CN111973641A - 去头屑组合物和其使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及包含浓度足以抑制马拉色(Malassezia)真菌生长的柳兰(Epilobium angustifolium)水提取物的去头屑组合物在制造用于减少或预防头皮屑的药物中的用途。

Description

去头屑组合物和其使用方法

本申请是申请日为2014年08月21日，申请号为201480036896.7，发明名称为“去头屑组合物和其使用方法”的申请的分案申请。

相关申请的交叉引用

本申请是要求2013年8月22日提交的美国临时申请序列号61/868,744和2013年11月18日提交的美国临时申请序列号61/905,372的权益。所有上述文件以引用的方式全文并入本文中。关于联邦资助的研究或开发的声明

不适用。

技术领域

本发明涉及去头屑组合物和其使用方法。更具体来说，本发明涉及包含柳兰(Epilobium angustifolium)提取物的去头屑组合物、其使用方法和其试剂盒。本发明还涉及包含浓度足以抑制马拉色(Malassezia)真菌生长的柳兰(Epilobium angustifolium)水提取物的去头屑组合物在制造用于减少或预防头皮屑的药物中的用途。

背景技术

头皮屑或头皮糠疹(pityriasis capitis)是世界范围内最普遍和诊断不足的头皮问题。其将在一定程度上影响到大约一半的年龄小于20岁的高加索人。

它的特征在于废弃的角质层簇集成油性的白色片状物。在正常的头皮中，皮肤迁移约28天并且细胞以单细胞形式脱落，而在具有头皮屑的头皮中，细胞迁移约7至21天并且细胞以约100-1000个细胞的团块脱落。虽然马拉色真菌(Maiassezia fungus)与头皮屑之间的确切联系尚不清楚，但人们认识到，这种真菌如下促进形成头皮屑：需要脂肪来生长的马拉色菌使用不同类型的脂肪酶以在头皮表面上(例如，在角质细胞上)水解甘油三酯，水解释放出不饱和脂肪酸，这又反过来增加马拉色菌生长并且可能造成炎症和发痒。马拉色菌在正常受试者中占微生物菌群的约46％，并且在具有头皮屑的受试者中占微生物菌群的约74％。据报道，物种球形马拉色菌(Maiassezia globosa)和限制马拉色菌(Maiasseziarestricta)是存在于人类头皮中的优势物种，其中球形马拉色菌是具有最高脂肪酶活性的物种。然而，据报道，仅存在马拉色菌不足以产生头皮屑。

其它促进因素包括遗传倾向、雄激素代谢(即，激素变化)、心理压力、环境刺激物(污染、高湿度、温度、UV辐射)和化妆品。

当前的去头屑成分试图控制脂肪酶活性、皮脂、真菌或炎症，和/或包括角质分离剂、抗微生物/抗真菌剂或抗增殖剂。角质分离剂(例如，水杨酸(Sebex^TM、Sebulex^TM、Neutrogena^TMT/Sal))将在具有较轻度病状的患者中除去显著比例的片状物。大多数的市售头皮屑治疗包括抗微生物/抗真菌剂，其已被证实可以改善片状剥落的可见症状并恢复潜在的皮肤状况(Warner等,2001)。例如，这些药剂包括吡啶硫酮锌(用于发痒干性头皮的Selsun Blue^TM、露得清(Neutrogena)^TMT/凝胶日常控制头皮屑洗发剂、海飞丝(Head&Shoulders)^TM)、硫化硒(Dandrex^TM、海飞丝^TM临床级别、Selsun^TM)、酮康唑(Extina^TM、Nizoral^TMA-D、Xolegel^TM)和环吡酮。抗增殖剂(例如，煤焦油(Denorex TherapeuticProtection^TM、露得清^TMT/凝胶、Scytera^TM))降低表皮增殖和真皮浸润(Schwartz等,2004)。利用局部类固醇的辅助治疗也可能有助于病状包括炎性组分迹象的患者。鉴于许多具有头皮屑的受试者可能需要定期、长期使用治疗剂，重要的是治疗剂被配制以在美学上和美容上可为患者所接受。

存在许多与目前头皮屑治疗相关的潜在缺点。例如，虽然煤焦油同时作为去头屑剂和杀生物剂起作用，但它是一种可能对皮肤健康有害的已知致癌物质。实际上，环境工作小组(Environmental Working Group)的化妆品安全数据库在0至10的量表上将其评级为10，其中10是对健康危害最大。因此，煤焦油在不同的地理区域如加拿大和欧盟受到禁止，但它在美国可以非处方洗发剂利用。有些人可能对吡啶硫酮锌过敏，或者可能经历由这种成分造成的皮肤刺激，但根据药物信息在线(Drug Information Online)，这两种副作用非常罕见。根据美国国家医学图书馆的家用产品数据库(National Library of Medicine'sHouseholds Products Database)，吡啶硫酮锌在接触时也可能刺激眼睛并且如果被吞咽的话可能造成恶心。水杨酸可通过松动死皮痂皮而有助于形成头皮屑。然而，根据美国国家卫生院(National Institutes of Health)，当应用含有酸的洗发剂时可能经历刺痛或烧灼感，并且其可能刺激皮肤。更严重的潜在副作用可能包括呕吐、头晕和呼吸率变化，但此类作用是罕见的。根据美国国家卫生院(NIH)，有些人可能对硒过敏。NIH还报道了含有浓度为2.5％或更高的硒的洗发剂最通常导致皮肤刺激、皮疹和其它局部副作用。根据NIH，酮康唑当局部使用时可促使皮肤发痒、荨麻疹和皮疹。更严重的副作用(如癌症风险增加)与化学物质的内部摄入有关。

虽然上述化学物质已经被报道显示一些功效，但在去头屑治疗(例如，通过将其与其它活性成分组合)中降低其浓度以降低触发其潜在副作用的风险可能是有利的。此外，由于健康和环境问题，以及不断增加的来自消费者的压力，天然来源和/或环境友好的去头屑活性成分将是非常理想的。

本说明书提及多个文件，其内容以全文引用的方式并入本文中。

发明内容

更具体来说，根据本发明，提供一种包含柳兰提取物的去头屑组合物。在另一个特定实施方案中，所述柳兰提取物是水提取物。在另一个特定实施方案中，所述柳兰提取物以足以抑制马拉色真菌生长的浓度存在。在另一个特定实施方案中，所述马拉色真菌是：糠秕马拉色菌(Malasseria furfur)、球形马拉色菌、限制马拉色菌或其任何组合。在特定实施方案中，上述组合物包含至少0.23％、至少0.25％或至少0.46％(w/v)的干重柳兰提取物。

在一个特定实施方案中，所述组合物还包含生理学上可接受的载体。在另一个特定实施方案中，所述组合物包含乳化油。在另一个特定实施方案中，所述组合物包含防腐剂(例如，焦亚硫酸钠和/或苯氧基乙醇)。在另一个特定实施方案中，所述组合物被配制成洗发剂、喷雾剂、乳膏剂、洗剂、发膜或凝胶剂。在另一个特定实施方案中，所述组合物还包含可用于治疗或预防头皮病状或病症或其至少一种症状的至少一种其它药剂。在另一个特定实施方案中，可用于治疗或预防头皮病状或病症或其至少一种症状的所述至少一种其它药剂是去头屑剂、抗皮脂剂、抗刺激剂、抗氧化剂、抗红斑剂、抗真菌剂、抗炎剂或抗脂肪酶剂。

在一个特定实施方案中，上述组合物是用于减少或预防头皮屑，例如粘附型头皮屑；非粘附型头皮屑；或其组合。在另一个特定实施方案中，上述组合物是还用于减少或预防以下中的至少一种：头发再起油；头皮刺激；头皮红斑；和头皮发痒。

根据本发明的另一个方面，提供一种用于减少或预防头皮屑的方法，所述方法包括在有需要的受试者的头皮上应用如上文所定义的组合物，其中所述受试者的头皮上的头皮屑相比于施用之前有所减少。在一些实施方案中，所述头皮屑是：粘附型头皮屑；非粘附型头皮屑；或其组合。在一些实施方案中，上述组合物是还用于减少或预防以下中的至少一种：头发再起油；头皮刺激；头皮红斑；和头皮发痒。

根据本发明的另一个方面，提供一种使用(i)本发明的组合物或(ii)柳兰提取物用于减少或预防以下的方法：(a)粘附型头皮屑；(b)非粘附型头皮屑；或(c)(a)和(b)的组合，所述方法包括在有需要的受试者的头皮上施用所述组合物或提取物，由此所述受试者中的(a)、(b)或(c)相比于所述受试者中在施用之前有所减少。在一个特定实施方案中，所述组合物或提取物还用于减少或预防以下中的至少一种：(e)头发再起油；(f)头皮刺激；(g)头皮红斑；和(h)头皮发痒。在另一个特定实施方案中，所述组合物或提取物在受试者的头皮上应用至少三次。

在另一个特定实施方案中，所述组合物或提取物在至少9天内每3天应用一次。在另一个特定实施方案中，所述组合物或提取物在至少12天内每3天应用一次。在另一个特定实施方案中，所述组合物或提取物在至少15天内每3天应用一次。在另一个特定实施方案中，所述组合物或提取物在至少18天内每3天应用一次。在另一个特定实施方案中，所述组合物或提取物在至少21天内每3天应用一次。在另一个特定实施方案中，所述组合物或提取物在至少24天内每3天应用一次。在另一个特定实施方案中，所述组合物或提取物在至少27天内每3天应用一次。在另一个特定实施方案中，所述组合物或提取物在至少30天内每3天应用一次。

根据本发明的另一个方面，提供(i)本发明的组合物或(ii)柳兰提取物用于减少或预防以下或者用于制造用于减少或预防以下的药物的用途：(a)粘附型头皮屑；(b)非粘附型头皮屑；或(c)(a)和(b)的组合。在一个特定实施方案中，所述组合物或提取物还用于减少或预防以下中的至少一种：(e)头发再起油；(f)头皮刺激；(g)头皮红斑；和(h)头皮发痒。

在一些方面，本发明涉及如上文所定义的组合物用于减少或预防头皮屑的用途。在一些方面，本发明涉及如上文所定义的组合物用于制造用于减少或预防头皮屑的药物的用途。在一些实施方案中，所述头皮屑是：粘附型头皮屑；非粘附型头皮屑；或其组合。在一些实施方案中，上述用途也用于减少或预防以下中的至少一种：头发再起油；头皮刺激；头皮红斑；和头皮发痒。

根据本发明的另一个方面，提供一种组合物，其包含：(i)本发明的组合物；或(ii)柳兰提取物；其用于减少或预防以下或者用于制造用于减少或预防以下的药物：(a)粘附型头皮屑；(b)非粘附型头皮屑；或(c)(a)和(b)的组合。在一个特定实施方案中，所述组合物或提取物还用于减少或预防以下中的至少一种：(e)头发再起油；(f)头皮刺激；(g)头皮红斑；和(h)头皮发痒。

根据本发明的另一个方面，提供一种试剂盒，其包含(A)本发明的组合物或柳兰提取物；和(B)以下中的至少一种：(i)使用(A)用于减少或预防头皮屑(例如，粘附型头皮屑、非粘附型头皮屑或其组合)的说明书；和(ii)可用于治疗或预防头皮病状或病症或其至少一种症状的至少一种其它药剂。在一个特定实施方案中，可用于治疗或预防头皮病状或病症或其至少一种症状的所述至少一种其它药剂是去头屑剂、抗刺激剂；抗氧化剂、抗皮脂剂、抗真菌剂、抗炎剂、抗脂肪酶剂。

在阅读了参考附图仅举例给出的本发明的特定实施方案的以下非限制性描述之后，本发明的其它特征将变得更显而易见。

附图说明

在附图中：

图1示意性呈现了为测试如实施例2中所述制备的含柳兰提取物的活性洗发剂的去头屑活性所遵循的临床方案的时间线。在清洗期内每3天使用中性洗发剂，而从D3起每三天使用活性洗发剂(包含柳兰提取物)。

图2呈现在用如实施例2中所述制备的包含柳兰提取物的活性洗发剂处理的人类受试者中的非粘附型头皮屑(±2SEM)随时间的平均评分(n＝24)的演变。

图3呈现在用如实施例2中所述制备的包含柳兰提取物的活性洗发剂处理的人类受试者中的粘附型头皮屑(±2SEM)随时间的平均评分(n＝24)的演变。

图4呈现在D0、D3和D30用如实施例2所述制备的包含柳兰提取物的活性洗发剂处理的代表性受试者的头皮(受试者#20、#14和#22，参见下文表I)的照片。

图5呈现在用如实施例2中所述制备的包含柳兰提取物的活性洗发剂处理的人类受试者中的平均皮脂分泌(n＝24)(±2SEM)随时间的演变。

图6呈现如实施例1中所述制备的柳兰溶液的3％v/v稀释液对于预先刺激的人类皮肤的作用。

图7呈现如实施例1中所述制备的柳兰溶液(也称为Canadian Willowherb^TM(CW))对于DPPH清除活性的作用。

具体实施方式

去头屑组合物

本发明的去头屑组合物包含柳兰提取物(有时也称为柳兰(Chamerionangustifolium)、柳兰(rosebay willowherb)、火草(主要在北美)或柳兰(Great Willow-herb)(加拿大的一些地区))。

它们可采用湿性或干性洗发剂、保留制剂(例如，喷雾剂、乳膏剂等)、发膜、洗剂等形式。

去头屑组合物的组分

本发明的去头屑组合物的某些实施方案可还包括已知用于头发护理的一种或多种任选的组分，其条件是所述任选组分可与本文所述的组合物在化学上和物理上相容，或者不会以其它方式不当地损害产品稳定性、美观性或性能。此类任选组分的单独的浓度可能通常在约0.001％至约10％w/w组合物的范围内。

在一些实施方案中，本发明的组合物包含足以清除自由基的浓度的柳兰提取物。在一些实施方案中，本发明的组合物包含足以抑制马拉色真菌(例如，糠秕马拉色菌、球形马拉色菌、限制马拉色菌或其任何组合)的生长的浓度的柳兰提取物。在一些实施方案中，本发明的组合物包含至少0.23％、0.25％或0.46％(w/v)的干重柳兰提取物(干提取物)。在一些实施方案中，本发明的组合物包含至少0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％、0.5％、0.55％或0.6％(w/v)的干重柳兰提取物(干提取物)。

在一些实施方案中，本发明的组合物可包含生理学上(或药学上)可接受的载体。

在一些实施方案中，本发明的组合物可包含乳化油。

用于组合物中的任选组分的非限制性实例包括分散粒子、阳离子聚合物、其它调理剂(烃油、脂肪酸酯、其它硅酮)、悬浮剂、粘度调节剂、染料、非挥发性溶剂或稀释剂(水溶性和不溶性)、珠光助剂、泡沫促进剂、其它表面活性剂或非离子性助表面活性剂、灭虱剂、pH调节剂、香料、防腐剂(焦亚硫酸钠、苯氧基乙醇)、螯合剂、蛋白质、皮肤活性剂、防晒剂、UV吸收剂和维生素。

在特定实施方案中，它们可包含可用于减少或预防头皮病状或病症或其至少一种症状的至少一种其它药剂。在更特定实施方案中，可用于治疗或预防头皮病状或病症或其至少一种症状的所述至少一种其它药剂可为以下中的至少一种：去头屑剂、抗皮脂剂、抗刺激剂；抗氧化剂、抗红斑剂、抗真菌剂、抗炎剂和抗脂肪酶剂等。

去头屑剂：其它去头屑剂的合适的非限制性实例包括：抗真菌剂如硫化硒、唑类(例如，酮康唑)、颗粒状硫、环吡酮、吡啶硫酮盐；角质分离剂如水杨酸；和前述成分中的至少两种的混合物。

抗刺激剂：抗刺激剂的合适的非限制性实例包括：如Steck等的US 6,528,490中所述的月见草鞣质A和/或B。

其它抗炎剂：抗炎剂的合适的非限制性实例包括：如Steck等的US 6,528,490中所述的月见草鞣质A和/或B。

其它抗氧化剂：抗刺激剂的合适的非限制性实例包括：如Steck等的US 6,528,490中所述的月见草鞣质A和/或B。

提取物

根据本发明的一个实施方案，提供包含来自柳兰的提取物的去头屑组合物和使用柳兰的方法。

提取物的制备

根据本发明的某些实施方案，植物和/或植物部分(例如，花、叶和/或茎)可以分离和研磨(例如，使用电掺混机或研钵和研杵进行粗磨)和/或干燥，然后被粉末化/粉碎。可使用本领域中已知用于研磨的其它方法。植物材料然后可进行溶剂提取过程。

根据本发明的一个实施方案，柳兰材料(例如，新鲜或干燥的，粉碎或未粉碎)可进行例如煎煮、回流、浸液或使用超临界CO₂。

如本文所用，术语“煎煮”意在是指通过沸腾来提取从植物材料(例如，花、叶、茎、根、树皮、根茎等)溶解的化学物质的过程。煎煮涉及在溶剂(例如，水性溶剂、醇类溶剂、水醇溶剂、有机溶剂、其中至少两种的混合物等)中沸腾以从柳兰提取油、挥发性有机化合物和其它化学物质。

在本发明的一个实施方案中，可使用以下煎煮程序：可将柳兰材料(例如，干燥植物粉末)在溶剂(例如，水性溶剂、醇类溶剂、水醇溶剂、有机溶剂、其中至少两种的混合物等)中加热(例如，沸腾，或在约60℃至约100℃之间、或约70℃至约100℃之间、或约80℃至约100℃之间、或约85℃至约100℃之间、或约85℃至约95℃之间的温度下加热)持续足以提取有用的植物组分的时间(例如，约30分钟至约5小时)并且可以将所得溶液倾析和/或过滤。煎煮程序可以重复多次(例如，1、2、3、4、5次或更多次)并且可将连续提取的结果收集并组合。

根据本发明的另一个实施方案，可对柳兰材料(例如，新鲜或干燥的，研磨或未研磨)进行回流。如本文所用，术语“回流”意在是指从植物材料(例如，花、叶、茎、根、树皮、根茎等)提取化学物质的过程，其通过在溶剂(例如，水性溶剂、醇类溶剂、水醇溶剂、有机溶剂、其中至少两种的混合物等)中加热植物材料以产生蒸气，将所述蒸气冷凝并且使这种冷凝物返回产生其的植物与溶剂的混合物。回流是煎煮的变化形式。

在本发明的一个实施方案中，可使用以下回流程序：可使用柳兰材料(例如，新鲜或干燥的，研磨或未研磨)。如果使用研磨材料，则其可首先任选地用过滤器(例如，1至4mm网目)过滤。所述材料(过滤或未过滤)可用于提取。可以将植物材料与溶剂在容器中混合并且回流持续足以提取化学物质的时间(例如，约30分钟至约3小时)，即，可使所述混合物沸腾并且将蒸气捕捉在设置以使冷凝蒸馏物返回容器的冷凝器中。然后可将混合物过滤，回收滤液并且使植物残余物留在容器中。回流程序可重复多次(例如，1、2、3、4、5次或更多次)并且可将连续提取的所得提取物收集并组合。可以将提取物蒸发以除去大部分的醇(如果存在的话)(例如，利用旋转蒸发仪)。水相可以任选地用水稀释并且然后冷冻并冻干以获得粉末。

根据本发明的另一个实施方案，可对柳兰材料(例如，新鲜或干燥的，研磨或未研磨)进行浸液。如本文所用，术语“浸液”意在是指在(加热或未加热的)溶剂(例如，水性溶剂、醇类溶剂、水醇溶剂、有机溶剂、其中至少两种的混合物等)中提取从植物材料(例如，花、叶、茎、根、树皮、根茎等)溶解的化学物质的过程，其通过允许所述材料随时间保持悬浮在溶剂中(通常称为浸泡的过程)来实现(例如，至少30分钟、或至少1小时、或至少2小时、或至少3小时、或至少4小时、或至少5小时等)。

在本发明的一个实施方案中，可使用以下浸液程序：可将沸腾溶剂添加至柳兰材料(例如，新鲜或干燥的，研磨或未研磨)并且在允许混合物冷却的温度(例如，约10℃至40℃之间，优选地18℃至25℃之间)下混合，持续足以提取化学物质的时间(例如，约30分钟至约5小时)。所得浸液可被倾析和/或过滤。浸液程序可重复多次(例如，1、2、3、4、5次或更多次)并且可将连续提取的结果收集并组合。粗制醇提取物可在真空下浓缩并且随后冻干。可将粗制水提取物冻干。

可用于根据本发明的提取程序(例如，煎煮或浸液或回流或在煎煮或浸液或回流之前和/或之后)的溶剂包括水(例如，蒸馏水和脱矿化水)、水醇(即水和醇的混合物(例如，大于或约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％的水/醇)、有机溶剂、醇(例如，乙醇)，或这些溶剂中的至少两种的任何混合物。

在一个特定实施方案中，可在溶液的过滤和/或倾析后进行煎煮或浸液或回流以将液体与固体分离。也可以进行液体和/或固体部分的另一种处理。例如，可对液体部分进行处理以凝聚和/或沉淀粘液和天然树胶。此类处理包括使用醇(例如，乙醇)和活性碳和倾析和/或过滤和/或硅藻土以除去凝聚和/或沉淀的粘液和天然树胶。

本发明的水醇和醇类提取物可为乙醇或甲醇提取物、丙醇提取物、丁醇提取物、甘油提取物，或从C_1-10脂族醇获得的提取物。在另一个实施方案中，使用有机溶剂获得提取物，所述有机溶剂的实例包括酮(例如C_1-10酮)、烃(例如己烷)、有机酸、酯(例如乙酸乙酯)、醚(例如***)、烷基氯(例如二氯甲烷)等。前述溶剂中的任何两种或更多种(例如，3种溶剂、4种溶剂等)的混合物可在存在或不存在水(例如，甲醇和乙醇)的情况下使用。将第一种溶剂蒸发以产生第一提取物/残余物。

如本文所用，短语“水提取物”是指含有生物活性部分(即，减少或预防头皮屑的化合物)的柳兰材料而不存在其细胞残余物的水基制剂。

在一些实施方案中，本发明的柳兰溶液包含至少1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％或6％(w/w)的干重柳兰提取物(干提取物)。

非极性组分/杂质。然后可进行另外的提取/悬浮以除去第一提取物/残余物的非极性组分/杂质。利用第二溶剂(或溶剂混合物)对于用第一溶剂(或溶剂混合物)获得的第一提取物/残余物进行这次另外的提取。在一个实施方案中，将利用第一溶剂(或溶剂混合物)获得的第一提取物/残余物悬浮在乙醇中并且用在甲醇中不可溶的烷烃(例如，己烷、戊烷或石油醚)提取。所述非极性组分/杂质因此用烷烃(例如，己烷)相溶解，然后弃去。然后将乙醇相蒸发以产生第二提取物/残余物。

极性组分/杂质。在一个实施方案中，对利用第二溶剂(或溶剂混合物)获得的第二残余物/提取物进行第三悬浮/提取以除去第二提取物/残余物的极性组分/杂质。例如，可将第二提取物/残余物悬浮在***、丁醇或氯化溶剂如氯仿或氯甲烷中并用水提取。在一个实施方案中，将残余物悬浮在Et₂O中并用水提取。极性组分/杂质因此用水相溶解，然后弃去。然后将例如二***相蒸发以产生第三提取物/残余物。

在更特定实施方案中，提取物是呈液体形式或干燥形式的本发明植物的乙醇提取物、甲醇提取物、水醇(例如，水乙醇提取物)或水提取物。在实施方案中，提供通过本发明的每种提取物的色谱分离而获得的一种或多种级分。

在实施方案中，可对植物材料进行初步提取(即在第一次提取(例如，水、水醇或醇提取)之前)以除去不需要的化合物。例如，可使用己烷或另一种溶剂(例如，己烷、醚、戊烷或石油醚)以除去非极性化合物如蜡状化合物。然后可对清洁的植物材料进行第一次提取。

根据本发明的其它实施方案，作为溶剂提取过程的可选方案，也可以经由使用超临界CO₂来获得本发明的提取物。超临界提取物通常被称为超临界二氧化碳提取物或SCO₂，因为所述过程使用压缩的二氧化碳。二氧化碳存在于空气中并且是植物生命所必需的。当它被压缩时，其可以转化成液态。当压力增加时，温度升高。超临界点是气体变成液体时的精确温度和压力。对于二氧化碳，超临界点相对较低(31℃)。此时的压缩CO₂具有液体的密度，而具有气体的特性。气体样状态有助于植物化学物质或提取物的更快扩散(几乎比其它液体高两个数量级)，而液体样状态有助于植物化学物质或提取物的更好溶解性。一旦提取完成，释放压力，并且二氧化碳被无害地释放。通过将原料植物放置在提取器中来起始提取过程。将液体CO₂加热至其超临界状态(31℃)，然后泵入提取器中。然后将SCO₂与植物混合。将现在带有所需提取物的SCO₂转移至对压力和温度进行控制的分离槽。提取物在分离器中沉淀，并且CO₂经由冷凝器再循环至提取器中。

提取物可呈液体或干燥形式。

如用于本发明方法中的本发明的柳兰提取物不会造成皮肤不耐受。

本发明的柳兰提取物涵盖例如由Lucas Meyer Cosmetics、A&E Connock、Bio-Botanica、Cosmetic Developments、Crodarom、IES Labo和Unipex销售的那些。

使用本发明的去头屑组合物和提取物的方法

本发明的提取物、分子和组合物可用于减少(a)粘附型头皮屑；(b)非粘附型头皮屑；(c)头皮皮脂；(d)头皮再起油；(e)头皮刺激；(f)头皮发痒；(g)头皮红斑；(h)头皮发红；(i)头皮发炎；或(j)(a)至(i)中的至少两种。在一个特定实施方案中，它减少至少(a)或(b)。在另一个特定实施方案中，它减少至少(a)或(b)并且还减少(c)至(i)中的至少一种。在一个特定实施方案中，受试者具有敏感性皮肤。

如本文所用，术语“减少(reduce)”或“减少(reducing)”意在是指预先存在的头皮病状或病症的减少。它涵盖头皮皮肤病状或病症的完全或部分矫正/治疗(例如，严重程度或频率的降低)。如本文所用，在表达“预防头皮病状或病症”(例如，头皮屑、头皮再起油等)中的术语“预防”意在是指头皮病状或病症或其至少一种症状(例如，粘附型头皮屑、非粘附型头皮屑、头皮皮脂、头皮红斑、头皮刺激等)的起始延迟，或完全或部分预防(例如，严重程度或频率的降低)。如本文所用，“减少”对应于所治疗受试者中的至少一种症状相比于所述受试者在治疗之前的症状降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、150％、200％、250％或300％等。在头皮屑(粘附型或非粘附型)或刺激或红斑减少的情况下，减少也可能意味着评分降低(例如，如本文所述的评分单位降低0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5或5)。

如本文所用，“预防”可对应于在用本发明的组合物或提取物治疗(例如，用包含本发明的柳兰提取物的洗发剂洗头发)后的受试者中的头皮病状或病症或其至少一种症状的发生或复发的延迟相比于在不存在本发明活性成分的情况下洗头发(例如，中性洗发剂(即，不具有柳兰提取物))后的受试者中的头皮病状或病症或其至少一种症状的发生或复发的延迟长至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、150％、200％、250％或300％等(或1、2、3、4、5天等)。

“治疗有效量”是指在实现所需治疗结果如减少头皮病状或病症或其症状(例如，头皮屑)所需的剂量和时段下有效的量。柳兰的治疗有效量可根据诸如以下因素而改变：个体的疾病状态、年龄、性别和体重，和柳兰提取物在个体中引起所需反应的能力。可调整给药方案以提供最佳治疗反应。治疗有效量也是使治疗有益作用超过柳兰提取物的任何毒性或有害作用的量。

“预防有效量”是指在实现所需预防结果如预防头皮病状或病症或其症状(例如，头皮屑、再起油等)所需的剂量和时段下有效的量。可以如上文关于治疗有效量所述来测定预防有效量。

在特定实施方案中，柳兰提取物的治疗或预防有效量的优选范围可为以组合物的重量计约0.1％至约10％，在一个特定实施方案中，其可为以组合物的重量计约1％至约7％之间，或以组合物的重量计约1％至约5％之间，或以组合物的重量计约1％至约4％之间，或以组合物的重量计约1％至约3％之间，或以组合物的重量计约1％至约2％之间。一种美容性、预防性或治疗性处理的方法是例如以洗发剂形式或以保留组合物形式向头皮局部应用柳兰提取物。剂量值可根据有待减轻的病状的严重程度而改变。此外应理解，对于任何特定受试者，可根据个体需要和应用组合物或监督组合物施用的人员的判断而随时间调整具体给药方案，并且本文所述的剂量范围仅为示例性的而不旨在限制本发明方法的范围或实施。

根据本发明的另一个方面，包含柳兰提取物的本发明的治疗性组合物可提供于具有标签的容器中，所述标签提供关于使用制剂来例如减少头皮屑、头皮皮脂溢、头皮刺激、头皮红斑、头皮发红或头皮发痒的说明书。所述标签还可公开，组合物包含可用于减少至少一种前述症状或病状的至少一种其它活性成分(例如，去头屑剂(例如，水杨酸、抗刺激剂、抗炎剂或抗氧化剂(例如月见草鞣质))等)。

如本文所用，“药学上可接受的载体”或“生理学上可接受的载体”或“赋形剂”包括在生理学上相容并且不会显著不利地影响柳兰的药物性质(例如毒性和效力)、例如在化妆品和制药领域中常规使用的任何和所有的乳膏剂、凝胶剂、溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。在一个实施方案中，载体适合局部施用。在一些实施方案中，局部施用包括向头皮施用。在一些条件下，柳兰提取物中的活性分子可经历在酸或碱中水解，以使得药学上或生理学上可接受的载体或赋形剂可包括pH缓冲剂以维持药物活性的可接受pH(关于pH对鞣花单宁的作用的讨论，参见Daniel等,1991,J.Natural Products 54(4):946)。

本发明的提取物以及头发和头皮组合物通常每天、每两天、每三天、每四天、每5天应用在受试者的头皮上，或频率较低，或按需要经常应用。它们也通常应用至少1周(或2、3、4、5、6周等)的时期。它们也可以应用至少7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、24、25、26、27、28、29、30天等。它们也可以应用至少两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次、十二次、十三次、十四次、十五次、十六次、十七次、十八次、十九次、二十次等。当至少一种头皮病状或病症或其症状(例如，头皮屑)变得可检测时，可应用治疗。

通过以下非限制性实施例更详细地说明本发明。

实施例1：

柳兰提取物

采集柳兰植物，并且将其花、叶和茎均质化并且在去离子水(通过反渗透制备)中在约85℃至95℃的温度下以8:1(w/w)的水:植物比率提取约3个小时。然后通过倾析使溶液澄清：在沉降槽中将固体与液体分离，并且然后用乙醇和活性碳处理液体以凝聚和沉淀粘液和天然树胶。然后使用压滤机过滤液体以除去凝聚/聚集在碳上的固体。在过滤困难的情况下，将硅藻土任选地添加在压滤机上以促进过滤。否则，在保持板上使用滤纸并且调适过滤器孔径以除去离心样品上的可见沉淀物。然后向滤液添加防腐剂(即焦亚硫酸钠(0.10-0.15％)和苯氧基乙醇(0.60-0.75％))并且在进行HEPA空气过滤的控制室中在0.5μm和0.2μm膜滤器上再次过滤溶液。获得以下溶液。

实施例2:

包含柳兰提取物的组合物

下表提供在下文实施例中所述的临床试验中使用的“活性”(A、B和C相)和“中性”(A和B相)洗发剂中使用的成分的列表和浓度。

如下制备含有A和B相的中性洗发剂：通过将水与Dermofeel^TMPA-3混合并且将混合物加热至约70-75℃来制备A相。向混合物中添加Ecogel^TM并且在搅拌下混合20分钟或直至所有固体溶解。通过将所有成分(Dermosoft^TMG10LW、Dermosoft^TMGMCY、Tegobetain F50、Texapon^TMN70、氯化钠)混合以获得均质相来制备B相。然后将B相的均质相添加至A相，并且将组合混合约5分钟，然后利用Ultra-Turrax^TM分散仪器在3000rpm下均质化。然后将混合物冷却直至它达到小于约40℃。

如上文关于中性洗发剂所述来制备含有A、B和C相的活性洗发剂，例外之处在于在最终冷却步骤后添加C相(即，如实施例1中所述制备的柳兰溶液)并且将组合混合约5分钟。如果需要的话调整pH以达到约5.0至5.4之间。在一些实施方案中，活性洗发剂的pH可为4.3至5.5之间。在一些实施方案中，活性洗发剂的pH为约5.1。

将中性和活性洗发剂储存在室温下。

实施例3：

马拉色菌物种生长抑制

通过测量使微生物菌株无可见生长的分子的最低浓度(MIC)来测定如实施例1中所述制备的溶液对3种不同的马拉色菌物种的有效性。所用的马拉色菌物种是糠秕马拉色菌(菌株1634.86，Pasteur Institute)、球形马拉色菌(菌株IP 2387.96，PasteurInstitute)和限制马拉色菌(菌株7877，Centralbureau voor Schimmerlcultures)。结果以w/v浓度形式呈现，即，0.04％为0.4g/L；0.078％为0.78g/L，0.156％为1.56g/L并且0.25％为2.5g(干重)/L。

实施例4：

柳兰提取物对DPPH清除活性的作用

将DPPH(2,2-二苯基-1-苦基苯肼)、Trolox^TM(参考)和抗坏血酸(阳性对照，未示出)分别以5×10^-4M、10g/L和10^-3M溶解在醇中。将如实施例1中所制备的柳兰提取物溶液直接稀释在由醇、Tris-HCl缓冲液(0.1N，pH 5.5)和DPPH溶液组成的反应介质中。DPPH的最终浓度为10^-4M。将混合物震荡并且在室温下在黑暗中静置30分钟。然后通过分光光度计(Berthold Mitras LB 240)在T＝30分钟、2小时和24小时下测量DPPH在540nm下的吸光度。根据空白与柳兰提取物溶液在540nm下检测的DPPH的吸光度之间的差异来评估DPPH自由基清除活性。

图7呈现结果，其示出如在实施例1中所述制备的柳兰溶液的稀释液至少在浓度0.1％(v/v)和0.05％(v/v)下强烈地降低所有类型的自由基。

实施例5：

用于临床试验的材料和方法

根据Helsinki Declaration(1964)和其连续更新进行本文实施例6至13中所述的研究。研究使用的***为获得认证的ISO 9001:2008。这是一种开放的个体内研究并且每个受试者是其自身对照。

受试者：纳入标准：使用24名年龄为20至61岁之间(平均年龄为30±2岁)的具有头皮屑和油性头发的男性和女性受试者。他们是提供其知情同意书并且意识到对照的必要性和持续时间以使得可预期由临床试验中心建立的方案的完美支持的健康受试者。所述受试者在测量之前至少72小时已经洗过头发。

非纳入标准是如下受试者：其头发长度小于2cm；头顶脱发，具有影响头皮屑评分的卷发；其在先前六周内已经起始、停止或改变激素治疗(包括口服避孕药)；呈现皮肤过敏的前因；其在研究开始之前的最后两周内已经使用用于头皮的去头屑、防脱发或皮质类固醇治疗；其在D-15之前最后一周内已经使用用于头皮的产品(染色、漂白、烫发和拉直等)；定期进行水上运动和/或定期进行桑拿浴；其具免疫抑制性；其在研究前已经进行口腔手术；其在研究前数周内使用容易干扰产品的皮肤耐受性评估的局部或全身治疗；其在研究前一个月内被过度阳光暴晒；其在研究区域上具有皮肤病变；其在研究前一个月内已服用含有锂、皮质激素类、抗组胺剂、抗真菌剂、抗生素、非类固醇抗炎剂的药物或免疫抑制药物；其在研究前6个月时期内已服用视黄酸；其在研究期间参加另一项临床试验；其被认为可能对方案不顺应。

表I：受试者的人口统计信息

图注：M＝男性；F＝女性；N＝正常；D＝干性；G＝油性。

*I、II和III分别是I、II和III型皮肤。

Fitzpatrick分类(Thomas B.Fitzpatrick,1975)根据个体皮肤对阳光暴晒的反应对个体进行分组。光类型I：皮肤非常白皙，雀斑，金发或红色头发。对阳光暴晒的反应：从未晒黑，总是灼伤。光类型II：皮肤白皙，金发或浅褐色头发，当暴露于阳光时出现雀斑，浅色眼睛。对阳光暴晒的反应：晒黑有困难，并且通常灼伤。光类型III：皮肤白皙，金发或浅褐色头发。对阳光暴晒的反应：有时灼伤，逐渐晒黑。光类型IV：橄榄色皮肤，浅或深褐色头发；褐色眼睛。对阳光暴晒的反应：很少灼伤，容易晒黑。光类型V：褐色、深褐色皮肤，褐色眼睛。对阳光暴晒的反应：极少灼伤，非常容易晒黑。光类型VI：极深褐色皮肤，褐色眼睛。对阳光暴晒的反应：从未灼伤，非常容易晒黑。

受试者不允许使用除了关于研究给出的头发或头皮产品(包括染色、漂白、烫发和拉直等)之外的那些，在研究期间保持头发长度>2cm，在研究随访时不带着湿头发来并且不会定期进行水上运动和/或定期进行桑拿浴。

在D-15(±2天)：进入实验室的受试者自前一天晚上以来没有在脸上应用任何产品(早上洗漱除外)并且没有佩戴隐形眼镜。他们阅读了信息表(关于产品使用和与研究相关的限制的说明)，在上面签名并注明日期，知情同意书一式两份。进行知情同意讨论的人也在这些文件上签名并注明日期。在皮肤学对照下进行纳入和非纳入标准的核查：评估头皮的初始状态的临床检查。也对受试者询问他们平常的不适感觉。将如实施例2中所述制备的中性洗发剂分发给受试者，以供其每周使用三次，持续两周。受试者接受工作日志来写下他们可能的不耐受感觉或其它。

在D0：受试者返回实验室而自随访前不到72小时以来没有在头发和头皮上应用任何产品。皮肤科医生进行临床检查以评估头皮的初始状态。技术人员对头皮屑、红斑和刺激进行评分。在发线上限定一个使用Sebumeter^TM进行皮脂率测量的区域。在先前限定的区域上使用Sebumeter^TM测量皮脂率。头发分缝区域的宏观照片(仅10名受试者)。Visia照片(10名受试者)。由负责这项研究的技术人员用如实施例2中所述的活性洗发剂洗头发。受试者接受新的工作日志来写下他们可能的不耐受感觉或其它。

在D3：受试者返回实验室而自上一次随访以来没有在头发和头皮上应用任何产品。他们带回了他们的工作日志以检查顺应性。皮肤科医生进行新的临床检查以评估头皮的状态。技术人员对新的头皮屑、红斑和刺激进行评分。头发分缝区域的新的宏观照片(10名受试者)。新的Visia照片(10名受试者)。将如实施例2中所述制备的活性洗发剂分发给受试者，以供其每周使用三次，持续28天。

在D9(在第三次用活性洗发剂产品洗发后的第3天)：受试者返回实验室而自随访之前不到72小时以来没有在头发和头皮上应用任何产品。他们带回了他们的活性洗发剂产品和工作日志以检查顺应性。皮肤科医生进行新的临床检查以评估头皮的状态。技术人员对新的头皮屑、红斑和刺激进行评分。

图1示意性呈现在如实施例2中所述制备的活性洗发剂的情形下测试柳兰提取物的去头屑活性所遵循的临床方案的时间线。下文更详细地描述时间线。

在D15(在第五次用活性洗发剂产品洗发后的第3天)：受试者返回实验室而自随访之前不到72小时以来没有在头发和头皮上应用任何产品。他们带回了他们的活性洗发剂产品和工作日志以检查顺应性。皮肤科医生进行新的临床检查以评估头皮的状态。技术人员对新的头皮屑、红斑和刺激进行评分。在先前限定的区域上使用

进行新的皮脂率测量。

在D30(在第十次用活性洗发剂洗发后的第3天)：受试者返回实验室而自随访之前不到72小时以来没有在头发和头皮上应用任何产品。他们带回了他们的活性洗发剂产品和工作日志以检查顺应性。皮肤科医生进行新的临床检查以评估头皮的最终状态。技术人员对新的头皮屑、红斑和刺激进行评分。在先前限定的区域上使用

测量皮脂率。头发分缝区域的新的宏观照片(10名受试者)。新的Visia照片(10名受试者)。受试者填写主观评价问卷。

试验期：研究起始于2013年4月4日并且结束于2013年6月5日。

头皮屑、红斑和刺激的临床评分：对分成四部分的头部进行临床评价。所研究的每个标准(非粘附和粘附型头皮屑、红斑、刺激)的评分是四部分评分的平均值(2位小数)。在洗发剂之后三天，技术人员在医学对照下使用0至5的评分来评价非粘附型头皮屑、粘附型头皮屑、红斑和刺激。

表II：头皮屑、红斑和刺激的评分的性质

临床“总头皮屑评分”是非粘附和粘附型头皮屑的总和。

临床“总红斑评分”是红斑和刺激的总和。

皮脂调节作用：在D0、D15和D30随访时利用COURAGE和KHAZAKA SM 810PCSebumeter^TM定量评价分泌至头皮皮肤表面的皮脂量。

Sebumeter^TM是基于光度测定法。将当与吸收的脂质接触时变得透明的合成条带应用至测量区，持续精确30秒。其透明度随来自其所接触的水脂膜的皮脂量成比例地增加。

使用反射测定记录来定量透射光的增加并且测定由表面单位分泌的脂质的总质量(μg/cm²)。

皮肤耐受性：在产品使用之前和之后，皮肤科医生检查受试者头皮以评估以下参数中的每一个：具有从没有至重度的评分(没有、非常轻微、轻微、中度和重度)的红斑、干燥、脱屑、皮脂溢、头皮屑等，并且也对受试者进行询问以在没有至重度之间评分，其在D0的感觉：发痒、刺痛、温热或烧灼感等。

在D30，通过由皮肤科医生进行的临床检查来评估产品的整体皮肤耐受性。该评价考虑到由受试者报道的相关体征(功能和身体体征＝T1)以及在检查期间指出的那些(临床体征＝T2)。使用这些体征的对抗来推断所研究产品的最终耐受性。所研究产品的整体皮肤耐受性被定义为最不利的结果(T1或T2)。体征的相关性定义为：1)持续超过5分钟；2)可能或确定归责于产品(相对于空或可疑的可归责性0；和3)在超过或等于研究长度的四分之一的时期内。

宏观照片：在D0、D3和D30时和在复发的情况下，拍摄一个所选区域的宏观照片。所用的数码相机是尼康D90型相机。在标准化、间接光中拍摄照片。将相机的光圈、速度和距离进行标准化。由于在不同获取时间的图像的同时可视化，重新定位的控制将在数据处理屏上直接进行。

所用的装置是来自CANFIELD^TM成像***的VISIA^TM。VISIA允许以多种照明模式和非常迅速的图像捕捉来拍摄照片。在每个获取时间使用图像的重叠可视化在数据处理屏上直接进行重新定位的控制。在多光谱成像和分析(白光、UV或者平行或交叉的偏振光)下拍摄的一系列照片允许捕捉视觉信息。为了使头皮屑可视化，使用UV光。

主观评价：受试者在D30时填写由临床试验中心准备并提交给赞助人的主观评价问卷来主观评价所研究产品的性质、功效、耐受性和其将来使用。

统计学方法：

统计学软件：

Excel 2010和SAS^TM9.2。

A)对于每个以下评估标准：粘附型头皮屑评分、非粘附型头皮屑评分；和皮脂测量，应用以下描述性统计学和比较性统计学。

在每个时间点计算定量变量(数值数目、缺失值数目、平均值、标准偏差、中位值、最小值和最大值)的描述性统计学。绘制随时间的平均演变(平均值的±2个标准误差)。

比较性分析：将用于重复测量(时间作为固定因子并且受试者作为随机因子)的混合ANOVA模型(proc GLM)与原始数据拟合。根据这个模型，使用Dunnett检验进行每个值(Di)与基线值(D0)之间的比较。使用Shapiro-Wilk检验和图示分析残差分布。

B)对于每个以下评估标准：刺激评分；和红斑评分，应用以下描述性统计学和比较性统计学。

描述性统计学：计算每个时间点的平均评分的分布(以频率和百分比计)。

比较性分析：进行分类数据(proc GENMOD)与时间因子的线性模型。根据这个模型，建立对比以比较每个值(Di)与基线值(D0)。

对于A)和B)分析，当可用时，在双尾方法中，I型误差概率设置为a＝0.05。

实施例6：

柳兰提取物对非粘附型头皮屑的作用

在最后一次洗发剂后的三天，技术人员在医学对照下根据表II使用0至5的评分来评价非粘附型头皮屑。在D0、D3、D9、D15和D30天评价如实施例2中所述制备的活性洗发剂的去非粘附型头皮屑作用。

结果呈现于表III和表IV中以及图2中。

表III：每个时间点(Di)的非粘附型头皮屑评分的描述性统计学。

表IV：每个时间点(Di-D0)的非粘附型头皮屑评分相比于基线的变化的汇总

比较(Di相对于D0)	估算值	SEM	原始p	调节的p<sup>(1)</sup>
					3相对于0	-0.13	0.11	0.2769	0.6457
9相对于0	-0.79	0.11	<.0001	<.0001
					15相对于0	-1.04	0.11	<.0001	<.0001
30相对于0	-1.41	0.11	<.0001	<.0001

⁽¹⁾利用Dunnett检验调节重复测量的ANOVA模型的对比

数据显示在D9(p<0.0001)、D15(p<0.0001)和D30(p<0.0001)时的非粘附型头皮屑评分的显著降低。

实施例7：

柳兰提取物对粘附型头皮屑的作用

在最后一次洗发剂后的三天，技术人员在医学对照下根据表II使用0至5的评分来评价粘附型头皮屑。在D0、D3、D9、D15和D30天时评价如实施例2中所述制备的活性洗发剂的去粘附型头皮屑作用。

结果呈现于表V和表VI中以及图3和图4中。

表V：每个时间点(Di)的粘附型头皮屑评分的描述性统计学。

表VI：每个时间点(Di-D0)的粘附型头皮屑评分相比于基线的变化的汇总。

比较(Di相对于D0)	估算值	SEM	原始p	调节的p<sup>(1)</sup>
					3相对于0	-0.42	0.11	0.0002	0.0008
9相对于0	-0.73	0.11	<.0001	<.0001
					15相对于0	-0.98	0.11	<.0001	<.0001
30相对于0	-1.51	0.11	<.0001	<.0001

⁽¹⁾利用Dunnett检验调节重复测量的ANOVA模型的对比

数据显示在D3(p＝0.0008)、D9(p<0.0001)、D15(p<0.0001)和D30(p<0.0001)时的粘附型评分相比于基线(D0)的显著降低。

在D0、D3和D30时拍摄的3名受试者的头皮的代表性宏观照片示于图4中。它们显示粘附型头皮屑随时间减少。

实施例8：

柳兰提取物对皮脂分泌的作用

在D0、D15和D30随访时利用COURAGE和KHAZAKA SM 810Sebumeter^TM测量在皮肤表面上分泌的皮脂量。

这种光度测定方法使用应用于测量的合成条带，其在与吸收的脂质接触时变得透明。其透明度与皮脂量成比例地增加。

通过反射测定法计算由表面单位分泌的脂质的总质量(μg/cm²)。

表VII：每个时间点(Di)的皮脂测量的统计学。

呈现于表III中的结果也示于图5中。

表VIII：每个时间点(ti-t0)的皮脂测量相比于基线的变化的汇总。

比较	估算值	SEM	原始p	调节的p<sup>(1)</sup>
					D15相对于D0	2.85	0.27	<.0001	<.0001
D30相对于D0	4.06	0.30	<.0001	<.0001

⁽¹⁾利用Dunnett检验调节重复测量的ANOVA模型的对比

数据显示在D15(p<0.0001)和D30(p<0.0001)的皮脂值相比于基线(D0)显著降低。

实施例9：

柳兰提取物对预先存在的刺激的作用

表IX：每个时间点(Di)的刺激评分的描述性统计学。

如根据表IX中的数据可见，仅3名受试者(12.5％)在基线(D0)时具有刺激体征(0.5至2之间的评分)。从D3至D30，未观察到刺激体征，例外之处在于在D9时一名受试者具有0.5的评分。

表X：刺激的平均评分随时间的分布(以频率和百分比计)。

°：来自GEE模型的p值

相比于基线(D0)，在D3(p<0.0001)、D15(p<0.0001)和D30(p<0.0001)时观察到刺激的显著降低。因为仅一些受试者具有刺激，所以进行分类数据分析并且示于表X中。

实施例10：

柳兰提取物对预先存在的红斑的作用

表XI：每个时间点(Di)的红斑评分的描述性统计学。

表XII：红斑的平均评分(±2SEM)随时间的分布(以频率和百分比计)。

°：来自GEE模型的p值

红斑评分数据显示具有红斑体征的受试者的比例在基线(D0)和D3时为25％(评分从0.5到2)。在D9和D15时，这个比例较低，16.7％的受试者具有红斑。

此外，所述数据揭示在D30时未观察到红斑体征，相比于基线(D0)，这种降低具有显著性，其中p<0.0001。因为仅一些受试者具有红斑，所以进行分类数据分析并且示于表XII中。

实施例11：

柳兰提取物对诱导的红斑(刺激和发红)的作用

进行其它实验来测定柳兰提取物对诱导的红斑(发红和刺激)的作用。

使用具有I-III型皮肤的八名志愿者(女性，18至60岁)。将乳酸(15％)应用在其头皮上持续4小时以诱导发红和刺激。

然后应用如实施例1中所述制备的柳兰溶液的3％(v/v)稀释液，或1％氢化可的松洗剂，并且在30分钟、1小时和24小时后测量红斑(使用色度测定法测定a*值)。

图6中的结果显示，如实施例1中所述制备的溶液的3％(v/v)稀释液在30分钟后使红斑减少24％，在1小时后减少23％，并且在24小时后减少27％。

实施例12：

柳兰提取物的皮肤耐受性

皮肤科医生在30天内每周三次在头发和头皮上应用之前和之后通过临床检查来评价如实施例2中所述制备的活性洗发剂的皮肤耐受性。在D0、D3、D9、D15和D30天测定皮肤耐受性。

在使用3天(D3)后，两名受试者报道在应用后不久在顶骨和颞区上发痒并且四名受试者报道头皮屑或红斑，但皮肤科医生判断这些体征不相关。

在使用9天(D9)后，三名受试者报道头皮屑，但皮肤科医生判断这些体征不相关。在使用15天后，一名受试者报道头皮屑和红斑，但皮肤科医生判断这些体征不相关。在使用30天后，没有受试者报道任何身体、功能或临床体征。活性洗发剂非常良好耐受。

实施例13：

主观评价问卷

由每名受试者(n＝24)进行主观评价以评估如实施例2中所述制备的活性洗发剂在30天内每周三次在头发和头皮上应用之前和之后的作用。在D0和D30天询问受试者。在D30后，受试者回答问卷以报道例如：(A)其在用活性洗发剂处理之前(“在处理前”)关于发痒、头皮屑和油性头发的头皮状态；(B)在用活性洗发剂进行30天处理期间(即，处理的早期、中期和/或末期)何时首先观察到头发方面关于头皮状态改善的改善和改进，头发方面相比于平时改变，他们是否注意到对发痒、头皮屑和头发再起油的作用，活性洗发剂是否具有柔顺作用，活性洗发剂是否对头发再起油的水平具有作用，和他们对于活性洗发剂作用的总体满意度；和(C)他们是否将在临床试验后自愿地继续使用活性洗发剂(“将来使用”)。来自问卷的结果示于表XIII中。

表XIII：主观评价的综合(n＝24，1名受试者代表4.2％)

一般来说，来自主观评价问卷的结果显示，受试者了解活性洗发剂的功效(改善头皮状态，减少头皮屑和头发再起油)。

权利要求书的范围不应受到实施例中所述的优选实施方案的限制，但是应给出与整个说明书一致的最宽泛理解。

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Claims (17)

1.包含浓度足以抑制马拉色(Malassezia)真菌生长的柳兰(Epilobiumangustifolium)水提取物的去头屑组合物在制造用于减少或预防头皮屑的药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述马拉色真菌是：糠秕马拉色菌(Malasseziafurfur)、球形马拉色菌(Malassezia globosa)、限制马拉色菌(Malassezia restricta)或其任何组合。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其中组合物包含至少0.23％(w/v)的干重柳兰提取物。

4.根据权利要求1或2所述的用途，其中组合物包含至少0.25％(w/v)的干重柳兰提取物。

5.根据权利要求1或2所述的用途，其中组合物包含至少0.46％(w/v)的干重柳兰提取物。

6.根据权利要求1或2所述的用途，其中组合物还包含生理学上可接受的载体。

7.根据权利要求1或2所述的用途，其中组合物还包含乳化油。

8.根据权利要求1或2所述的用途，其中组合物还包含防腐剂。

9.根据权利要求8所述的用途，其中所述防腐剂是焦亚硫酸钠和/或苯氧基乙醇。

10.根据权利要求1或2所述的用途，其中组合物被配制成洗发剂、喷雾剂、乳膏剂、洗剂、发膜或凝胶剂。

11.根据权利要求1或2所述的用途，其中组合物还包含可用于治疗或预防头皮病状或病症或其至少一种症状的至少一种其它药剂。

12.根据权利要求11所述的用途，其中可用于治疗或预防头皮病状或病症或其至少一种症状的所述至少一种其它药剂是：去头屑剂、抗皮脂剂、抗刺激剂、抗氧化剂、抗红斑剂、抗真菌剂、抗炎剂或抗脂肪酶剂。

13.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述头皮屑是：粘附型头皮屑；非粘附型头皮屑；或其组合。

14.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述组合物用于减少或预防以下中的至少一种：头发再起油；头皮刺激；头皮红斑；和头皮发痒。

15.一种试剂盒，其包含：

(A)根据权利要求1至12中任一项所定义的组合物；和

(B)以下中的至少一种：

(i)使用(A)来减少或预防头皮屑的说明书；和

(ii)可用于治疗或预防头皮病状或病症或其至少一种症状的至少一种其它药剂。

16.根据权利要求15所述的试剂盒，其中所述头皮屑是粘附型头皮屑、非粘附型头皮屑、或其组合。

17.根据权利要求15或16所述的试剂盒，其中可用于治疗或预防头皮病状或病症或其至少一种症状的所述至少一种其它药剂是：去头屑剂、抗刺激剂、抗氧化剂、抗皮脂剂、抗真菌剂、抗炎剂和抗脂肪酶剂。

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