CN111850074A - 一种苦瓜多肽的制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了苦瓜多肽的制备方法及应用，包括以下步骤：1)将苦瓜原料破碎后，按照1:1～10的比例将其加入水中，调节后过滤得到苦瓜蛋白液；2)调节步骤1)过滤得到的苦瓜蛋白液至水洗沉淀至中性后，加入复合酶，对苦瓜蛋白进行酶解，酶解结束后，对复合酶进行灭活处理，然后将灭活处理后的苦瓜蛋白液自然冷却至室温，除去不溶物和沉淀杂质，得到澄清的酶解后的苦瓜粗多肽；3)再采用膜过滤技术对酶解后的苦瓜粗多肽的分子量进行筛选，得到分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩体积后，进行干燥，即得苦瓜多肽粉。其提高了有效多肽分子的含量，改善苦瓜多肽的口感。可用于配制具有调节血糖代谢功能的特殊膳食、保健食品、药物等领域。适用于工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于生物活性肽制备技术领域，涉及一种苦瓜多肽的制备方法及应用。
背景技术
随着人们生活水平不断提高和社会经济快速发展，我国糖尿病患者呈现出快速增长态势，患病人数约占全球糖尿病人总数三分之一。目前我国糖尿病发病率高达9.6％，糖尿病患者已超过1.1亿，且患病人数还在逐年递增。糖尿病的危害巨大，伴随糖尿病产生的糖尿病并发症也对患者的健康和生命构成巨大威胁。糖尿病古称为消渴，是指以多饮、多尿、多食及消瘦、疲乏、尿甜为主要特征的综合病症，化验检查其主要特征为高血糖及尿糖。消渴是由于阴亏燥热，五脏虚损所导致的以多饮、多食、多尿、形体消瘦为特征的病症。现代医学研究表明，糖尿病产生的主要原因是胰岛细胞受损、胰岛素分泌不足、或者机体功能紊乱造成机体对胰岛素敏感性下降，从而无法起到调节血糖的功能而引起糖尿病。
苦瓜又名凉瓜，是葫芦科植物，是一种药食两用蔬菜，据《本草纲目》及《滇南本草》记载，苦瓜具有清热消暑、养血益气、补肾健脾、滋肝明目。苦瓜的主要化学成分含有苦瓜甙、多种氨基酸和类脂。经过以往的实验研究表明，苦瓜中的苦瓜甙及多肽具有较好的降糖活性。1981年，KhannaL用酸、醇等试剂，采用薄层层析方法从苦瓜果实及苦瓜中提取出苦瓜多肽，该肽皮下注射后可降低实验动物的血糖，此苦瓜多肽有166个氨基酸残基。
苦瓜在变老变黄之后，苦瓜籽会变得又大又硬，不可直接食用，苦瓜籽取出晒干以后即可入药，它入药以后味苦、甘，性质温和，具有温补肾阳的重要功效，平时多用于人在肾阳不足的调理，对人类的因肾阳不足引起的小便频繁和遗尿以及男性阳痿等症都有很好的治疗功效。苦瓜籽还可以降血糖，能用于人类高血糖和糖尿病的治疗，苦瓜籽中含有大量的苦瓜甙，这种物质不但能降低血糖的含量也能提高胰岛功能。但是大部分人吃苦瓜都是吃新鲜的苦瓜，当苦瓜变黄，变老之后，一般就是将其扔掉，苦瓜籽由于其的特殊性，吃的人也比较少，这样就会造成一定的浪费。
经过大量的实验研究表明，苦瓜籽中的苦瓜多肽具有较好的降血糖功能，但是一般情况下由于苦瓜籽中含有的苦瓜多肽含量较少，因此很少有人想到在苦瓜籽中提取苦瓜多肽。根据参考文献可知，国内外热衷于采用苦瓜治疗和预防糖尿，相继研究开发出许多类似“苦瓜素”、“苦瓜总甙”、“苦瓜茶”、“苦瓜粉”、“苦瓜蛋白粉”，但是这些产品有共同的不足就是分子量都大，人体不易吸收和利用。根据中医理论，体质寒的人不宜吃或不宜多吃、常吃苦瓜菜，但是人体却需要摄取一定的苦瓜肽，来调节体内的糖分。而以往的苦瓜多肽很大程度上不能够满足市场上对于苦瓜多肽的要求。
发明内容
本发明为了解决上述技术问题，提供了一种苦瓜多肽的制备纯化方法及应用，该方法得到的苦瓜多肽产品，人体很容易吸收，能快速被人体组织利用，迅速平衡血糖，可长期服用。
本发明是通过以下技术方案来实现：
一种苦瓜多肽的制备方法，包括以下步骤：
1)将苦瓜原料破碎成10-60目的小颗粒后，按照1:1～10的比例将其加入水中，对破碎后的苦瓜原料进行水浴加热，调pH至碱性，控制提取温度在45-60℃左右，提取时间为1.5-3h左右，过滤得到苦瓜蛋白液；
2)调节步骤1)过滤得到的苦瓜蛋白液的pH值到3-5，使蛋白质沉淀析出，水洗沉淀至中性后，再加入复合酶溶液，对苦瓜蛋白进行酶解，酶解时间为4-6h，酶解温度为45-65℃，酶解结束后，在水浴85～90℃的情况下对苦瓜蛋白液中的酶进行1-1.5h的灭活处理，然后将灭活处理后的苦瓜蛋白液自然冷却至室温，静置至不溶物和杂质完全沉淀，除去不溶物和沉淀杂质，得到澄清的酶解后的苦瓜粗多肽；
3)再采用膜过滤技术对酶解后的苦瓜粗多肽的分子量进行筛选确定，对大分子未酶解的蛋白质进行除杂，得到分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩体积后，进行干燥，即得苦瓜多肽粉。
步骤1)具体为：将苦瓜原料破碎成10-60目的小颗粒后，按照1:1～5的比例将其加入水中，对粉碎后的苦瓜进行水浴加热，调pH至7.5-8.5，控制提取温度在45-70℃左右，提取时间为2-3h，过滤得到苦瓜蛋白液。
步骤2)中的复合酶由大豆蛋白酶、胰蛋白酶、果胶酶和纤维素酶按照2-4:1-3:1-3:1-4的比例组成。
步骤1)中的苦瓜蛋白液是苦瓜原料进行水浴加热提取后调节溶液pH后，使蛋白沉淀析出后的苦瓜蛋白溶液。
步骤2)中得到的苦瓜粗多肽中的苦瓜多肽的分子量分布在1kDa-68kDa之间。
步骤3)具体为：将步骤2)中得到的分子量在1kDa-68kDa之间的苦瓜粗多肽采用超滤膜进行分子量筛选，预设的超滤膜的分子截留量为10kDa、3kDa、1kDa，分别收集不同分子量的截留液，最后得到4种不同分子量的苦瓜多肽液：10kDa以上、10kDa-3kDa、3kDa-1kDa、1kDa以下；
从4种不同分子量的苦瓜多肽液中选取分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩至固含量为50％，进行干燥，即得苦瓜多肽粉。
采用超滤膜过滤时的温度是35-40℃，操作压力为0.3-0.5MPa。
所述的干燥为真空干燥。
所述的苦瓜原料包括鲜苦瓜、苦瓜干、苦瓜籽、苦瓜干和苦瓜肉。
一种苦瓜多肽的应用，将其作为制备或预防II型糖尿病的食品添加辅料、保健食品或药品的原料。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明提供的苦瓜多肽的制备方法及应用，是一种从苦瓜中提取蛋白，通过复合酶酶解蛋白得到苦瓜多肽的制备方法，其是将苦瓜原料破碎后，进行预处理，得到粗蛋白液后，进行酶解步骤，酶解液进行超滤处理，从而获得苦瓜多肽。本发明旨在通过对苦瓜中多肽的制备和纯化，来进一步提高有效多肽分子的含量，改善苦瓜多肽的口感。可用于配制具有调节血糖代谢功能的特殊膳食、保健食品、食品添加剂、药物等领域。适用于工业化生产。
本发明提供的苦瓜多肽的制备方法及应用，其制备出来的苦瓜多肽产品，分子量在3kDa以下，人体很容易吸收，能快速被人体组织利用，迅速平衡血糖，可长期服用。
本发明的产品，可广泛用于医药原料、药物、保健品、食品添加剂。是一种技术易握，设备简单，工艺简单易行，投资少，周期短，附加值高，无环境污染，适用于工业化技术生产的产品。
附图说明
图1为苦瓜多肽制备纯化方法的工艺流程图。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，并将结合动物功能试验，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，但显然，所描述的仅仅是本发明的一部分，而不是全部，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围，下面所述是对本发明的解释而不是限定。
实施例1，参见图1，一种苦瓜多肽的制备方法，包括以下步骤：
1)将苦瓜原料破碎成10-60目的小颗粒后，按照1:1～10的比例将其加入水中，对破碎后的苦瓜原料进行水浴加热，调pH至碱性，控制提取温度在45-60℃左右，提取时间为1.5-3h左右，过滤得到苦瓜蛋白液；其中，步骤1)中的苦瓜蛋白液是苦瓜原料进行水浴加热提取后调节溶液pH后，使蛋白沉淀析出后的苦瓜蛋白溶液。
2)调节步骤1)过滤得到的苦瓜蛋白液的pH值到3-5，使蛋白质沉淀析出，水洗沉淀至中性后，再加入复合酶溶液，对苦瓜蛋白进行酶解，酶解时间为4-6h，酶解温度为45-65℃，酶解结束后，在水浴85～90℃的情况下对酶解后的苦瓜蛋白液中的复合酶进行1-1.5h的灭活处理，然后将灭活处理后的苦瓜蛋白液自然冷却至室温，静置至不溶物和杂质完全沉淀，除去不溶物和沉淀杂质，得到澄清的酶解后的苦瓜粗多肽；其中，步骤2)中得到的苦瓜粗多肽中的苦瓜多肽的分子量分布在1kDa-68kDa之间；步骤2)中的复合酶由大豆蛋白酶、胰蛋白酶、果胶酶和纤维素酶按照2-4:1-3:1-3:1-4的比例组成。
3)再采用膜过滤技术对酶解后的苦瓜粗多肽的分子量进行筛选确定，对大分子未酶解的蛋白质进行除杂，得到分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩体积后，进行真空干燥，即得苦瓜多肽粉；其中，采用超滤膜过滤时的温度是35-40℃，操作压力为0.3-0.5MPa。
具体的，步骤1)具体为：将苦瓜原料破碎成10-60目的小颗粒后，按照1:1～5的比例将其加入水中，对粉碎后的苦瓜进行水浴加热，调pH至7.5-8.5，控制提取温度在45-70℃左右，提取时间为2-3h，过滤得到苦瓜蛋白液。
步骤3)具体为：将步骤2)中得到的分子量分布在1kDa-68kDa之间的苦瓜粗多肽采用超滤膜进行分子量筛选，预设的超滤膜的分子截留量为10kDa、3kDa、1kDa，分别收集不同分子量的截留液，最后得到4种不同分子量的苦瓜多肽液：10kDa以上、10kDa-3kDa、3kDa-1kDa、1kDa以下；
从4种不同分子量的苦瓜多肽液中选取分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩至固含量为50％，进行干燥，即得苦瓜多肽粉。
需要说明的是，所述的苦瓜原料包括鲜苦瓜、苦瓜干、苦瓜籽、苦瓜干和苦瓜肉。优选的，本发明的制备方法采用苦瓜籽作为提取苦瓜多肽的原料，这样可以变废为宝，一物多用。
需要说明的是，所使用的复合酶是通过两个步骤完成的，首先通过单因素实验，筛选单一酶酶解效果最佳的酶解条件，其次通过正交试验对复合酶的投入比例进行确定。
进一步地，一种苦瓜多肽的应用，将其作为制备或预防II型糖尿病的食品添加辅料、保健食品或药品的原料。
实施例2，参见图1，一种苦瓜多肽的制备方法，包括以下步骤：
1)将苦瓜原料破碎成10目的小颗粒后，按照1:5的比例将其加入水中，对破碎后的苦瓜原料进行水浴加热，调pH至碱性，控制提取温度在50℃左右，提取时间为2h左右，过滤得到苦瓜蛋白液；其中，步骤1)中的苦瓜蛋白液是苦瓜原料进行水浴加热提取后调节溶液pH后，使蛋白沉淀析出后的苦瓜蛋白溶液。
2)调节步骤1)过滤得到的苦瓜蛋白液的pH值到4，使蛋白质沉淀析出，水洗沉淀至中性后，再加入复合酶溶液，对苦瓜蛋白进行酶解，酶解时间为5h，酶解温度为50℃，酶解结束后，在水浴90℃的情况下对酶解后的苦瓜蛋白液中的复合酶进行1h的灭活处理，然后将灭活处理后的苦瓜蛋白液自然冷却至室温，静置至不溶物和杂质完全沉淀，除去不溶物和沉淀杂质，得到澄清的酶解后的苦瓜粗多肽；其中，步骤2)中得到的苦瓜粗多肽中的苦瓜多肽的分子量分布在1kDa-68kDa之间；步骤2)中的复合酶由大豆蛋白酶、胰蛋白酶、果胶酶和纤维素酶按照2:1:1:1的比例组成。
3)再采用膜过滤技术对酶解后的苦瓜粗多肽的分子量进行筛选确定，对大分子未酶解的蛋白质进行除杂，得到分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩体积后，进行真空干燥，即得苦瓜多肽粉；其中，采用超滤膜过滤时的温度是35-40℃，操作压力为0.3-0.5MPa。
具体的，步骤1)具体为：将苦瓜原料破碎成10目的小颗粒后，按照1:5的比例将其加入水中，对粉碎后的苦瓜进行水浴加热，调pH至8，控制提取温度在50℃左右，提取时间为2h，过滤得到苦瓜蛋白液。
步骤3)具体为：将步骤2)中得到的分子量分布在1kDa-68kDa之间的苦瓜粗多肽采用超滤膜进行分子量筛选，预设的超滤膜的分子截留量为10kDa、3kDa、1kDa，分别收集不同分子量的截留液，最后得到4种不同分子量的苦瓜多肽液：10kDa以上、10kDa-3kDa、3kDa-1kDa、1kDa以下；
从4种不同分子量的苦瓜多肽液中选取分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩至固含量为50％，进行干燥，即得苦瓜多肽粉。
需要说明的是，所述的苦瓜原料包括鲜苦瓜、苦瓜干、苦瓜籽、苦瓜干和苦瓜肉。优选的，本发明的制备方法采用苦瓜籽作为提取苦瓜多肽的原料，这样可以变废为宝，一物多用。
需要说明的是，所使用的复合酶是通过两个步骤完成的，首先通过单因素实验，筛选单一酶酶解效果最佳的酶解条件，其次通过正交试验对复合酶的投入比例进行确定。
进一步地，一种苦瓜多肽的应用，将其作为制备或预防II型糖尿病的食品添加辅料、保健食品或药品的原料。
实施例3，参见图1，一种苦瓜多肽的制备方法，包括以下步骤：
1)将苦瓜原料破碎成35目的小颗粒后，按照1:1的比例将其加入水中，对破碎后的苦瓜原料进行水浴加热，调pH至碱性，控制提取温度在45℃左右，提取时间为1.5左右，过滤得到苦瓜蛋白液；其中，步骤1)中的苦瓜蛋白液是苦瓜原料进行水浴加热提取后调节溶液pH后，使蛋白沉淀析出后的苦瓜蛋白溶液。
2)调节步骤1)过滤得到的苦瓜蛋白液的pH值到3，使蛋白质沉淀析出，水洗沉淀至中性后，再加入复合酶溶液，对苦瓜蛋白进行酶解，酶解时间为4h，酶解温度为45℃，酶解结束后，在水浴87℃的情况下对酶解后的苦瓜蛋白液中的复合酶进行1.2h的灭活处理，然后将灭活处理后的苦瓜蛋白液自然冷却至室温，静置至不溶物和杂质完全沉淀，除去不溶物和沉淀杂质，得到澄清的酶解后的苦瓜粗多肽；其中，步骤2)中得到的苦瓜粗多肽中的苦瓜多肽的分子量分布在1kDa-68kDa之间；步骤2)中的复合酶由大豆蛋白酶、胰蛋白酶、果胶酶和纤维素酶按照3:2:2:2.5的比例组成。
3)再采用膜过滤技术对酶解后的苦瓜粗多肽的分子量进行筛选确定，对大分子未酶解的蛋白质进行除杂，得到分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩体积后，进行真空干燥，即得苦瓜多肽粉；其中，采用超滤膜过滤时的温度是35-40℃，操作压力为0.3-0.5MPa。
具体的，步骤1)具体为：将苦瓜原料破碎成35目的小颗粒后，按照1:1的比例将其加入水中，对粉碎后的苦瓜进行水浴加热，调pH至7.5，控制提取温度在45℃左右，提取时间为2.5h，过滤得到苦瓜蛋白液。
步骤3)具体为：将步骤2)中得到的分子量分布在1kDa-68kDa之间的苦瓜粗多肽采用超滤膜进行分子量筛选，预设的超滤膜的分子截留量为10kDa、3kDa、1kDa，分别收集不同分子量的截留液，最后得到4种不同分子量的苦瓜多肽液：10kDa以上、10kDa-3kDa、3kDa-1kDa、1kDa以下；
从4种不同分子量的苦瓜多肽液中选取分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩至固含量为50％，进行干燥，即得苦瓜多肽粉。
需要说明的是，所述的苦瓜原料包括鲜苦瓜、苦瓜干、苦瓜籽、苦瓜干和苦瓜肉。优选的，本发明的制备方法采用苦瓜籽作为提取苦瓜多肽的原料，这样可以变废为宝，一物多用。
需要说明的是，所使用的复合酶是通过两个步骤完成的，首先通过单因素实验，筛选单一酶酶解效果最佳的酶解条件，其次通过正交试验对复合酶的投入比例进行确定。
进一步地，一种苦瓜多肽的应用，将其作为制备或预防II型糖尿病的食品添加辅料、保健食品或药品的原料。
实施例4，一种苦瓜多肽的制备方法，包括以下步骤：
1)将苦瓜原料破碎成60目的小颗粒后，按照1:10的比例将其加入水中，对破碎后的苦瓜原料进行水浴加热，调pH至碱性，控制提取温度在60℃左右，提取时间为3h左右，过滤得到苦瓜蛋白液；其中，步骤1)中的苦瓜蛋白液是苦瓜原料进行水浴加热提取后调节溶液pH后，使蛋白沉淀析出后的苦瓜蛋白溶液。
2)调节步骤1)过滤得到的苦瓜蛋白液的pH值到5，使蛋白质沉淀析出，水洗沉淀至中性后，再加入复合酶溶液，对苦瓜蛋白进行酶解，酶解时间为6h，酶解温度为65℃，酶解结束后，在水浴85℃的情况下对酶解后的苦瓜蛋白液中的复合酶进行1.5h的灭活处理，然后将灭活处理后的苦瓜蛋白液自然冷却至室温，静置至不溶物和杂质完全沉淀，除去不溶物和沉淀杂质，得到澄清的酶解后的苦瓜粗多肽；其中，步骤2)中得到的苦瓜粗多肽中的苦瓜多肽的分子量分布在1kDa-68kDa之间；步骤2)中的复合酶由大豆蛋白酶、胰蛋白酶、果胶酶和纤维素酶按照4:3:3:4的比例组成。
3)再采用膜过滤技术对酶解后的苦瓜粗多肽的分子量进行筛选确定，对大分子未酶解的蛋白质进行除杂，得到分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩体积后，进行真空干燥，即得苦瓜多肽粉；其中，采用超滤膜过滤时的温度是35-40℃，操作压力为0.3-0.5MPa。
具体的，步骤1)具体为：将苦瓜原料破碎成60目的小颗粒后，按照1:10的比例将其加入水中，对粉碎后的苦瓜进行水浴加热，调pH至8.5，控制提取温度在70℃左右，提取时间为3h，过滤得到苦瓜蛋白液。
步骤3)具体为：将步骤2)中得到的分子量分布在1kDa-68kDa之间的苦瓜粗多肽采用超滤膜进行分子量筛选，预设的超滤膜的分子截留量为10kDa、3kDa、1kDa，分别收集不同分子量的截留液，最后得到4种不同分子量的苦瓜多肽液：10kDa以上、10kDa-3kDa、3kDa-1kDa、1kDa以下；
从4种不同分子量的苦瓜多肽液中选取分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩至固含量为50％，进行干燥，即得苦瓜多肽粉。
需要说明的是，所述的苦瓜原料包括鲜苦瓜、苦瓜干、苦瓜籽、苦瓜干和苦瓜肉。优选的，本发明的制备方法采用苦瓜籽作为提取苦瓜多肽的原料，这样可以变废为宝，一物多用。
需要说明的是，所使用的复合酶是通过两个步骤完成的，首先通过单因素实验，筛选单一酶酶解效果最佳的酶解条件，其次通过正交试验对复合酶的投入比例进行确定。
进一步地，一种苦瓜多肽的应用，将其作为制备或预防II型糖尿病的食品添加辅料、保健食品或药品的原料。
具体的，实施例5，将苦瓜籽破碎成10目的小颗粒后，预处理一下，再按水料比5:1的比例加水，调pH至8，控制提取温度在50℃左右，提取时间为2h，过滤，取上清液，即为苦瓜蛋白液，再用筛选好的复合酶(大豆蛋白酶、胰蛋白酶、果胶和纤维素酶＝2：1：1：1)对苦瓜蛋白液进行酶解，酶解时间为5h，酶解温度为50℃，酶解结束后，在90℃的条件下进行灭酶活性处理1h，然后自然冷却至室温，静置一段时间，至杂质和不溶物全部沉淀，除去不溶物和沉淀杂质即可。再采用膜过滤技术对酶解多肽的分子量进行筛选确定，对大分子未酶解的蛋白质进行除杂，得到分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩体积后，进行真空干燥，即得苦瓜多肽粉。
进一步地，实施例6，将新鲜苦瓜破碎成35目的小颗粒后，预处理一下，再按水料比1:1的比例加水，调pH至7.5，控制提取温度在45℃左右，提取时间为2.5h，过滤，取上清液，即为苦瓜蛋白液，再用筛选好的复合酶(大豆蛋白酶、胰蛋白酶、果胶和纤维素酶＝3：2：2：2.5)对苦瓜蛋白液进行酶解，酶解时间为4h，酶解温度为45℃，酶解结束后，在87℃的条件下进行灭酶活性处理1.2h，然后自然冷却至室温，静置一段时间，至杂质和不溶物全部沉淀，除去不溶物和沉淀杂质即可。再采用膜过滤技术对酶解多肽的分子量进行筛选确定，对大分子未酶解的蛋白质进行除杂，得到分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩体积后，进行真空干燥，即得苦瓜多肽粉。
进一步地，实施例7，将苦瓜干片破碎成60目的小颗粒后，预处理一下，再按水料比10:1的比例加水，调pH至8.5，控制提取温度在70℃左右，提取时间为3h，过滤，取上清液，即为苦瓜蛋白液，再用筛选好的复合酶(大豆蛋白酶、胰蛋白酶、果胶和纤维素酶＝4：3：3：4)对苦瓜蛋白液进行酶解，酶解时间为6h，酶解温度为65℃，酶解结束后，在85℃的条件下进行灭酶活性处理1.5h，然后自然冷却至室温，静置一段时间，至杂质和不溶物全部沉淀，除去不溶物和沉淀杂质即可。再采用膜过滤技术对酶解多肽的分子量进行筛选确定，对大分子未酶解的蛋白质进行除杂，得到分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩体积后，进行真空干燥，即得苦瓜多肽粉。
需要说明的是，实施例中苦瓜原料可以为新鲜苦瓜、苦瓜干片或者苦瓜籽，还可以为其他，这样使得原料具有多样性，且证明该方法具有一定的稳定性。
本发明一种苦瓜多肽的制备方法，其涉及苦瓜多肽的制备和分离纯化方法，将苦瓜原料破碎后，对苦瓜蛋白进行浸提，过滤得到苦瓜蛋白液。使用复合酶，酶解苦瓜蛋白液，将澄清的酶解液进行超滤处理后，浓缩干燥从而获得苦瓜多肽。
其中，将过滤得到的苦瓜多肽酶解液，进行超滤处理。预设的分子截留量为10kDa、3kDa、1kDa。分别收集不同分子量的截留液，浓缩至固含量为50％即可。
其中，超滤过程进行时，超滤膜纯化***进行超滤时的温度是35-40℃，操作压力为0.3-0.5MPa。
本发明提供的苦瓜多肽的制备方法及应用，是一种利用复合酶对苦瓜蛋白进行酶解从而获得苦瓜多肽的方法，其利用蛋白质提取技术、生物工程酶解技术、膜过滤技术，将苦瓜原料破碎，按比例加水，调pH，控温在50℃，加热2h，过滤，取上清液，即为苦瓜蛋白液，再用筛选好的复合酶对苦瓜蛋白液进行酶解，酶解结束后，再采用膜过滤技术对酶解的苦瓜多肽的分子量进行筛选，得到分子量在3kDa以下的苦瓜多肽。此类苦瓜多肽，可用真空干燥的方法对其进行干燥，可作为口服液、胶囊、片剂、冲剂等的原材料。小分子苦瓜多肽，是由氨基酸组成，其营养性和降血糖的效果较高，无化学试剂的添加，绿色安全，品质优良。
本发明提供的苦瓜多肽的制备方法及应用，其制备出来的苦瓜多肽产品，分子量在3kDa以下，人体很容易吸收，能快速被人体组织利用，迅速平衡血糖，可长期服用。
本发明提供的苦瓜多肽的制备方法及应用，一种从苦瓜中提取蛋白，通过复合酶酶解蛋白得到苦瓜多肽的制备方法，属于生物医药技术领域。其是将苦瓜原料破碎后，进行预处理，得到粗蛋白液后，进行酶解步骤，酶解液进行超滤处理，从而获得苦瓜多肽。所述酶解步骤中使用的复合酶通过单因素和正交试验确定的(大豆蛋白酶、胰蛋白酶、果胶和纤维素酶＝2：1：1：1)。本发明旨在通过对苦瓜中多肽的制备和纯化，来进一步提高有效多肽分子的含量，改善苦瓜多肽的口感。可用于配制具有调节血糖代谢功能的特殊膳食、保健食品、食品添加剂、药物等领域。适用于工业化生产。
本发明的产品，可广泛用于医药原料、药物、保健品、食品添加剂。是一种技术易握，设备简单，工艺简单易行，投资少，周期短，附加值高，无环境污染，适用于工业化技术生产的产品。
本发明提供的苦瓜多肽的制备方法，该方法采用的苦瓜原料可以是一些吃不了的，老了，黄了的苦瓜，这样里面的苦瓜籽也可以提取出来苦瓜多肽，使得苦瓜籽可以拿出来进行回收利用，来提取苦瓜多肽，这样一来本发明实现了对废弃苦瓜的从新使用，变废为宝，这样，可以大大减少投资，也使得一物多用。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (10)
1.一种苦瓜多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将苦瓜原料破碎成10-60目的小颗粒后，按照1:1～10的比例将其加入水中，对破碎后的苦瓜原料进行水浴加热，调pH至碱性，控制提取温度在45-60℃左右，提取时间为1.5-3h左右，过滤得到苦瓜蛋白液；
2)调节步骤1)过滤得到的苦瓜蛋白液的pH值到3-5，使蛋白质沉淀析出，水洗沉淀至中性后，再加入复合酶溶液，对苦瓜蛋白进行酶解，酶解时间为4-6h，酶解温度为45-65℃，酶解结束后，在水浴85～90℃的情况下对苦瓜蛋白液中的酶进行1-1.5h的灭活处理，然后将灭活处理后的苦瓜蛋白液自然冷却至室温，静置至不溶物和杂质完全沉淀，除去不溶物和沉淀杂质，得到澄清的酶解后的苦瓜粗多肽；
3)再采用膜过滤技术对酶解后的苦瓜粗多肽的分子量进行筛选确定，对大分子未酶解的蛋白质进行除杂，得到分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩体积后，进行干燥，即得苦瓜多肽粉。
2.根据权利要求1所述的苦瓜多肽的制备方法，其特征在于，步骤1)具体为：将苦瓜原料破碎成10-60目的小颗粒后，按照1:1～5的比例将其加入水中，对粉碎后的苦瓜进行水浴加热，调pH至7.5-8.5，控制提取温度在45-70℃，提取时间为2-3h，过滤得到苦瓜蛋白液。
3.根据权利要求1所述的苦瓜多肽的制备方法，其特征在于，步骤2)中的复合酶由大豆蛋白酶、胰蛋白酶、果胶酶和纤维素酶按照2-4:1-3:1-3:1-4的比例组成。
4.根据权利要求1所述的苦瓜多肽的制备方法，其特征在于，步骤1)中的苦瓜蛋白液是苦瓜原料进行水浴加热提取后调节溶液pH后，使蛋白沉淀析出后的苦瓜蛋白溶液。
5.根据权利要求1所述的苦瓜多肽的制备方法，其特征在于，步骤2)中得到的苦瓜粗多肽中的苦瓜多肽的分子量分布在1kDa-68kDa之间。
6.根据权利要求1所述的苦瓜多肽的制备方法，其特征在于，步骤3)具体为：将步骤2)中得到的分子量在1kDa-68kDa之间的苦瓜粗多肽采用超滤膜进行分子量筛选，预设的超滤膜的分子截留量为10kDa、3kDa、1kDa，分别收集不同分子量的截留液，最后得到4种不同分子量的苦瓜多肽液：10kDa以上、10kDa-3kDa、3kDa-1kDa、1kDa以下；
从4种不同分子量的苦瓜多肽液中选取分子量在3kDa以下的苦瓜多肽，浓缩至固含量为50％，进行干燥，即得苦瓜多肽粉。
7.根据权利要求6所述的苦瓜多肽的制备方法，其特征在于，采用超滤膜过滤时的温度是35-40℃，操作压力为0.3-0.5MPa。
8.根据权利要求1所述的苦瓜多肽的制备方法，其特征在于，所述的干燥为真空干燥。
9.根据权利要求1所述的苦瓜多肽的制备方法，其特征在于，所述的苦瓜原料包括鲜苦瓜、苦瓜干、苦瓜籽、苦瓜干和苦瓜肉。
10.一种苦瓜多肽的应用，其特征在于，将其作为制备或预防II型糖尿病的食品添加辅料、保健食品或药品的原料。
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