CN111918638A

CN111918638A - 用于表皮处理的肽的用途

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Publication number: CN111918638A
Application number: CN201980022478.5A
Authority: CN
Inventors: P·蒙东; C·林根巴赫; O·格拉斯欧索
Original assignee: Sederma SA
Current assignee: Sederma SA
Priority date: 2018-04-05
Filing date: 2019-04-04
Publication date: 2020-11-10
Also published as: FR3079749B1; EP3773460B1; BR112020018265A2; US20210093537A1; KR20200141463A; JP2021520371A; WO2019193113A1; JP2023161014A; FR3079749A1; US11523980B2; EP3773460A1

Abstract

肽具有通式X‑(Xaa)_nK*TFK*‑(Xaa)_m‑Z。它有助于保持或改善表皮的状况。在式中，K*选自赖氨酸K、鸟氨酸、二氨基丁酸或二氨基丙酸或羟基衍生物；(Xaa)_n和(Xaa)_m彼此独立地对应于n个或m个氨基酸Xaa的序列，Xaa独立地选自Gly、Ala、Pro、Val、Leu、Ile和Phe，其中n和m是在0到5之间相等或不同的整数；在N末端X选自H、‑CO‑R¹、‑SO₂‑R¹或生物素酰基基团；在C末端Z选自OH、OR¹、NH₂、NHR¹或NR¹R²；并且R¹和R²彼此独立地选自烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、烷氧基、糖和芳氧基基团，其可以是直链的、支链的、环状的、多环的、不饱和的、羟基化的、羰基化的、磷酸化的和/或硫化的，所述基团具有1至24个碳原子并且在其主链中可以具有O、S和/或N杂原子。优选的肽是Pal‑KTFK。

Description

用于表皮处理的肽的用途

技术领域

本发明涉及基于化妆品或皮肤病学肽的处理，基于该肽的新化妆品或皮肤病学成分以及包含它的组合物。更具体地涉及用于处理人或动物哺乳动物的皮肤及其附属物的肽。

尤其涉及化妆品产品、皮肤病学产品以及卫生和个人护理产品的工业。

发明背景

肽具有重要的信号功能并协调许多生化过程。结果，它们早已成为必不可少的和有前途的活性成分，尤其是在化妆品工业中，在化妆品工业不断寻找能够美化皮肤和附属物(也就是说改善其总体状况)的新的化合物。

目前提出的大多数肽是通过刺激细胞外基质组分，主要是胶原蛋白和弹性蛋白而作用于真皮的肽。在这个方向上提出了许多肽，特别是由申请人提出的，例如以商品名

销售的Pal-KTTKS(SEQ ID NO 1)，以商品名

3000销售的包含Pal-GHK和Pal-GQPR(SEQ ID NO 2)的混合物，以商品名

销售的Pal-KMO2K(MO2对应于双加氧甲硫氨酸)或最近的以

商品名销售的Pal-K(P)HG(具有嫁接在赖氨酸上的脯氨酸)，以Dermaxyl^TM或Biopeptide EL^TM商品名销售的Pal-VGVAPG(SEQ ID NO 3)，或者以Idéalift^TM或Calmosensine^TM商品名销售的N-乙酰基-Tyr-Arg-O-十六烷基。

皮肤的美丽和良好健康在很大程度上取决于表皮的质量和厚度，尤其是通过角质形成细胞的最佳分化和表皮形成其最外层(角质层)的能力，以及通过脱皮来定期更新所述最外层。表皮，尤其是角质层确实形成真正的皮肤屏障，对于保护自己免受外部环境的分子和侵害(光辐射、污染物等)至关重要。例如，对该皮肤屏障的良好保护将有利地限制表皮微炎症的风险，表皮微炎症可能引起皮肤过早老化，尤其是敏感性皮肤所必需的保护。它还限制了水分流失的风险，这有助于维持表皮的良好保湿。

发明概述

本发明旨在提供对表皮，特别是对角质层的特性具有活性的肽，即能够作用于皮肤表面上的第一层的肽。

为此，根据第一方面，本发明提供了具有以下通式1的肽用于非治疗性美容处理以保持或改善表皮状况的用途：

X-(Xaa)_nK*TFK*-(Xaa)_m-Z。

在通式1中：

·K*选自包含赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸或二氨基丙酸或其羟基化衍生物的组，两个K*是相同的或不同的；

·(Xaa)_n和(Xaa)_m彼此独立地对应于n和m个氨基酸Xaa的序列，Xaa彼此独立地选自Gly、Ala、Pro、Val、Leu、Ile和Phe，其中n和m是在0到5之间相等或不同的整数；

·在N末端，X选自H、-CO-R¹、-SO₂-R¹或生物素酰基基团；

·在C末端，Z选自OH、OR¹、NH₂、NHR¹或NR¹R²；和

·其中R¹和R²彼此独立地选自烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、烷氧基、糖和芳氧基基团，其可以是直链的、支链的、环状的、多环的、不饱和的、羟基化的、羰基化的、磷酸化的和/或硫化的，所述基团具有1至24个碳原子并且在其主链中可以具有一个或多个O、S和/或N杂原子。

因此，根据本发明使用的肽的特征在于其至少包含对表皮具有生物学活性的氨基酸序列K*TFK*。可以将选自Gly、Ala、Pro、Val、Leu、Ile和Phe的1-5个非极性氨基酸的序列添加到活性序列K*TFK*的任一侧，优选地选自Gly、Ala、Pro、Val，优选地Gly和Ala。

优选地，根据本发明，K*是赖氨酸或鸟氨酸，更优选地赖氨酸。优选的羟基化的衍生物是羟基赖氨酸。

根据本发明更优选地，n和m在0至2之间，优选地等于0，肽具有通式2：X-K*TFK*-Z(SEQ ID NO 4)

优选地，肽具有通式3：

X-KTFK-Z

K是赖氨酸(Lys)，T是苏氨酸(Thr)，F是苯丙氨酸(Phe)，以及X和Z如上所定义。

在说明书中以下给出了体外测试结果(在角质形成细胞培养，皮肤外植体或重建的皮肤上)显示出得益于根据本发明的肽，表皮状况的保持/保护和改善，特别是通过增强皮肤屏障功能和协调表皮成熟的自然过程。

这些测试已经证明了根据本发明的肽在几个水平上的靶向作用，特别是：

-肽刺激构成皮肤屏障或积极干预屏障起始时角质形成细胞分化的几种分子的产生；

-肽改善表皮上部的保湿；

-肽改善通过脱皮的角质层的更新；

-肽刺激α-晶体蛋白的产生；

-肽降低由多次每日小侵害(光辐射、污染物等)引起的皮肤微炎症中涉及的许多分子的水平。

在说明书中以下给出的体内测试结果显示其后与根据本发明的肽有关的真正的美容益处：使皮肤光滑，更好的保湿(皮肤因此更透明、充盈(supple)和柔软)以及改善的肤色光泽度和均质性。得益于本发明，避免或减少了皮肤缺陷。

优选地，根据本发明的肽在N-末端位置或在C-末端位置被修饰，排除X＝H和Z＝OH的情况。

根据本发明的其他优选特征：

-R¹和/或R²是1至24个碳原子的烷基链，优选地3至24个碳原子的亲脂性烷基链；和/或

-X是酰基基团CO-R¹；优选地选自辛酰基(C₈)、癸酰基(C₁₀)、月桂酰基(C₁₂)、肉豆蔻酰基(C₁₄)、棕榈酰基(C₁₆)、硬脂酰基(C₁₈)、生物素酰基、反油酰基(elaidoyl)、油酰基和脂酰基；更优选选自月桂酰基(C₁₂)、肉豆蔻酰基(C₁₄)和棕榈酰基(C₁₆)，和/或

-Z选自OH、OMe、OEt和NH₂，优选地OH；和/或

-X选自棕榈酰基(C₁₆)、肉豆蔻酰基(C₁₄)和月桂酰基(C₁₂)；更优选地棕榈酰基(C₁₆)和Z是OH。

在N-或C-末端位置包含特定酸衍生物的肽，酸衍生物例如抗坏血酸，视黄酸，肉桂酸，齐墩果酸，透明质酸，烟酸，硫辛酸，没食子酸或泛酸的那些也包括在本发明中。

根据本发明的优选的肽是Pal-KTFK-OH(也称为Pal-KTFK，SEQ ID NO 5)，对应于在N-末端的棕榈酰基链取代(X＝Pal)和在C末端没有取代(Z＝OH)，根据通式4：

根据本发明的肽可以是光学纯的或者由L或D异构体或其混合物组成。天然存在的L-异构体可以是优选的。如果合适，肽可以是盐形式，尤其是盐酸盐或乙酸盐。

本发明还涵盖肽的衍生物(具有化学功能的修饰和/或添加，但碳骨架没有变化)和类似物(具有化学功能的修饰和/或添加，但也具有碳骨架的变化)，与其他种类例如金属离子(例如铜、锌、锰、镁等)的复合物。

对于根据本发明的用途，取决于设想的盖伦(galenic)形式，如果合适，可以将肽与增溶剂一起溶解在生理上可接受的亲脂性或亲水性基质中。

根据本发明，“生理上可接受的介质”是指，但不限于，水性或水醇溶液、油包水乳液、水包油乳液、微乳液、水凝胶、无水凝胶、血清、囊泡分散液、粉末。

“生理上可接受的”是指包含本发明的肽的成分和组合物适合于局部或透皮使用，与哺乳动物(更特别地是人)的粘膜、指甲、头皮、头发、体毛和皮肤接触，组合物可被摄入或注射到皮肤中而没有毒性、不相容性、不稳定性、过敏应答等的风险。这种“生理上可接受的介质”形成通常称为组合物的赋形剂。

通过结合、掺入或吸附在大、微或纳米颗粒例如胶囊、球体、脂质体、油质体、乳糜微粒、海绵之上/之处，以微乳液或纳米乳液的形式，或吸附在例如有机粉末状聚合物、滑石、膨润土、孢子或外壁以及其他无机或有机支持物上，可以将根据本发明的肽以载体化的形式使用。

优选地，根据本发明的肽以特定形式使用，“捕获”在油蜡表面活性剂和水的微乳液中，以减慢其穿透并使其在皮肤表面上在表皮水平更可生物利用。

得益于这种特殊形式，基本上防止了肽进入真皮，并且可以从角质层和然后在表皮的所有水平缓慢且均匀地发挥其生物学作用。

根据本发明的第二方面，提供了包含通式1的肽的化妆品或皮肤病学成分：

X-(Xaa)_nK*TFK*-(Xaa)_m-Z

在通式1中：

·K*选自赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸或二氨基丙酸或其羟基化衍生物，两个K*是相同的或不同的；

·(Xaa)_n和(Xaa)_m彼此独立地对应于n和m个氨基酸Xaa的序列，Xaa独立地选自Gly、Ala、Pro、Val、Leu、Ile和Phe，其中n和m是在0到5之间相等或不同的整数；

·在N末端，X选自H、-CO-R¹、-SO₂-R¹或生物素酰基基团；

·在C末端，Z选自OH、OR¹、NH₂、NHR¹或NR¹R²；和

·其中R¹和R²彼此独立地选自烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、烷氧基、糖和芳氧基基团，其可以是直链的、支链的、环状的、多环的、不饱和的、羟基化的、羰基化的、磷酸化的和/或硫化的，所述基团具有1至24个碳原子并且在其主链中可以具有一个或多个O、S和/或N杂原子；

以及能够减缓所述肽穿透入皮肤以作用于表皮的生理上可接受的媒介物。

肽更精确地如上根据本发明的第一方面所定义。

优选地，媒介物或载体是肽在其中被溶剂化的油蜡表面活性剂和水的微乳液，更优选地包含含卵磷脂的蜡相。

在形成的微乳液中，通过在肽和蜡颗粒之间以及通过表面活性剂建立离子键、氢键和范德华键的弱键的溶剂化使肽被“捕获”。

然后在局部应用期间诱导的力和能量通过破坏这些弱键而缓慢和逐渐地去溶剂化，从而使得肽释放在角质层中。

根据本发明的第三方面，提供了包含根据本发明的第二方面的成分的化妆品或皮肤病学组合物。

包含根据本发明肽的组合物，特别是根据本发明的第三方面的组合物，是最终将由使用者应用的组合物。

组合物可以以任何盖仑形式提供(实例在下面的说明书中给出)并且也可以通过天然或合成纤维，羊毛，或任何适于与皮肤接触的材料，或用于衣服，例如白天或晚上的内衣、手帕或纸巾的织物支持物来输送，以通过这种皮肤/织物接触发挥其美容或皮肤病学作用并允许连续局部递送。

根据本发明，以特定和有利的方式，肽可以与至少一种另外的活性剂缔合，所述另外的活性剂适于以增强活性而发挥作用和/或以互补的方式作用于一种或多种其他活性。

为此，在下面的详细描述中提到了多种另外的活性物。

根据第四方面，本发明提供了用于改善皮肤的美学外观的方法，包括将有效量的根据上述本发明的第三方面的化妆品或皮肤病学组合物局部应用于皮肤。

根据第五方面，本发明提供了用于产生自晒黑(tanning)美容处理的试剂盒，包括在分别的隔室中的：

a)如上定义的根据本发明的组合物或在生理上可接受的介质中包含根据第一方面如上定义的根据本发明的肽的组合物；

b)在生理上可接受的介质中包含自晒黑活性剂的组合物。

特别且有利地，根据本发明的肽可以在应用自晒黑活性剂之前用于实现自然的柔软光滑，在应用自晒黑活性物之前，肽特别地应用至少3天，优选地6天，更优选地8天的时间段。

根据本发明，“局部处理”或“局部使用”是指旨在作用于其应用位置：皮肤、粘膜、附属物的应用。

肽或包含它的根据本发明的组合物可以局部应用于靶标区域。

“有效”量取决于多种因素，例如年龄、患者状况、病症或病理的严重程度以及施用的方式。有效量是指足以实现所需效果的无毒量。

在根据本发明的化妆品组合物中，相对于组合物的总重量，以有效量存在的肽通常比率是0.000001％至5％，优选地0.00001％至0.1％，更优选地约0.0005至0.005％，取决于组合物的目的地和或多或少明显的所需效果。

除非另有说明，否则本申请中使用的所有百分比和比率均以总组合物的重量计并且所有测量均在25℃进行。

例如，对于美容面部处理，欧洲化妆品指导(European Cosmetics Directive)已将乳霜的标准应用量设定为2.72mg/cm²/天/人，而对于身体乳的标准应用量设定为0.5mg/cm²/天/人。

根据其他特征，根据本发明的美容处理方法可以与针对皮肤的一种或多种其他处理方法联合，如例如光疗法、热、振动、电穿处理、微针贴剂或芳香疗法。

根据本发明，可以提出具有旨在用于实施上述方法的几个隔室或试剂盒的设备，并且该设备可以包括例如但不限于在第一隔室中的包含根据本发明的活性成分的组合物和在第二隔室中的另外的赋形剂和/或活性物，包含在所述第一和第二隔室中的组合物在本文被认为是组合组合物，用于同时、分开或随时间散布的使用，特别是在上述定义的一种处理中。

根据本发明的组合物适合于治疗性处理，特别是皮肤的处理，特别是具有患病表皮的皮肤。

根据第六方面，提供了根据本发明的用于化妆品用途、方法、组合物和试剂盒的肽，肽具有通式1：

X-(Xaa)_nK*TFK*-(Xaa)_m-Z

其中

·K*选自包含赖氨酸(K)、鸟氨酸、二氨基丁酸或二氨基丙酸或其羟基化衍生物的组，两个K*是相同的或不同的；

·在N末端，X选自H、-CO-R¹、-SO₂-R¹或生物素酰基基团；

·在C末端，Z选自OH、OR¹、NH₂、NHR¹或NR¹R²；和

·其中R¹和R²彼此独立地选自烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、烷氧基、糖和芳氧基基团，其可以是直链的、支链的、环状的、多环的、不饱和的、羟基化的、羰基化的、磷酸化的和/或硫，所述基团具有1至24个碳原子并且在其主链中可以具有一个或多个O、S和/或N杂原子，

排除肽Pal-KTFK-OH和Ela-KTFK-OH。

根据肽的优选特征：

-K*是赖氨酸K或鸟氨酸；和/或

-n和m独立地是0或1或2中的一个；和/或

-肽在N-末端位置或C-末端位置被修饰，排除其中X＝H且Z＝OH的情况；和/或

-R¹和/或R²是1至24个碳原子的烷基链；和/或

-X是酰基基团CO-R¹和Z选自OH、OMe、OEt和NH₂；和/或

-肽被溶剂化，优选地在肽在其中被溶剂化的油蜡表面活性剂和水的微乳液的媒介物或载体中，更优选包含含卵磷脂的蜡相。

发明详述

根据实施方案的以下描述以及体外和体内测试，将更好地理解本发明。

A)根据本发明的Pal-KTFK肽(SEQ ID NO 5)的制备实例

通过肽合成制备Pal-KTFK肽。赖氨酸通过其末端酸官能团与树脂偶联(使用偶联剂，例如DCC(二环己基碳二亚胺)/NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)或HBTU(2-(1H-苯并***-1-基)-1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐)/HOBT(1-羟基-苯并***)。然后将如此保护的赖氨酸在偶联剂的存在下与苏氨酸衍生物反应，然后进行相同的操作以添加苯丙氨酸，并且类似地添加第二赖氨酸。然后后者在碱的存在下用活化的棕榈酸衍生物(例如棕榈酰氯)在其胺官能团上进行酰化。在酸性介质中从树脂上切除肽链并且在沉淀、洗涤和干燥后，获得以固体形式的棕榈酰基-赖氨酰基-苏氨酰基-苯丙氨酰基-赖氨酸产物。

B)包含Pal-KTFK(SEQ ID NO 5)的根据本发明的化妆品活性成分的制备实例

Pal-KTFK肽是两亲性的，Pal链是疏水的，苯丙氨酰基部分是亲水的。用合适的表面活性剂将肽溶解在水/乙二醇基质中。

C)具有载体化的肽的根据本发明的化妆品活性成分的制备实例

方案：

步骤1：制备《赋形剂》相：

水相：水+表面活性剂

+蜡相：蜡+基于卵磷脂的表面活性剂

+油相：油+表面活性剂

强烈搅拌以形成水包油乳液。该步骤导致包含液体部分和包含蜡颗粒的固体部分的非均相。

步骤2：制备包含根据本发明的活性肽的相：

水相：水+Pal-KTFK肽(200ppm)

步骤3：在适度搅拌下，将《活性物》相添加到《赋形剂》相中。

步骤4：任选地在最终乳液中添加包含防腐剂的一个或多个相。

步骤5：任选地在最终乳液中添加pH调节剂(期望的pH是约4.5)。

蜡可以由多种蜡构成，油也可以由多种油构成。

获得的产品：

在形成的乳液中，由于在肽与蜡颗粒之间以及通过卵磷脂建立了弱的离子键、氢键和范德华键，肽通过溶剂化而被之前形成的水包油乳液“捕获”。

Pal-KTFK肽是两亲性的并因此对角质细胞间接合部分(cement)具有高亲和力，在去溶剂化后它将扩散并均匀地起作用。

D)体外功效测试

在根据本发明的优选肽Pal-KTFK上以其未溶剂化形式进行。

在表皮细胞：正常人角质形成细胞(NHK)上或在皮肤外植体或在重建的皮肤上执行了以下体外测试。在惰性溶剂(乙醇)中的溶液中，以用于皮肤的推荐浓度测试了根据本发明的肽。

1/改善表皮屏障和协调表皮成熟

表皮角质层或角质层是具有极大复杂性的组装体，一方面将扁平的，无核的细胞彼此牢固地结合在一起，另一方面联合了脂类和蛋白质，脂类和蛋白质的组成和组装确保了该结构的独特的性能，对环境的物理、化学和生物攻击具有高度抵抗力。

下列测试表明，通过在三种不同的生物***(人角质形成细胞的薄层培养物或人皮肤外植体的培养物或重构的皮肤)上分析涉及表皮分化和屏障形成的多种标志物，根据本发明的肽诱导了表皮内稳态和皮肤屏障的增强。

角质形成细胞逐渐成熟，外壳坚固，由称为外膜蛋白(involucrine)和兜甲蛋白(loricrin)的蛋白质形成，并通过转谷氨酰胺酶(是钙敏感酶)的干预相互连接。角质层的成熟和内稳态中的其他蛋白质SPRR(小脯氨酸富集区域蛋白质)通过在蛋白质之间产生柔性但牢固的交联(也通过转谷氨酰胺酶的活性)来增强该蛋白质外壳。NICE-1是一种蛋白质，其基因与许多层蛋白质的基因位于同一位置。它的组成使其成为转谷氨酰胺酶的理想底物，类似于兜甲蛋白。LEC(晚期角质化包膜蛋白)也属于在成熟阶段期间要桥接的最后组分。此外，角蛋白10和1以及神经酰胺在角质层及其蛋白脂质基质的形成和质量中非常重要，因此刺激其合成的化妆品活性物非常重要。

良好的屏障功能还高度依赖于角蛋白细胞在进行大量代谢的过程中产生的丝聚蛋白和丝聚蛋白2。它们通过与角蛋白结合来提供稳定化角质细胞的时间，然后最终被降解成氨基酸，产生在角质层中发现的天然保湿因子(NMF)的基本组分。围绕着角质形成细胞的透明质酸也将水保留在表皮中，并起着真正的海绵的作用，吸引并保持了其重量的1000倍的水。

最后，α-晶体蛋白是与HSP家族(或热激蛋白)相关的小蛋白。它存在于表皮中，在其中保护上皮细胞，恢复其线粒体功能并增加其对氧化应激的抵抗力。这种蛋白质具有在细胞中及其紧邻附近发现的特性。有了它的存在，就可以保护皮肤免受UV、炎性和更普遍的氧化型攻击。

1.1/DNA-阵列

原理：

使根据本发明的肽与汇合的KHN(n＝3)接触6或24h。然后冲洗KHN垫并将细胞压碎以提取其mRNA。然后将这些mRNA转换成小DNA序列，在沉积在DNA芯片上并通过类似于qRT-PCR(实时定量逆转录聚合酶链反应)的方法进行扩增后对其进行分析。将由于肽引起的mRNA变化与对照案例(肽溶剂)进行比较。

结果：

表1：关于控制编码表皮分化蛋白的基因的表达的变化。4ppm的根据本发明的肽的作用。

没有发现毒性作用。*＝6小时接触；**＝24小时接触

这些测试表明在NHK与根据本发明的肽接触的早期(6-24h)诱导了几种生物学靶标。参与角质细胞的构建或角质层的保湿的三种蛋白质兜甲蛋白、丝聚蛋白和丝聚蛋白2的基因在统计学上比在溶剂对照中更好地表达(p<0.01)。进行了对丝聚蛋白基因表达的进一步qRT-PCR分析，并且观察到与对照相比，4和6ppm的本发明的肽的当量使该表达分别增加2.87和3.66倍(p<0.01)。

1.2/通过LC-MS/MS(液相色谱与质谱偶联)的研究

原理：

使用与用于DNA阵列相同的培养方案(1.1/以上)，但培养时间更长(7天)，用这种LC-MS/MS方法需要更长的时间检测到蛋白质产生。每3天更换NHK培养基(n＝3)。在这种接触的最后，裂解细胞以提取蛋白质并以压碎的材料形式分析它们，其通过联合了蛋白酶作用于压碎的材料，通过偶联液相色谱与质谱分析来分离片段，然后根据获得的片段的性质和量鉴定和浓缩预先存在的蛋白质的方法(LC-MS/MS)。为了对等同量的蛋白质进行LC-MS/MS分析，在压碎的材料上测量蛋白质浓度。

为了判断结果的显著性，进行了方差和学生t检验的研究。

结果：

表2：与表皮的内稳态成熟有关的蛋白质的控制方面的变化。4ppm的根据本发明的肽的作用。

没有发现毒性作用。

这些结果证实根据本发明的肽正向诱导与分化有关的蛋白质的产生：丝聚蛋白、NICE-1和SPRR1A，所有三种均增加。同时，角蛋白10增加，也已知角蛋白10在表皮分化现象期间产生。角蛋白用于通过桥粒(细胞间接合)强化表皮，有利于促进表皮的内稳态。

有趣且出乎意料的是，α-晶体蛋白的表达似乎比对照例更为重要，导致了补充性的探索。

1.3/α-晶体蛋白在重建皮肤上

原理：

正常人成纤维细胞接种在基质中。几天后，角质形成细胞沉积在该等效真皮上以形成均匀的细胞层。在这一阶段，整个通过气液界面(浮现)以形成多层的表皮。21天后(大约)，获得了成熟的皮肤等效物(其中表皮包含角质层)。

在浮现阶段的前夕，这些皮肤的汇合的人角质形成细胞层接受根据本发明的肽24小时，然后随后是18天(表皮形成的时期)。进行冷冻切片(7μm)，并用荧光抗体标记α-晶体蛋白(免疫组织学)。分析照片中的荧光，对所有照片分析等同表面(n＝51-59)。执行了学生t检验。

结果：

表3：重建的皮肤表皮中α-晶体蛋白的表达。4和6ppm的根据本发明的肽的作用。

没有发现毒性作用。

这些结果表明得益于根据本发明的肽，皮肤中非常清楚地刺激了α-晶体蛋白(相对于对照+61和+164％，p＜0.01)。该蛋白被描述为对表皮中存在的角质形成细胞、其蛋白及其线粒体具有保护作用。

1.4/调节表皮的分化和保湿要素

原理：

在存在或不存在(对照)根据本发明肽的情况下，将汇合的NHK(n＝3)如前所述培养7天，然后使用针对表皮成熟的特征性蛋白质：外膜蛋白、兜甲蛋白和丝聚蛋白，或保湿的特征性蛋白质：丝聚蛋白，以及神经酰胺(角质层的构成要素)的抗体进行免疫细胞化学标记。

通过用ELISA法的由角质形成细胞产生的透明质酸的测定法来评价保湿方面。

最后，评价了根据本发明的肽对转谷氨酰胺酶的活性和对转谷氨酰胺酶-5基因表达的影响。

为此，使汇合的NHK与根据本发明的肽接触长达21天。转谷氨酰胺酶活性是使用荧光丹酰戊二胺的方案进行评估的，荧光丹酰戊二胺通过这些酶结合角质层蛋白质。执行荧光的分析，并将结果与溶剂对照进行比较。

关于转谷氨酰胺酶-5，在KHN与根据本发明的肽接触72小时后执行qRT-PCR。

对于此部分中描述的4个测试，平行地进行对细胞数量的定量，以便将结果归纳为细胞数量。

结果：

表4：NHK中外膜蛋白、兜甲蛋白、丝聚蛋白和神经酰胺形成的诱导(免疫荧光)。2ppm的根据本发明的肽的作用。

没有发现毒性作用。

这些结果表明根据本发明的肽有效地促进了NHK的成熟。在2ppm时效果明显。

表5：NHK中透明质酸分泌的诱导。4和6ppm的根据本发明的肽的作用。

没有发现毒性作用。

这些结果表明根据本发明的肽参与表皮的保湿。

表6：KHN中转谷氨酰胺酶活性和转谷氨酰胺酶-5基因表达的变化。4和6ppm的根据本发明的肽的作用。

这些结果显示了根据本发明的肽对转谷氨酰胺酶-5基因的表达的影响，已知该基因特别结合兜甲蛋白蛋白质、外膜蛋白，并因此有助于形成角质层。同时，确实在角质形成细胞中转谷氨酰胺酶蛋白质的活性增加。

通过补充的方法获得的所有这些结果表明NHK与根据本发明的肽的接触诱导了对关键细胞成分的合成的刺激，这导致在可能的环境和环境侵害方面增强了皮肤屏障并促进了对表皮的表层的保湿。

1.5/刺激成熟的机制：TRPC6

TRPC6受体(瞬时受体电位经典6)参与钙诱导的角质形成细胞分化。它的简单刺激足以触发表皮的分化和然后形成角质层所需的结构的构建。基底层的角质形成细胞中不存在TRPC6。它对于表皮的成熟部分是特异性的。

除了刺激编码角质层形成的基因外，DNA阵列(参见上文1.1)已经揭示了编码TRPC6(提供细胞内钙通量的蛋白质)的mRNA的产生增加。在6小时与溶剂对照相比，与本发明的肽(4ppm)有关的非常显著的增加是×6.05。

原理：

汇合的角质形成细胞加载特异性钙探针。在细胞内游离钙存在下，该分子变得非常发荧光。在显微镜下监测荧光的出现。一旦加载，细胞进行漂洗，然后接受6或15ppm的根据本发明的肽或阳性对照(缓激肽)。

进行方差和学生t检验的研究以判断结果的显著性(每种条件下n＝3)。

结果：

视觉结果表明，根据本发明的肽确实在汇合的角质形成细胞中诱导细胞内钙动员(在细胞与肽接触约30分钟后，在荧光显微镜下可见)。众所周知，这种钙释放机制通过允许角质层要素的协调形成来促进角质形成细胞分化。

1.6/成熟的表观遗传调控：ANCR

ANCR(抗分化非编码RNA)是由855个碱基组成的Lnc-RNA(长非编码RNA)。它对于表皮的内稳态是必要的。它在其基底部分过表达，而相反，在其分化和成熟部分则大大减少。ANCR是涉及表皮再生和表皮屏障形成的复杂机制网络的部分。它在角质形成细胞中的实验耗竭触发了后者的分化和表达表皮成熟的早期和最终标志物：丝聚蛋白、兜甲蛋白、外膜蛋白。这是应用于皮肤屏障形成的表观遗传调控的一个实例。

原理：

在该测试中，汇合的角质形成细胞与根据本发明的肽接触24小时，然后细胞进行漂洗，研磨并提取其RNA，转化为DNA，并然后通过qRT-PCR进行分析。

进行方差和学生t检验的研究，以判断结果的显著性(每种情况n＝4)。

结果：

表7：24h时Lnc-RNA ANCR表达的变化；根据本发明的肽的作用(与对照相比的比率结果)。

这些结果表明根据本发明的肽允许作为表皮分化的表观遗传调节剂的该Lnc-RNA的适度但剂量依赖性且显著的降低。

1.7/桥粒

桥粒形成斑块，使角质形成细胞彼此连接。这些块非常有抵抗力。它们特别是由桥粒芯蛋白形成的。它们允许角蛋白10细丝的细胞内锚固并参与表皮的细胞聚合。

原理：

在接受了含有6ppm的根据本发明的肽的乳霜或安慰剂乳霜的腹部皮肤(女性，白种人，54岁)的切片上搜索桥粒芯蛋白。6天后(每天应用乳霜)，将皮肤冷冻并切片，使用针对该蛋白的抗体寻找桥粒芯蛋白(荧光免疫组织学)。使用荧光显微镜捕获照片并使用合适的软件分析图像。将结果与安慰剂乳霜的结果进行比较。

结果：

表8：在腹部皮肤外植体模型上，第6天桥粒芯蛋白产生的变化；根据本发明的肽的作用(对比对照的比率结果)。

这些结果表明根据本发明的肽有利于桥粒的形成，因为桥粒芯蛋白(桥粒的基本组分)的表达显著增加。

1.8/对脱皮的影响

KLK5(激肽释放酶5)是一种参与角质层更新的酶，允许自然脱皮，从而确保柔和的自然抛光效果(“软抛光”)。

原理：

使用与用于桥粒芯蛋白的那些相同的切片以及相同的方法(荧光免疫组织学)来分析和定量根据本发明的肽对该脱皮标志物的作用。

结果：

表9：在腹部皮肤外植体模型上第6天KLK5产生的变化；根据本发明的肽的作用(对比对照的比率结果)。

皮肤的内稳态除了需要形成有效的皮肤屏障外，还需要通过脱皮来确保角质细胞更新的可能性。用根据本发明的肽观察到KLK5的显著增加，已知其确保了柔和的自然光滑现象。

2/缓和炎症标志物的产生

皮肤承受持续的应激(暴露于UV、烟雾、污染物等)，其中一些引起直接或间接的炎症应答。尽管强度低，但不受控制或持续的炎症应答诱导细胞因子(例如IL-1α、IL-1β、IL-6、TNFα)和脂质(例如PGE2)的产生，以吸引或刺激其他细胞，引起级联反应。如此形成的促炎性微环境改变了皮肤的内稳态，并逐渐改变甚至破坏了细胞和组织的生物分子。还诱导皮肤屏障完整性的破坏。因此，已知炎症的介导物IL-6和PGE-2通过微炎症引起过早衰老现象。另外，敏感性和受刺激的皮肤的特征在于细胞因子、促炎肽(例如IL-1、IL-6)和促炎脂质(例如PGE-2)的异常高分泌。

为了测试活性，将角质形成细胞在温和的应激条件下(应用UVB辐射)进行培养，以模拟皮肤的实验性微炎症。在这种情况下，其分泌组中炎症介导物的显著减少将从皮肤的修复和保护作用的意义上解释。

原理：

使培养中和汇合时的NHK在允许其存活的培养基中与根据本发明的肽(或其溶剂)接触24小时，然后将垫在生理缓冲液中用UVB辐照，并放回与待测试产品接触24小时。在该孵育结束时，通过ELISA测定培养基以了解这些细胞响应辐照而产生的促炎性介导物的量。将结果与溶剂对照+/-辐照进行比较。进行了细胞呼吸测试以评价细胞数量并使结果标准化。

进行方差和学生t检验的研究以判断结果的显著性。

结果：

表10：暴露于UVB的NHK的促炎性介导物的分泌组变化。根据本发明的肽的作用。

这些结果表明根据本发明的肽通过暴露于UVB辐照下的NHK调控促炎性介导物的分泌的非常有趣的作用。这种作用增强了皮肤屏障，特别是对于敏感性和受刺激的皮肤，并减缓了由于暴露于辐射和各种引起微炎症的污染物而引起的皮肤老化。

E)根据本发明的组合物的盖伦性/制备

根据本发明的肽可以与另外的化妆品活性成分一起配制，另外的化妆品活性成分任选地以成分形式或在生产面向消费者的最终化妆品组合物时支持和/或补充活性。该组合物可以以本领域技术人员已知的任何形式或媒介物，尤其是以溶液、分散液、乳剂、糊剂或粉末的形式应用至面部、身体、领口、头皮、头发、睫毛、体毛，单独或预混合地或者单独或作为预混合物输送。

在化妆品中，尤其可以提出在面部、身体、头发和体毛的皮肤护理范围和化妆护理范围内的应用。

这些成分可以根据其功能(一种或多种)，应用的位置(身体、面部、颈部、胸部、手、头发、睫毛、眉毛、体毛等)，所需的最终效果和靶向的消费者而为任意类别，例如是抗氧化剂、张力剂(tensor)、保湿剂、滋养、保护、光滑、重塑、丰盈(脂质填充)、作用于肤色的光泽度、针对眼袋和黑眼圈、抗衰老、抗皱、瘦身、舒缓、肌松弛、抗发红、抗拉伸纹、防晒霜等。

CTFA(“国际化妆品成分词典和手册”(2018年第18版)，由“The Cosmetic,Toiletry,and Fragrance Association,Inc.”，Washington DC出版)描述了多种但不限于通常在皮肤护理和头皮护理工业中使用的化妆品成分，它们适合用作本发明组合物中的另外的成分。

可以提及选自如下的至少一种化合物：维生素B3化合物，诸如烟酰胺或生育酚的化合物，类视黄醇化合物诸如视黄醇，己脒啶(hexamidine)，α-硫辛酸，白藜芦醇或DHEA，透明质酸，肽尤其是N-乙酰基-Tyr-Arg-O-十六烷基、Pal-VGVAPG(SEQ ID NO：3)、Pal-KTTKS(SEQ ID NO：1)、Pal-GHK、Pal-KMO2K、Pal-GQPR(SEQ ID NO：2)和Pal-K(P)HG，它们是广泛用于化妆品或皮肤病学组合物中的活性成分。

在Sederma的商业文献中以及www.sederma.com或www.crodarom.fr可以找到特别有用的其他另外的护肤活性物。

为了增强对表皮和/或角质层的特性的活性，另外的活性剂可以选自包含如下的组：磷脂，各种神经酰胺，鞘氨醇，植物鞘氨醇，鞘糖脂，胆固醇及其衍生物，甾醇(尤其是芥花和大豆的)，脂肪酸(特别是亚油酸、棕榈酸、硫辛酸(lipoic acid)、硫辛酸(thiocticacid))，角鲨烷(特别是橄榄的)，甘油三酸酯(特别是椰子油的)，羊毛脂，羊毛脂的醇，羊毛甾醇，维生素D3，生育酚烟酸酯，各种油(特别是摩洛哥坚果、玫瑰、猴面包树)，抗坏血酸，N-乙酰基半胱氨酸和N-乙酰基-L-丝氨酸，维生素B3化合物(例如烟酰胺和烟酸)，泛醇，假丝聚素(pseudofilaggrin)，精氨酸，丝氨酸，PCA盐(吡咯烷酮羧酸)，积雪草(Centellaasiatica)叶提取物(在羟基积雪草苷(madecassoside)和积雪草皂苷中滴定)，某些植物提取物(野山药的根、栗子、雪松的芽、茄科)，浮游生物和酵母。还可以提及Sederma销售的以下活性成分：Venuceane^TM(嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)的发酵培养基的提取物)，Moist 24^TM(白茅(Imperata cylindrica)根的乙醇酸提取物)，Dermaxyl^TM(神经酰胺2与肽Pal-VGVAPG的联合)，Senestem^TM(长叶车前(Plantago lanceolata)的体外细胞培养提取物)，Ceramide 2^TM(céramide)，Ceramide HO3^TM(羟基神经酰胺)，Optim Hyal^TM(或多或少乙酰化的葡萄糖醛酸寡糖)，Meiritage^TM(阿尔泰柴胡(Bupleurum falcatum)、膜荚黄芪(Astragalus membranaceus)、白术(Atractylodes macrocephala)根的提取物的联合)，Revidrate^TM(苹果酸磷酸肉豆蔻酯)，Pacifeel^TM(紫茉莉(Mirabilis jalapa)的提取物)，Hydronesis^TM(来自西班牙盐球菌(Salinococcus hispanicus)的发酵)，未皂化的sheabutter^TM和Citystem^TM(欧夏至草(Marrubium vulgare)的体外植物细胞培养提取物)。

更一般而言，还可以提及以下商业活性物作为实例：甜菜碱，甘油，Actimoist Bio2^TM(活性有机物)，AquaCacteen^TM(Mibelle AG Cosmetics)，Aquaphyline^TM(Silab)，AquaregulK^TM(Solabia)，Carciline^TM(Greentech)，Codiavelane^TM(Biotech Marine)，Dermaflux^TM(Arch Chemicals,Inc)，Hydra'Flow^TM(Sochibo)，Hydromoist L^TM(Symrise)，RenovHyal^TM(Soliance)，Seamoss^TM(Biotech Marine)，Argireline^TM(来自Lipotec的商品名乙酰基六肽-3)，金钮扣醇(spilanthol)或以商品名Gatuline Expression^TM已知的千日菊(Acmella oleracea)的提取物，以名称Boswellin^TM已知的齿叶乳香树(Boswelliaserrata)的提取物，Deepaline PVB^TM(Seppic)，Syn-AKE^TM(Pentapharm)，Ameliox^TM，Bioxilift^TM(Silab)，PhytoCellTec^TMArgan(Mibelle)，Papilactyl D^TM(Silab)，Preventhelia^TM(Lipotec)或者Sederma销售的以下一种或多种活性成分：Subliskin^TM，Venuceane^TM，Moist 24^TM，Vegesome Moist24^TM，Essenskin^TM，Juvinity^TM，Revidrat^TM，Resistem^TM，Chronodyn^TM，Kombuchka^TM，Chromocare^TM，Calmosensine^TM，Glycokin factorS^TM，Biobustyl^TM，Idealift^TM，Ceramide 2^TM，Ceramide A2^TM，Ceramide HO3^TM，Legance^TM，Intenslim^TM，Prodizia^TM，Beautifeye^TM，PacifeelTM，Zingerslim^TM，Meiritage^TM，Senestem^TM，Sebuless^TM，Majestem^TM，Apiscalp^TM，Rubistem^TM，CitystemTM，Neonyca^TM，NGInsaponifiables de Beurre de Karité^TM，Majestem^TM，Hydronesis^TM和Poretect^TM或它们的混合物。

在可以与根据本发明的肽组合的植物提取物(以常规提取物的形式或通过体外方法制备的)中，可以更特别提及的是以下的提取物：常春藤特别是英格兰常春藤(Hederahelix)、中国柴胡(Bupleurum chinensis)、阿尔泰柴胡(Bupleurum falcatum)、山金车(Arnica montana L)、迷迭香(Rosmarinus officinalis N)、金盏花(Calendulaofficinalis)、鼠尾草(Salvia officinalis L)、人参(Panax ginseng)、银杏(ginkobiloba)、圣约翰草(Hyperycum perforatum)、假叶树(Ruscus aculeatus L)、欧洲绣线菊(旋果蚊子草(Filipendula ulmaria L))、大花Jarva荼(Orthosiphon stamincus benth)、朝鲜蓟(Cynara scolymus)、藻类(Fucus vesiculosus)、桦树(Betula alba)、绿茶、可乐果(Cola nipida)、马栗、竹、积雪草(Centella asiatica)、石楠、黑角菜、柳树、鼠耳草、escine、苍术(cangzhu)、金黄洋甘菊(chrysanthellum indicum)、Armeniacea属的植物、Atractylodis Platicodon、Sinnomenum、牵牛子(Pharbitidis)、千斤拔(Flemingia)、彩叶草属(Coleus)(如C.Forskohlii、C.blumei、C·esquirolii、C.scutellaroides、C.xanthantus和C.Barbatus，如Coleus barbatus的根的提取物)，Ballote的提取物、Guioa、骨碎补(Davallia)、Terminalia、玉蕊属(Barringtonia)、山麻黄属(Trema)、antirobia、伞树科(cecropia)、阿甘树(argania)、山药(dioscoreae)如淮山药(Dioscoreaopposita)或墨西哥山药，阿密茴(Ammi visnaga)的提取物、豨莶(Siegesbeckia)，特别是豨莶草(Siegesbeckia orientalis)，欧石楠(Ericaceae)科的植物提取物，特别是越橘提取物(矮丛蓝莓(Vaccinium angustifollium))或熊果(Arctostaphylos uva ursi)，芦荟(aloe vera)，含固醇(例如，植物固醇)的植物，Manjistha(从茜草属(Rubia)的植物提取，特别是茜草(Rubia cordifolia))和Guggal(从没药属(Commiphora)的植物提取，特别是穆库尔没药(Commiphora Mukul))、可乐树提取物、甘菊、红三叶草提取物、卡瓦胡椒(Pipermethysticum)提取物(来自Sederma的Kava Kava^TM)、假马齿觅(Bacopa monieri)提取物(来自Sederma的Bacocalmine^TM)和海鞭提取物，光果甘草(Glycyrrhiza glabra)的提取物、桑椹、白千层(melaleuca)(茶树)、Larrea divaricata、冬凌草(Rabdosia rubescens)、细小裸藻(Euglena gracilis)、Fibraurea recisa Hirudinea、丛林高粱(ChaparralSorghum)，向日葵提取物，绿花恩南蕃茄(Enantia chlorantha)、Spermacocea属的Mitracarpe、Buchu barosma、散沫花(Lawsonia inermis L.)、Adiantiumcapillus-veneris L.、白屈菜(Chelidonium majus)、丝瓜(Luffa cylindrica)、日本柑橘(柑橘温州变种(Citrus reticulata Blanco var.unshiu))、茶树(Camelia sinensis)、白茅根(Imperata cylindrica)、黄海罌粟(Glaucium Flavum)、地中海桕木(Cupressussempervirens)、多花黄精(Polygonatum multiflorum)、小虫它莲(loveyly hemsleya)、欧洲接骨木(Sambucus nigra)、金甲豆(Phaseolus Iunatus)、百金花属(Centaurium)、巨藻(Macrocystis pyrifera)、特纳草(Turnera Diffusa)、知母(Anemarrhenaasphodeloides)、多毛马齿觅(Portulaca pilosa)、啤酒花(Humulus lupulus)、阿拉比卡咖啡(Coffea arabica)、巴拉圭茶(Ilex paraguariensis)，或心叶球花(Globulariacordifolia)、合欢花(Albizzia julibrissin)、铃兰树(Oxydendron arboretum)、红球姜(Zingimber zerumbetsmith)、膜荚黄(AstragaIus membranaceus)、白术(Atractylodesmacrocephalae)、长叶车前(Plantago Ianceolata)、火绒草(Leontopodium alpinum)、紫茉莉(Mirabilis jalapa)、欧夏至草(Marrubium vulgare)、旱芹(Apium graveolens)或兰花的提取物。

本发明的组合物可以包含一种或多种另外的肽，包括不限于二肽、三肽、四肽、五肽和六肽及其衍生物。根据特定的实施方案，在组合物中，另外的肽的浓度范围是1x10^-7％至20％，优选地1x10^-6％至10％，优选地1x10^-5％至5％重量。本文中术语“肽”是指含有10个氨基酸或更少的肽，其衍生物、异构体以及与其他种类物质如金属离子(例如，铜、锌、锰、镁等)的复合物。术语“肽”是指天然肽和合成肽。还指含有肽的组合物并且其是在自然界中发现的，和/或商业上可购得的。

用于本文的合适的二肽包括但不限于肌肽(βAH)、YR、VW、NF、DF、KT、KC、CK、KP、KK、TT、PA、PM或PP。

用于本文的合适的三肽包括，但不限于RKR、HGG、GKH、GHK、GGH、GHG、KFK、KAvaK、KβAK、KAbuK、KAcaK、KPK、KMOK、KMO₂K(MO₂是双加氧化亚砜甲硫氨酸)、KVK、PPL、PPR、SPR、QPA、LPA或SPA。

用作本文中另外的肽的合适的四肽包括但不限于RSRK(SEQ ID NO:6)、GQPR(SEQID NO:7)、KTAK(SEQ ID NO:8)、KAYK(SEQ ID NO:9)或KFYK(SEQ ID NO:10)。

合适的五肽包括但不限于KTTKS(SEQ ID NO:11)。

合适的六肽包括但不限于GKTTKS(SEQ ID NO:12)和VGVAPG(SEQ ID NO:13)。

根据本发明使用的其他合适的肽可以选自以下非限制性的列表：肽的亲脂性衍生物，优选地棕榈酰(Pal)衍生物或肉豆蔻酰(Myr)，以及上述的金属复合物(例如，三肽HGG的铜复合物)。优选的二肽包括例如N-棕榈酰-β-Ala-His、N-乙酰基-Tyr-Arg-十六烷基酯(Calmosensine^TM，来自Sederma的Idealift^TM)、Pal-RT或Pal-KT(Sederma)。优选的三肽衍生物包括例如Pal-GKH和Pal-GHK(来自Sederma)、HGG的铜衍生物(来自Sigma的Lamin^TM)、Lipospondin(N-反油酰基-KFK)及其保守置换的类似物、N-乙酰基-RKR-NH₂(肽CK+)、N-Biot-GHK(来自Sederma)、Pal-KAvaK、Pal-KβAlaK、Pal-KAbuK、Pal-KAcaK或Pal-KMO₂K(来自Sederma的

)、PalKVK(DSM的Syn-Co11^TM)及其衍生物。

本文还可以引用W02015181688申请中描述的通式X-Pro*-Pro*-Xaa-Y的抗衰老三肽，其中Xaa选自Leu、Arg、Lys、Ala、Ser和Asp，在N末端，X选自H、-CO-R¹和-SO₂-R¹，并且在C末端，Y选自OH、OR¹、NH₂、NHR¹或NR¹R²，R¹和R²彼此独立地选自烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、烷氧基和芳氧基基团，其可以是直链的、支链的、环状的、多环的、不饱和的、羟基化的、羰基化的、磷酸化的和/或硫化的，所述基团在其骨架中可能具有杂原子特别是O、S和/或N，并且Pro*对应于脯氨酸、其类似物或衍生物；包括例如Myr-PPL-OH和Myr-PPR-OH。

本文还可以进一步引用WO2014/080376中公开的通式X-(Xaa₁)n-Pro*-Xaa₂-Y的促着色和/或促-mec二肽和三肽，其中n＝0、1或2，Xaa₁是选自Ala、Val、Met、Leu、Iso、Phe、Pro及其类似物和衍生物的疏水性氨基酸；或选自Ser、Thr、Tyr、Asp、Glu及其类似物和衍生物的极性氨基酸；且当n＝2时，两个氨基酸Xaa₁相同或不同；Xaa₂是选自Ala、Val、Met、Leu、Iso、Phe及其类似物和衍生物的疏水性氨基酸，或选自Arg、Lys、His及其类似物和衍生物的碱性氨基酸；在N末端，X选自H、-CO-R₁和-SO₂-R₁；在C末端，Y选自OH、OR₁、NH₂、NHR₁或NR₁R₂；R₁和R₂彼此独立地选自烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、烷氧基和芳氧基基团，其可以是直链的、支链的、环状的、多环的、饱和的、不饱和的、羟基化的、羰基化的、磷酸化的和/或硫化的，所述基团在其骨架中具有或不具有O、S和/或N杂原子，并且Pro*对应于脯氨酸、其类似物或衍生物；包括例如以下肽Pal-SPR-OH、Pal-PPR-OH、Pal-QPA-OH、Pal-LPAOH、Myr-SPA-OH、Pal-PM-OH、Pal-PA-OH和Pal-PP-OH。

用作根据本发明的另外的肽的合适的四肽衍生物包括，但不限于Pal-GQPR(SEQID NO:2)(来自Sederma)，Ela-KTAK(SEQ ID NO:14)，Ela-KAYK(SEQ ID NO:15)或Ela-KFYK(SEQ ID NO:16)。用作本文的另外的肽的合适的五肽衍生物包括，但不限于Pal-KTTKS(SEQID NO:1)(可作为

从Sederma获得)，Pal-YGGFXaa(SEQ ID NO:17)，其中Xaa是Leu或Pro，或其混合物。

用于本文的合适的六肽衍生物包括，但不限于Pal-VGVAPG(SEQ ID NO:3)，Pal-GKTTKS(SEQ ID NO:18)，Pal-HLDIIXaa其中Xaa是Trp、Phe、Tyr、Tic、7-羟基-Tic或Tpi(SEQIDN0：19)及其衍生物。还可以提及Pal-GHK和Pal-GQPR(SEQ ID NO:2)的混合物(

3000，Sederma)。

商业上可获得的含有三肽或衍生物的优选组合物包括Sederma的Biopeptide-CL^TM、Maxilip^TM、Biobustyl^TM、Procapil^TM和

商业上可获得的优选四肽来源的组合物包括Rigin^TM、Eyeliss^TM、

Reloaded和Matrixyl

其含有50至500ppm的Pal-GQPR(SEQ ID NO:2)和赋形剂，由Sederma提出。

以下销售的肽也可以作为另外的活性成分提及：

-由Pentapharm销售的Vialox^TM(INCI名称＝五肽-3(包含丙氨酸、精氨酸、异亮氨酸、甘氨酸和脯氨酸的合成肽))、Syn-ake^TM(β-Ala-Pro-Dab-NH-Bz1)或Syn-Coll^TM(Pal-Lys-VaI-Lys-OH)；

-由Lipotec销售的Argireline^TM(Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-MH₂(INCI名称＝乙酰基六肽-3)(SEQ ID NO：20)、Leuphasyl^TM(Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu)(SEQ ID NO：21)、Aldenine^TM(Gly-His-Lys)、Trylagen^TM(INCI名称＝假交替单胞菌(Pseudoalteromonas)发酵提取物、水解小麦蛋白、水解大豆蛋白、三肽-10瓜氨酸(瓜氨酸和三肽-10(天冬氨酸、异亮氨酸和赖氨酸组成的合成肽)的反应产物)、三肽-1)、Eyeseryl^TM(Ac-β-Ala-His-Ser-His)(SEQ ID NO:22)、Serilesine^TM(Ser-Ile-Lys-Val-Ala-Val)(SEQ ID NO 23)或Decorinyl^TM(INCI名称：三肽-10瓜氨酸＝瓜氨酸和三肽-10(天冬氨酸、异亮氨酸和赖氨酸组成的合成肽)的反应产物)；

-由Vincience销售的Collaxyl^TM(Gly-Pro-Gln-Gly-Pro-Gln(SEQ ID NO 24))或Quintescine^TM(Cys-Gly)；

-由Les Laboratoires Serobiologiques/Cognis销售的Cytokinol^TMLS(酪蛋白水解产物)；

-由l’lnstitut Européen de Biologie Cellulaire销售的Kollaren^TM(Gly-His-Lys)、IP2000^TM(Pal-Val-Tyr-Val)或Meliprene^TM(INCI名称＝单氟七肽-1：乙酸与包含精氨酸、甘氨酸、谷氨酸、组氨酸、正亮氨酸、P-氟苯丙氨酸和色氨酸的合成肽的反应产物)；

-由Innovations销售的Neutrazen^TM(Pal-His-D-Phe-Arg-NH₂)；或

-由lnfinitec Activos销售的BONT-L-Peptide^TM(INCI名称＝棕榈酰六肽-19：棕榈酸和六肽-19(由天冬酰胺、天冬氨酸、赖氨酸和甲硫氨酸组成的合成肽)的反应产物)、Timp-Peptide^TM(INCI名称＝乙酰基六肽-20：通过六肽-20(由丙氨酸、甘氨酸、赖氨酸、缬氨酸和脯氨酸组成的合成肽)的乙酰基化获得的反应产物或ECM Moduline^TM(INCI名称＝棕榈酰三肽-28：棕榈酸和三肽-28(由精氨酸、赖氨酸和苯丙氨酸组成的合成肽)的反应产物)。

下文描述了根据本发明的不同组合物/制剂以及另外的活性成分的实例。

根据本发明的活性成分如C/点所述，也就是说包含载体化的肽。

通常将这种成分配制为1-5％的范围，优选地3％。

1)乳霜形式，例如面部抗衰老日霜。

其他一种或多种活性成分的实例：

1.保湿/光滑成分，例如：

由Sederma销售的OPTIM HYAL^TM，包含具有类似于透明质酸片段的结构的乙酰化葡糖醛酸寡糖。

2.皮脂调节剂成分，例如：

由Sederma销售的SEBULESS^TM，包含通过体外细胞培养获得的欧丁香(Syringavulgaris)的提取物，其是皮脂调节剂，对肤色进行净化、控油(mattify)和清爽，并且使瑕疵模糊。

由Sederma销售的PORETECT^TM，包含滴定在cylolinopeptide和洋川芎内酯(senkyunolide)中的亚麻油菜籽和西芹(celeri)提取物的组合，为皮肤提供紧致、色调和致密，从而增强随着年龄的增长而被破坏的毛孔保持结构。

3.作用于皮肤/皮肤屏障的弹性特性的成分，例如：

由Sederma销售的IDEALIFT^TM，包含N-乙酰基-酪氨酰基-精氨酰基-O-十六烷基酯脂二肽，通过特别是弹性蛋白刺激对抗面部的松弛并改善对重力的抵抗力。

4.由Sederma销售的DERMAXYL^TM，将神经酰胺2(一种角质层的胶合剂)和Pal-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly(一种棕榈酸酯化的matrikine)组合，其平滑皱纹并修复皮肤屏障。

1)温和的水性血清形式

其他一种或多种活性成分的实例：

1.抗衰老成分，例如：

由Sederma销售的SENESTEM^TM，包含通过长叶车前的体外细胞培养获得的植物细胞，其特别改善了皮肤的粘弹特性并减淡了衰老色素斑点。

2.抗氧化剂成分，例如：

由Sederma销售的MAJESTEM^TM，基于通过体外细胞培养而获得的高山火绒草(Leontopodium alpinum)的植物细胞滴定在绒花酸(Leontopodic acid)中；中和氧化应激(污染，UV辐射)并恢复皮肤张力。

2)凝胶形式

其他一种或多种活性成分的实例：

1.抗污染成分，例如：

由Sederma销售的CITYSTEM^TM，基于体外获得的欧夏至草的植物细胞，具有高浓度的连翘苷B；用于抵御污染攻击：皮肤柔软和光滑，皮肤纹理细化，可见的黑头减少，使皮肤有光泽和纯净。

2.敏感性皮肤的舒缓成分，例如：

由Sederma销售的PACIFEEL^TM，包含紫茉莉的提取物。

3.保湿成分，例如：

由Sederma销售的AQUALANCE^TM，由龙虾肌碱和赤藓糖醇组成的渗透保护性保湿活性成分。

3)用于制作喷雾面膜的凝胶形式

其他一种或多种活性成分的实例：

1.作用于肤色光泽度的成分，例如：

由Sederma销售的EVERMAT^TM，包含富含原小檗碱和齐墩果酸的绿花恩南蕃茄提取物的组合；降低毛孔大小和亮度；细化易长粉刺皮肤的颗粒。

2.具有恢复活力特性的成分，例如：

由Crodarom销售的Fruitliquid^TMKumquat^TM。

4)乳霜形式，用于底妆

其他一种或多种活性成分的实例：

1.作用于眼睛下方的黑眼圈/眼睛轮廓的成分，例如：

由Sederma销售的HALOXYL^TM，是2种matrikine(Pal-GHK和Pal-GQPR)，与N-羟基琥珀酰亚胺和黄酮类物质(白杨素(chrysin))的组合。

由Sederma销售的EYELISS^TM，包含三个组分：橙皮苷甲基查尔酮(hesperidinemethyl chalcone)、缬氨酸-色氨酸(VW)二肽和Pal-GQPR脂肽。

由Sederma销售的PRODIZIA^TM，包含合欢(Albizia julibrissin)的提取物，其通过修复和保护皮肤免受糖化造成的损害来促进疲劳迹象的可见减少：黑眼圈、眼袋、暗沉肤色和憔悴特征。

2.基于一种或多种肽的抗皱/抗衰老成分，例如：Sederma销售的

MATRIXYL 3000^TM、MATRIXYL synthe'6^TM和/或MATRIXYL Morphomics^TM。

F)体内功效测试

被测产品：上述盖仑性部分的E)点的乳霜1)。

原理：

在以下三个补充研究期间，对一定数量的志愿者进行了根据本发明肽的功效评估：

1.第一项安慰剂对照研究，测量不完美肌肤的改善并使用几种补充技术研究不同参数：

·在标准化的照片上进行对瑕疵的评价；

·使用Epsilon^TM设备进行对保湿的图像评价；

·使用彩色相机执行对皮肤光滑的评价；和

·通过在“剥离”(粘附支持物上细胞层的脱离)上的图像分析对角质细胞大小(角质层状态)的评估。

2.通过CLCT临床评价方法(颜色、亮度、清晰度、透明度)对整个面部进行第二项研究，以量化对肤色的感知效果。

3.第三项安慰剂对照研究，旨在通过分析应用的均匀性和自晒黑产品的消失来证明该肽的柔软“抛光”效果。

1/第一项研究

方案

具体纳入标准

这项研究是针对29位中间年龄41岁(30-50岁)的女性组进行的，这些女性的眼部皮肤不完美，也就是说肤色暗淡/疲倦/不整洁(scruffy)和/或皮肤纹理不规则，粗糙皮肤。另一方面，例如酒渣鼻、粉刺或发红等瑕疵已被排除。

志愿者必须观察使用单个保湿剂的1个月的洗掉期并排除任何磨砂膏(scrub)或面膜类型的美容行为以及任何强烈的阳光照射。

研究类型、持续时间、应用

这项研究是在面部和前臂上以单盲进行的。志愿者在6周早晚应用根据本发明的乳霜和对侧安慰剂乳霜。

根据以下内容总结了研究的概要

统计

使用学生t检验或如有需要的非参数Wilcoxon检验执行统计研究。对匹配的系列进行了双向检验。对于专家评估，使用了Khi²检验。

方法和结果

瑕疵评价

在T0和T6周时，使用照相台使用高清数码相机，特定的照明和志愿者约束***拍摄标准化的照片。对面部的位置，照片和照明设置进行标准化和控制使得随时间推移可重复。

由5位专家评审员组成的小组对获得的照片进行鉴别。对于每位志愿者，专家们目视检查处理前后的图片，并对以下陈述发表意见：“肤色得到改善”，即肤色更均匀，皮肤更光滑，瑕疵更少。

结果如下。

**与不赞同意见相比有显著变化，p<0.01/

$与安慰剂相比具有显著差异，p<0.05。

根据本发明的乳霜的应用以54％的赞同意见相对于3％的不赞同意见带来了可见的并显著的肤色改善。相反，安慰剂的使用只有36％的正面和8％的负面，明显且显著地不同(p<0.05)。

保湿评价

使用Epsilon^TM E100设备(来自Biox)。它的区别在于不仅提供单个值，而且提供超过几千个点的平均值，并且还提供保湿的图像(“电容成像”)。得益于其电容式传感器具有空间分辨率为50μm，因此图像面积是12.8x15mm，相当于76800像素。每个像素给出0到85的皮肤介电常数的ε值，基准是：空气＝1，水＝80。测量深度达到约50微米。除了图像目的外，此2D测量还可以获取有关皮肤形貌的信息，并可以扩展到其均匀性的信息，或甚至潜在地其充盈性(suppleness)的信息，因为已知保湿改善此参数。

表11：前臂上的保湿变化(n＝3次测量，25位志愿者)

*针对安慰剂：非参数检验，单向；p<0.1双向。NSD：非显著性差异

在应用根据本发明的乳霜6周之后，保湿值增加了+25.8％。同时，安慰剂的应用导致+11.3％的更小增加(由于手臂通常不用乳霜，因此安慰剂具有作用是正常的)。

使用Epsilon^TM获得的图像也得到了5位专家评审员小组的鉴别。

对于每个志愿者，在用根据本发明的乳霜或用安慰剂乳霜处理后，专家们肉眼检查照片并选择哪个图像具有最大的均匀性。

表12：关于皮肤均匀性的赞同或不赞同意见的％(n＝25位志愿者，5位评审员)

**与“使用安慰剂更均匀的皮肤”类别相关的显著变化，p<0.01。

在图像上，每个黑色区域不提供信息，而每个像素提供一个。保湿的分布在两个图像之间变化：与已接受根据本发明的乳霜的部位相对应的图像比与已接受安慰剂的部位相对应的图像在像素上更“浓密”。这指示皮肤除了可以更好地补水外，还变得更光滑和可能变得更充盈。

光滑评价

彩色相机用于该评价。这是一种使用具有偏光的漫射和恒定LED照明以避免任何发亮(shine)的照相机。它具有图像校正算法，可以进行即时颜色校准和图像均匀化(消除边缘的阴影)。其测量范围为16x 12mm，分辨率为1000万个像素。它具有x50变焦，可以看到小于20μm的结构。此外，得益于基于立体测光技术的***，相机可以在不同的照明条件下记录几张图像，从而可以3D重建图像并分析皮肤的形貌。

这最后一项功能用于研究根据本发明的乳霜并且评价了形貌的两个参数：微起伏(microrelief)的复杂性和深度。

表13：前臂上微起伏的形貌变化(光滑效果)(2个部位的平均值，28位志愿者)

*针对安慰剂：参数单向检验；p<0.08和0.05双向

首先，安慰剂具有光滑作用(每个参数是-8.5％和-14.3％)，这可以如之前由在此部位不寻常的乳霜摄入来解释。

然而，根据本发明的乳霜的作用广泛且显著更高，无论对于微起伏的深度(-12.8％，p<0.04对比安慰剂)或其复杂性(-20.9％，p<0.05对比安慰剂)。

角质细胞大小的评价

几项研究显示在微应激条件下，角质细胞的大小减小，这与导致角质细胞有些不成熟的表皮比率增加有关。

在T0和T6周，使用粘合剂以标准化方式从志愿者皮肤中收获角质细胞，然后用荧光试剂标记以在显微镜下显示并量化其表面。按照志愿者和案例对约300个角质细胞进行了定量。

表14：面部上角质细胞大小的变化(n＝300个角质细胞的平均，29位志愿者)

这些结果表明在用根据本发明的乳霜处理的一侧，在T0和T6周之间角质细胞的大小没有非常显著的变化。在安慰剂一侧观察到该大小的减小(-2.4％，p<0.01)。

该测试是在秋天这个天气和温度有很多变化的季节进行的。志愿者的皮肤很可能将这些变化“记录”为应激，导致角质细胞大小略有减少。根据本发明的乳霜的使用允许维持表皮上部的内稳态，并因此使其舒缓，特别是得益于其减少促炎性介导物并增强皮肤屏障的特性。

2/第二项研究

方案

具体纳入标准

这项研究是在26位中间年龄36岁(22-44岁)的女性组上进行的，她们肤色暗淡(基于Spincontrol Laboratory CLCT量表(颜色、亮度、清晰度、透明度))和具有I至III原型的皮肤。

研究类型、持续时间、应用

这项研究是在面部上进行的。志愿者在6周早晚应用根据本发明的乳霜。

统计

对于CLCT指数，使用相对于理论平均值的单向学生t检验。在志愿者进行自我评估的情况下，使用了Khi²检验。

方法和结果

1/通过CLCT的肤色评价

为了评价肤色，CLCT方法基于训练有素的评审员针对肤色的7个描述特征的视觉分析。

-肤色由表征白种人肤色的4个色度定义：粉红色、橄榄色、米色、淡粉色；

-亮度定义为面部突出区域上“光斑”的强度；

-清晰度是皮肤颜色一致性和纹理规则性(均匀性)的综合；和

-透明度的特征在于能够看透皮肤并反映其细腻度的能力。

待评价的受试者坐在两个“日光”灯之间并穿斗篷和黑色charlotte以避免任何外部影响。评审员们从色卡中评价四种颜色，而其他三个描述特征则以0到100的模拟量表进行评级。

从7个描述特征中计算出“i”指数，然后通过使delta i(T6)-i(T0)计算“I”CLCT指数。如果该指数大于5，则可以认为产品对肤色的光泽度有显著可能性是有效的。

表15：面部上肤色感觉的变化(n＝3位评审员，26位志愿者)

应用根据本发明的乳霜6周使得CLCT指数变化了+8.4个单位(+33.5％，p<0.01对比T0)，这使其成为用于肤色光泽度的有效产品。改善最显著的描述特征是橄榄色(减少25％)、米色(减少4％)和淡粉色(改善16％，所有对比T0 p<0.01)。

通过自我评估的肤色评价

在应用根据本发明的乳霜的6周结束时，志愿者就几点给出了她们的意见。

结果表明该产品具有很好的感受，志愿者发现该产品令人愉悦(68％)，吸收迅速(71％)且不干扰化妆(84％)。对面部的效果是有意义的，皮肤得到补水且减少粗糙程度(68％和69％)，但特别是皮肤感觉不那么暗淡(59％)。所有这些都有助于拥有更美丽的皮肤(66％)和更好的外观(62％)。

3/第三项研究

方案

具体纳入标准

这项研究是在20位年龄为37岁(20-49岁)具有I至III原型皮肤的女性组上执行的。

研究类型、持续时间、应用

这项研究是以单盲形式在胳膊上进行的。志愿者在6周早晚应用根据本发明的乳霜和对侧的安慰剂乳霜。

统计

使用Khi²检验进行统计研究。

方法和结果

通过监测DHA染色(二十二碳六烯酸)评价“软抛光”的效果

这项研究基于以下事实：在自晒黑剂应用之前，需要对皮肤执行非常柔软的抛光或皮肤脱落(peeling)以使其更光滑，并因此确保更一致和持久地使用皮肤自晒黑剂。

为了证明根据本发明的乳霜的“软抛光”效果，将乳霜应用6周，然后对区域给予DHA(常规的自晒黑剂)，然后通过用C-Cube^TM相机采集跟踪着色和随后褪色。

为了评价对T2天和T7天之间褪色的强度和均匀性的影响，由专家组评价通过C-Cube^TM相机采集获得的图像。对于每位志愿者，专家们必须确定哪个图像对(根据本发明的面霜或安慰剂面霜)在褪色(较少变色)和/或均匀性(较少褐色小斑块)方面表现出最可接受的演变。

结果显示非常明显地偏向已经接受根据本发明的乳霜的位置，以63％的投票对比安慰剂25％的投票。该结果具有统计学显著性，p<0.01。因此，使用根据本发明的乳霜准备皮肤导致角质层的柔软自然光滑，可与物理脱落相比。

序列表

<110> SEDERMA

<120> 用于表皮处理的肽的用途

<130> KTFK PCT

<150> FR1852950

<151> 2018-04-05

<160> 24

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> 通过N末端上的棕榈酰基链酰胺化

<400> 1

Lys Thr Thr Lys Ser

1 5

<210> 2

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> 通过N末端上的棕榈酰基链酰胺化

<400> 2

Gly Gln Pro Arg

1

<210> 3

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> 通过N末端上的棕榈酰基链酰胺化

<400> 3

Val Gly Val Ala Pro Gly

1 5

<210> 4

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (1)..(1)

<223> Xaa是赖氨酸、鸟氨酸、二氨基丁酸、二氨基丙酸或其羟基化衍生物

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> X = -CO-R1或-SO2-R1或biot基团, R1 = C1-C24基团

<220>

<221> MOD_RES

<222> (4)..(4)

<223> Z = -OR1, -NH2, -NHR1或-NR1R2 ; R1, R2 = C1-C24基团

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<400> 4

Xaa Thr Phe Xaa

1

<210> 5

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> 通过N末端上的棕榈酰基链酰胺化

<400> 5

Lys Thr Phe Lys

1

<210> 6

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 6

Arg Ser Arg Lys

1

<210> 7

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 7

Gly Gln Pro Arg

1

<210> 8

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 8

Lys Thr Ala Lys

1

<210> 9

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 9

Lys Ala Tyr Lys

1

<210> 10

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 10

Lys Phe Tyr Lys

1

<210> 11

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 11

Lys Thr Thr Lys Ser

1 5

<210> 12

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 12

Gly Lys Thr Thr Lys Ser

1 5

<210> 13

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 13

Val Gly Val Ala Pro Gly

1 5

<210> 14

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> 通过N末端上的反油酰基链酰胺化

<400> 14

Lys Thr Ala Lys

1

<210> 15

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> 通过N末端上的反油酰基链酰胺化

<400> 15

Lys Ala Tyr Lys

1

<210> 16

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> 通过N末端上的反油酰基链酰胺化

<400> 16

Lys Phe Tyr Lys

1

<210> 17

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> 通过N末端上的棕榈酰基链酰胺化

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa是脯氨酸P或亮氨酸L.

<400> 17

Tyr Gly Gly Phe Xaa

1 5

<210> 18

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> 通过N末端上的棕榈酰基链酰胺化

<400> 18

Gly Lys Thr Thr Lys Ser

1 5

<210> 19

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> 通过N末端上的棕榈酰基链酰胺化

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (6)..(6)

<223> Xaa是Trp, Phe, Tyr, Tic, 7-羟基-Tic或Tpi

<400> 19

His Leu Asp Ile Ile Xaa

1 5

<210> 20

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<220>

<221> MOD_RES

<222> (1)..(1)

<223> N末端上的酰胺化

<400> 20

Glu Glu Met Gln Arg Arg

1 5

<210> 21

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 21

Tyr Ala Gly Phe Leu

1 5

<210> 22

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 22

Ala His Ser His

1

<210> 23

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 23

Ser Ile Lys Val Ala Val

1 5

<210> 24

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 24

Gly Pro Gln Gly Pro Gln

1 5

Claims

1.具有以下通式1的肽用于非治疗性美容处理以保持或改善表皮状况的用途：

X-(Xaa)_nK*TFK*-(Xaa)_m-Z

在通式1中：

·K*选自包含赖氨酸K、鸟氨酸、二氨基丁酸或二氨基丙酸或其羟基化衍生物的组，两个K*是相同的或不同的；

·在N末端，X选自H、-CO-R¹、-SO₂-R¹或生物素酰基基团；

·在C末端，Z选自OH、OR¹、NH₂、NHR¹或NR¹R²；和

·其中R¹和R²彼此独立地选自烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、烷氧基、糖和芳氧基基团，其可以是直链的、支链的、环状的、多环的、不饱和的、羟基化的、羰基化的、磷酸化的和/或硫，所述基团具有1至24个碳原子并且在其主链中可以具有一个或多个O、S和/或N杂原子。

2.根据权利要求1的用途，其特征在于所述处理旨在使皮肤光滑和/或改善其保湿和/或改善肤色的光泽度和均匀性。

3.根据权利要求1或2的用途，其特征在于所述处理改善和/或增强表皮屏障。

4.根据前述权利要求中任一项的用途，其特征在于肽能够保护皮肤免受外部环境的分子和侵害(光辐射、污染物等)，特别是敏感性皮肤。

5.根据前述权利要求中任一项的用途，其特征在于肽促进角质层的脱皮和皮肤的自然脱落。

6.根据前述权利要求中任一项的用途，其特征在于肽能够刺激α-晶体蛋白的产生以保护皮肤免受UV、炎性和氧化型侵害。

7.根据前述权利要求中任一项的用途，其特征在于肽在油蜡表面活性剂微乳液和水中被溶剂化以减慢其穿透并使其在皮肤表面在表皮水平更可生物利用。

8.根据前述权利要求中任一项的用途，以在应用自晒黑活性物之前实现自然的柔软光滑。

9.根据权利要求8的用途，其特征在于在应用自晒黑活性物之前，将肽应用至少3天的时间段。

10.化妆品或皮肤病学成分，包含通式1的肽：

X-(Xaa)_nK*TFK*-(Xaa)_m-Z

在通式1中：

·在N末端，X选自H、-CO-R¹、-SO₂-R¹或生物素酰基基团；

·在C末端，Z选自OH、OR¹、NH₂、NHR¹或NR¹R²；和

·R¹和R²彼此独立地选自烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、烷氧基、糖和芳氧基基团，其可以是直链的、支链的、环状的、多环的、不饱和的、羟基化的、羰基化的、磷酸化的和/或硫，所述基团具有1至24个碳原子并且在其主链中可以具有一个或多个杂原子O、S和/或N，

11.根据权利要求10的成分，其特征在于所述媒介物是肽在其中被溶剂化的油蜡表面活性剂微乳液和水。

12.化妆品或皮肤病学组合物，其特征在于它包含根据权利要求10或11之一的活性成分。

13.用于执行自晒黑美容处理的试剂盒，包括在分别的隔室内的：

a)根据权利要求12的组合物或在生理上可接受的介质中包含以下通式1的肽的组合物：

X-(Xaa)_nK*TFK*-(Xaa)_m-Z

其中：

·在N末端，X选自H、-CO-R¹、-SO₂-R¹或生物素酰基基团；

·在C末端，Z选自OH、OR¹、NH₂、NHR¹或NR¹R²；和

b)包含在生理上可接受的介质中的自晒黑活性剂的组合物。

14.根据权利要求1至9之一的用途，或根据权利要求10或11的成分，或根据权利要求13的试剂盒，其特征在于K*是赖氨酸K或鸟氨酸。

15.根据权利要求1至9或14之一的用途，或根据权利要求10或11或14的成分，或根据权利要求13或14的试剂盒，其特征在于n和m彼此独立地是0或1或2。

16.根据权利要求1至9之一的用途，或根据权利要求10或11的成分，或根据权利要求13的试剂盒，其特征在于肽在N-末端位置或在C-末端位置被修饰，排除其中X＝H和Z＝OH的情况。

17.根据权利要求16的用途或成分或试剂盒，其特征在于R¹和/或R²是1至24个碳原子的烷基链。

18.根据权利要求16或17的用途或成分或试剂盒，其特征在于X是酰基基团CO-R¹和Z选自OH、OMe、OEt和NH₂。

19.根据权利要求1至9或14至18之一的用途，或根据权利要求10或11或14至18的成分，或根据权利要求13至18的试剂盒，其特征在于肽是Pal-KTFK(SEQ ID NO 5)。

20.以下通式1的肽：

X-(Xaa)_nK*TFK*-(Xaa)_m-Z

其中：

·在N末端，X选自H、-CO-R¹、-SO₂-R¹或生物素酰基基团；

·在C末端，Z选自OH、OR¹、NH₂、NHR¹或NR¹R²；和

·其中R¹和R²彼此独立地选自烷基、芳基、芳烷基、烷芳基、烷氧基、糖和芳氧基基团，其可以是直链的、支链的、环状的、多环的、不饱和的、羟基化的、羰基化的、磷酸化的和/或硫，所述基团具有1至24个碳原子并且在其主链中可以具有一个或多个O、S和/或N杂原子，排除肽Pal-KTFK-OH和Ela-KTFK-OH。

21.根据权利要求20的肽，其中K*是赖氨酸K或鸟氨酸。

22.根据权利要求20或21的肽，其中n和m彼此独立地是0或1或2。

23.根据权利要求20至22中任一项的肽，其中n和m彼此独立地是0或1或2。

24.根据权利要求20至23中任一项的肽，其中肽在N-末端位置或在C-末端位置被修饰，排除其中X＝H和Z＝OH的情况。

25.根据权利要求20至24中任一项的肽，其中R¹和/或R²是1至24个碳原子的烷基链。

26.根据权利要求20至25中任一项的肽，其中X是酰基基团CO-R¹，和Z选自OH、OMe、OEt和NH₂。