CN111856027B - 适用于无明显症状者排查的新冠病毒抗体检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及适用于无明显症状者排查的新冠病毒抗体检测试剂盒。本发明的新型冠状病毒SARS‑CoV‑2抗体(IgG)检测器件包括其包括固体载体,以及连接于所述固体载体上的特定多肽组合。

Description

适用于无明显症状者排查的新冠病毒抗体检测试剂盒
本申请要求中国专利申请202010302216.9(发明名称:适用于无明显症状者排查的新冠病毒抗体检测试剂盒,申请日:2020年4月16日)的优先权。
技术领域
本发明主要涉及抗体检测试剂盒。具体而言,本发明涉及新型冠状病毒(SARS-CoV-2)IgG抗体检测试剂盒。
背景技术
2020年新型冠状病毒(SARS-CoV-2)肺炎席卷全球,疫情防控已经成为各国政府和人民的共同任务。疾控专家提出了“早发现、早隔离、早治疗”的防控措施,诊断试剂盒成为疫情防控不可或缺的工具。
目前已开发出的诊断试剂盒按检测目标可以分为两类,一类是检测病毒的核酸,一类是检测病毒的抗体。
当前阶段诊断试剂盒的重要应用场景包括:入境人员排查、密切接触者排查、高危环境工作人员排查、重点地区人员排查、解除隔离人员排查、复工人员排查等,上述应用场景的一个共同特点是大量的待排查人员未表现出明显症状(包括无症状、非典型症状、轻微症状)。
因此,需要开发对于无明显症状人群的新冠病毒抗体检测具有高灵敏度和高特异性的诊断试剂盒。
发明内容
鉴于上述现有技术中存在的问题,发明人基于“iPDMS纳米膜”和“多相抗体动力学”研发了“短肽蛋白复合芯片”,从而解决了上述技术问题。
即,本发明包括:
1. 一种新型冠状病毒SARS-CoV-2抗体(IgG)检测器件(本发明的检测器件1),其包括固体载体,以及连接于所述固体载体上的下述多肽组合1:
多肽组合1
a.SEQ ID NO:1所示的多肽(S39),
b.SEQ ID NO:2所示的多肽(S115),
c.SEQ ID NO:3所示的多肽(N15),
d.SEQ ID NO:4所示的多肽(S82),和
e.SEQ ID NO:5所示的多肽(M1)。
2. 根据上述的检测器件,其中,所述固体载体是表面带引发剂的聚二甲基硅氧烷(iPDMS膜)。所述表面带引发剂的聚二甲基硅氧烷可以参见例如中国发明专利申请公开文本CN101265329A。
3. 一种新型冠状病毒SARS-CoV-2抗体(IgG)检测试剂盒(本发明的检测试剂盒1),其包括上述的检测器件。
4. 根据上述的检测试剂盒,其用于无明显症状的新型冠状病毒SARS-CoV-2肺炎(COVID-19)疑似患者的诊断。
在本说明书中视具体情况,“诊断”可以是确诊,也可以是为确诊提供参考信息。
所述无明显症状包括:无症状、非典型症状(例如其它病毒感染引起的疾病(例如普通感冒、流感、手足口病等)的症状,这些症状与新型冠状病毒SARS-CoV-2肺炎的症状相似)、轻微症状(例如轻度发热、干咳、咳痰、呼吸不畅等))。
所述疑似患者例如为入境人员、确诊患者的密切接触者、高危环境工作人员、重点地区人员、解除隔离人员、复工人员。
无明显症状的疑似患者可以是未被感染的人,也可以是被感染10天以内的人(优选5天以内)。
5.上述的检测器件在制备用于新型冠状病毒SARS-CoV-2肺炎(COVID-19)的诊断的新型冠状病毒SARS-CoV-2抗体(IgG)检测试剂盒中的用途,所述检测试剂盒用于无明显症状的新型冠状病毒SARS-CoV-2肺炎疑似患者的诊断。
本发明的检测器件1或检测试剂盒1可以用于诊断对象生物(例如人、特别是无明显症状的新型冠状病毒SARS-CoV-2肺炎疑似患者)是否罹患新型冠状病毒SARS-CoV-2肺炎。具体而言,
当所述多肽中的至少两个对来自对象的样本有响应(DMI>1)时,判定为该对象被新型冠状病毒SARS-CoV-2感染;否则,判定为该对象未被新型冠状病毒SARS-CoV-2感染。
在本说明书中,“响应”是指用识读设备读取的阳性点的信号值显著区别于阴性点的信号值。例如,识读设备读取的阳性点的信号值大于或等于10、优选大于或等于20、更优选大于或等于30;而识读设备读取的阴性点的信号值小于10、优选小于5、更优选小于1。所述识读设备例如可以是苏州艾比拓生物技术有限公司生产的微阵列芯片成像仪。
在本说明书中,固体载体可以是一个,也可以是多个,但优选为一个,即全部多肽独立地连接于同一固体载体上。在本发明中,对固体载体没有特殊限制,只要是作为固体或不溶性材料的载体即可。多肽与固体载体的连接可以采用本领域技术人员公知的多肽与固体载体的连接方法来进行。
实施例
实施例1.多肽及蛋白的制备与确认
SEQ ID NO:1~5的多肽委托南京金斯瑞生物科技有限公司合成。
所述多肽的氨基酸序列(氨基酸的单字母符号)如下:
S31 CTLKSFTVEKGIYQTSNFRV
S39 GVSPTKLNDLCFTNVYADSF
S82 KPSKRSFIEDLLFNKVTLAD
S115 LQPELDSFKEELDKYFKNHT
N15 TPKDHIGTRNPANNAAIVLQ
M1 MSNDNCTGDIVTHLKNWNFG
S64 PTWRVYSTGSNVFQTRAGCL
实施例2.试剂盒(检测器件)的制备
试剂盒(检测器件)2
采用常规方法在iPDMS膜固相载体上分别点样上述SEQ ID NO:1~5所示的多肽的溶液,另点样阳性质控点和阴性质控点,制备了试剂盒(检测器件)(48孔板形式的芯片反应板)。
实施例3.用试剂盒进行检测
检验步骤
1. 准备工作:试验前试剂和测试样品需平衡至室温;血清用血清稀释液稀释100倍(全血稀释50倍)。
2. 润湿芯片:取出芯片反应板。用清洗液浸润芯片表面3分钟,后弃去洗液。
3. 加入样品:取 100μL待测样品加入芯片反应孔中。
4. 样品孵育:将芯片反应板放入恒温孵育器中,37℃,500rpm孵育30分钟。
5. 样品清洗:将芯片反应孔中的样品弃去,用洗液淋洗反应孔并甩掉,重复3次。
6. 加入酶抗:往芯片反应孔中加入100μL酶标抗体液,所述酶标抗体为HRP标记的山羊抗人IgG抗体。
7. 酶抗孵育:将芯片反应板放入恒温孵育器中,以37℃,500rpm孵育30分钟。
8. 酶抗清洗:将芯片反应孔中的酶标抗体液弃去,使用清洗液冲洗反应孔并甩掉,重复3次。
9. 显色:每孔加入70μL显色底物液,室温静止反应5-10min。
10. 弃掉显色液,撬盖(用一字螺丝刀),用超纯水淋洗3次,晾干/吹干。
11. 用48孔微阵列芯片成像仪(苏州艾比拓生物技术有限公司制造)拍照,自动采集显色信号。
12. 结果判定:
对于试剂盒2,当所述多肽中的至少两个对来自对象的样本有响应(DMI>1)时,判定为该对象被新型冠状病毒SARS-CoV-2感染(阳性);否则,判定为该对象未被新型冠状病毒SARS-CoV-2感染(阴性)。
“响应”是指用上述识读设备读取的信号值大于或等于10。阳性质控点的信号值远大于10,阴性质控点的信号值远小于10。
对于经核酸检测、影像学、流行病学及临床表现排除新冠肺炎的密切接触者38例的血清样本,采用试剂盒2进行检测,结果均为阴性38例、阳性0例。因此,特异性为38/38、即100%。
对于核酸检测结果为阳性、但无明显症状的新冠肺炎感染者58例(包括无症状感染者,包括重点国家入境人员、确诊患者的密切接触者、重点地区人员)的血清样本,采用试剂盒2进行检测,结果均为阳性57例、阴性1例。因此,敏感性为57/58、即98.3%。
尽管以上对本发明的实施方案进行了描述,但本发明并不局限于上述的具体实施方案和应用领域,上述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的,而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下,还可以做出很多种的形式,这些均属于本发明保护之列。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所
中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
<120> 适用于无明显症状者排查的新冠病毒抗体检测试剂盒
<130> 2021
<160> 5
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr
1 5 10 15
Ala Asp Ser Phe
20
<210> 2
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Leu Gln Pro Glu Leu Asp Ser Phe Lys Glu Glu Leu Asp Lys Tyr Phe
1 5 10 15
Lys Asn His Thr
20
<210> 3
<211> 0
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
<210> 4
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Lys Pro Ser Lys Arg Ser Phe Ile Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val
1 5 10 15
Thr Leu Ala Asp
20
<210> 5
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 5
Met Ser Asn Asp Asn Cys Thr Gly Asp Ile Val Thr His Leu Lys Asn
1 5 10 15
Trp Asn Phe Gly
20

Claims (5)

1.一种新型冠状病毒SARS-CoV-2抗体IgG检测器件,其包括固体载体,以及连接于所述固体载体上的下述多肽组合1:
多肽组合1
a. SEQ ID NO:1所示的多肽,
b. SEQ ID NO:2所示的多肽,
c. SEQ ID NO:3所示的多肽,
d. SEQ ID NO:4所示的多肽,和
e. SEQ ID NO:5所示的多肽。
2.根据权利要求1所述的检测器件,其中,所述固体载体是表面带引发剂的聚二甲基硅氧烷膜。
3.一种新型冠状病毒SARS-CoV-2抗体IgG检测试剂盒,其包括权利要求1或2所述的检测器件。
4.根据权利要求3所述的检测试剂盒,其用于无明显症状的新型冠状病毒SARS-CoV-2肺炎COVID-19疑似患者的诊断。
5.权利要求1或2所述的检测器件在制备用于新型冠状病毒SARS-CoV-2肺炎COVID-19的诊断的新型冠状病毒SARS-CoV-2抗体IgG检测试剂盒中的用途,所述检测试剂盒用于无明显症状的新型冠状病毒SARS-CoV-2肺炎COVID-19疑似患者的诊断。
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