CN112029732A - 一种耐高温宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体及其组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及噬菌体技术领域，尤其是涉及一种耐高温宽裂解谱沙门氏菌噬菌体及其组合物。所述沙门氏菌噬菌体为沙门氏菌噬菌体SG8P3（Salmonella pullorum phage SG8P3）。本发明沙门氏菌噬菌体SG8P3具有良好的耐高温特性，65℃水浴2h仍具有80%存活率，75℃下水浴2h具有106 PFU/mL效价。在浓度为102～103cfu/mL的沙门氏菌培养基中，104～106PFU/mL的沙门氏菌噬菌体SG8P3对上述浓度的沙门氏菌的灭菌率达到99%以上，对沙门氏菌具有广谱的杀菌能力；沙门氏菌噬菌体SG8P3的组合物可裂解更多沙门氏菌，裂解率达98％以上，具有更强的裂解性。

Description

一种耐高温宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体及其组合物
技术领域
本发明涉及噬菌体技术领域，尤其是涉及一种耐高温宽裂解谱沙门氏菌噬菌体及其组合物、试剂盒和应用。
背景技术
沙门氏菌一般定殖在动物肠道内，在食品加工中若处理不当，极易污染食品，造成食品安全隐患，危害人类健康。近些年来，随着养殖户和饲料生产商抗生素的滥用导致该病菌出现越来越多的耐药菌株，使众多的治疗沙门氏菌感染病症的抗生素失效。据报道，中国沙门氏菌对磺胺类抗生素的耐药性已经接近100％，人们不得不寻求别的能有效对抗该病菌感染的防治方法。
噬菌体是一类专性寄生或感染细菌的病毒，它们广泛存在于自然界中。烈性噬菌体可以在敏感宿主菌胞内增殖，最后裂解宿主菌释放出子代噬菌体，从而达到破坏宿主菌的作用。在生产中，烈性噬菌体广泛应用于杀灭各种病原细菌，尤其是利用其治疗泛耐药的“超级细菌”引起的感染，取得了良好的效果。
现有公告号为CN104830806B的国内发明专利，公开了一株沙门氏菌噬菌体及其抑菌应用。其保藏变号为:CCTCC NO：M2014145，保藏日期为2014年4月24日，该噬菌体对沙门氏菌有强的裂解作用。在该发明中，该株噬菌体从电镜形态上分析，属于肌尾噬菌体科，将其命名为沙门氏菌噬菌体STP4-a；在40～60℃和pH为4～12的条件下都能够存活；－20℃保存1年后活性稳定；噬菌体保存的保护剂为含20％甘油的培养溶液。采用该发明的噬菌体特异性裂解沙门氏菌可以杀死具有耐药性的沙门氏菌。
公告号为CN106497888B的国内发明专利，公开了沙门氏菌噬菌体和噬菌体抗菌组合物及其应用。该发明提供的噬菌体为肠炎沙门氏菌噬菌体LPSE1和鼠伤寒沙门氏菌噬菌体 LPST10，无论是噬菌体LPSE1还是LPST10，均可对沙门氏菌具有良好的抑制作用，在食品体系中的应用实例也证实，当其用做于抑菌剂时具备良好的效果。
上述中的现有技术方案存在以下缺陷：上述沙门氏菌噬菌体的裂解范围以及对高温的耐受性均有限，亟需提供一种耐高温的宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的之一是提供一种耐高温宽裂解谱沙门氏菌噬菌体。
本发明的上述发明目的之一是通过以下技术方案得以实现的：一种耐高温宽裂解谱沙门氏菌噬菌体，所述沙门氏菌噬菌体为沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorumphage SG8P3)，保藏编号为CCTCC NO:M 2020205。
通过采用上述技术方案，提供了一种新型的具有宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体SG8P3 (Salmonella pullorum phage SG8P3)，该噬菌体同时对高温具有良好的耐受能力，可以高效杀灭沙门氏菌。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)头部为二十面体，长度80～100nm，横径50～70nm，具有可收缩性肌鞘，尾长90～110nm，直径15～25nm。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)在75℃下具有良好的耐高温特性。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)对沙门氏菌具有广谱的杀菌能力。
本发明的目的之二是提供一种含有上述的耐高温宽裂解谱沙门氏菌噬菌体的组合物，沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)对高温具有良好的耐受性且裂解谱较广，可以与其他噬菌体组合联用，满足特异性需求。
本发明的上述发明目的之二是通过以下技术方案得以实现的：一种含有上述的耐高温宽裂解谱沙门氏菌噬菌体的组合物，组合物含有所述沙门氏菌噬菌体(Salmonellapullorum phage SG8P3)以及其它沙门氏菌噬菌体中的至少一种。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述其它沙门氏菌噬菌体为鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)，保藏编号为：CCTCC M2018765；肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)，保藏编号为CCTCC NO:M 2015146；肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)保藏编号为CCTCC NO:M 2015145；或长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)保藏编号为CCTCC NO:M 2015141的一种。
通过上述技术方案，将沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)和其他噬菌体联合使用，以获得对目标细菌更好的杀灭效果。作为示例性的说明，沙门氏菌噬菌体SG8P3与其他噬菌体之间的比例关系可以由本领域技术人员结合本发明以及实际的应用领域以及本领域常识进行确定。
本发明的目的之三是提供一种含有上述耐高温宽裂解谱沙门氏菌噬菌体或沙门氏菌噬菌体的组合物的试剂或试剂盒。
本发明的上述发明目的之三是通过以下技术方案得以实现的：一种含有耐高温宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体的组合物的试剂或试剂盒，试剂或试剂盒中带有所述沙门氏菌噬菌体 SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)或沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonellapullorum phage SG8P3)的组合物。
本发明的目的之四是提供一种上述的沙门氏菌噬菌体的应用。
本发明的上述发明目的之四是通过以下技术方案得以实现的：沙门氏菌噬菌体SG8P3 (Salmonella pullorum phage SG8P3)用作于生物杀菌剂。
通过采用上述技术方案，可以用作为日常的杀菌剂，可以特异性地杀灭环境中的沙门氏菌，改善环境中的微生物分布；也可以用作在畜禽产品养殖、运输及保存的生物杀菌剂，用于防治在畜禽养殖、运输及保存过程中致病性的沙门氏菌污染；也可以与其它杀菌剂混合使用，喷洒于食品生产车间，防治食品加工过程中沙门氏菌的污染。
本发明的目的之五是提供一种上述的沙门氏菌噬菌体的另一种应用。
本发明的上述发明目的之五是通过以下技术方案得以实现的：沙门氏菌噬菌体SG8P3 (Salmonella pullorum phage SG8P3)用于为由沙门氏菌引起的细菌感染提供潜在的治疗药物或保健品。
通过采用上述技术方案，沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3) 可以用于治疗和预防因沙门氏菌引起的细菌感染。
本发明的目的之六是提供一种上述的沙门氏菌噬菌体的另一种应用。
本发明的上述发明目的之六是通过以下技术方案得以实现的：沙门氏菌噬菌体SG8P3 (Salmonella pullorum phage SG8P3)用作于治疗和预防因沙门氏菌引起的细菌感染的医疗器械。
通过采用上述技术方案，沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3) 可以作为医疗器械被审批注册，用于治疗和预防因沙门氏菌引起的细菌感染。
本发明的目的之七是提供一种上述的沙门氏菌噬菌体的另一种应用。
本发明的上述发明目的之七是通过以下技术方案得以实现的：沙门氏菌噬菌体SG8P3 (Salmonella pullorum phage SG8P3)用作于饲料添加剂。
通过采用上述技术方案，沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3) 可用于添加于饲料中，可特异性、持续性防治饲料中沙门氏菌的生存和繁殖，防治饲料存储及动物养殖中沙门氏菌的污染。
综上所述，本发明包括以下至少一种有益技术效果：
1.本发明的沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)，具有极强的耐酸能力，可以特异性地部分或完全灭活沙门氏菌，为工业化生产噬菌体杀菌剂提供噬菌体株来源；
2.本发明沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)是从自然界中分离的烈性噬菌体，经毒理实验证明其安全、无任何副作用；供试噬菌体不含毒力基因或不良基因；本发明未对供试噬菌体进行任何遗传修饰；
3.本发明本发明沙门氏菌噬菌体SG8P3具有良好的耐高温特性，65℃水浴2h仍具有80％存活率，75℃下水浴2h具有106PFU/mL效价；
4.本发明中沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)单独使用具有较宽的宿主范围；与其他噬菌体混合使用，其组合物可裂解更多沙门氏菌，裂解率达98％以上，具有更强的裂解性；
5.本发明中沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)与非宿主性致病性细菌的互作，无法识别28株供试非宿主性致病性细菌中的任何一株，特异性良好。
6.本发明的沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)在浓度为102～ 103cfu/mL的沙门氏菌培养基中104～106PFU/mL的噬菌体对该浓度的沙门氏菌的灭菌率达到 99％以上，对沙门氏菌具有广谱的杀菌能力；沙门氏菌噬菌体SG8P3可作为应用于环境消毒的各种产品的有效成分，例如包括但不限于以液体浸泡、喷洒、与含水性载体联合使用等形式对配水***、医疗设施、养殖业设施、公共及私人设施或其他环境表面进行消毒去污，可有效控制目标细菌的生长及活性。所述液体浸泡、喷洒形式包括但不限于洗涤剂、消毒剂、去污剂等；所述含水性载体包括但不限于磷酸盐缓冲液、LB培养基、氯游离水等。
7.本发明的沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)，可以有效杀灭鸡肉表面的沙门氏菌并防治鸡肉在保存过程中沙门氏菌的污染，可作为食品防护的各种产品的有效成分。本发明包括但不限于以液体浸泡、喷洒、与合成组分联合使用等形式对由沙门氏菌侵染所导致的食品腐坏进行预防，尤其适用于熟食或不宜灭菌的食品。所述液体浸泡、喷洒形式包括但不限于食品除菌剂、食品消毒剂、食品防腐剂等；本发明中合成组分包括但不限于苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙等。
8.本发明的沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorumphage SG8P3)，可用于制备组合物，试剂，或试剂盒；可应用于沙门氏菌的快速检测，其包括但不限于以试纸、试剂盒等形式对目标样本中的沙门氏菌进行检测，或对临床样本中的目标致病菌进行筛选，可有效确保检测的灵敏度；
9.本发明的沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)可以单独或混合使用，用作为生物杀菌剂，饲料添加剂，或因沙门氏菌引起的细菌感染的治疗药物、保健品及医疗器械；沙门氏菌噬菌体SG8P3可应用于治疗或预防由沙门氏菌引起的感染性疾病；可被沙门氏菌感染的寄主包括人类、家畜(猪、牛、羊等)、家禽(鸡、鸭、鹅等)，以及各种兽类、鱼类、鼠类等；
10.本发明的沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)可以应用于工业生产，可由宿主菌特异性扩增，可应用标准病毒纯化方法高度纯化，具有极好的推广前景。本领域技术人员可以根据本发明的记载及本领域常识将本发明所述沙门氏菌噬菌体SG8P3或其组合物制备成应用于医疗，检测，消毒及食品防护等方面的各种产品加以工业应用。产品形式可包括但不限于以载体携带、浓缩注射或药剂浸泡等形式施用于被防治的寄主体表、口部、直肠、胸膜内部等部位；作为实施方案之一，所述载体携带形式包括但不限于口服含水性载体、口服无水性载体、乳膏制剂等；浓缩注射形式包括但不限于疫苗注射、胸膜腔注射、经脉注射等；药剂浸泡形式包括但不限于气雾剂、漂洗剂等。
附图说明
图1是沙门氏菌噬菌体SG8P3噬菌斑形态照片。
图2是透射电子显微镜下沙门氏菌噬菌体SG8P3形态结构示意图。
具体实施方式
以下实施例用于进一步阐述本发明，但不以任何的方式限制本发明的有效范围。
以下实例中，所涉及菌株代号均为本公司的命名方式编号。
沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)，保藏编号为CCTCCNO: M 2020205，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏时间为2020年06月12日。
鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)，保藏编号为CCTCCNO:M2018765，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏时间为2018年11月09 日。
肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)，保藏编号为CCTCC NO:M 2015146，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏日期为 2015年3月23日。
肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)保藏编号为CCTCC NO:M 2015145，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏日期为2015年3月23日。
长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)保藏编号为CCTCC NO:M 2015141，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏日期为 2015年3月23日。
以下实例中，
LB液体培养基的配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL， pH7.0。
LB固体培养基的配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH 7.0。
半固体琼脂培养基配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂7g，蒸馏水1000mL，pH 7.0。
SM缓冲液配方为：氯化钠8.5g，硫酸镁2g，1mol/L Tris-HCl 50mL，明胶0.25g，蒸馏水1000mL。
沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)、鸡白痢沙门氏菌噬菌体 SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)、肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-636)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirussp.BP-12)的组合物1～组合物8均依实施例6所述方法制备。
实施例1：噬菌体的筛选和纯化
(一)样品采集及处理
本发明中的样品采集自山东、河南、江苏的养殖场污水与附近农田土壤。
采集的样品经过5000r/min离心10min，过0.22μm滤膜。
(二)样品中针对目标沙门氏菌的噬菌体富集
将上述滤液以1:1的比例与2倍LB液体培养基混合，接种目标沙门氏菌菌株100μL，过夜富集。
(三)噬菌体筛选
将上述富集液离心取上清过0.22μm膜后，取1mL与5mL含有目标沙门氏菌的LB半固体培养基混匀，倾倒于盛有LB固体培养基的培养皿上，待半固体培养基凝固后，37℃过夜培养，第二天观察是否有噬斑，记录实验结果。
(四)噬菌体纯化
挑取上述单噬菌斑于1mL SM缓冲液中，150rpm震荡15min，梯度稀释，将稀释液与5mL含有目标沙门氏菌的LB半固体培养基混匀，倾倒于盛有LB固体培养基的培养皿上，待半固体培养基凝固后，37℃过夜培养。重复该步骤3～5次，得到噬菌体单克隆样品，命名为沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)。沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)噬菌斑形态如图1所示；沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)透射电子显微镜下形态如图2所示，形态为头部二十面体，长度80～100nm，横径50～70nm，具有可收缩性肌鞘，尾长90～110nm，直径15～25nm。本图中SG8P3头部长度87nm，横径66nm，尾长95nm，直径18nm。
(五)噬菌体颗粒制备
应用宿主菌将沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)进行扩增，待培养基澄清后，8000g离心10min，去除杂质，加入固体聚乙二醇(PEG8000)至终浓度为10％(w/v)，搅拌溶解，4℃过夜，4℃8000g离心20min，将沉淀重悬于SM缓冲液中。将得到的噬菌体悬液4℃保存待用。
实施例2沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)对沙门氏菌最佳感染复数(MOI)的测定
1.噬菌体计数方法：将所得沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)样品按10倍比例梯度稀释，取其中一定稀释比例的样品100μL，按照实施例1所述的步骤(四) 中的方法铺双层平皿，取合适比例的平皿计算噬斑个数，一个噬菌斑代表一个噬菌体单体。
2.挑取沙门氏菌单个菌落，接种到盛有3mL LB培养液的试管中，37℃150rpm振荡培养12h，得到宿主菌悬液。将菌悬液以1:100比例转接到l0mL LB培养液，37℃150rpm振荡培养至对数前期。按照感染复数比例加入沙门氏菌噬菌体SG8P3的纯培养液(由实施例1制得)和宿主菌(MOI＝噬菌体数量/细菌数量)，加入LB液体培养基使各管总体积相同。在 37℃摇床中150rpm过夜摇培。培养完毕后5000g离心l0min并收集上清液，测定噬菌体效价。各点均作双份复管培养取平均值，以产生最高噬菌体效价的MOI为最佳感染复数。实验重复3次。
表1不同感染复数下沙门氏菌噬菌体SG8P3的效价
MOI SG8P3(PFU/mL) 宿主菌(cfu/mL) SG8P3效价(PFU/mL)
1000:1 10<sup>8</sup> 10<sup>5</sup> 8x10<sup>8</sup>
100:1 10<sup>8</sup> 10<sup>6</sup> 7.6x10<sup>8</sup>
10:1 10<sup>8</sup> 10<sup>7</sup> 4.6x10<sup>9</sup>
1:1 10<sup>8</sup> 10<sup>8</sup> 3.4x10<sup>9</sup>
1:10 10<sup>8</sup> 10<sup>9</sup> 4x10<sup>9</sup>
1:100 10<sup>8</sup> 10<sup>10</sup> 6.6x10<sup>9</sup>
1:1000 10<sup>7</sup> 10<sup>10</sup> 2.3x10<sup>10</sup>
结果如表1所示，沙门氏菌噬菌体SG8P3效价达到最高(2.3x1010PFU/mL)时，其MOI为1:1000。其初始投入量少，繁殖速度快，可应用于工业生产中。
实施例3：沙门氏菌噬菌体SG8P3的毒力基因或不良基因缺失检测试验选取65种经鉴定源自病原细菌体内溶源性噬菌体的毒力基因(表2)，通过测定沙门氏菌噬菌体SG8P3的全基因组并对其进行生物信息学分析，以确定其是否含有上述毒力基因。结果显示，沙门氏菌噬菌体SG8P3不含有下列毒力基因。供试噬菌体无不良基因。
表2病原细菌体内溶源性噬菌体的主要已知毒性基因
Figure BDA0002667919190000081
Figure BDA0002667919190000091
本发明的沙门氏菌噬菌体SG8P3不含毒力基因或不良基因，其中不含毒力基因或不良基因是指表2所记载的毒力基因或不良基因。
实施例4：毒理实验
实验小鼠20只，雌雄各半，适应性饲养三天后，随机分为两组(噬菌体组、对照组)，每组10只(雌雄各5只)，给予噬菌体组计量为1010pfu/kg的沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonellapullorum phage SG8P3)，对照组给予等量生理盐水，连续给药15d，将实验鼠断颈处死，检查内脏情况。
实验结果显示，此剂量的沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3) 对小鼠日常行为没有影响。解剖检查内脏未见异常。本发明的沙门氏菌噬菌体SG8P3 (Salmonella pullorum phage SG8P3)具有生物安全性，可应用于饲料添加剂。当然，沙门氏菌噬菌体SG8P3也可以应用成保健品去运用或药剂去应用，在本毒理验中也证明是安全的。
实施例5：沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)的热稳定性试验
1.噬菌体计数方法：同实施例2所述方法。
2.各取500μL效价为5x109PFU/mL的噬菌体纯培养液(实施例1制得)装于无菌EP管中，分别于25℃(CK)、55℃、65℃、75℃水浴中作用2h、24h、48h。作用时间结束后取出样品管并立即置于冰浴中冷却，经适当稀释后采用双层平板法测定噬菌体效价。实验重复 3次。
表3沙门氏菌噬菌体SG8P3于不同温度下的效价
Figure BDA0002667919190000101
结果如表3所示，实验组中沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)在55℃下较易存活。沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)具有良好的耐高温特性，与对照相比，65℃水浴2h仍具有80％存活率，75℃下水浴2h仍具106PFU/mL效价。
实施例6：沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)对沙门氏菌裂解范围试验及沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)和鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)组合物的制备和裂解范围试验采用点滴法来测定噬菌体的裂解谱。选择大量的沙门菌株，将5mL含有沙门氏菌的LB半固体培养基混匀，分别倾倒于盛有LB固体培养基的培养皿上，待半固体培养基凝固后用实施例1分离到的沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)进行点滴。
分别取效价为1x108PFU/mL沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3) 和鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)的原液，将2株噬菌体等体积均匀混合于SM液中，制成沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorumphage SG8P3) 和鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)的1:1的组合物(组合物1)。
分别取效价为1x108PFU/mL沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)、鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)和肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)的原液，将3株噬菌体等体积均匀混合制成沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)、鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonellapullorum phage SG4P1)和肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)的1:1:1的组合物(组合物2)。
分别取效价为1x108PFU/mL沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)、鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)和肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)的原液，将3株噬菌体等体积均匀混合制成沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)、鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonellapullorum phage SG4P1)和肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)的1:1:1的组合物(组合物3)。
分别取效价为1x108PFU/mL沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)、鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的原液，将3株噬菌体等体积均匀混合制成沙门氏菌噬菌体 SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)、鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的1:1:1的组合物(组合物4)。
分别取效价为1x108PFU/mL沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)、鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)和肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)的原液，将4株噬菌体等体积均匀混合制成沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)、鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)和肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)的1:1:1:1的组合物(组合物5)。
分别取效价为1x108PFU/mL沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)、鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的原液，将4株噬菌体等体积均匀混合制成沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)、鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-63 (Myoviridae sp.BP-63)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的1:1:1:1的组合物(组合物6)。
分别取效价为1x108PFU/mL沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)、鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的原液，将4株噬菌体等体积均匀混合制成鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phageSG4P1)、肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirussp.BP-12)的 1:1:1:1的组合物(组合物7)。
分别取效价为1x108PFU/mL沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)、鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)、肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)和长尾噬菌体BP-12 (Chilikevirus sp.BP-12)的原液，将5株噬菌体等体积均匀混合制成沙门氏菌噬菌体SG8P3 (Salmonella pullorum phage SG8P3)、鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)、肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp. BP-66)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的1:1:1:1:1的组合物(组合物8)。
挑取160株分属34种血清型的沙门氏菌的单菌落分别接种于盛有3mL LB的试管中， 160rpm培养8h，制得各株细菌菌液。取300μL菌悬液分别与半固体培养基混合铺于普通琼脂平板上，分别取10μL沙门氏菌噬菌体SG8P3培养液及其组合物1～8培养液滴于平板的不同位置上，加样时各噬菌体培养液间不可接触，以免影响试验结果。待自然风干后37℃培养6～8h，观察结果。试验重复三次。
结果如表4所示，沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)具有较宽的宿主范围。沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)可裂解153株沙门氏菌，裂解率为95.6％。而SG8P3的组合物培养液普遍可识别至少157株以上沙门氏菌，裂解率至少为98％以上。说明沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)具有较宽的宿主范围，可识别不同来源不同血清型的沙门氏菌，同时SG8P3的组合物可弥补噬菌体单一应用时宿主谱的局限性，在噬菌体治疗方面具有极大的应用潜力。
表4沙门氏菌噬菌体SG8P3、和组合物的裂解谱测定结果
Figure BDA0002667919190000121
Figure BDA0002667919190000131
Figure BDA0002667919190000141
Figure BDA0002667919190000151
Figure BDA0002667919190000161
Figure BDA0002667919190000171
Figure BDA0002667919190000181
Figure BDA0002667919190000191
Figure BDA0002667919190000201
Figure BDA0002667919190000211
Figure BDA0002667919190000221
Figure BDA0002667919190000231
Figure BDA0002667919190000241
注：++：完全裂解，噬菌斑非常透亮；+：完全裂解，噬菌斑透亮；-：未裂解
结果显示：沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)及其组合物对大量不同地域不同血清型的沙门氏菌菌株均表现出较为出色的杀菌能力，证明其具有较宽的裂解谱，可以作为养殖的替抗选择。
实施例7：沙门氏菌噬菌体SG8P3对非宿主性致病性细菌的裂解试验
挑取包括无乳链球菌、停乳链球菌等在内的28株非宿主性病原细菌单菌落，将其分别接种于盛有3mL TSB的试管中，37℃160rpm振荡培养8h，制得各株细菌菌液。取300μL供试细菌菌悬液分别与5mL TSB半固体培养基混合铺于TSA琼脂平板上。分别取10μL沙门氏菌噬菌体SG8P3噬菌体液(实施例1制得)点滴于平板上，待自然风干后37℃培养18～24h，观察结果。试验重复三次。
结果显示，沙门氏菌噬菌体SG8P3无法识别28株供试非宿主性致病性细菌中的任何一株(表5)。说明供试噬菌体具有极强的宿主特异性，且对微生物群落无损伤作用。
表5沙门氏菌噬菌体SG8P3对非宿主性致病性细菌的裂解试验
Figure BDA0002667919190000242
Figure BDA0002667919190000251
实施例8：沙门氏菌噬菌体SG8P3及其组合物在液体中的杀菌效果
1.沙门氏菌计数方法(效价)
采用BS沙门氏菌选择性培养基，应用稀释涂布的方法计数，37℃培养24h，黑色有金属光泽的菌落为阳性菌落。
2.沙门氏菌噬菌体SG8P3在液体中杀菌效果实验培养沙门氏菌至对数生长期，分装进不同试管中，用等体积的液体LB培养基稀释菌液至沙门氏菌的终浓度为1000cfu/mL，接种进不同浓度的沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)(实施例1制得)，使样品中沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)的浓度分别是1x102PFU/mL、1x103PFU/mL、1x104PFU/mL、1x105PFU/mL， 1x106PFU/mL。同时设置对照组和空白组(CK)，对照组给予终浓度1x103cfu/mL的沙门氏菌；空白组给予等量生理盐水。4h后检测沙门氏菌的残留量。结果参见表6。
表6不同浓度沙门氏菌噬菌体SG8P3在液体中的杀菌效果
Figure BDA0002667919190000252
Figure BDA0002667919190000261
表6的测试结果显示：沙门氏菌噬菌体SG8P3浓度为104～106PFU/mL时，噬菌体SG8P3对液体LB培养基中沙门氏菌的杀菌效果最好，杀灭率在99％以上。表明沙门氏菌噬菌体SG8P3具有应用为生物杀菌剂的潜力。
3.高浓度沙门氏菌噬菌体SG8P3的组合物在液体中杀菌效果实验
沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)组合物1～组合物8，其配制方法见实施例6。
培养沙门氏菌至对数生长期，分装进不同试管中，用液体LB培养基稀释菌液至使沙门氏菌的终浓度为1x103cfu/mL，接种带有终浓度为1x106PFU/mL浓度的沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)的组合物1～组合物8。设置对照组和空白组(CK)，对照组给予终浓度1x103cfu/mL的沙门氏菌；空白组给予等量生理盐水。4h后检测沙门氏菌的残留量，检测方法见本实施例步骤1。结果参见表7。
表7高浓度沙门氏菌噬菌体SG8P3的组合物在液体中杀菌效果
Figure BDA0002667919190000262
表7测试结果显示：沙门氏菌噬菌体SG8P3浓度为高浓度1x106PFU/mL时，带有其的组合物不仅杀菌效果好，而且对其它组合成分无拮抗作用。沙门氏菌噬菌体SG8P3的组合物具有应用为生物杀菌剂的潜力。
实施例9：沙门氏菌噬菌体SG8P3及其组合物对雏鸡养殖过程中沙门氏菌感染的防治沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)组合物1～组合物8的制备方法参见实施例6。
实验雏鸡550只，适应性饲养3天后，随机分为4组(噬菌体SG8P3组、组合物1、对照组和空白组)，每组50只，各处理实验组给予剂量为1x108PFU/kg的供试噬菌体和1x108 cfu/kg的沙门氏菌；对照组给予1x108cfu/kg的沙门氏菌；空白组给予等量生理盐水，连续给药15d。统计雏鸡日常生长情况及存活率，结果参见表8。
表8沙门氏菌噬菌体SG8P3及其组合物对雏鸡存活率的影响
Figure BDA0002667919190000263
Figure BDA0002667919190000271
表8结果显示：对照组雏鸡生活有大量的腹泻，白痢现象，且在第7天雏鸡全部死亡；空白组成活率95％；单沙门氏菌噬菌体SG8P3组雏鸡成活率79％；沙门氏菌噬菌体SG8P3组合物8雏鸡成活率为95％，其它组合物的雏鸡成活率也均为83％以上，表明沙门氏菌噬菌体SG8P3可与其它组分协同使用，并不影响其性能。该试验也表明沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phageSG8P3)及其组合物可以用作为生物杀菌剂或饲料添加剂，可有效防治鸡养殖过程中沙门氏菌的感染。
实施例10：沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)及其组合物对鸡肉样品保存过程中沙门氏菌污染的防治
1.噬菌体计数方法：同实施例2所述方法。
2.沙门氏菌计数方法：同实施例8所述方法。
3.沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)组合物1～组合物8的配制方法：同实施例6所述方法。
4.将经高压蒸汽灭菌的鸡胸肉切成1cm见方的小方块55块，分为11组(单噬菌体SG8P3 组、组合物1～组合物8、对照组和空白组)，每组5块，置于无菌平皿中。实验组每块接种 1x105cfu沙门氏菌和剂量为1x108PFU/kg的供试噬菌体；对照组每块接种1x105cfu沙门氏菌和等量无菌水；空白组给与等量无菌生理盐水。将各处理置于37℃培养箱中培养。每2h取一块鸡肉置于10mL无菌水中，充分震荡，测定该液体的沙门氏菌含量，结果参见表9。
表9沙门氏菌噬菌体SG8P3及其组合物对鸡肉样品保存过程中沙门氏菌污染的防治结果
Figure BDA0002667919190000272
Figure BDA0002667919190000281
表9结果显示：8h后对照组的鸡肉表面生长了大量的沙门氏菌；而各实验组由于沙门氏菌噬菌体SG8P3及其组合物的添加，鸡肉表面的沙门氏菌始终控制在极低的水平。沙门氏菌噬菌体SG8P3及其组合物可以用作为生物杀菌剂，有效杀灭鸡肉表面的沙门氏菌并防治鸡肉在保存过程中沙门氏菌的污染。
实施例11：沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)及其组合物的试剂或试剂盒的制备及使用试剂或试剂盒中含有5～10mL的效价为1×107PFU/mL的沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)或沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)的组合物，1L LB半固体培养基，1L LB固体培养基。
试剂或试剂盒的使用方法为：取效价为1×107PFU/mL沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)噬菌体液体或沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonellapullorum phage SG8P3)的组合物的液体，采用双层平板点滴法来测定供试噬菌体的裂解谱。挑取待检测单菌落，将其接种于目标液体培养基中，于目标温度下结合待检测菌株生长特性进行振荡培养，制得待检测菌株菌液。取300μL待检测菌株菌悬液分别与5mL LB半固体培养基混合铺于LB固体平板上，取10μL沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorumphage SG8P3)液体或沙门氏菌噬菌体SG8P3(Salmonella pullorum phage SG8P3)的组合物点滴于平板上。待自然风干后根据待检测菌株生长特性于目标温度下进行培养，观察结果即可。
本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 菲吉乐科（南京）生物科技有限公司
<120> 一种耐高温宽裂解谱的沙门氏菌噬菌体及其组合物
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 32768
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<400> 1
ctaagaatct ttcggcattt tagttacgtt gccgttgtgg ttcttcaacc agggttgtgc 60
ctttattctt attacctggt aactaaaggg caggccttaa gcctaccctc taatcgttac 120
attttacggt tgcgaatcta cggcacatca aggaaatcag atacttaaga gatatgctgc 180
cgatgagaat atagctcgcc caaggcagtt cagatactaa ggaaggaagt tactgagttt 240
taagtttgca ggtttcagta agccttaacg cgtttccgct tagggcggaa ccgctaagct 300
ctcacaaagt gaaacagaaa cttaagtaac ttgaagttac aagagacaac ttacacgaaa 360
aaaataagaa tgtcaatagg tgcgtttata cttgatttcc cattatgccg tgggtatact 420
tgctttacta actgagatgg agggcttgat aatgacacag aatgaagtag ctaagcttat 480
tggggtgacc cgccgcacgc tgaataactg gctaagagac ggcaagttcc cggattgttg 540
tgtccggatt atgggccgcc ggatgccggg aacattcgac agggagaaag tggaagcgtg 600
gattagggag aatgtaaagt gactgatttc cagaaaaggg tatttagggc agtagctgct 660
cttacattta aaaaggggtc gtgtagtgtc cttgacttgc gccggactta ttttcagtac 720
tatagttcct ctctcattga gaggtcgctg gaggttttgg ttcgagacgg agcagttaaa 780
agtaaggccg gaaaatattc ggcagtagct gaagttaaag gctatcaggc gacaccagaa 840
gaccttgaat aaaagaaaag ccccaacgcg cgaacgtcag ggccttaaac actacaaagg 900
aaaagcacat gtcaacaggt aatctagcat actcatggtc gcgtagcaat cgccgtgagg 960
aacgcgctga cattaacgtt tacaccacga cttccggcac ctgggatgag ttcatcgaac 1020
ttatgcagcc gcttaaacgt tcgcgccgga accccaagac agaccccgga tatatcaccg 1080
ccgcgtgtac cgccacggta agctctacag gtaaagaagc cgccgaaggt atgttttatc 1140
gctgcaatgc gtccgtaacg tcttcgtccc tggcttacgc cgatgtggac agtgcaacca 1200
cggaagagtt tgcaactgac tgcgagatgg tgcgggagtc gcgtttcgca atgatgctct 1260
acaccacggc gtcccacacc gaagaagcgc cgcgctatcg cgtcgttatg ccggtacgta 1320
cccctgtaac aggcggagac atcattcgca ttcggtacgg tctgcttacg catttcctta 1380
aaggccgtga cgtagatagc gcgggcttca ccctgtccca gccgatgtac cgcccgccag 1440
tgggaagcca ggtcatcgtg tctgaaagta gccgcatgat tacagcaagc aagcttatgg 1500
agggggtgcc agaaattaac gttaccggtg cttctgatta taaagtgccg gagggcgagc 1560
aatctgagtt aactgacctg tttgaagagt tcgctttcga gttcggcggc cgtatgactg 1620
accgtggcct gcaaatgccg gcgacgccag aacatgccgc ccaatactcg acgggggaac 1680
cgaaacagga cgacttcctt ttctgttggc cccgcgatgg cttcgagcgc cccaacgtaa 1740
ccatgtatca cgacaccgac ctggtagcca cgggctggat gacccctggc ggacgggata 1800
tgtgggctta cgcttgcgcc gctaccggtt tgccgtttga ccgcgtagag gtagctcttg 1860
gctgggcgcc gggcgttact tgcgacgagg aagacctgga cgacgaagaa cctccggcgc 1920
cgcaggccga tttcgtcgta gaagggtaca tgccgtccaa ttgcatctgg gatattatcg 1980
gtgaatccgg gacgtataag tctttttaca cactcggcat gatgtatatc agcgccgccg 2040
gatatcggtt cgcgggggcg gacacccgta aagcccatca tttctatatt gatggtgagg 2100
gtggggagtt tacgcacacc cgtatcgctg cgttggccgc taaatacggc gatgaaggta 2160
tgcggtatgt gcatgtgctt gacgccgggg aattcgcaga tacgaagaaa ctggtgcgta 2220
aaatacgcca gatagccggt agtgaacccg tcgggatggt tgcattcgac acccttaacc 2280
agaccttcgg taactggata gacaagttta atgaaaactc cgccgggcag gacggtatgg 2340
gtcgtgtcgt ggctatgctt aaagaagtac gcgacggtac taaaggcgct gtgggtgtcg 2400
ttcatcatac tcctaaaggt gggagtaagg cgcgcgggag tggggcgcta tatgccggtg 2460
tcgacgtcga acttacgctt gtccgggcca ctgagaaaca aataaacgtt gcgcacacca 2520
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ggcaaatagt tgcaagagct ggagaccaca gtataacaaa cctggtactt gagaagatgc 2940
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taaaacagtc taccttacac acccgaccag ttgccagatg ggtaataagg ctttgggata 3240
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taccgtagaa tttgattcgt cgggcaggaa ggttcctggc tggtggttgt gtatggagtt 8040
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cgcaagaccc cagttacgaa caccagcggg gtgaaagggg ttaactggag taaacaccat 9000
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ccgtcatata ggacgccagt acagggatat tgccagttac gatgttacca atagtggtga 29700
ttgccattat ttatttcctc agggctttaa gttgccgttc aaattcggca gggtttgatt 29760
tatagagagc caatcgctca ctttcactca tatctttaaa cgctggtgcg gccccgccgc 29820
ctttattccc ggaagccccg ccaccggaag ctgcatttgc tttaatcaaa tgcgaaaaag 29880
ctttatgttc gcgcaggtat ttgcggaact gctcagggtc ggtagtaaca acattgccgt 29940
ccgcacccat gaatttagta actatgtctt ccccctcgaa ttcggtctta acgaacggcg 30000
ccaggatttc taccgcttcc ggggtgatga aatcaccggc gaaagaaccc aaaacagcct 30060
tacgttcact tccaagaatt cgcgcggcta aagaagcgta gcgttcttct ttctctttca 30120
gtacaggttc atactgacta cgaatcgtct tttcaaattc gtccatttta ccagcagcct 30180
tcagggcctc ctggtgggcg cgctgccgtt cttcttcggc ttctttagcc cggcgagcag 30240
cttccttttt ctcgctaagg agcgcttcct gatttgcctt gagcccggcc acttctttct 30300
caatcaaggc ctgcacttct tcggcggtgt acatttttgg tgcatcacct gcacccgatt 30360
tatcttctac tccagcttct tcctggagtg gatagtgtaa aaaacgattc atagtcaata 30420
tgtcccctgg actttaggac accgggccac ccggtgtttc tgtaacaaga ataaattatt 30480
ccacttacta aggcaactat tccagaatat tccttatgta ctcctgcaac cggaatactt 30540
tcaagcgaag ttgccgtgtg cactccgcgt tacgtacgtc gatggccagg tcttcatcag 30600
cgtcactgct cgggggaata agcttgcacg gcggttgcat tagtgtcata tccggggatg 30660
gaattagcat tctcagtggc gcgtcgtttg attgacaccc gttcaggagg aaactcacag 30720
acagtacggc caggacgggt aacatatttg atgacttcat gggtgatagc ctccgaattt 30780
tctttgcctt ccgattcggc ggaggcggcc ttagtatcat tctgctgctg ccgttgtgtt 30840
ttcttcgtca gctcagcttg tgccttcttt tgttgctgtg aaacaagatt ctctcggcct 30900
tctacccacc cgcttctgta gttgtactgg ccgtataacc acaaggaaag gatgccggct 30960
gccgtgatta ctgcggttac tttccaattc atggtatccc ctttctttat acgctaagcc 31020
cggcgtaagc cgggcgttaa actcgtatat ctgtaaacat catacggcga atcttagata 31080
aatactgaaa gcaatatagc tctgcccttc cgaatgcgtt cgcggttacg ctagggcgct 31140
gtggcgcccg cttcacgcgt ccgcaccgcg gtacgctgaa agcgtaggta gcgtaacata 31200
taaaataata aaagtctatt tttggaataa agtattcctg aatttacatt ggtaaggaat 31260
aactggaata atggtgtgta aaattaaggc cccttgacgg ggcctttcgt tactcaggtt 31320
ctgagacctt agccgcttta cttaccaccg atatcccgtc agcatctacc accctgacga 31380
aatactcccc cgggtcttta acagttagtt caccctcaac gtacgggacg ttgattacct 31440
ctttaccatt tttaaaccat tgcaaatcgt agggcgcttt gccacctttc acgacaacgg 31500
ttaattttgc ggaaccgtct ttcaattcta catctgctgg ctgcgtatcg aagtacacat 31560
cacctgctcc atccagatac gacacttcgt acaggatacc gtcggtgatt gctaccagtc 31620
cggtcttatc ggcgaacggc atttcatcta ccgactcacc aagaacagat tcatctttaa 31680
tataaacaac accttcgcca gcaccagaca cacgtgagta ctgaactacg cggcgtgacg 31740
gcacatcttt aactttgaaa aatcccatct ttattcctct ttcaggtatt tggcaacacg 31800
tttatcgagc tccgccatct ctttaagagt taacggacgc ccgaatccgt ctaccgatat 31860
tacacgaaat tcttccgggg ttatcccact attacgaaaa atcttacctc ttacagggcc 31920
aagcgcttcg tcctggaacc aggccggctg ttgtttaaga aactcgtaat aggtggtgtc 31980
tgcgcttacc tgctgacccc catctgcacc ccgggccgcc cgtttcgcgc ccttatcaag 32040
gaagtcgaat tctggactga ttactggtgc cgtggtcgac cgacagccaa aatgggcagg 32100
gggcatcggc cctttatcaa tttcccacgt cattccgtct cgggacctgc aaacggcaga 32160
agtacgagag tcgagggtgg acacccattc gtatttcgtg atgatatcgt cattctgcgc 32220
gtaaacctgt tgccgtgctt cattagatac gtgcgccagg gctgtacgga taaccgtcgc 32280
cgcattacgt tcggaaatat ccgccagtcc accgggcccg acaacgttct taactatctg 32340
ccgtgttgtc tggccttgca caaatcccat cttaacgcca gttaccaggc gcgcgacttc 32400
cgtttcaccc cagcccgaca ttagagaaac aaaatcaact ggcttttcgc ttagttcaag 32460
aggcgcgaaa gtagcggcgg cccacacttg ctcggcggct ggggttacga aattagcgtt 32520
aacgttggtc gacagggttt ttacgttcca gttaatttca tagtcagaaa gctcacgagc 32580
gtcagccagt aatttctcgt accattctga cgtaatcccg ttcagtgctt gttcaagttc 32640
ccgcagcatg atggtgagtc tcgctgccgt tctgctgtca tcaccaaaca gcagcacctg 32700
tcgcttaacc tcatcacgca tttgcgagat aaatggtgcc aggtctttta cttcgctact 32760
ggcgttgc 32768

Claims (11)

1.一种耐高温宽裂解谱沙门氏菌噬菌体，其特征在于：所述沙门氏菌噬菌体为沙门氏菌噬菌体SG8P3（Salmonella pullorum phage SG8P3），保藏编号为CCTCCNO:M2020205。
2.根据权利要求1所述耐高温宽裂解谱沙门氏菌噬菌体，其特征在于：所述沙门氏菌噬菌体SG8P3（Salmonella pullorum phage SG8P3）为有尾噬菌体，头部为二十面体，长度80～100nm，横径50～70nm，具有可收缩性肌鞘，尾长90～110nm，直径15～25nm。
3.根据权利要求1所述耐高温宽裂解谱沙门氏菌噬菌体，其特征在于：所述沙门氏菌噬菌体SG8P3（Salmonella pullorum phage SG8P3）在75℃下具有良好的耐高温特性。
4.根据权利要求1所述耐高温宽裂解谱沙门氏菌噬菌体，其特征在于：所述沙门氏菌噬菌体SG8P3（Salmonella pullorum phage SG8P3）具有较广谱的杀灭沙门氏菌的能力。
5.一种含有权利要求1～4任一项所述的耐高温宽裂解谱沙门氏菌噬菌体的组合物，其特征在于：组合物含有所述沙门氏菌噬菌体SG8P3（Salmonella pullorum phage SG8P3）以及其它沙门氏菌噬菌体中的至少一种。
6.根据权利要求5所述耐高温宽裂解谱沙门氏菌噬菌体的组合物，其特征在于：所述其它沙门氏菌噬菌体为鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1（Salmonella pullorum phage SG4P1），保藏编号为：CCTCC NO:M2018765；肌尾噬菌体 BP-66（Myoviridae sp. BP-66），保藏编号为CCTCC NO: M 2015146；肌尾噬菌体 BP-63（Myoviridae sp. BP-63）保藏编号为 CCTCCNO: M 2015145；或长尾噬菌体 BP-12（Chilikevirus sp. BP-12）保藏编号为 CCTCC NO:M 2015141中的一种。
7.一种含有权利要求5所述耐高温宽裂解谱沙门氏菌噬菌体或沙门氏菌噬菌体的组合物的试剂或试剂盒。
8.一种权利要求1～4任一项所述沙门氏菌噬菌体的应用，其特征在于：沙门氏菌噬菌体SG8P3（Salmonella pullorum phage SG8P3）用作于生物杀菌剂。
9.一种权利要求1～4任一项所述沙门氏菌噬菌体的应用，其特征在于：沙门氏菌噬菌体SG8P3（Salmonella pullorum phage SG8P3）用于为由沙门氏菌引起的细菌感染提供潜在的治疗药物或保健品。
10.一种权利要求1～4任一项所述沙门氏菌噬菌体的应用，其特征在于：沙门氏菌噬菌体SG8P3（Salmonella pullorum phage SG8P3）用作于治疗和预防因沙门氏菌引起的细菌感染的医疗器械。
11.一种权利要求1～4任一项所述沙门氏菌噬菌体的应用，其特征在于：沙门氏菌噬菌体SG8P3（Salmonella pullorum phage SG8P3）用作于饲料添加剂。
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