CN111944718A - 一种农用微生物综合制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种农用微生物综合制剂，属于微生物制剂技术领域，由以下重量比的原料制备而成：A制剂1‑97％、B制剂1‑97％、C1制剂1‑97％和C2制剂1‑97％；该制剂以低于或等同于化肥农药的投入，取得农产品品质与产量都高于化肥农药种植的效果，实现无残留，无抗性，无污染，为取代化肥农药提供了实际应用的可能。

Description

一种农用微生物综合制剂
技术领域
本发明涉及微生物制剂技术领域，具体为一种农用微生物综合制剂。
背景技术
近些年，化肥、农药(包括化学除草剂、化学生长激素，下同)，对生态环境的破坏愈来愈严重，其污染物和农产品中的残留物对人类健康造成的巨大危害也愈来愈为人们所认同。然而化肥、农药目前仍是农业增产增收的主要生产资料，它给人类带来巨大效益的同时，也给人类的环境和健康带来巨大的危胁。用什么办法什么技术和产品能够取代化肥、农药，即，以同等投入获得同等产量，又不对生态环境造成破坏，不影响人类的生存与健康？这是摆在人们面前迫切需要解决的重大课题，也是对当代科技和人类文明进步的严重挑战。
有机肥(包括农家肥)可以替代化肥。人类数千年的农耕时代就没有化肥，但有机肥的用量和资金以及劳动力的投入量要数倍于化肥才能达到使用化肥的产量。人类已经不可能回到刀耕火种的蛮荒时代，不用化肥农药的传统农耕方式如今已经无法生存。
有机种植是不使用化肥化学农药的。但目前有机种植与化肥农药种植的投入不对等，有机种植投入高，产出低，无法满足广泛的需求，也无法取代化肥农药。
农作物和土壤对化肥的耐受性，使得化肥越施越多，肥效却越来越差。化肥残存于土壤造成耕地硬化板结，残存于农产品损害人类健康，流失于水系造成面源广泛污染。因此，在现有技术仍然无法取代化肥农药的情况下，提出测土配方施肥，科学施肥，以及化肥农药零增长等节省化肥农药的方法，是无耐之举，不能解决根本问题。
微生物肥料或生物有机肥料可以替代化肥。国家给予免税等优惠政策鼓励发展多年，但目前还是作为化肥的一种辅助，多年来一直没能形成取代化肥的局面。当然，也是由于施用这种肥料价格较高，和有机种植同样，与化肥农药种植的投入不对等(投入高，产出低)，无法满足广泛的需求。
微生物农药和生物农药是可以替代化学农药的。但为什么至今仍然未能形成人们广泛使用并抛弃化学农药的局面？主要是价格贵，菌种或功能单一，不易保存，效果不稳定等因素造成。
病毒和害虫对化学农药的抗性也在不断增加，使农药用量和品种越用越多。化学农药对生物灭杀没有选择性，不能大面积实施喷洒，局部使用形成驱赶，杀灭不彻底。使用化学农药的同时，害虫天敌遭到灭杀，土壤有益微生物菌遭到灭活，农作物自然生长所需要的天然生态环境遭到破坏，化学农药包括化学除草剂、化学生长激素的大量残留，也严重威胁着人类健康。然而，目前仍然没有能够有效解决这些问题的方法。
发明内容
针对上述存在的技术不足，本发明的目的是提供一种农用微生物综合制剂，该制剂以低于或等同于化肥农药的投入，取得农产品品质与产量都高于化肥农药种植的效果，实现无残留，无抗性，无污染，为取代化肥农药提供了实际应用的可能。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
一种农用微生物综合制剂，其特征在于，由以下重量比的原料制备而成：
A制剂1-97％、B制剂1-97％、C1制剂1-97％和C2制剂1-97％；
所述A制剂包括根瘤菌、固氮螺菌、巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和吸附材料；
所述B制剂包括苏云金芽孢杆菌以色列亚种、哈茨木霉、细黄链霉菌、球孢白僵菌、金龟子绿僵菌、玫烟色棒束孢、淡紫色拟青霉、绿色木霉和吸附材料；
所述C1制剂包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、拟康宁木霉和吸附材料；
所述C2制剂包括保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、德氏乳杆菌和吸附材料。
优选地，所述根瘤菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜1.0％，磷酸氢二钾0.05％，碳酸钙0.3％，硫酸镁0.02％，酵母膏0.04％，钼酸钠0.0002％，无菌水补足100％；
所述固氮螺菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜1.0％，磷酸氢二钾0.01％，磷酸二氢钾0.04％，硫酸镁0.02％，氯化钠0.01，氯化钙0.002％，硫酸亚铁0.002％，钼酸钠0.0002％，无菌水补足100％；
所述巨大芽孢杆菌培养基配方由以下重量比的原料组成：玉米淀粉1.0％，糖蜜0.6％，牛肉膏1.5％，硫酸铵0.1％，磷酸氢二钾0.2％，碳酸钙0.1％，硫酸镁0.05％，硫酸锌0.02％，无菌水补足100％；
所述胶冻样芽孢杆菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜2％，豆粕粉0.5％，硫酸镁0.1％，磷酸氢二钾0.05％，碳酸钙0.1％，无菌水补足100％。
优选地，所述苏云金芽孢杆菌以色列亚种培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜2.0％，蛋白胨0.5％，酵母膏0.5％，磷酸氢二钾0.03％，磷酸氢二钠0.1％，硫酸镁0.1％，硫酸亚铁0.002％，氯化钙0.002％，无菌水补足100％；
所述哈茨木霉培养基配方由以下重量比的原料组成：20％马铃薯煮汁，磷酸氢二钾0.3％，糖密2.0％，硫酸镁0.15％，维生素0.1％，无菌水补足100％；
所述细黄链霉菌培养基配方由以下重量比的原料组成：可溶性淀粉2.0％，硝酸钾0.1％，磷酸氢二钾0.05％，硫酸镁0.1％，硫酸亚铁0.001％，氯化钠0.05％，无菌水补足100％；
所述球孢白僵菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜5.0％，磷酸氢二钾0.1％，1％玉米浸提液，无菌水补足100％；
所述金龟子绿僵菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜4.0％，蛋白胨1.0％，醇母膏1.0％，磷酸氢二钾0.15％，硫酸镁0.05％，硼酸钠0.03％，硫酸锰0.04％，钼酸钠0.05％，硫酸铜0.08％，硫酸锌0.4％，硫酸亚铁0.01％，维生素B1微量，无菌水补足100％；
所述玫烟色棒束孢培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜2.0％，磷酸氢二钾0.3％，硫酸镁0.15％，20％马铃薯提取液补足100％。
所述淡紫色拟青霉培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜1.5％，可溶性淀粉0.5-1.0％，硫酸铵0.5％，磷酸氢二钾0.1％，硫酸锌0.01％，碳酸钙0.025％，硫酸锰0.001％，无菌水补足100％；
所述绿色木霉培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜1.0％，玉米粉1.3％，大豆粉0.5％，磷酸氢二钾0.3％，硝酸铵0.2％，无菌水补足100％。
优选地，所述枯草芽孢杆菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜1.5％，磷酸氢二钾0.05％，酵母膏0.05％，牛肉膏0.02％，蛋白胨0.05％，0.025％，氯化钠0.02％，硫酸锰0.001％，无菌水补足100％；
所述地衣芽孢杆菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜1.5％，酵母膏1.0％，硫酸镁0.3％，牛肉膏0.1％，蛋白胨0.05％，碳酸钙0.025％，氯化钠0.02％，无菌水补足100％；
所述短小芽孢杆菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜0.5％，玉米粉0.5％，蛋白胨1.5％，豆饼粉0.5％，磷酸氢二钾0.75％，硫酸镁0.2％，无菌水补足100％；
所述拟康宁木霉培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜0.75％，麦麸3.0％，磷酸氢二钾0.1％，玉米粉3.0％，无菌水补足100％。
优选地，所述保加利亚乳杆菌培养基配方由以下重量克原料组成：蔗糖20g，蛋白胨35g，碳酸钙1.5g，酵母膏30g，磷酸氢二钾2g，硫酸镁1.5g，碳酸钙1g，硫酸锰0.02g，磷酸氢氨1.5g，无菌水补足1L；
所述嗜酸乳杆菌培养基配方由以下重量克的原料组成：蔗糖20g，蛋白胨20g，氯化钠1g，硫酸锰0.01g，硫酸镁0.02g，乙酸钠0.5g，无菌水补足1L；
所述植物乳杆菌培养基配方由以下重量克的原料组成：蔗糖20g，酵母膏25g，磷酸氢二钾2g，酪蛋白胨10g，牛肉膏10g，乙酸钠5g，柠檬酸二胺2g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，吐温80 1g，无菌水补足1L；
所述德氏乳杆菌培养基配方由以下重量克的原料组成：蔗糖20g，蛋白胨35g，碳酸钙1.5g，酵母膏30g，磷酸氢二钾2g，硫酸镁1.5g，碳酸钙1g，硫酸锰0.02g，磷酸氢氨1.5g，无菌水补足1L。
优选地，所述吸附材料由以下重量比的原料制备而成：煅烧蛭石粉50-97％、腐殖酸1-48％，草炭土1-48％和凹凸棒土1-48％。
本发明的有益效果在于：该制剂以低于或等同于化肥农药的投入，取得农产品品质与产量都高于化肥农药种植的效果，实现无残留，无抗性，无污染，为取代化肥农药提供了实际应用的可能。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种农用微生物综合制剂，由以下重量比的原料制备而成：
A制剂1-97％、B制剂1-97％、C1制剂1-97％和C2制剂1-97％；
A制剂包括根瘤菌、固氮螺菌、巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和吸附材料；
B制剂包括苏云金芽孢杆菌以色列亚种、哈茨木霉、细黄链霉菌、球孢白僵菌、金龟子绿僵菌、玫烟色棒束孢、淡紫色拟青霉、绿色木霉和吸附材料；
C1制剂包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、拟康宁木霉和吸附材料；
C2制剂包括保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、德氏乳杆菌和吸附材料。
本发明技术方案如下：
用4种促进植物增长的菌剂按比例组合制成A制剂，用防治植物病虫害的8种生防菌剂按比例组合制成B制剂，用4种好氧分解菌剂按比例组合制成C1制剂，用4种厌氧分解菌按比例组合制成C2制剂。然后，再将A+B+C1+C2按比例混合后制成本综合制剂。
本方案采用分别对好氧菌开口发酵、对厌氧菌密闭发酵的液体菌剂扩繁技术，使微生物菌剂的生产扩繁实现了低成本高效果；采用含多种有益元素的混合吸附剂，使菌剂吸附量增大活力持久且增加了中微量元素；采用好氧菌与厌氧菌混配的技术，为两类菌互补共生保持活力创造了条件；采用在使用前二次扩繁的方法，再次降低了成本且保证了菌剂功能的有效性；采用对本综合制剂中的三类制剂可根据实际调整使用配比的方法，更具实用性和针对性。
本综合制剂的重要特征是：促使植物增长和有机肥料充分利用；防治植物多种病害虫害，不产生抗性，不伤及害虫天敌，不伤害使用者健康；对残留于土壤及水质的污染物包括抗生素、芳香剂、化学农药、化学肥料、生长激素及重金属等残留，进行生物分解；使板结、硬化、酸化、盐渍化的土壤得到改良，恢复土壤团粒结构及微生态良性环境；以低于或等同于化肥农药的投入取代化肥农药，且农产品品质与产量高于化肥农药种植，无残留
A制剂的制备方法及步骤
A制剂由以下4种好氧菌剂组成：
1、根瘤菌，拉丁学名Rhizobium，细菌界，主要功能作用：与豆科植物共生固氮，把空气中天然存在的分子氮还原成氨态氮，为植物提供氮素营养。
2、固氮螺菌，细菌界，拉丁学名：Azospirillum，主要功能作用：促进豆科及非豆科作物联合固氮。
3、巨大芽孢杆菌、细菌界，拉丁学名：bacillus megaterium，主要功能作用：解磷，分解无机磷有机磷，降解有机磷类农药及黄曲霉毒素，提高土壤肥质。
4、胶冻样芽孢杆菌，细菌界，拉丁学名：Bacillus mucilaginosus，主要功能作用：解钾解磷固氮并释放土壤中被固化的钙镁硫等中微量元素，增强作物抗逆性，改善品质，提高产量。
第一步、先配制液体A菌剂
1、按配方和培养条件，分别接种4个菌株到三角杯中，上摇床进行种子培养。
2、按配方和培养条件，分别接种4个液体菌剂到发酵罐中，进行菌剂的一级扩大培养。
3、重复2进行菌剂的二级、三级扩大培养。得到经过三级培养的4种液体A菌剂。
液体好氧菌制剂的扩繁方法。
对制剂中的好氧菌，分别采用开口好氧发酵的液体菌剂扩繁方法，以优势菌群排斥吞噬杂菌。这种方法培养扩繁出的菌株活性高、耐受力强，且成本低廉。具体方法是：在罐中注入天然水(井水、河水、湖水)，通臭氧30分钟灭菌静放24小时后，注入培养基混匀，放入菌种，罐口不密闭，按要求条件搅拌扩繁。
液体A菌剂的培养基配方及培养条件
1、根瘤菌培养基配方：
糖蜜1.0％，磷酸氢二钾0.05％，碳酸钙0.3％，硫酸镁0.02％，酵母膏0.04％，钼酸钠0.0002％，无菌水补足100％。
发酵条件：接种量4％，初始ph值7.1-7.5，转数110-180r/min，温度28-32℃，开口通气培养发酵72-120h。
2、固氮螺菌培养基配方：
糖蜜1.0％，磷酸氢二钾0.01％，磷酸二氢钾0.04％，硫酸镁0.02％，氯化钠0.01，氯化钙0.002％，硫酸亚铁0.002％，钼酸钠。0.0002％，无菌水补足100％。
发酵条件：接种量4％，初始ph值7.2-7.4，转数110-180r/min，温度28-32℃，开口通气培养发酵72-120h。
3、巨大芽孢杆菌培养基配方：
玉米淀粉1.0％，糖蜜0.6％，牛肉膏1.5％，硫酸铵0.1％，磷酸氢二钾0.2％，碳酸钙0.1％，硫酸镁0.05％，硫酸锌0.02％，无菌水补足100％。
发酵条件：接种量4％，初始ph值7.1-7.5，转数110-220r/min，温度28-32℃，开口通气培养发酵48-72h。
4、胶冻样芽孢杆菌培养基配方：
糖蜜2％，豆粕粉0.5％，硫酸镁0.1％，磷酸氢二钾0.05％，碳酸钙0.1％，无菌水补足100％。
发酵条件：接种量4％，初始ph值7.1-7.5，转数110-180r/min，温度30-35℃，开口通气培养发酵33-72h。
第二步、配制固体A制剂
1、分别将4种液体A菌剂，按菌剂2份，吸附材料1份的比例，分别混配成4个不同菌种的A制剂。
2、按种植实际需要对4种A制剂进行配制。配制的比例为：根瘤菌制剂占1-97％，固氮螺菌制剂占1-97％，巨大芽孢杆菌制剂占1-97％，胶胨样芽孢杆菌制剂占1-97％。
B制剂的制备方法及步骤
B制剂由以下菌8种生防菌剂组成；
1、苏云金芽孢杆菌以色列亚种，拉丁学名Bacillus thuringiensis israelensisBti，细菌界，主要功能作用：是对人和环境友好的安全型细菌杀虫剂，对鳞翅目200多种害虫有毒杀作用，并可在害虫疫区广泛传播。
2、哈茨木霉，真菌界，拉丁学名：Trichoderma harzianun。主要功能作用：防治多种土传病害，包括白粉病，灰霉病，锈病，霜霉病，枯萎病，黄萎病，后斑病，炭疽病，根腐病等；改善土壤团粒结构，增强植物抗病能力，提高作物产量。
3、细黄链霉菌，细菌界，拉丁学名：Streptomyces microflavus，主要功能作用：转化土壤氮磷钾营养成分，提高土壤肥力，抑制病菌繁殖，防病保苗，促进作物生根发芽，增加产量。提高农产品品质。
4、球孢白僵菌，拉丁学名：Beauveria bassiana，真菌界，好氧菌，主要功能作用：广泛用于害虫防治的杀虫真菌，对鳞翅目，鞘翅目等15目，149科，521属，707种害虫具有侵染灭杀作用。
5、金龟子绿僵菌，拉丁学名Metarhizium anisopliae，真菌，好氧菌；，主要功能作用：广谱性杀虫真菌，侵染杀灭昆虫达两百种以上。
6、玫烟色棒束孢，拉丁学名Fumosorosea wize，昆虫病原真菌，好氧菌，主要功能作用：可侵染灭杀半翅目，鞘翅目，双翅目，同翅目等多种害虫。
7、淡紫色拟青霉，拉丁学名：Paecilmryces lilacinus samson。内寄生性真菌，好氧菌。主要功能作用：寄生杀灭各种线虫，刺激作物生长。
8、绿色木霉，真菌界，好氧菌。拉丁学名：Trichoderma Viride，主要功能作用：产酶，分解纤维，有效防治土传病害。
第一步、先配制液体B菌剂
1、按配方和培养条件，分别接种8个菌株到三角杯中，上摇床进行种子培养。
2、按配方和培养条，分别接种8个液体菌剂到发酵罐中，进行菌剂的一级扩大培养。
3、重复2进行菌剂的二级、三级扩大培养。分别得到经过三级培养的8种液体B菌剂。
液体B菌剂的培养基配方及培养条件
1、苏云金芽孢杆菌培养基配方：
糖蜜2.0％，蛋白胨0.5％，酵母膏0.5％，磷酸氢二钾0.03％，磷酸氢二钠0.1％，硫酸镁0.1％，硫酸亚铁0.002％，氯化钙0.002％，无菌水补足1L；
培养条件：初始pH值7.2，25-35℃，转数120-180r/min，不封口好氧震荡发酵60-80小时；
2、哈茨木霉培养基配方：
综合马铃薯培养基：
糖密2.0％，磷酸氢二钾0.3％，硫酸镁0.15％，维生素0.1％，20％马铃薯汁补足100％。
20％马铃薯汁制法：取去皮马铃薯200g，切小块，加水煮沸30min，无菌水补足1000ml。
发酵条件：初始Ph 7.2-7.4，28-35℃，转数120-180r/min，开口好氧发酵74-96h。
3、细黄链霉菌培养基配方：
可溶性淀粉2.0％，硝酸钾0.1％，磷酸氢二钾0.05％，硫酸镁0.1％，硫酸亚铁0.001％，氯化钠0.05％，无菌水补足100％；
培养条件：初始pH值7.2，25-35℃，转数120-140r/min，不封口好氧震荡培养48-72小时；
4、球孢白僵菌培养基配方：
糖蜜5.0％，磷酸氢二钾0.1％，1％玉米浸提液，无菌水补足100％；
培养条件：初始pH值7.0，遮光，25-37℃，120-140r/min，不封口好氧震荡发酵72-96小时；
5、金龟子绿僵菌培养基配方：
糖蜜4.0％，蛋白胨1.0％，酵母膏1.0％，磷酸氢二钾0.15％，硫酸镁0.05％，硼酸钠0.03％，硫酸锰0.04％，钼酸钠0.05％，硫酸铜0.08％，硫酸锌0.4％，硫酸亚铁0.01％，维生素B1微量，无菌水补足100％。
培养条件：30～37℃，初始ph6.5-7.2，转数120～140r/min通气震荡培养发酵72-96小时。
6、玫烟色棒束孢培养基配方：
糖蜜2.0％，磷酸氢二钾0.3％，硫酸镁0.15％，20％马铃薯提取液补足100％；
培养条件：初始pH值7.0，遮光，25-37℃，120-140r/min，不封口好氧发酵5-7天。
7、淡紫色拟青霉培养基配方：
糖蜜1.5％，可溶性淀粉0.5-1.0％，硫酸铵0.5％，磷酸氢二钾0.1％，硫酸锌0.01％，碳酸钙0.025％，硫酸锰0.001％，无菌水补足100％。
培养条件：28～30℃，初始ph6～7，120-180r/min，好氧震荡培养60-120h。
8、绿色木霉培养基配方：
糖蜜1.0％，玉米粉1.3％，大豆粉0.5％，磷酸氢二钾0.3％，硝酸铵0.2％，无菌水补足100％。
培养条件：28～30℃，初始ph6～7，120-180r/min，好氧震荡培养60-120h。
进一步的，1％玉米浸提液采用鲜玉米粒10g加水1L，煮沸30分钟，滤除渣，无菌水补足1L；20％马铃薯提取液采用去皮马铃薯200g，切小块，加水1L煮沸30分钟，滤除渣，无菌水补足1L。
第二步、配制固体B制剂
1、分别将8种液体B菌剂，按菌剂2份，吸附材料1份的比例，分别混配成8个不同菌种的B制剂。
2、对8种制剂进行配制。配制的比例为可按种植实际需要进行调整：苏云金芽孢杆菌以色列亚种制剂占1-93％，哈茨木霉制剂占1-93％，拉细黄链霉菌制剂占1-93％，球孢白僵菌制剂占1-93％，金龟子绿僵菌制剂占1-93％，玫烟色棒束孢制剂占1-93％，淡紫色拟青霉制剂占1-93％，，绿色木霉制剂占1-93％。
C1制剂的制备方法及步骤
C1制剂由以下菌剂组成
1、枯草芽孢杆菌，拉丁学名Bacillus subtilis，细菌，原核生物界，好氧兼性厌氧菌。主要功能作用：抑制病原菌，诱导植物产生抗病性，降解农化及重金属残留，净化改良土壤。
2、地衣芽孢杆菌，细菌界，好氧菌，拉丁学名Bacillus licheniformis，主要功能作用：抑制病原菌，提高作物抗病能力，降解农化残留，改良、净化、修复土壤。
3、短小芽孢杆菌，细菌界，好氧菌，拉丁学名；Bacillus pumilus。主要功能作用：提高作物抗病，抗寒，抗旱能力，增加土壤养分，改良土壤结构，促进有机质分解和作物生长。固氮解磷解钾。
4、拟康宁木霉，真菌界，好氧菌。拉丁学名Trichoderma pseudokoningii。主要功能作用：分解纤维，生物防治灰葡萄孢，灰霉病，尖镰刀孢，叶霉病，早疫病，炭疽病，枯萎病等多种病害。
第一步、先配制液体C1菌剂
1、按配方和培养条件，分别接种4个菌株到三角杯中，上摇床进行种子培养。
2、按配方和培养条，分别接种4个液体菌剂到发酵罐中，进行菌剂的一级扩大培养。
3、重复2进行菌剂的二级、三级扩大培养。得到经过三级培养的4种液体C1菌剂。
液体C1菌剂的培养基配方及培养条件
1、枯草芽孢杆菌的液体培养基配方：
糖蜜1.5％，磷酸氢二钾0.05％，酵母膏0.05％，牛肉膏0.02％，蛋白胨0.05％，0.025％，氯化钠0.02％，硫酸锰0.001％，无菌水补足100％。
培养条件：28～30℃，初始ph6～7，120-180r/min，好氧震荡培养48～36h。
2、地衣芽孢杆菌的液体培养基配方：糖蜜1.5％，酵母膏1.0％，硫酸镁0.3％，牛肉膏0.1％，蛋白胨0.05％，碳酸钙0.025％，氯化钠0.02％，无菌水补足100％。
培养条件：28～30℃，初始ph6～7，120-180r/min，好氧震荡培养48～36h。
3、短小芽孢杆菌的液体培养基配方：糖蜜0.5％，玉米粉0.5％，蛋白胨1.5％，豆饼粉0.5％，磷酸氢二钾0.75％，硫酸镁0.2％，无菌水补足100％。
培养条件：28～30℃，初始ph6～7，120-200r/min，好氧震荡培养48～36h。。
4、拟康氏木霉的液体培养基配方：糖蜜0.75％，麦麸3.0％，磷酸氢二钾0.1％，玉米粉3.0％，无菌水补足100％。
培养条件：28～30℃，初始ph5.0～6.0，120-180r/min，好氧震荡培养6d。
第二步、配制固体C1制剂
1、分别将4种液体C1菌剂，按菌剂2份，吸附材料1份的比例，分别混配成4个不同菌种的C1制剂。
2、按种植实际需要对4种C1制剂进行配制。配制的比例为：枯草芽孢杆菌制剂占1-97％，地衣芽孢杆菌制剂占1-97％，短小芽孢杆菌制剂占1-97％，拟康氏木霉制剂占1-97％。
C2制剂的制做方法及步骤
C2制剂由以下厌氧菌剂组成：
1、保加利亚乳杆菌，拉丁学名Lactobacillus bulgaricus，细菌，厌氧菌，主要功能作用：产酸，把复杂的有机物及胶状难溶的有害有机物，消解转化成有机酸、醇类；产气产氧，为与好氧菌互利共生提供优良条件。
2、嗜酸乳杆菌，拉丁学名Lactobacillus acidophilus，细菌，厌氧菌；，主要功能作用(同1)。
3、植物乳杆菌，拉丁学名Lactobacillus plantarum，细菌，厌氧菌，主要功能作用(同1)。
4、德氏乳杆菌，拉丁学名Lactobacillus delbrueckii subsp，细菌，厌氧菌；主要功能作用(同1)。
第一步、先配制液体C2菌剂
1、分别配制保加利亚乳杆菌，嗜酸乳杆菌，植物乳杆菌以及德氏乳杆菌的液体厌氧菌培养基(见“4个液体C2菌剂的培养基配方及培养条件”)，再分别向4种液体厌氧菌培养基中接种各自对应的菌种，在25-37℃条件下静置密闭发酵48-72小时，进行菌种的一级扩大培养。
2、把4种一级培养的厌氧菌液按以下比例配制混合在一起，密闭、静置24小时，即为一级发酵的厌氧混合菌液。配制的比例为：保加利亚乳杆菌制剂占1-97％，嗜酸乳杆菌制剂占1-97％，植物乳杆菌制剂占1-97％，德氏乳杆菌制剂占1-97％。
3、配制混合发酵的液体厌氧菌培养基(见“4个液体C2菌剂的培养基配方及培养条件”)，将经一级发酵的厌氧混合菌液，接种到混合发酵的液体厌氧菌培养基中，接种量为培养基质量的5-10％，在30-37℃条件下静置密闭厌氧发酵48-72小时，进行菌种的二级扩大培养，得到混合发酵的二级厌氧菌液；
4、重复3进行菌剂的三级扩大培养。得到混合厌氧发酵的液体C2制剂。
第二步、配制固体C2制剂
将混合厌氧发酵的液体C2制剂，按菌剂2份，吸附材料1份的比例，混配成C2制剂。
4个液体C2菌剂的培养基配方及培养条件
1、保加利亚乳杆菌，培养基配方及培养条件：
蔗糖20g，蛋白胨35g，碳酸钙1.5g，酵母膏30g，磷酸氢二钾2g，硫酸镁1.5g，碳酸钙1g，硫酸锰0.02g，磷酸氢氨1.5g，无菌水补足1L；培养条件：初始pH值6.0，30-37℃，遮光，密闭封口，静置厌氧培养48-72小时；
2、嗜酸乳杆菌，培养基配方及培养条件：
蔗糖20g，蛋白胨20g，氯化钠1g，硫酸锰0.01g，硫酸镁0.02g，乙酸钠0.5g，无菌水补足1L；培养条件：初始pH值6.0，30-37℃，遮光，密闭封口，静置厌氧培养48-72小时；
3、植物乳杆菌，培养基配方及培养条件：
蔗糖20g，酵母膏5g，磷酸氢二钾2g，酪蛋白胨10g，牛肉膏10g，乙酸钠5g，柠檬酸二胺2g，吐温80 1g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，无菌水补足1L；培养条件：初始pH值6.0，30-37℃，遮光，密闭封口，静置厌氧培养48-72小时；
4、德氏乳杆菌，培养基配方及培养条件：
蔗糖20g，蛋白胨35g，碳酸钙1.5g，酵母膏30g，磷酸氢二钾2g，硫酸镁1.5g，碳酸钙1g，硫酸锰0.02g，磷酸氢氨1.5g，无菌水补足1L；培养条件：初始pH值6.0，30-37℃，遮光，密闭封口，静置厌氧培养48-72小时。
混合发酵的液体厌氧菌培养基配方及培养条件：
蔗糖20g，蛋白胨35g，碳酸钙1.5g，酵母膏30g，磷酸氢二钾2g，硫酸镁1.5g，碳酸钙1g，硫酸锰0.02g，磷酸氢氨1.5g，无菌水补足1L；培养条件：初始pH值6.0，30-37℃，遮光，密闭封口，静置厌氧培养48-72小时。
把A、B、C1、C2四种制剂按照各占1-97％的比例混合制备成本综合制剂。混配的比例，可按照增产、防治病虫害、改良土壤及降解污染残留的需要调整。
本综合制剂所述吸附材料由以下4种材料和配比组成：
煅烧蛭石粉，按质量比占50-97％；蛭石是一种天然矿物质，多微孔，吸水量高，易于菌种保藏，且硅镁钙铁等中微量元素含量高达80％。
腐殖酸，按质量比占1-48％；腐植酸是天然高有机质肥料，可肥沃土壤，提高肥效，促进生长，增强抗逆性。
草炭土，按质量比占1-48％；草炭土是含腐殖质较高的天然有机肥料。
凹凸棒土，按质量比占1-48％；凹凸棒土硅含量超过60％，还含钾及稀有元素钼。
本综合制剂在使用前可进行2次扩繁。第一次扩繁，每公斤本综合制剂兑4-6％的红糖水10-20升，搅匀，遮阳120-180r/min通气搅拌2-3天，即成第一次扩繁菌剂。第二次扩繁，用第一次扩繁的菌剂，每升再兑4-6％的红糖水10-20升，混匀，遮阳，120-180r/min通气搅拌2-3天即成第二次扩繁菌剂。经过二次对综合制剂100-400倍的扩繁后，即可对作物和土壤采用喷施、灌根、随水滴灌或大面积喷洒使用。也可将扩繁后的制剂与有机肥和农家肥混拌或叠加施用。
不使用化肥单独靠施用有机肥来获得施用化肥的产量，有机肥的用量要达到或超过化肥用量的8-10倍。而有机肥若混拌二次扩繁的菌剂后再施用，可获得单独施用有机肥8-10倍的产量。有机肥添加二次扩繁的本菌剂，用量或资金投入量可以和使用化肥农药相同甚至低于，在相同条件下产量达到或高于化肥农药种植。产量上可以取代化肥农药。
本制剂采用开口发酵的技术，使生产成本大幅度降低；采用高性能吸附材料吸附液体菌剂，为菌剂持久活力提供了保障；经过二次对综合制剂100-400倍的扩繁，提高了效果，降低了价格。同等条件下，花同样的钱可取得比化肥农药种植更好的效益，在价格上可完全取代化肥农药。
本综合制剂所采用的菌种其安全级别均由国家认证部门确定为四级，是对人畜禽及生态环境安全无害级。这些菌种保藏于中国和国际承认的具有用于专利程序的微生物保藏资质的单位，具体保藏于中国农业微生物菌种保藏中心，中国普通微生物菌种保藏中心，广东省微生物菌种保藏中心。
由于本制剂的综合效应，农作物在生长的全程病害减少，土壤得到改良，作物品质提高，口味回归天然，无农化残留，在质量上可完全取代化肥农药。
实施例一
时间：2019年7-10月
地点：广西武宣县东沟乡
水稻种植户老阚，种植晚稻20亩，划定6亩示范田采用本综合制剂，其余为对照田。种植品种为广西传统稻”田东香”。示范田施用二次扩繁制剂4次，1、育秧，喷施秧苗0.5L/亩；2、耙田，先撒施有机肥100k/亩叠加喷施20L同时旋耕耙田；3、分蘖期喷施2L/亩；4、孕穗期喷施2L/亩。肥料投入：二次扩繁的制剂0.5元/kgx24.5+有机肥1元/kgx100＝113元/亩。收获时产干谷1100斤/亩。对照田施用鹿寨牌3ⅹ15复合肥180元/袋+追施钾肥5kgx6元/kg+农药20元＝230元/亩。收获时产干谷960斤/亩。示范田没施化肥农药，所产稻谷全部被香港唐氏有机食品公司收购。
显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (6)

1.一种农用微生物综合制剂，其特征在于，由以下重量比的原料制备而成：
A制剂1-97％、B制剂1-97％、C1制剂1-97％和C2制剂1-97％；
所述A制剂包括根瘤菌、固氮螺菌、巨大芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌和吸附材料；
所述B制剂包括苏云金芽孢杆菌以色列亚种、哈茨木霉、细黄链霉菌、球孢白僵菌、金龟子绿僵菌、玫烟色棒束孢、淡紫色拟青霉、绿色木霉和吸附材料；
所述C1制剂包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、拟康宁木霉和吸附材料；
所述C2制剂包括保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、德氏乳杆菌和吸附材料。
2.如权利要求1所述的一种农用微生物综合制剂，其特征在于，
所述根瘤菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜1.0％，磷酸氢二钾0.05％，碳酸钙0.3％，硫酸镁0.02％，酵母膏0.04％，钼酸钠0.0002％，无菌水补足100％；
所述固氮螺菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜1.0％，磷酸氢二钾0.01％，磷酸二氢钾0.04％，硫酸镁0.02％，氯化钠0.01，氯化钙0.002％，硫酸亚铁0.002％，钼酸钠0.0002％，无菌水补足100％；
所述巨大芽孢杆菌培养基配方由以下重量比的原料组成：玉米淀粉1.0％，糖蜜0.6％，牛肉膏1.5％，硫酸铵0.1％，磷酸氢二钾0.2％，碳酸钙0.1％，硫酸镁0.05％，硫酸锌0.02％，无菌水补足100％；
所述胶冻样芽孢杆菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜2％，豆粕粉0.5％，硫酸镁0.1％，磷酸氢二钾0.05％，碳酸钙0.1％，无菌水补足100％。
3.如权利要求1所述的一种农用微生物综合制剂，其特征在于，
所述苏云金芽孢杆菌以色列亚种培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜2.0％，蛋白胨0.5％，酵母膏0.5％，磷酸氢二钾0.03％，磷酸氢二钠0.1％，硫酸镁0.1％，硫酸亚铁0.002％，氯化钙0.002％，无菌水补足100％；
所述哈茨木霉培养基配方由以下重量比的原料组成：20％马铃薯煮汁，磷酸氢二钾0.3％，糖密2.0％，硫酸镁0.15％，维生素0.1％，无菌水补足100％；
所述细黄链霉菌培养基配方由以下重量比的原料组成：可溶性淀粉2.0％，硝酸钾0.1％，磷酸氢二钾0.05％，硫酸镁0.1％，硫酸亚铁0.001％，氯化钠0.05％，无菌水补足100％；
所述球孢白僵菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜5.0％，磷酸氢二钾0.1％，1％玉米浸提液，无菌水补足100％；
所述金龟子绿僵菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜4.0％，蛋白胨1.0％，醇母膏1.0％，磷酸氢二钾0.15％，硫酸镁0.05％，硼酸钠0.03％，硫酸锰0.04％，钼酸钠0.05％，硫酸铜0.08％，硫酸锌0.4％，硫酸亚铁0.01％，维生素B1微量，无菌水补足100％；
所述玫烟色棒束孢培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜2.0％，磷酸氢二钾0.3％，硫酸镁0.15％，20％马铃薯提取液补足100％；
所述淡紫色拟青霉培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜1.5％，可溶性淀粉0.5-1.0％，硫酸铵0.5％，磷酸氢二钾0.1％，硫酸锌0.01％，碳酸钙0.025％，硫酸锰0.001％，无菌水补足100％；
所述绿色木霉培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜1.0％，玉米粉1.3％，大豆粉0.5％，磷酸氢二钾0.3％，硝酸铵0.2％，无菌水补足100％。
4.如权利要求1所述的一种农用微生物综合制剂，其特征在于，
所述枯草芽孢杆菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜1.5％，磷酸氢二钾0.05％，酵母膏0.05％，牛肉膏0.02％，蛋白胨0.05％，0.025％，氯化钠0.02％，硫酸锰0.001％，无菌水补足100％；
所述地衣芽孢杆菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜1.5％，酵母膏1.0％，硫酸镁0.3％，牛肉膏0.1％，蛋白胨0.05％，碳酸钙0.025％，氯化钠0.02％，无菌水补足100％；
所述短小芽孢杆菌培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜0.5％，玉米粉0.5％，蛋白胨1.5％，豆饼粉0.5％，磷酸氢二钾0.75％，硫酸镁0.2％，无菌水补足100％；
所述拟康宁木霉培养基配方由以下重量比的原料组成：糖蜜0.75％，麦麸3.0％，磷酸氢二钾0.1％，玉米粉3.0％，无菌水补足100％。
5.如权利要求1所述的一种农用微生物综合制剂，其特征在于，
所述保加利亚乳杆菌培养基配方由以下重量克的原料组成：蔗糖20g，蛋白胨35g，碳酸钙1.5g，酵母膏30g，磷酸氢二钾2g，硫酸镁1.5g，碳酸钙1g，硫酸锰0.02g，磷酸氢氨1.5g，无菌水补足1L；
所述嗜酸乳杆菌培养基配方由以下重量克的原料组成：蔗糖20g，蛋白胨20g，氯化钠1g，硫酸锰0.01g，硫酸镁0.02g，乙酸钠0.5g，无菌水补足1L；
所述植物乳杆菌培养基配方由以下重量克的原料组成：蔗糖20g，酵母膏5g，磷酸氢二钾2g，酪蛋白胨10g，牛肉膏10g，乙酸钠5g，柠檬酸二胺2g，吐温80 1g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，
无菌水补足1L；
所述德氏乳杆菌培养基配方由以下重量克的原料组成：蔗糖20g，蛋白胨35g，碳酸钙1.5g，酵母膏30g，磷酸氢二钾2g，硫酸镁1.5g，碳酸钙1g，硫酸锰0.02g，磷酸氢氨1.5g，无菌水补足1L。
6.如权利要求1-5中任意一项所述的综合制剂，其特征在于，所述吸附材料由以下重量比的原料制备而成：煅烧蛭石粉50-97％、腐殖酸1-47，草炭土1-47％和凹凸棒土1-47％。
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