CN111855834A - 一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法 - Google Patents

一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111855834A
CN111855834A CN202010534544.1A CN202010534544A CN111855834A CN 111855834 A CN111855834 A CN 111855834A CN 202010534544 A CN202010534544 A CN 202010534544A CN 111855834 A CN111855834 A CN 111855834A
Authority
CN
China
Prior art keywords
selenium
sample
digestion
measuring
acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010534544.1A
Other languages
English (en)
Inventor
王凤芹
汪以真
曹进平
程远之
路则庆
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang University ZJU
Original Assignee
Zhejiang University ZJU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang University ZJU filed Critical Zhejiang University ZJU
Priority to CN202010534544.1A priority Critical patent/CN111855834A/zh
Publication of CN111855834A publication Critical patent/CN111855834A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/36—Control of physical parameters of the fluid carrier in high pressure liquid systems
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/72—Mass spectrometers
    • G01N30/7233—Mass spectrometers interfaced to liquid or supercritical fluid chromatograph
    • G01N30/724—Nebulising, aerosol formation or ionisation
    • G01N30/7253—Nebulising, aerosol formation or ionisation by thermal means, e.g. thermospray
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/067—Preparation by reaction, e.g. derivatising the sample

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明公开了一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法。富硒蛋白多糖中加入双氧水和盐酸在水浴条件下进行消解，所得到的SeO3 2‑定容后直接用高效液相色谱电感耦合等离子体质谱（HPLC‑ICP‑MS）进行测定。消解过程完成对硒化合物的氧化还原反应，操作简单，样品不需要在多个容器中进行转移；对样品的消解避免使用了混合酸，同时大大减少了酸的用量；避免了强氧化还原性酸对实验室环境的污染，同时可防止硒的挥发损失，得到较高回收率；避免pH值的调节，操作快速；消解时间短，约60分钟可以完成。

Description

一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法
技术领域
本发明涉及一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法。
背景技术
目前，有关硒的检测检测方法和判定标准都是以硒的总量为标准，因此硒的总量检测尤为重要（卢晓林，2017）。
荧光分光光度法（Watkinson，1960；Hall，1969）是比较经典的总硒含量测定方法（Koike，1993），该方法在前处理过程中，样品须在HClO4-HNO3，甚至H2SO4中，高温条件下进行消解，再进行过夜放置（Ducros，1992）。Ducros （Ducros，1994）改进了上述方法，样品经H2O2-HNO3加热回流微波消解再加入HCl进行酸化，整个消化过程45分钟。以上样品中的硒被统一氧化还原成四价，检测四价硒从而得到样品中总硒的含量。以上方法均涉及到高温加热装置，其次一个消解时间长，另一个涉及回流及微波功率的控制，给实际操作带来不便。
2015年，本申请人公开了酵母硒总硒、无机硒、有机硒含量的测定方法（CN104931468A），所述方法将样品经酸加热消化后，在盐酸介质中，将试样中的硒统一还原成四价硒，四价硒在微酸性条件下与2，3-二氨基萘（DAN）生成苤硒脑络生物，用环己烷萃取。用荧光光度计测定荧光强度，从而计算出样品中的硒含量。该方法用到浓硝酸、高氯酸等强氧化性的酸，并且酵母硒经氧化后需要再经盐酸进一步还原。得到的反应物需要再经过定容、调节pH值、DAN衍生化等系列操作。另外，2017年本申请人还公开了一种单质硒含量的测定方法（CN106323933A）。所述方法将待测单质硒样品在H2O2-HCl体系中常温下氧化还原，再利用荧光分光光度法测定其DAN衍生产物的荧光强度。该方法常温消解条件非常适用于单质硒，但不能解决富硒蛋白多糖样品所有硒化合物的消解问题。
发明内容
针对现有富硒蛋白多糖中总硒含量检测的需要，本发明提供了一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法，快速、环保、简便、精准。
一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法，水浴下向待测富硒蛋白多糖样品中加入双氧水和HCl，利用双氧水在酸性条件下的氧化性和HCl的还原性将样品中的硒化合物氧化还原成为SeO3 2-离子，采用HPLC-ICP-MS测定78Se，从而得到样品中的总硒含量。
所述的测定方法，步骤如下：称取25 mg的富硒蛋白多糖于50 mL离心管中，加入2mL 双氧水，再加入1.5 mL的6 M HCl，50℃水浴30 min，然后沸水浴30 min，将上述反应液转移到容量瓶中，并用水定容至500 mL，取出少量样品用0.22 µm水相滤膜过滤，随后测定其78Se的离子强度，从而得到富硒蛋白多糖中总硒含量。
本发明的有益效果：
发明向富硒蛋白多糖中加入双氧水和HCl，使其先后在50℃和沸水浴条件下进行氧化还原一步反应，所得到的四价硒定容后直接用高效液相色谱电感耦合等离子体质谱（HPLC-ICP-MS）测定总硒的含量。整个消解过程操作简单，样品转移少；对样品的消解避免使用了混合酸，同时大大减少了酸的用量；避免了强氧化还原性酸对实验室环境的污染，同时可防止硒的挥发损失，得到较高回收率；避免pH值的调节，操作快速；硒的消解时间短，约60分钟可以完成。
附图说明
图1为样品溶液色谱图。
图2为***钠标准溶液的标准曲线及线性方程。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明进一步阐述。
方法原理
利用双氧水在HCl提供的酸性条件下的氧化性和HCl的还原性将样品中的硒氧化还原成为SeO3 2-离子，采用HPLC-ICP-MS测定78Se，从而计算出样品中的硒含量。
称取25 mg的富硒蛋白多糖于50 mL离心管中，加入2 mL 双氧水，再加入1.5 mL的6 M HCl，50℃水浴30 min，然后沸水浴30 min（水浴条件经过反复实验，避免持续高温操作），将上述反应液转移到容量瓶中，并用水定容至500 mL，取出少量样品用0.22 µm水相滤膜过滤，随后测定其78Se的离子强度，从而得到富硒蛋白多糖中总硒含量。
仪器与试剂
Softmax pro5多功能连续光谱酶标仪（美国Molecular Devices公司），iCAP RQ电感耦合等离子体质谱仪（美国Thermo Scientific公司），Ultimate 3000高效液相色谱义（美国Thermo Scientific公司），数显恒温水浴锅（常州国华），pH计 （美国Mettler Toledo 公司），纯水仪（日本Yamato公司），纯水来自本纯水仪。色谱级***钠和2，3-二氨基萘（DAN）分析纯从sigma公司购买。盐酸、30%双氧水、EDTA二钠、盐酸羟胺、环己烷、磷酸二氢钾均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司。DAN 试剂（1.0 g/L）：此试剂在暗室内配制。称取DAN（纯度95%～98%）200 mg 于一带盖锥形瓶中，加入0.1 mol/L 盐酸200 mL，振摇约15min 使其全部溶解。加入约40 mL 环己烷，继续振荡5 min。将此液倒入塞有玻璃棉（或脱脂棉）的分液漏斗中，待分层后滤去环己烷层，收集DAN 溶液层，反复用环己烷纯化直至环己烷中荧光降至最低时为止（约纯化6 次）。将纯化后的DAN 溶液储于棕色瓶中，加入约1 cm厚的环己烷覆盖表层，至冰箱内保存。必要时在使用前再以环己烷纯化一次。至荧光值约为7～8；盐酸、EDTA二钠、盐酸羟胺、环己烷均为分析纯，由国药集团化学试剂有限公司生产；EDTA 混合液：称取EDTA 二钠盐2.5 g，加水并加热至完全溶解，冷却后稀释至125mL；加入6.25 g 盐酸羟胺溶于水中，稀释至250 mL。
分析条件
Hypersil GOLD C8色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，美国Thermo Scientific公司）；进样量25 μL；流动相：20 mmol/L 磷酸二氢钾水溶液（pH 3.7，含0.1%七氟丁酸）95%+甲醇5%；流速1.2 mL min−1。射频功率：1550W，Q Cell 气体（He）流速：4.5 mL min−1，冷却气（Ar）流速：14 L min−1，KED电压：4v，辅助气（Ar）流速：0.8 L min−1，驻留时间：100 ms，雾化气（Ar）流速：1.1 L min−1，分析质量数：78Se。无机硒极性较强，在已有文献中多采用离子排阻色谱柱（Alzate，2007）和离子交换色谱柱（Infante，2004）对其进行分离。无机硒在一般的C18或C8反相色谱柱上保留很弱，不能实现有效分离。本实验采用Hypersil GOLD C8作为分离柱，加入七氟丁酸作为离子对试剂，磷酸二氢钾做缓冲盐增加离子强度提高流动相的洗脱能力。实现了SeO32-离子在C8反相色谱柱的保留。
富硒蛋白多糖由本实验室发酵（Xu，2009，略有修改），对于本领域技术人员来说可以自制或者外购合适的富硒蛋白多糖样品。
实施例1 标准曲线的绘制
准确称取量25.0 mg***钠溶解在100 mL水中，逐步用水稀释成1. 0，2.5，5.0，10.0，25.0，50.0，100.0，250.0以及400.00 ug/L***钠标准工作液。用HPLC-ICP-MS测定78Se离子强度。
实施例2 国标法测定总硒含量
准确称取25 mg的富硒蛋白多糖样品，参考GB/T 13883-2008采用HNO3—HClO4体系进行消解，再采用浓度为6 M的 HCl进行还原，将上述反应液转移到容量瓶中，并用水定容至100 mL。从中取出2.0 mL加入至锥形瓶中，再加入30～40mL的水，调节pH至 1.5～2.0，接着加入3 mL EDTA 混合液摇匀，后加入3 mL DAN溶液，摇匀，置于沸水中保持5 min，取出冷却至室温，然后全部转移到125 mL分液漏斗中，加10 mL环己烷振荡2.0 min，静置分层后，用激发光波长376 nm、发射光波长520 nm 测定环己烷层的荧光强度。
实施例3富硒蛋白多糖中总硒含量测定
准确称取25 mg的富硒蛋白多糖于50 mL离心管中，加入3 mL 双氧水，再加入1.5 mL的HCl，50℃水浴30 min，然后沸水浴30 min，将上述反应液转移到容量瓶中，并用水定容至500 mL，取出少量样品用0.22 µm水相滤膜过滤，随后测定其78Se的离子强度，与***钠标准溶液分析结果比对，从而得到富硒蛋白多糖中总硒含量。
根据以上实施例1-3得到的结果与讨论：
HPLC-ICP-MS色谱图
本文采用H2O2-HCl体系消解的样品，经过HPLC-ICP-MS分析，得到的色谱图如图1所示。
标准曲线的绘制
***钠标准工作液的标准曲线如图2所示，曲线的回归方程为y=248.6x+387.2，相关系数R2为0.9997，在2.5～400 µg/L浓度范围内，SeO3 2-离子强度与其浓度呈良好的线性关系。
国标法测定总硒含量结果
采用国标法GB/T 13883-2008 （饲料中硒的测定）测定富硒蛋白多糖中硒的含量为1450.0 µg/g，与本方法测定结果高度一致。
富硒蛋白多糖中总硒含量测定结果
5次测得富硒蛋白多糖中硒含量平均值为1346.5 µg/g，相对标准偏差为4.01%，如下表1所示：
Figure DEST_PATH_IMAGE001

Claims (2)

1.一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法，其特征是：水浴下向待测富硒蛋白多糖样品中加入双氧水和HCl，利用双氧水在酸性条件下的氧化性和HCl的还原性将样品中的硒化合物氧化还原成为SeO3 2-离子，采用HPLC-ICP-MS测定78Se，从而得到样品中的总硒含量。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征是：步骤如下：
称取25 mg的富硒蛋白多糖于50 mL离心管中，加入2 mL 双氧水，再加入1.5 mL的6 MHCl，50℃水浴30 min，然后沸水浴30 min，将上述反应液转移到容量瓶中，并用水定容至500 mL，取出少量样品用0.22 µm水相滤膜过滤，随后测定其78Se的离子强度，从而得到富硒蛋白多糖中总硒含量。
CN202010534544.1A 2020-06-12 2020-06-12 一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法 Pending CN111855834A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010534544.1A CN111855834A (zh) 2020-06-12 2020-06-12 一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010534544.1A CN111855834A (zh) 2020-06-12 2020-06-12 一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111855834A true CN111855834A (zh) 2020-10-30

Family

ID=72987638

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010534544.1A Pending CN111855834A (zh) 2020-06-12 2020-06-12 一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111855834A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112630316A (zh) * 2020-11-19 2021-04-09 浙江大学 基于hplc-icp-ms分析富硒蛋白多糖硒形态的方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002059150A (ja) * 2000-08-15 2002-02-26 National Institute Of Advanced Industrial & Technology セレン汚染土壌用洗浄剤並びに安定化剤及びこれらを用いたセレン汚染土壌修復方法
CN102520089A (zh) * 2011-12-20 2012-06-27 苏州硒谷科技有限公司 富硒谷物中硒形态的测定方法
CN102928500A (zh) * 2012-11-15 2013-02-13 中华人民共和国浙江出入境检验检疫局 微波消解-icp-ms法直接测定海产品中有机硒、蛋白硒或多糖硒的检测方法
CN105021781A (zh) * 2015-08-07 2015-11-04 广东药学院 双浊点萃取-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定食品中的硒的方法
CN106248646A (zh) * 2016-09-09 2016-12-21 哈尔滨中科龙祥科技有限公司 一种准确测定酒中硒含量的方法
CN106323933A (zh) * 2016-08-12 2017-01-11 浙江大学 一种单质硒含量的测定方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002059150A (ja) * 2000-08-15 2002-02-26 National Institute Of Advanced Industrial & Technology セレン汚染土壌用洗浄剤並びに安定化剤及びこれらを用いたセレン汚染土壌修復方法
CN102520089A (zh) * 2011-12-20 2012-06-27 苏州硒谷科技有限公司 富硒谷物中硒形态的测定方法
CN102928500A (zh) * 2012-11-15 2013-02-13 中华人民共和国浙江出入境检验检疫局 微波消解-icp-ms法直接测定海产品中有机硒、蛋白硒或多糖硒的检测方法
CN105021781A (zh) * 2015-08-07 2015-11-04 广东药学院 双浊点萃取-氢化物发生-原子荧光光谱联用测定食品中的硒的方法
CN106323933A (zh) * 2016-08-12 2017-01-11 浙江大学 一种单质硒含量的测定方法
CN106248646A (zh) * 2016-09-09 2016-12-21 哈尔滨中科龙祥科技有限公司 一种准确测定酒中硒含量的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
G. DUGO 等: "Determination of copper, zinc, selenium, lead and cadmium in potatoes (Solanum tuberosum L.) using potentiometric stripping methods", 《FOOD ADDITIVES AND CONTAMINANTS》 *
季海冰 等: "反相离子对色谱联合电感耦合等离子体质谱法测定环境水样中5种形态硒", 《分析仪器》 *
王凤芹 等: "高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定富硒蛋白多糖中纳米单质硒含量", 《动物营养学报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112630316A (zh) * 2020-11-19 2021-04-09 浙江大学 基于hplc-icp-ms分析富硒蛋白多糖硒形态的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Bağ et al. Determination of Cu, Zn, Fe, Ni and Cd by flame atomic absorption spectrophotometry after preconcentration by Escherichia coli immobilized on sepiolite
Zeng et al. A colorimetric and ratiometric fluorescent probe for quantitative detection of GSH at physiologically relevant levels
Li et al. Speciation of inorganic arsenic by electrochemical hydride generation atomic absorption spectrometry
Li et al. Determination of mercury by intermittent flow electrochemical cold vapor generation coupled to atomic fluorescence spectrometry
CN108693241B (zh) 一种同时测定土壤中硒和镉的方法
Zhang et al. Electrochemical hydride generation atomic fluorescence spectrometry for the simultaneous determination of arsenic and antimony in Chinese medicine samples
Zhang et al. Room temperature ionic liquids enhanced chemical vapor generation of copper, silver and gold following reduction in acidified aqueous solution with KBH 4 for atomic fluorescence spectrometry
CN111855834A (zh) 一种富硒蛋白多糖总硒含量的测定方法
Li et al. A simple gold nanoplasmonic SERS method for trace Hg2+ based on aptamer‐regulating graphene oxide catalysis
CN111443079A (zh) 一种同时检测三氯化铁中痕量As、Pb、Cd、Zn、Cr、Co、V元素含量的方法
CN113533559B (zh) 一种oled材料生产用的8-羟基喹啉质量控制方法
CN111855847B (zh) 高效液相色谱法测定富硒蛋白多糖中总硒含量的方法
CN102225247B (zh) 对含有痕量银离子的溶液进行处理的方法及所用的固相萃取吸附剂
CN112710756A (zh) 液相色谱-原子荧光光谱联用测定三价锑和五价锑含量的方法
CN103487416B (zh) 一种基于不对称卟啉荧光比检测锌离子的荧光传感器
CN101349637A (zh) 烟草中非蛋白质氮含量的测定方法
Liu et al. Determination of cadmium in water samples by electrochemical hydride generation atomic fluorescence spectrometry using series graphite tubes as electrolytic cells under constant voltage
Shakerian et al. Hydride generation atomic absorption spectrometric determination of bismuth after separation and preconcentration with modified alumina
Sun et al. Determination of germanium (IV) by catalytic cathodic stripping voltammetry
CN112630348A (zh) 一种使用hplc-icp-ms测定水中硒酸盐***盐的检测方法
CN111413168B (zh) 一种氧化锆包覆镍钴锰三元正极材料中氧化锆的测试方法
Li et al. Rapid determination of trace Cu 2+ by an in-syringe membrane SPE and membrane solid-phase spectral technique
Luan et al. Determination of Cd2+, Cr3+, Cu2+ and Zn2+ in traditional Chinese medicine shuanghuanglian oral liquid by high performance capillary electrophoresis
Huang et al. Improved hydride generation-atomic fluorescence spectrometry for determination of trace lead: minimization of blank from potassium ferricyanide
CN111443078A (zh) 一种同时检测氯化亚铁中痕量As、Pb、Cd、Zn、Cr元素含量的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20201030