CN111869671B

CN111869671B - 三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物在抗植物病原菌中的应用

Info

Publication number: CN111869671B
Application number: CN202010896976.7A
Authority: CN
Inventors: 周学明; 林芳霞; 杨静雨; 陈光英; 宋鑫明; 李小宝
Original assignee: Hainan Normal University
Current assignee: Hainan Normal University
Priority date: 2020-08-31
Filing date: 2020-08-31
Publication date: 2021-09-14
Anticipated expiration: 2040-08-31
Also published as: CN111869671A

Abstract

本发明公开了三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物在抗植物病原菌中的应用，所述的三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物结构式如下所示，其中R₁、R₂、R₃、R₄分别独立选自为‑H或3,4,5‑三羟基苯甲酸。本发明首次发现了三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物具有显著且广谱抗植物病原菌的活性，可用于制备抗植物病原菌的药物。

Description

三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物在抗植物病原菌中的应用

技术领域

本发明涉及植物化学技术领域，具体涉及一种从互叶白千层叶子中提取分离的三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物在抗植物病原菌中的应用。

背景技术

互叶白千层(学名：Melaleuca alternifolia(Maiden&Betche)Cheel)是桃金娘科白千层属植物。原产于澳大利亚南纬23.5°沿海地区及其北方领域的北部等地区。目前，中国海南、广东、广西、重庆等地有栽培。互叶白千层是经济价值较高的经济作物，其新鲜枝叶可提取精油，称茶树油。它可以高效、无毒、无刺激地杀死人体皮肤表面的真菌与细菌，并对某些病毒也有抑制作用，因而在医药、食品防腐、化妆护肤及保健品等方面广泛应用。目前，未见从互叶白千层叶子中提取分离的三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物在抗植物病原菌活性方面的报道。

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明的目的是提供一种从互叶白千层中提取分离的三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物在抗植物病原菌中的应用。

本发明采用的技术方案如下：

三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物在抗植物病原菌中的应用，所述的三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物结构式如下：

其中R₁、R₂、R₃、R₄分别独立选自为-H或3,4,5-三羟基苯甲酸。

优选的结构之一是，R₁为3,4,5-三羟基苯甲酸，R₂为3,4,5-三羟基苯甲酸，R₃为-H，R₄为-H。

优选的结构之二是，R₁为3,4,5-三羟基苯甲酸，R₂为-H，R₃为-H，R₄为-H。

本发明所述植物病原菌为细菌，更优选为甘蓝黑斑病病原菌、烟草黑胫病病原菌、辣椒炭疽病病原菌、水稻胡麻叶病病原菌、金桔沙皮病病原菌、甘蔗凤梨病病原菌、玉米大斑病病原菌、茶轮斑病病原菌或贡柑链格。

本发明取得的有益效果：

本发明首次发现了三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物具有抗植物病原真菌的活性，可用于制备抗植物病原真菌的药物。

附图说明

图1：化合物1结构式；

图2：化合物2结构式。

具体实施方式

为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。

实施例1：

单萜苷类化合物的制备：

(1)取互叶白千层枝叶粉末3Kg，用70％v/v的乙醇浸提3次每次7天，得到提取液，将提取液减压浓缩成膏状，得到互叶白千层提取物320g；

(2)将互叶白千层提取物用水稀释成悬浮液，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液浓缩成浸膏，进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯混合溶剂(100:0―0:100,V/V)及乙酸乙酯-甲醇混合溶剂(100:0―0:100,V/V)按极性递增进行硅胶柱层析(200～300目)，并按每次约500mL收集馏分。通过TLC检测(以氯仿体积百分数为10％的氯仿-甲醇混合溶剂为展开剂)合并相似流分分成8个组分，即Fr.1―8。Fr.5进行葡聚糖凝胶柱层析(Sephadex LH-20)，洗脱剂为氯仿-甲醇(50:50,V/V)；再分别用高效液相制备，洗脱剂为体积百分数30％的乙腈水，得到化合物1(8mg)以及化合物2(10mg)。

2个化合物的结构鉴定结果如下：

化合物1：为白色粉末状，旋光度为

HR-ESI-MS m/z635.1988[M-H]^-，结合¹H-NMR和¹³C NMR可知分子式为C₃₀H₃₆O₁₅，计算不饱和度为13。根据¹H,¹³C-NMR和DEPT可知化合物中由一个葡萄糖，两个3,4,5-三羟基苯甲酸和一个单萜组成。根据HMBC可知：葡萄糖的4号和6号位的氢分别与两个3,4,5-三羟基苯甲酸的羧基碳相关说明两个两个3,4,5-三羟基苯甲酸都是通过酯键分别连在葡萄糖的4号位和6号位；此外，葡萄糖1号位的氢和单萜2号位的碳相关说明单萜是通过醚键连在葡萄糖的1号位。由此可知化合物的结构如图1所示。化合物1的¹H-NMR和¹³C-NMR数据见表1。

表1.化合物1的氢谱与碳谱数据.

化合物2：同为白色粉末。根据¹H，¹³CNMR数据与化合物1非常相似，只是缺少一个3,4,5-三羟基苯甲酸的信号。由此可知化合物1同为三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物。化合物2的结构式如图2所示。

试验例1：药理活性实验

植物病原真菌是农作物主要危害之一，是造成农业损失的主要原因之一。本发明通过检测化合物1以及化合物2对植物病原真菌的抑制作用，发现这一类化合物具有较好的抗植物病原真菌的抑制活性。

试验方法：微量稀释法。一般使用96孔微量稀释板，其孔底呈U型，每孔容量0.20-0.30mL本法操作较方便，且培养基用量少，可用于大批量药敏试验。一般用MH培养基，将已配制好的药液在试管中作二倍浓度递减稀释，分别装于96孔板内或者用微量加液器直接在板孔内作二倍稀释，然后再接种稀释菌液，另外需留出一列孔作为药液对照，该孔列仅加培养基和菌液作为菌对照，试验完毕后，用微量搅拌器震荡混匀，再将96孔板置于28℃培养箱中温孵18-48h，用酶标仪测630nm下吸光度。

植物病原真菌菌株的准备：

将活化好的9株植物病原真菌分别接种于已灭菌处理的LB培养基中，再将其放置于恒温振荡器中28℃震荡培养24h。

化合物的初筛：

将培养好的植物病原真菌用培养液进行稀释，稀释度为1:500-1:1000；将稀释后的含菌培养液分别定量加至96孔板的各个孔中；将样品配制成1mg/mL，分别取定量加至各个孔中。加完后置于恒温培养箱中28℃恒温培养48h，而后用酶标仪在630nm下测各孔吸光度。试验结果表明化合物1以及化合物2对9株植物病原真菌(甘蓝黑斑、烟草黑胫、辣椒炭疽、水稻胡麻叶、金桔沙皮、甘蔗凤梨、玉米大斑、茶轮斑以及贡柑链格)都具有显著的抑制活性。

最小抑菌浓度的测试：

将培养好的植物病原真菌用培养液进行稀释，稀释度为1:500-1:1000；将稀释后的含菌培养液分别定量加至96孔板的第一排各孔中，让后一次向下成倍稀释；然后将各样品分别加入至各列孔中。加完后置于恒温培养箱中28℃恒温培养48h，而后用酶标仪在630nm下测各孔吸光度。其结果见表2。

表2互叶白千层中三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物对9株植物病原真菌的最小抑制浓度

试验结果表明，三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物具有显著且广谱的抗植物病原真菌活性。化合物1和化合物2都表现出广谱的抗菌活性并且大部分都表现出与高于或与阳性对照相当的活性。其中化合物1的整体抗菌效果优于化合物2，化合物1对甘蓝黑斑、辣椒炭疽、金桔沙皮、茶轮斑的最小抑制浓度低至12.5ug/ml。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物在抗植物病原菌中的应用，其特征在于，所述的三羟基苯甲酸取代的单萜苷类化合物结构式如下：

其中R₁、R₂、R₃、R₄分别独立选自-H或3,4,5-三羟基苯甲酰基，且R₁、R₂、R₃、R₄中至少有其一为3,4,5-三羟基苯甲酰基。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，R₁为3,4,5-三羟基苯甲酰基，R₂为3,4,5-三羟基苯甲酰基，R₃为-H，R₄为-H；结构式如下：

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，R₁为3,4,5-三羟基苯甲酰基，R₂为-H，R₃为-H，R₄为-H；结构式如下：

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述植物病原菌为真菌。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的植物病原菌为甘蓝黑斑病病原菌、烟草黑胫病病原菌、辣椒炭疽病病原菌、水稻胡麻叶病病原菌、金桔沙皮病病原菌、甘蔗凤梨病病原菌、玉米大斑病病原菌、茶轮斑病病原菌或贡柑链格孢菌。