CN111896353A - 一种小组织块脱水方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种小组织块脱水方法，应用于动物组织石蜡块制备过程；由95%乙醇加入5%甲醇后发生甲基化变性制成IMS，99%IMS I道，99%IMS II道，99%IMS III道，每道中组织浸没1 h；二甲苯组织透明、浸蜡、包埋、切片、烤片、烘片以及苏木素（染色细胞核为蓝色）伊红（染色细胞浆为粉红色）染色；通过改进脱水试剂，并减少缸数，降低科研成本，并且对小块组织的脱水以达到更稳定的效果。
Description
技术领域
本发明属于组织块脱水领域，具体涉及一种小组织块脱水方法。
背景技术
现有的用于组织脱水的试剂通常使用梯度乙醇，通过无水乙醇和去离子水进行配置，从低浓度到高浓度：80%乙醇I道，90%乙醇I道，95%乙醇I道，95%乙醇II道，100%乙醇I道，100%乙醇II道。组织在每道试剂浸没1个小时以达到脱水效果。但对于小块组织，这样的脱水程序通常会出现过度脱水，组织变脆，切片时难以成型等困难。因此，多数学者会通过减少乙醇缸和/或减少组织的浸没时间来调整，然而费时费力，却难以得到理想效果。
发明内容
解决的技术问题：针对现有技术中存在的过度脱水，组织变脆，切片时难以成型，使用梯度乙醇进行组织脱水的方案不能广泛使用于从小体积到较大体积的动物组织/器官，尤其是小块组织的脱水优化存在很大的困难，不容易达到理想脱水效果；乙醇缸数较多，因其易挥发需时常补充或更换，以上缺点会造成科研时间和物质成本的增加等技术问题，本发明目的为提供一种小组织块脱水方法。
技术方案：
一种小组织块脱水方法，步骤为：
第一步，配置IMS：由95% 乙醇加入5%甲醇后发生甲基化变性制成工业甲基化乙醇Industrial Methylated Spirits，IMS；
第二步，小块组织脱水： 99%IMS I 道，99%IMS II 道，99%IMS III 道，每道中组织浸没1 h；
第三步：二甲苯组织透明、浸蜡、包埋、切片、烤片、烘片以及苏木素、伊红染色。
进一步的，所述二甲苯组织透明具体步骤为：二甲苯I 道15分钟，二甲苯II 道15分钟。
进一步的，所述浸蜡具体步骤为：石蜡I 道30分钟，石蜡II 道30分钟，石蜡III道30分钟。
进一步的，所述包埋具体步骤为：使用自动包埋机，将组织块切面朝下放置于金属框凹槽中，出蜡包埋住组织块，上方放入包埋盒，继续出蜡直至与包埋盒上方平齐，将金属框及包埋盒一起移至冷冻台，组织块完全凝固后移除金属框，包埋结束。
进一步的，所述切片具体步骤为：将包埋后的组织石蜡块置于包埋机上，先使用粗调约20微米厚度修片，组织块暴露后，调节切片厚度为4微米，继续切片，使用镊子轻轻夹取切片的石蜡边缘，放置于42度水浴锅中展片，在将载玻片伸入水面以下并靠近组织切片后慢慢使其贴附于玻片。
进一步的，所述烤片具体步骤为：将以上贴附组织切片的载玻片置于烤片机，60度烤片1小时。
进一步的，所述烘片具体步骤为：将烤后切片置于56度烘箱12小时。
进一步的，所述苏木素、伊红染色具体步骤为：将石蜡切片依次放置于二甲苯I道、二甲苯II 道中脱蜡，各10分钟，然后依次浸入100%乙醇、90％乙醇、80％乙醇、70％乙醇，各为1分钟， 流水冲洗玻片1分钟，过蒸馏水后于苏木素染液染色5分钟， 苏木素染色细胞核为蓝色，流水冲洗1分钟后置于1%盐酸酒精分化数秒， 迅速入水冲洗，饱和碳酸锂蓝化1-60秒， 流水冲洗1分钟，于80%乙醇1-60秒至细胞核返蓝，置伊红染色液1分钟，伊红染色细胞浆为粉红色，依次经95%乙醇I道、95%乙醇II 道、无水乙醇I道、无水乙醇II 道、无水乙醇III道和无水乙醇IV道脱水数秒，放入二甲苯中浸泡， 封片：擦去切片周围多余的二甲苯，勿使切片干涸，快速滴加适量中性树胶，加盖玻片封固。
有益效果：
1、IMS用于小块组织脱水效果更可靠、稳定，大大增加了后续切片的成功率及实验效率。
2、较传统的脱水试剂相比，由于使用的缸数较少和甲醇的加入使得试剂成本降低。
附图说明：图1为本申请脱水方法与传统脱水方法染色后显微镜视图。
具体实施方式
以下通过实施例说明本发明的具体步骤，但不受实施例限制。
在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
在下面结合具体实施例并参照数据进一步详细描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。
对比例1
小鼠1个肾脏的1/8，80%乙醇I道，90%乙醇I道，95%乙醇I道，95%乙醇II道，100%乙醇I道，100%乙醇II道。
随后对脱水组织进行了后续相同的二甲苯组织透明、浸蜡、包埋、切片、烤片、烘片以及苏木素（染色细胞核为蓝色）伊红（染色细胞浆为粉红色）染色。重复三次。
实施例1
一种小组织块脱水方法，步骤为：
第一步，配置IMS：由95% 乙醇加入5%甲醇后发生甲基化变性制成工业甲基化乙醇Industrial Methylated Spirits，IMS；
第二步，小块组织脱水：同一只小鼠的同一侧肾脏的1/8，99%IMS I 道，99%IMS II 道，99%IMS III 道，每道中组织浸没1 h；
第三步：二甲苯组织透明、浸蜡、包埋、切片、烤片、烘片以及苏木素、伊红染色。
所述二甲苯组织透明、浸蜡、包埋、切片、烤片、烘片以及苏木素、伊红染色具体步骤为：
二甲苯组织透明具体步骤为：二甲苯I 道15分钟，二甲苯II 道15分钟。
浸蜡具体步骤为：石蜡I 道30分钟，石蜡II 道30分钟，石蜡III道30分钟。
包埋具体步骤为：使用自动包埋机，将组织块切面朝下放置于金属框凹槽中，出蜡包埋住组织块，上方放入包埋盒，继续出蜡直至与包埋盒上方平齐。将金属框及包埋盒一起移至冷冻台，组织块完全凝固后移除金属框，包埋结束。
切片具体步骤为：将包埋后的组织石蜡块置于包埋机上，先使用粗调约20微米厚度修片，组织块暴露后，调节切片厚度为4微米，继续切片，使用镊子轻轻夹取切片的石蜡边缘，放置于42度水浴锅中展片，在将载玻片伸入水面以下并靠近组织切片后慢慢使其贴附于玻片。
烤片具体步骤为：将以上贴附组织切片的载玻片置于烤片机，60度烤片1小时。
烘片具体步骤为：将烤后切片置于56度烘箱12小时。
苏木素、伊红染色具体步骤为：将石蜡切片依次放置于二甲苯I道、二甲苯II 道中脱蜡，各10分钟，然后依次浸入100%乙醇、90％乙醇、80％乙醇、70％乙醇，各为1分钟， 流水冲洗玻片1分钟，过蒸馏水后于苏木素染液染色5分钟， 苏木素染色细胞核为蓝色，流水冲洗1分钟后置于1%盐酸酒精分化数秒， 迅速入水冲洗，饱和碳酸锂蓝化1-60秒， 流水冲洗1分钟，于80%乙醇1-60秒至细胞核返蓝，置伊红染色液1分钟，伊红染色细胞浆为粉红色，依次经95%乙醇I道、95%乙醇II 道、无水乙醇I道、无水乙醇II 道、无水乙醇III道和无水乙醇IV道脱水数秒，放入二甲苯中浸泡， 封片：擦去切片周围多余的二甲苯，勿使切片干涸，快速滴加适量中性树胶，加盖玻片封固。
如图1所示，使用本发明方法脱水，切片厚度均一，染色均匀，组织结构清晰；而使用传统方法脱水的组织较难切片，导致组织厚薄不一，表现为染色的不均一性，并有组织结构不清晰的现象。
Claims (8)
1.一种小组织块脱水方法，其特征在于步骤为：
第一步，配置IMS：由95% 乙醇加入5%甲醇后发生甲基化变性制成工业甲基化乙醇Industrial Methylated Spirits，IMS；
第二步，小块组织脱水： 99%IMS I 道，99%IMS II 道，99%IMS III 道，每道中组织浸没1 h；
第三步：二甲苯组织透明、浸蜡、包埋、切片、烤片、烘片以及苏木素、伊红染色。
2.根据权利要求1所述的一种小组织块脱水方法，其特征在于：所述二甲苯组织透明具体步骤为：二甲苯I 道15分钟，二甲苯II 道15分钟。
3.根据权利要求1所述的一种小组织块脱水方法，其特征在于：所述浸蜡具体步骤为：石蜡I 道30分钟，石蜡II 道30分钟，石蜡III道30分钟。
4.根据权利要求1所述的一种小组织块脱水方法，其特征在于：所述包埋具体步骤为：使用自动包埋机，将组织块切面朝下放置于金属框凹槽中，出蜡包埋住组织块，上方放入包埋盒，继续出蜡直至与包埋盒上方平齐，将金属框及包埋盒一起移至冷冻台，组织块完全凝固后移除金属框，包埋结束。
5.根据权利要求1所述的一种小组织块脱水方法，其特征在于：所述切片具体步骤为：将包埋后的组织石蜡块置于包埋机上，先使用粗调约20微米厚度修片，组织块暴露后，调节切片厚度为4微米，继续切片，使用镊子轻轻夹取切片的石蜡边缘，放置于42度水浴锅中展片，在将载玻片伸入水面以下并靠近组织切片后慢慢使其贴附于玻片。
6.根据权利要求1所述的一种小组织块脱水方法，其特征在于：所述烤片具体步骤为：将以上贴附组织切片的载玻片置于烤片机，60度烤片1小时。
7.根据权利要求1所述的一种小组织块脱水方法，其特征在于：所述烘片具体步骤为：将烤后切片置于56度烘箱12小时。
8.根据权利要求1所述的一种小组织块脱水方法，其特征在于：所述苏木素、伊红染色具体步骤为：将石蜡切片依次放置于二甲苯I道、二甲苯II 道中脱蜡，各10分钟，然后依次浸入100%乙醇、90％乙醇、80％乙醇、70％乙醇，各为1分钟， 流水冲洗玻片1分钟，过蒸馏水后于苏木素染液染色5分钟， 苏木素染色细胞核为蓝色，流水冲洗1分钟后置于1%盐酸酒精分化数秒， 迅速入水冲洗，饱和碳酸锂蓝化1-60秒， 流水冲洗1分钟，于80%乙醇1-60秒至细胞核返蓝，置伊红染色液1分钟，伊红染色细胞浆为粉红色，依次经95%乙醇I道、95%乙醇II 道、无水乙醇I道、无水乙醇II 道、无水乙醇III道和无水乙醇
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20201106 |
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