根状茎植物试管苗移植方法，包括以下步骤：
S1.将根状茎植物组培苗进行炼苗培养，形成根状茎试管苗；
S2.对根状茎试管苗进行清洗消毒，晾苗；
S3.根据根状茎试管苗的生长情况分级种植；
S4.进行移植后的栽培管理，形成根状茎试管苗成苗；
S5.根状茎试管苗成苗出圃。
根据本发明第一个方面所述的方法，优选地，步骤S1中所述炼苗培养的条件为：温度18.5～28.5℃，光照强度6000～8500Lux；日照时间8～11h。
炼苗形态促成培养过程：于超净工作台转接后的准备用于炼苗促根培养的材料,转接后当天用保鲜膜立即密封瓶盖与瓶子接口处，隔天放入炼苗塑料大棚炼苗培养。
炼苗形态促成培养时间一般为40～60d，具体时间根据实际条件而定。
根据本发明第一个方面所述的方法，进一步地，步骤S1中所述炼苗培养的出苗标准为：(1)叶色青绿，叶片数达到3片以上或叶片枯黄无叶片；(2)根状茎直径为2.5cm以上；(3)根状茎形态明显浅绿色或绿色；(4)生长正常。
根据本发明第一个方面所述的方法，进一步地，步骤S2中所述对根状茎试管苗进行清洗消毒的具体方法为：对无污染苗，清水洗净后，用高锰酸钾溶液浸泡，后用清水再清洗一遍；对污染苗，清水洗净后，用高锰酸钾溶液浸泡，后用清水再清洗一遍，再用杀菌溶液浸泡后取出。
更进一步地，对无污染苗，清水洗净后，用高锰酸钾溶液浸泡7min.，后用清水再清洗一遍；对污染苗，清水洗净后，用高锰酸钾溶液浸泡10min.，后用清水再清洗一遍，再用杀菌溶液浸泡后取出。
更具体地，把需清洗的根状茎试管苗分出无污染苗和污染苗两类，并分开清洗，以防止交叉污染。
根状茎试管苗出瓶：用镊子把炼好的组培成苗从培养瓶轻轻地夹出(注意尽量不要伤苗)，放入备好的干净塑料盆里。
根状茎试管苗清洗：根状茎试管苗的清洗需用干净水清洗三遍，第一遍先把附着在放入塑料盆里的组培成苗的培养基去除干净，应做到基部无残留培养基，尽量少伤苗。再用干净水清洗两遍。
无污染苗消毒：清洗干净后的根状茎试管苗用0.02％的高锰酸钾溶液浸泡7min.后取出后，用清水清洗一遍，把附着在苗上的残留高锰酸钾溶液清洗干净。
污染苗消毒：清洗干净后的根状茎试管苗先用0.02％的高锰酸钾溶液浸泡10min.后取出，用自来水清洗一遍，再用1000倍的70％多菌灵(或甲基托布津等)溶液浸泡后捞起。
把消毒好的根状茎试管苗放在通风、阴凉处进行风晾，直到附着在苗表面的水分刚消失即止。
根据本发明第一个方面所述的方法，进一步地，步骤S3中所述分级的标准为：分为一、二、三级及无级，仅保留一、二、三级；
一级：(1)叶色青绿，叶片数达到3片以上；(2)根状茎直径为3.5cm以上；(3)根状茎形态明显，浅绿色或绿色；(4)生长正常；
二级：(1)叶片枯黄无叶片；(2)根状茎直径为2.5～3.5cm；(3)根状茎形态明显，浅绿色或绿色；(4)生长正常；
三级：(1)叶片枯黄脱落或有一定的叶片数量；(2)根状茎直径为1.5～2.5cm；(3)根状茎形态明显，浅绿色或绿色；(4)生长正常。
根据本发明第一个方面所述的方法，具体地，步骤S3中所述种植的具体操作为：将根状茎试管苗湿润后，表面醮粘杀菌防虫生根粉后种植于基质中。
更具体地，作为根状茎试管苗移植基质要求干净、通气、排水良好的粗细合适的干净河沙(Ф0.2～3.0mm)。消毒：基质消毒剂用高锰酸钾和50％敌磺钠等土壤杀菌剂。具体操作方法是用0.2％的高锰酸钾溶液淋洒使基质均匀湿润为度，隔天再用500倍的50％敌磺钠溶液淋透隔天使用。
按不同级别分类分区进行栽植且种植在河沙基质中，株行距为8×8cm。
基质应该盖到根状茎的顶部，恰好根状茎埋入基质，不能盖过叶基，不然会因淋水不当导致幼苗腐烂，也不能种得太浅，否则不利于幼苗新根的生长。栽植后，用手轻捏，使根状茎与基质充分接触，并淋杀菌促根生长营养液(杀菌促根生长营养液配方：1/4MS矿质元素+NAA0.2mg/L+70％多菌灵(或甲基托布津等)500液的混合液)。
根据本发明第一个方面所述的方法，优选地，400～600ppm IBA、3～5ppm 2.4-D、20～40ppm 6BA、900～1100ppm KH2PO4、900～1100ppm KNO3、50～150ppm FeSO4·7H20、40～60ppm H3BO3、3～5wt％纳米银离子溶液、4500～5500ppm O,O-二甲基-(2,2,2-三氯-1-羟基乙基)膦酸酯和附着剂。
更优选地，每1000g单位重量包括以下原料：500ppm IBA、4ppm 2.4-D、30ppm 6BA、1000ppm KH2PO4、1000ppm KNO3、100ppm FeSO4·7H20、50ppm H3BO3、40wt％纳米银离子溶液、5000ppmO,O-二甲基-(2,2,2-三氯-1-羟基乙基)膦酸酯和附着剂。
更加优选地，所述纳米银溶液中银离子的浓度为100ppm；所述附着剂为滑石粉；所述滑石粉的目数为1000，附着剂的目的是为了使生根粉更好地黏附于植物表面。
进一步提供所述生根粉的制备方法，所述生根粉的制备工艺主要包括以下步骤：
S11：按照权利1至4任一所述的配比称取相应的原料，溶解混合后定容，得混合物A；
S12：将混合物A进行烘干得混合物B；
S13：将混合物B压碎成粉状后，土壤筛过筛，既得所述生根粉。
优选地，步骤S2中烘干的温度为65～75℃，时间为2～4h，连续重复烘干12～16次。
根据本发明第一个方面所述的方法，进一步地，步骤S4所述栽培管理包括湿度管理、光照管理、水分管理、温度管理、通风管理、肥分管理和病虫害防治。
具体地，根据本发明第一个方面所述的方法，所述湿度管理为移植后前15～25天保持湿度60～75％；
所述光照管理为移植后遮阴，移植35～45天后遮阴度为50～60％；
所述水分管理为基质始终保持湿润状态；
所述温度管理为生长温度控制在15～32℃，优选20～28℃；
所述通风管理为保持通风；
所述肥分管理为移植后前8～12天喷洒杀菌促根营养液；进一步地，所述杀菌促根营养液为包括MS矿质元素、NAA、多菌灵或甲基托布津或代森锌的混合溶液；更进一步地，所述杀菌促根营养液为包括1/4MS矿质元素、0.2mg/L NAA、多菌灵或甲基托布津或的代森锌的混合溶液。
MS矿质元素即为MS培养基母液中的大量元素、微量元素以及铁盐。
所述病虫管理为移植后前18～22天喷施杀菌剂；进一步地，所述杀菌剂选自多菌灵(N-(2-苯骈咪唑基)-氨基甲酸甲酯)、代森锌(乙撑1、2-双硫代氨基甲酸锌)、甲基托布津(1、2-二(3-甲氧碳基-2-硫脲基)苯)、敌磺钠(对二甲氨基苯重氮磺酸钠)中的至少一种。
更具体地，1、湿度管理：根状茎试管苗栽植后，必须加强对栽培驯化环境的管理，一般前20d左右湿度须保持60～75％左右，并保持通风透气，后视其驯化情况可逐渐通风降低湿度，一直到苗长出新根、新芽后即可放开按常规管理进行。
2、光照管理：刚栽植的根状茎试管苗必须遮阴(70～85％遮阳网遮盖)，光照过强，容易引起烧苗，且容易引起棚内高温，高温高湿，加上不通风，就容易引发病害，苗出现严重死亡。40d后应增强光照，保持遮阴度为50～60％左右，以便出圃到大田种植时更适应自然条件，更有利于黄精的大田生长。
3、水分管理：基质的水分必须始终保持湿润状态，水分不能过多，否则苗很容易霉烂，茎质表面干时，才用喷雾淋湿并经常通风降温，并要注意观察，发现干时，及时淋水，淋水时必须采用喷淋的方式，切忌用水龙头直接对着冲淋。淋水应做到先少后多，保证前7d基质离表面1～3cm处保持湿润状态(用手捏紧湿手但无水滴下)，以便促进根的生长。25～30d左右有新根长出后，顶芽开始抽高，苗开始成活生长，淋水应保证全部基质湿润(用手捏紧湿手但无水滴下)。
4、温度管理：黄精的生长温度一般为15～32℃，最适生长温度为20～28℃，低于15℃时生长停滞，10℃以下叶片干枯，进入休眠，高于32℃时，不但生长缓慢，且容易引起烧苗。因此，根状茎试管苗栽植后，前期栽培驯化环境温度最好控制在20～28℃之间，在这种温度时，一般20d左右后苗开始长新根，不定芽长出或长高，如无法达到这种温度要求，也要控制达到15～32℃的温度范围内，否则根状茎试管苗移植将失败。后期，一般30d左右后即可按常规管理进行。
5、通风管理：通过通风，可以调节移植环境的湿度、温度及空气的新鲜度，有利于苗的生长，及病害的控制。栽培驯化种植全过程需始终保持通风透气。
6、肥分管理：根状茎试管苗栽植后前10天，可用杀菌促根生长营养液(配方：1/4MS矿质元素+NAA0.2mg/L+70％多菌灵(或甲基托布津或代森锌)500液的混合液进行3次喷施，每3天1次，每次喷施需直至基质表层湿润为止。长出新根并开始长高时，即可开始向基质淋施水肥，水肥配方：磷酸二氢钾、硝酸钾、硫酸钙按1：1：0.5的比例配成总浓度为2500ppm的水溶液施用，每7d施用一次。
7、病虫害防治：试管苗移植前20天，每7天喷施杀菌剂1次，一般可用多菌灵、代森锌、甲基托布津、敌磺钠等交替使用，以后每10天喷施一次，60天后，可根据病害的发生情况，及时喷药防病治病。发生病害，应及时清除病株，并每隔2～3天喷药一次，连续喷施2～3次。杀菌剂必须多种交换使用，特殊情况可多种混合使用(碱性药不能与酸性药混合)并可加入井冈霉素。
根据本发明第一个方面所述的方法，进一步地，步骤S5所述根状茎试管苗成苗出圃的标准为：(1)叶片饱满，叶色青绿，舒展，叶片数达到5片以上；(2)根系发达，植株健康，无病虫害；(3)生长正常，无扭曲现象；(4)根状茎直径为4.0cm以上。
进一步地，根状茎试管苗成苗出圃后塑料大棚中栽培驯化种植1年以上。
本发明的有益效果是：
1.本发明提供的移植方法可在根茎类(如：马铃薯、姜、小黄姜、淮山等)繁殖的植物中采用，解决了根茎类繁殖种苗成苗率低下的难题，简化了育苗管理程序，节约了劳动成本。高效地保证了根茎的成苗，提高了根茎成苗，使阳山多花黄***苗大规模生产成为可能，解决了阳山多花黄精产业化发展的瓶颈。采用该方法通过组织培养培育的黄精成苗率90～95％，生根率95～100％，试管苗移栽成活率91～98％；采用该方法组织培养工厂化根状茎育苗生产和根茎分生繁殖，已培育出阳山多花黄精优质根状茎组培苗21590株。针对野生黄精被过度采摘，且目前缺少人工培育种植的方法，提供了一种组织培养根状茎工厂化育苗的方法。
2.本发明在移植过程中引入杀菌生根粉，在多花黄精组织培养工厂化育苗根状茎试管苗移栽时使用，获得高的成活率和成苗率，并加速了根状茎的生根和芽的萌动生长，起到高效杀菌的作用，有效防止了根状茎腐烂的产生和地下害虫的咬食，保证了根状茎的生根成苗，提高了根状茎试管苗移植成活率，也可适用于其他根茎类分生繁殖的植物。
3.本发明移植基质采用河沙，经济方便、移植成活率高、水分控制简便；可在根状茎植物的组织培养工厂化育苗推广应用，实现大规模生产经营，经济效益显著，领先国内组培试管苗移植技术，应用前景广泛。
附图说明
图1已配好装瓶的生根粉。
图2组织培养移栽出瓶的多花黄精根状茎。
图3多花黄精根状茎试管苗移植60天后生根发芽情况。
图4多花黄精根状茎试管苗移植后隔年3月生长情况。
图5组织培养根状茎生根粉处理移栽种植后隔年5月生长情况。
图6为马铃薯外植体诱导效果。
图7为马铃薯不定芽的形成。
图8为马铃薯继代增殖壮芽。
图9为马铃薯芽苗生根。
图10为姜外植体诱导效果。
图11为姜不定芽的形成。
图12为姜继代增殖壮芽。
图13为姜芽苗生根。
具体实施方式
为了加深对本发明的理解，下面将结合实施例对本发明做进一步详细描述，该实施例仅用于解释本发明，并不对本发明的保护范围构成限定。
纳米银溶液为纳米银(Ag+)D原液，购自广州市科瑨材料科技有限公司，银离子成分含量浓度是100ppm。
实施例1
一种根状茎植物试管苗移植方法，包括以下步骤：
S1.将根状茎植物组培苗进行炼苗培养；
S2.对根状茎试管苗进行清洗消毒，晾苗；
S3.根据根状茎试管苗的生长情况分级种植；
S4.进行移植后的栽培管理；
S5.根状茎试管苗成苗出圃。
具体来说：移植前准备步骤：
根状茎试管苗移植圃地选择
多花黄精组培工厂化生产育苗根状茎移植的圃地，要求地势平坦，四周通透，光照充足，排水良好，洁净、无污染的空旷地带，如山坡则必须选择南边。
根状茎试管苗移植设施准备
1、有条件最好安装标准塑料大棚，塑料大棚必须具备各类栽培环境条件调控设施，包括光照调节***、湿度条件***、通风调节***、喷淋***等。
2、如无条件，也可采用临时简易塑料棚，但必须防雨水，并容易进行通风、光照调节、调温、调湿、淋水、施肥及病虫害防治等操作。
根状茎试管苗移植基质准备
1、基质配制：作为根状茎试管苗移植基质要求干净、通气、排水良好的粗细合适的干净河沙(Ф0.2～3.0mm)。
2、基质消毒：基质消毒剂用高锰酸钾和50％敌磺钠等土壤杀菌剂。具体操作方法是用0.2％的高锰酸钾溶液淋洒使基质均匀湿润为度，隔天再用500倍的50％敌磺钠溶液淋透隔天使用。
3、移栽床的铺建及基质装填：移栽棚地面必须高于周围地面，周围开好排水沟，移栽床床边高度为15cm左右，可用建筑用红砖砌成，宽1.2m，长视移栽棚长度具体确定，床与床之间间隔用建筑用红砖铺上40cm步行道。移栽床装填上移栽基质，移栽基质装填高度为低于床边2cm左右。
S1.将根状茎植物组培苗进行炼苗培养/根状茎试管苗炼苗形态促成培养
1、黄精根状茎试管苗塑料大棚进行炼苗形态促成培养。炼苗应根据“由弱到强”的原则，合理调节光照强度，避免因光线过强灼伤种苗或光线过弱使种苗生长不良，并根据天气变化情况及时调节炼苗的温度、湿度等。
2、炼苗形态促成培养条件(炼苗塑料大棚)：温度:18.5～28.5℃，光照强度6000～8500Lux,光照时间8～11h。
3、炼苗形态促成培养过程：于超净工作台转接后的准备用于炼苗促根培养的材料,转接后当天用保鲜膜立即密封瓶盖与瓶子接口处，隔天放入炼苗塑料大棚炼苗培养。
4、炼苗形态促成培养时间一般为40～60d，具体时间根据实际条件而定。
5、根状茎试管苗出苗质量标准：(1)叶色青绿，叶片数达到3片以上或叶片枯黄无叶片；(2)根状茎直径为2.5cm以上；(3)根状茎形态明显浅绿色或绿色；(4)生长正常。
S2.对根状茎试管苗进行清洗消毒，晾苗
根状茎试管苗出瓶与清洗
1、把需清洗的根状茎试管苗分出无污染苗和污染苗两类，并分开清洗，以防止交叉污染。
2、根状茎试管苗出瓶：用镊子把炼好的组培成苗从培养瓶轻轻地夹出(注意尽量不要伤苗)，放入备好的干净塑料盆里。
3、根状茎试管苗清洗：根状茎试管苗的清洗需用干净水清洗三遍，第一遍先把附着在放入塑料盆里的组培成苗的培养基去除干净，应做到基部无残留培养基，尽量少伤苗。再用干净水清洗两遍。
根状茎试管苗消毒晾苗
1、无污染苗消毒：清洗干净后的根状茎试管苗用0.02％的高锰酸钾溶液浸泡7min.后取出后，用清水清洗一遍，把附着在苗上的残留高锰酸钾溶液清洗干净。
2、污染苗消毒：清洗干净后的根状茎试管苗先用0.02％的高锰酸钾溶液浸泡10min.后取出，用自来水清洗一遍，再用1000倍的70％多菌灵(或甲基托布津等)溶液浸泡后捞起。
3、把消毒好的根状茎试管苗放在通风、阴凉处进行风晾，直到附着在苗表面的水分刚消失即止。
S3.根据根状茎试管苗的生长情况分级种植
1、组培成苗分级：把清洗、消毒、晾苗后的组培成苗进行分级，一般分为一、二、三级及无级。
一级：(1)叶色青绿，叶片数达到3片以上；(2)根状茎直径为3.5cm以上；(3)根状茎形态明显，浅绿色或绿色；(4)生长正常；
二级：(1)叶片枯黄无叶片；(2)根状茎直径为2.5～3.5cm；(3)根状茎形态明显，浅绿色或绿色；(4)生长正常；
三级：(1)叶片枯黄脱落或有一定的叶片数量；(2)根状茎直径为1.5～2.5cm；(3)根状茎形态明显，浅绿色或绿色；(4)生长正常。
无级：除一、二、三级以外，其它全部分为无级。
2、根状茎试管苗生根粉处理操作与种植：按不同级别分类分区进行栽植且种植在河沙基质，株行距为8×8cm。栽植时，根状茎试管苗湿润后，表面醮粘杀菌防虫生根粉，保证每一个根状茎表面都均匀粘附有一小薄层生根粉，后种植在移植床上。基质应该盖到根状茎的顶部，恰好根状茎埋入基质，不能盖过叶基，不然会因淋水不当导致幼苗腐烂，也不能种得太浅，否则不利于幼苗新根的生长。栽植后，用手轻捏，使根状茎与基质充分接触，并淋杀菌促根生长营养液(杀菌促根生长营养液配方：1/4MS矿质元素+NAA0.2mg/L+70％多菌灵(或甲基托布津)500液的混合液)。
所述杀菌防虫生根粉的成分配方与下表1所示。
表1专用杀菌防虫生根粉配方及说明表
Figure BDA0002625888890000091
Figure BDA0002625888890000101
上述组培育苗杀菌防虫生根粉的制备工艺主要包括以下步骤：
S1：称取相应原料：
1.滑石粉称取：戴上口罩和一次性胶手套，用电子称称取滑石粉990g，放入40cm×60cm不锈钢手术盘。
2.90％O,O-二甲基-(2,2,2-三氯-1-羟基乙基)膦酸酯秤取：秤取90％O,O-二甲基-(2,2,2-三氯-1-羟基乙基)膦酸酯5g，放入1L塑料量杯，再加入100mL的纯净水溶解后，均匀倒入称取好的滑石粉上，并用玻璃棒不断搅拌。
3.纳米银(Ag+)D原液量取：用量筒量取40mL的纳米银(Ag+)D原液，放入1L塑料量杯，用纯净水稀释至200mL后，均匀倒入称取好的滑石粉上，并用玻璃棒不断搅拌。
4.其它药品称取溶解定容：用电子称分别称取下列物品：吲哚丁酸0.5g，先用适量1NNaOH溶液溶解；2.4-二氯苯氧乙酸0.004g，先用适量1NNaOH溶液溶解；6-卞氨基腺嘌呤0.03g，先用适量1NHCl溶液溶解；磷酸二氢钾1g、硝酸钾1g、硫酸亚铁0.1g、硼酸0.05g，并用50mL的纯净水在200mL烧杯逐一溶解，倒入200mL容量瓶定容后，慢慢均匀倒入称取好的滑石粉上，并用玻璃棒不断搅拌，直到滑石粉均匀湿润为止并整平。
S2：烘干：把上述调制配好的滑石粉放入电热鼓风烘干箱里，关好门，调控温度70℃、定时3小时进行烘干。烘干过程，每3小时定时结束时检查滑石粉干湿程度，一直到烘干为止。一般需连续重复烘干8次才能把滑石粉里的水分烘干。
S3：制粉：把烘干的滑石粉从烘干箱取出，压碎成粉状后，用400目的土壤筛过筛，放进20L塑料盆，过不了筛的粗滑石粉粒继续压碎，一边碾压一边筛动，一直到所有滑石粉全部过筛为止。
S4：包装储存：过筛的滑石粉即为组培育苗杀菌防虫生根粉，把其装入贴有记录配制日期、品名、使用方法标签的500mL白色塑料试剂瓶密封，放在荫凉通风干燥处保存。
S4.进行移植后的栽培管理/根状茎试管苗栽培驯化管理
1、湿度管理：根状茎试管苗栽植后，必须加强对栽培驯化环境的管理，一般前20d左右湿度须保持60～75％左右，并保持通风透气，后视其驯化情况可逐渐通风降低湿度，一直到苗长出新根、新芽后即可放开按常规管理进行。
2、光照管理：刚栽植的根状茎试管苗必须遮阴(70～80％遮阳网遮盖)，光照过强，容易引起烧苗，且容易引起棚内高温，高温高湿，加上不通风，就容易引发病害，苗出现严重死亡。40d后应增强光照，保持遮阴度为50～60％左右，以便出圃到大田种植时更适应自然条件，更有利于黄精的大田生长。
3、水分管理：基质的水分必须始终保持湿润状态，水分不能过多，否则苗很容易霉烂，茎质表面干时，才用喷雾淋湿并经常通风降温，并要注意观察，发现干时，及时淋水，淋水时必须采用喷淋的方式，切忌用水龙头直接对着冲淋。淋水应做到先少后多，保证前7d基质离表面1～3cm处保持湿润状态(用手捏紧湿手但无水滴下)，以便促进根的生长。25～30d左右有新根长出后，顶芽开始抽高，苗开始成活生长，淋水应保证全部基质湿润(用手捏紧湿手但无水滴下)。
4、温度管理：黄精的生长温度一般为15～32℃，最适生长温度为20～28℃，低于15℃时生长停滞，10℃以下叶片干枯，进入休眠，高于32℃时，不但生长缓慢，且容易引起烧苗。因此，根状茎试管苗栽植后，前期栽培驯化环境温度最好控制在20～28℃之间，在这种温度时，一般20d左右后苗开始长新根，不定芽长出或长高，如无法达到这种温度要求，也要控制达到15～32℃的温度范围内，否则根状茎试管苗移植将失败。后期，一般30d左右后即可按常规管理进行。
5、通风管理：通过通风，可以调节移植环境的湿度、温度及空气的新鲜度，有利于苗的生长，及病害的控制。栽培驯化种植全过程需始终保持通风透气。
6、肥分管理：根状茎试管苗栽植后前10天，可用杀菌促根生长营养液(配方：1/4MS矿质元素+NAA0.2mg/L+40％多菌灵(或甲基托布津等)500液的混合液)进行3次喷施，每3天1次，每次喷施需直至基质表层湿润为止。长出新根并开始长高时，即可开始向基质淋施水肥，水肥配方：磷酸二氢钾、硝酸钾、硫酸钙按1：1：0.5的比例配成总浓度为2500ppm的水溶液施用，每7d施用一次。
7、病虫害防治：试管苗移植前20天，每7天喷施杀菌剂1次，一般可用多菌灵、好生灵、甲基托布津、敌磺钠等杀菌剂，交替使用，以后每10天喷施一次，60天后，可根据病害的发生情况，及时喷药防病治病。发生病害，应及时清除病株，并每隔2～3天喷药一次，连续喷施2～3次。杀菌剂必须多种交换使用，特殊情况可多种混合使用(碱性药不能与酸性药混合)并可加入井冈霉素。
8、根状茎试管苗成苗出圃：1、根状茎试管苗成苗出圃质量标准：(1)叶片饱满，叶色青绿，舒展，叶片数达到5片以上；(2)根系发达，植株健康，无病虫害；(3)生长正常，无扭曲现象；(4)根状茎直径为4.0cm以上；(3)塑料大棚移植、栽培驯化种植1年以上。
S5.根状茎试管苗成苗出圃。
实施例2
一种根状茎植物试管苗移植方法，步骤与实施例1中相同。
本实施例中采用的杀菌防虫生根粉的配方成分包括以下原料：400ppm IBA、3ppm2.4-D、20ppm 6BA、900ppm KH2PO4、900ppm KNO3、50ppm FeSO4·7H20、40ppm H3BO3、30mL100ppm的Ag+溶液、4500ppm O,O-二甲基-(2,2,2-三氯-1-羟基乙基)膦酸酯和附着剂。
实施例3
一种根状茎植物试管苗移植方法，步骤与实施例1中相同。
本实施例中采用的杀菌防虫生根粉的配方成分包括以下原料：600ppm IBA、5ppm2.4-D、40ppm 6BA、1100ppm KH2PO4、1100ppm KNO3、150ppm FeSO4·7H20、60ppm H3BO3、50mL100ppm的Ag+溶液、5500ppm O,O-二甲基-(2,2,2-三氯-1-羟基乙基)膦酸酯和附着剂。
实施例4多花黄精试管苗移植效果实验
本实施例提供上述实施例1至3在多花黄精组培工厂化育苗试管苗移植效果的对比试验。
1.试验设计：选择4000株的根状茎试管苗，每组1000株、一条苗床，分为试验组1～3及对照组，其中1～3组采用本发明实施例1～3中移植方法，于3月份进行试管苗移植，对照组则不采用，移植后种植时间为60d，对试管苗的成苗率及生长状况进行记录。
2.试验设施选择：选择大田环境条件下，采用防雨水，并容易进行通风、光照调节、调温、调湿、淋水、施肥及病虫害防治等操作的临时简易塑料棚。
3.移植床准备：移栽棚地面高于周围地面，周围开好排水沟，移栽床床边高度为15cm,用建筑用红砖砌成宽1.2m，长视移栽棚长度具体确定，床与床之间间隔用建筑用红砖铺上40cm步行道。移栽床装填上干净河沙做为移栽基质，移栽基质装填高度为低于床边2cm左右。并用0.2％的高锰酸钾溶液和500倍的50％敌磺钠溶液对基质进行消毒。
4.根状茎试管苗准备：把已在炼苗塑料大棚炼苗好的瓶装根状茎试管苗取出、清洗、消毒、晾苗和分级。
5.根状茎试管苗生根粉应用试验种植：统一选用一级根状茎试管苗，按试验设计分区进行栽植，株行距为8×8cm。栽植时，根状茎试管苗湿润后，醮粘本发明的多花黄精根状茎试管苗移植专用杀菌防虫生根粉，保证每一个根状茎表面都均匀粘附有一小薄层生根粉后，对照组则不醮粘，种植在移植床上。
6.根状茎试管苗栽培驯化管理：种植后严格根据多花黄精的生物学特性及生态习性进行湿度、光照、水分、温度、通风、肥分、病虫害防治等管理。
7.试验数据统计分析：试管苗移栽种植60d后，对试管苗的成苗率及生长状况进行统计分析，结果见表2。
表2多花黄精根状茎试管苗移植成苗率及生长状况统计
Figure BDA0002625888890000131
从表2的数据可以看出，采用实施例1至3中移植方法，移栽的根状茎试管苗因腐烂而死亡和虫咬而伤害的比率降低，生根及成苗率显著提高，生根及芽叶萌动加快，植株生长状况良好，见附图2至4所示。
附图2为多花黄精组织培养移栽出瓶的多花黄精根状茎。从图中可以看出其形态已形成，但根尚未形成，有一定的叶芽长出，这时的根状茎由于原在人为控制的环境条件下生长，苗比较弱，尚未有很好自主吸收基质中水分和养分的能力。
附图3为多花黄精根状茎试管苗移植60天后生根发芽情况。可以看出，其根系已形成，叶芽粗壮长大、长高，已具有很好的独立吸收基质中水分和养分的能力。
附图4为多花黄精根状茎试管苗移植后隔年5月生长情况。可以看出，这时生长情况良好。出苗整齐、成苗率高、生长快且健壮。
实施例5马铃薯块茎分生繁殖育苗实验
本实施例提供上述实施例1至3在马铃薯块茎分生繁殖育苗效果的对比试验，并以获得的试验数据为依据，验证其在马铃薯块茎分生繁殖育苗的作用效果，其主要包括以下步骤：
1.试验设计：选择2000块优质的马铃薯块茎，每块茎切成大小为3～5cm,含2～3个芽眼，每组500块、一条苗床，分为试验组1～3及对照组，其中1～3组采用本发明实施例1～3的多花黄精组培工厂化根状茎繁殖育苗专用杀菌防虫生根粉配方，于10月份进行块茎分生繁殖育苗试验，对照组则不采用，种植50d后，对块茎分生繁殖的成苗率及生长状况进行记录。
2.试验设施选择：选择大田环境条件下，采用防雨水，并容易进行通风、光照调节、调温、调湿、淋水、施肥及病虫害防治等操作的临时简易塑料棚。
3.移植床准备：移栽棚地面高于周围地面，周围开好排水沟，移栽床床边高度为15cm,用建筑用红砖砌成宽1.2m，长视移栽棚长度具体确定，床与床之间间隔用建筑用红砖铺上40cm步行道。移栽床装填上干净河沙做为移栽基质，移栽基质装填高度为低于床边2cm左右。并用0.2％的高锰酸钾溶液和500倍的50％敌磺钠溶液对基质进行消毒。
4.马铃薯块茎准备：从市场上采购用于种苗生产的脱毒健康无病虫害优质马铃薯块茎，把其切成大小为3～5cm,含2～3个芽眼的小块茎。
5.马铃薯块茎分生繁殖育苗试验：按试验设计分区进行栽植，株行距为10×10cm。栽植时，马铃薯小块茎湿润后，醮粘本发明的多花黄精根状茎试管苗移植专用杀菌防虫生根粉，保证每一个根状茎表面都均匀粘附有一小薄层生根粉后，对照组则不醮粘，种植在移植床上。
6.马铃薯块茎分生繁殖育苗栽培管理：种植后严格根据马铃薯的生物学特性及生态习性进行湿度、光照、水分、温度、通风、肥分、病虫害防治等管理
7.试验数据统计分析：马铃薯小块茎栽种植50d后，对其成苗率及生长状况进行统计分析，结果见表3。
表3马铃薯分生繁殖育苗成苗率及生长状况统计
Figure BDA0002625888890000141
从表3的数据可以看出，采用实施例1至3中的移植方法，种植的马铃薯小块茎因腐烂而死亡和虫咬而伤害的比率降低，生根及成苗率显著提高，生根及芽叶萌动加快，植株生长状况良好。
图6为马铃薯外植体诱导效果；图7为马铃薯不定芽的形成；图8为马铃薯继代增殖壮芽；图9为马铃薯芽苗生根。
实施例6姜根茎分生繁殖育苗实验
本实施例提供上述实施例1至3在姜的根茎分生繁殖育苗效果的对比试验，并以获得的试验数据为依据，验证其在姜的根茎分生繁殖育苗的作用效果，其主要包括以下步骤：
1.试验设计：选择2000块的优质姜的根茎，每块根茎切成大小为3～5cm,含1～2个芽眼，每组500块、一条苗床，分为试验组1～3及对照组，其中1～3组采用本发明实施例1～3的多花黄精组培工厂化根状茎繁殖育苗专用杀菌防虫生根粉配方，于5月份进行根茎分生繁殖育苗试验，对照组则不采用，种植50d后，对根茎分生繁殖的成苗率及生长状况进行记录。
2.试验设施选择：选择大田环境条件下，采用防雨水，并容易进行通风、光照调节、调温、调湿、淋水、施肥及病虫害防治等操作的临时简易塑料棚。
3.移植床准备：移栽棚地面高于周围地面，周围开好排水沟，移栽床床边高度为15cm,用建筑用红砖砌成宽1.2m，长视移栽棚长度具体确定，床与床之间间隔用建筑用红砖铺上40cm步行道。移栽床装填上干净河沙做为移栽基质，移栽基质装填高度为低于床边2cm左右。并用0.2％的高锰酸钾溶液和500倍的50％敌磺钠溶液对基质进行消毒。
4.姜种植根茎准备：从市场上采购用于种苗生产的健康无病虫害优质姜的根茎，把其切成大小为3～5cm,含1～2个芽眼的小根茎。
5.姜根茎分生繁殖育苗试验：按试验设计分区进行栽植，株行距为10×10cm。栽植时，姜小块根茎湿润后，醮粘本发明的多花黄精根状茎试管苗移植专用杀菌防虫生根粉，保证每一个根状茎表面都均匀粘附有一小薄层生根粉后，对照组则不醮粘，种植在移植床上。
6.姜根茎分生繁殖育苗栽培管理：种植后严格根据姜的生物学特性及生态习性进行湿度、光照、水分、温度、通风、肥分、病虫害防治等管理
7.试验数据统计分析：姜根茎种植50d后，对其成苗率及生长状况进行统计分析，结果见表4。
表4姜根茎分生繁殖育苗成苗率及生长状况统计
Figure BDA0002625888890000151
Figure BDA0002625888890000161
从表4的数据可以看出，采用实施例1至3中的组培育苗杀菌防虫生根粉，种植的姜小块根茎因腐烂而死亡和虫咬而伤害的比率降低，生根及成苗率显著提高，生根及芽叶萌动加快，植株生长状况良好。
图10为姜外植体诱导效果；图11为姜不定芽的形成；图12为姜继代增殖壮芽；图13为姜芽苗生根。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种根状茎植物试管苗移植方法，包括以下步骤：
S1.将根状茎植物组培苗进行炼苗培养，形成根状茎试管苗；
S2.对根状茎试管苗进行清洗消毒，晾苗；
S3.根据根状茎试管苗的生长情况分级种植；
S4.进行移植后的栽培管理，形成根状茎试管苗成苗；
S5.根状茎试管苗成苗出圃。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中所述炼苗培养的条件为：温度18.5～28.5℃，光照强度6000～8500Lux；日照时间8～11h。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中形成根状茎试管苗的出苗标准为：
(1)叶色青绿，叶片数达到3片以上或叶片枯黄脱落；(2)根状茎直径为2.5cm以上；(3)根状茎形态明显浅绿色或绿色；(4)生长正常。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2中对根状茎试管苗进行清洗消毒的具体方法为：取无污染的根状茎试管苗，使用清水洗净后，用高锰酸钾溶液浸泡，后用清水再清洗一遍；对污染苗，清水洗净后，用高锰酸钾溶液浸泡，后用清水再清洗一遍，再用杀菌溶液浸泡后取出。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3中所述分级种植为：将根状茎试管苗分为一级、二级和三级，分别种植；其中，
一级：(1)叶色青绿，叶片数达到3片以上；(2)根状茎直径为3.5cm以上；(3)根状茎形态明显，浅绿色或绿色；(4)生长正常；
二级：(1)叶片枯黄无叶片；(2)根状茎直径为2.5～3.5cm；(3)根状茎形态明显，浅绿色或绿色；(4)生长正常；
三级：(1)叶片枯黄脱落或有一定的叶片数量；(2)根状茎直径为1.5～2.5cm；(3)根状茎形态明显，浅绿色或绿色；(4)生长正常。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3中所述分级种植的具体操作为：将分级后的根状茎试管苗湿润后，表面醮粘杀菌防虫生根粉后种植于河沙基质中。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述杀菌防虫生根粉包括以下原料：400～600ppm IBA、3～5ppm 2.4-D、20～40ppm 6BA、900～1100ppm KH2PO4、900～1100ppmKNO3、50～150ppm FeSO4·7H20、40～60ppm H3BO3、3～5wt％纳米银离子溶液、4500～5500ppm O,O-二甲基-(2,2,2-三氯-1-羟基乙基)膦酸酯和附着剂。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4所述栽培管理包括湿度管理、光照管理、水分管理、温度管理、通风管理、肥分管理和病虫害防治。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述湿度管理为移植后前15～25天保持湿度60～75％；
所述光照管理为移植后遮阴，遮阴度为70～85％，移植35～45天后遮阴度为50～60％；
所述水分管理为基质始终保持湿润状态；
所述温度管理为生长温度控制在15～32℃，优选20～28℃；
所述通风管理为保持通风；
所述肥分管理为移植后前8～12天喷洒杀菌促根营养液；进一步地，所述杀菌促根营养液为包括MS矿质元素、NAA、杀菌剂的混合溶液；更进一步地，所述杀菌促根营养液为包括1/4MS矿质元素、0.2mg/L NAA、多菌灵和甲基托布津的混合溶液；
所述病虫害防治为移植后前18～22天喷施杀菌剂；进一步地，所述杀菌剂选自N-(2-苯骈咪唑基)-氨基甲酸甲酯、乙撑1、2-双硫代氨基甲酸锌、1、2-二(3-甲氧碳基-2-硫脲基)苯、对二甲氨基苯重氮磺酸钠中的至少一种。
10.根据权利要求1至9任一所述的方法，其特征在于，所述根状茎植物为多花黄精、马铃薯、姜。
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