CN111848792B - 疫苗中牛血清白蛋白等杂质的抗体制备方法及检测方法 - Google Patents

疫苗中牛血清白蛋白等杂质的抗体制备方法及检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111848792B
CN111848792B CN202010684592.9A CN202010684592A CN111848792B CN 111848792 B CN111848792 B CN 111848792B CN 202010684592 A CN202010684592 A CN 202010684592A CN 111848792 B CN111848792 B CN 111848792B
Authority
CN
China
Prior art keywords
neomycin
bovine serum
antibody
serum albumin
preparation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010684592.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111848792A (zh
Inventor
沈泓
陈碧莲
万宇平
李超
刘柱
张瑜
王宇
邓祖跃
陈晓玉
何凯伦
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ZHEJIANG INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL
Beijing Kwinbon Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
ZHEJIANG INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL
Beijing Kwinbon Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ZHEJIANG INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL, Beijing Kwinbon Biotechnology Co Ltd filed Critical ZHEJIANG INSTITUTE FOR FOOD AND DRUG CONTROL
Priority to CN202010684592.9A priority Critical patent/CN111848792B/zh
Publication of CN111848792A publication Critical patent/CN111848792A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111848792B publication Critical patent/CN111848792B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明提供了一种疫苗中牛血清白蛋白等杂质的抗体制备方法，它涉及：牛血清白蛋白抗体是通过直接免疫动物得到的，杂质新霉素抗体是通过制备出新霉素免疫原，进而免疫动物得到的，然后将得到的抗体应用于酶联免疫检测试剂盒。

Description

疫苗中牛血清白蛋白等杂质的抗体制备方法及检测方法
技术领域
本发明涉及抗体制备技术，具体涉及一种用于检测牛血清白蛋白和新霉素的抗体制备方法，制备出的抗体可应用于快速检测方法，用于测定疫苗中该类杂质的残留量。
背景技术
牛血清白蛋白广泛应用于基础、生化、教学、科研、药品、生物制品等相关实验室，尤其是在疫苗等生物制品生产过程中(如细胞和组织培养等)，一般均使用一定量的牛血清，各品种的终产品虽然均经过一定工艺加以去除，但仍可能残留少量的牛血清。牛血清作为一种致敏物质，可能会在疫苗接种后产生严重后果。因此，残余牛血清的检测是生物制品质量控制中的一个重要指标，而牛血清白蛋白(BSA)作为牛血清中的主要成分，世界卫生组织(WHO)及世界各国生物制品规程对其在制品中的残余含量均有严格限定。BSA含量的检测关系到制品的合格与否，进而影响到人体健康，甚至直接关系到生命的安全。另外，新霉素等抗生素也可能存在于疫苗中，是需要检测的杂质。
本申请研究出牛血清白蛋白和新霉素的抗体制备方法，以便应用于快速检测方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗体制备技术，具体涉及一种用于检测牛血清白蛋白和新霉素的抗体制备方法，制备出的抗体可应用于快速检测方法，比如酶联免疫试剂盒。
本发明的酶联免疫试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、标准品溶液、抗体、酶结合物浓缩液、酶结合物稀释液、底物显色液、终止液、洗涤液，所述包被原分别为新霉素偶联抗原、牛血清白蛋白，所述酶结合物分别为酶标记的新霉素抗体、牛血清白蛋白抗体。
所述新霉素偶联抗原是由新霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述新霉素半抗原是由硫酸新霉素与6-马来酰亚胺基-己醛等物质经过一系列化学反应得到，所述载体蛋白为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、猪尿白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原。
所述新霉素抗体是以新霉素偶联抗原作为免疫原制备获得，所述新霉素特异性抗体可为新霉素单克隆抗体或新霉素多克隆抗体，其中优选新霉素单克隆抗体。
所述牛血清白蛋白抗体是以牛血清白蛋白作为免疫原制备获得，所述牛血清白蛋白抗体可为牛血清白蛋白单克隆抗体或牛血清白蛋白多克隆抗体，其中优选牛血清白蛋白单克隆抗体。
所述酶结合物的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，其中优选辣根过氧化物酶；酶结合物是由酶和抗体偶联得到的。
为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液。
所述新霉素标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L，0.5μg/L，1.5μg/L，4.5μg/L，13.5μg/L，40.5μg/L。
所述牛血清白蛋白标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L，0.1μg/L，0.3μg/L，0.9μg/L，2.7μg/L，8.1μg/L。
当标记酶为辣根过氧化物酶时，所述底物显色液由底物液A液和底物液B液组成，A为过氧化氢或过氧化脲，B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺，所述终止液为1～2mol/L的硫酸溶液或盐酸缓冲液；当标记酶为细菌提取碱性磷酸酯酶时，所述底物显色液为对硝基磷酸盐缓冲液，所述终止液为1～2mol/L氢氧化钠溶液。
所述洗涤液优选为pH值为7.4，含有0.5％～1.0％吐温-20、0.01‰～0.03‰叠氮化钠防腐剂、0.1～0.3mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。
其中在酶标板制备过程中所用到的包被缓冲液为pH值为9.6，0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，封闭液为pH值为7.1～7.5，含有1％～3％酪蛋白、0.1～0.3mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比。
本发明中酶标板的制备过程为：用包被缓冲液将包被原稀释成20μg/mL，每孔加入100μl，25℃避光孵育2h或4℃过夜，倾去孔中液体，用洗涤液洗涤2次，每次30s，拍干，然后在每孔中加入150～200μl封闭液，25℃避光孵育1～2h，倾去孔内液体拍干，干燥后用铝膜真空密封保存。
本发明的检测原理为：
牛血清白蛋白试剂盒采用直接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被免疫原，样本中残留的牛血清白蛋白和酶标板微孔条上预包被的免疫原竞争抗牛血清白蛋白的酶结合物，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含残留物牛血清白蛋白的含量成负相关，与标准曲线比较，再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中牛血清白蛋白的残留量。
新霉素试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中残留的新霉素和酶标板微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗新霉素的抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含残留物新霉素的含量成负相关，与标准曲线比较，再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中新霉素的残留量。
本发明的酶联免疫试剂盒主要采用ELISA方法定性或定量检测样品中待测物的含量；对样品的前处理要求低，样品前处理过程简单，能同时快速检测大批量样品；主要试剂以工作液的形式提供，检验方法方便易行，具有特异性高、灵敏度高、精确度高、准确度高等特点。本发明的酶联免疫试剂盒，结构简单、使用方便、价格便宜、携带便利、检测方法高效、准确、简便、适于大批量样品筛选的定性、定量。
附图说明
图1：新霉素半抗原合成路线图
具体实施方式
下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不用来限制本发明的范围。
实施例1试剂盒组分的制备
1、新霉素半抗原的制备
取硫酸新霉素680mg，加25ml水溶解，加0.2mol/L碳酸钾6ml，充分搅拌，加入含6-马来酰亚胺基-己醛151mg的1ml甲醇溶液，室温搅拌8h，加硼氢化钠55.2mg，继续搅拌2h，用6mol/LHCl调节pH值到7，旋蒸蒸干，除去水分，加吡啶50ml，充分搅拌溶解，过滤，除去盐，有机相旋蒸蒸干，加无水乙醇5ml重结晶，得到半抗原产物马来酰亚胺-新霉素470mg，收率79.05％。
2、抗原的制备
免疫原制备——新霉素半抗原与牛血请白蛋白(BSA)偶联得到免疫原。
取牛血请白蛋白(BSA)100mg，加0.05mol/L PB8.0 6ml溶解，加7.8mg二硫苏糖醇(DDT)，充分溶解，搅拌过夜，得到A液，取68mg马来酰亚胺-新霉素，加乙醇2ml溶解，滴加到A液中，室温反应6h，0.02mol/L PBS透析三天，每天换液3次，得到新霉素-BSA偶联物，即为免疫原，分装，-20℃保存备用。
包被原制备——新霉素半抗原与卵清蛋白(OVA)偶联得到免疫原。
取卵血请白蛋白(OVA)100mg，加0.05mol/L PB8.0 6ml溶解，加5.3mg二硫苏糖醇(DDT)，充分溶解，搅拌过夜，得到A液，取35mg马来酰亚胺-新霉素，加乙醇2ml溶解，滴加到A液中，室温反应6h，0.02mol/L PBS透析三天，每天换液3次，得到新霉素-OVA偶联物，即为包被原，分装，-20℃保存备用。
3、新霉素单克隆抗体和牛血清白蛋白单克隆抗体的制备
动物免疫：将新霉素免疫原/牛血清白蛋白注入到不同Balb/c小鼠体内，免疫剂量为150μg/只，使其产生抗血清。
细胞融合和克隆化：小鼠血清测定结果较高后，取其脾细胞，按8:1(数量配比)比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，采用间接竞争ELISA测定细胞上清液，筛选阳性孔。利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，直到得到分泌新霉素单克隆抗体/牛血清白蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
细胞冻存和复苏：将单克隆杂交瘤细胞株用冻存液制成1×106个/mL的细胞悬液，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37℃水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。
单克隆抗体的生产与纯化：将Balb/c小鼠腹腔注入灭菌石蜡油0.5mL/只，7天后腹腔注射稳定的单克隆杂交瘤细胞株5×105个/只，7天后采集腹水。用辛酸-饱和硫酸铵法进行腹水纯化，-20℃保存。
4、酶结合物的制备
以山羊作为免疫动物，以单克隆抗体为免疫原对无病原体山羊进行免疫，得到相应抗体。将抗体与辣根过氧化物酶(HRP)进行偶联得到酶结合物。
5、酶标板的制备
用包被缓冲液将包被原稀释成20μg/mL，每孔加入100μl，25℃避光孵育2h，倾去孔中液体，用洗涤液洗涤2次，每次30s，拍干，然后在每孔中加入200μl封闭液，25℃避光孵育2h，倾去孔内液体拍干，干燥后用铝膜真空密封保存。
实施例2酶联免疫试剂盒的组建
组建检测新霉素/牛血清白蛋白的酶联免疫试剂盒，使其包含下述组分：
(1)包被有包被原的酶标板；
(2)新霉素标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L，0.5μg/L，1.5μg/L，4.5μg/L，13.5μg/L，40.5μg/L；牛血清白蛋白标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L，0.1μg/L，0.3μg/L，0.9μg/L，2.7μg/L，8.1μg/L；
(3)用辣根过氧化物酶标记的抗体；
(4)底物显色液由A液和B液组成，A液为过氧化脲，B液为四甲基联苯胺；
(5)终止液为2mol/L硫酸；
(6)洗涤液为pH值为7.4，含有0.5％～1.0％吐温-20、0.01‰～0.03‰叠氮化钠防腐剂、0.1～0.3mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量体积百分比；
实施例3生物制品中待测物的检测
1、用试剂盒检测
将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。加入标准品/样本每孔20μl-80μl到对应的微孔中，然后加入酶结合物工作液每孔20μl-80μl，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。将孔内液体甩干，加入洗涤工作液250μl/孔，充分洗涤4-5次，每次间隔10s，泼掉板孔内洗涤液，用吸水纸拍干。加入底物液A液50μl/孔，再加入底物液B液50μl/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15min。加入终止液50μl/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处，测定每孔OD值。
2、检测结果分析
标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值(双孔)除以第一个标准品(0标准)的吸光度值的平均值，再乘以100％，得到标准品或样本的百分吸光度值。以标准品百分吸光率为纵坐标，以标准品浓度(μg/L)的对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。
实施例4新霉素试剂盒的关键技术参数
1、试剂盒线性范围
试剂盒的线性范围为0.5～40.5μg/L。
2、试剂盒准确度
试剂盒的准确度为70％-130％。
3、试剂盒精密度
试剂盒的精密度：板内、板间变异系数均小于10％。
4、试剂盒特异性
链霉素小于0.1％；
卡那霉素小于0.1％；
安普霉素小于0.1％；
庆大霉素小于0.7％；
托普霉素小于0.1％。
实施例5牛血清白蛋白试剂盒的关键技术参数
1、试剂盒线性范围
试剂盒的线性范围为0.1～8.1μg/L。
2、试剂盒准确度
试剂盒的准确度为80％-100％。
3、试剂盒精密度
试剂盒的精密度：板内、板间变异系数均小于10％。

Claims (2)

1.一种疫苗中牛血清白蛋白杂质的抗体制备方法，其特征在于：牛血清白蛋白抗体是通过直接免疫动物得到的，杂质新霉素抗体是通过制备出新霉素免疫原，进而免疫动物得到的，所述新霉素免疫原是通过新霉素半抗原偶联蛋白得到的，所述新霉素半抗原的制备方法如下：
取硫酸新霉素680mg，加25ml 水溶解，加0.2mol/L碳酸钾6ml，充分搅拌，加入含6-马来酰亚胺基-己醛151mg的1ml甲醇溶液，室温搅拌8h，加硼氢化钠55.2mg，继续搅拌2h，用6mol/L HCl调节pH值到7，旋蒸蒸干，除去水分，加吡啶50ml，充分搅拌溶解，过滤，除去盐，有机相旋蒸蒸干，加无水乙醇5ml重结晶，得到半抗原产物马来酰亚胺-新霉素470mg，收率79.05%；
所述新霉素半抗原的分子结构式为：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
。
2.如权利要求1所述的抗体制备方法，其特征在于所述牛血清白蛋白抗体的制备方法如下：
将牛血清白蛋白注入到不同Balb/c小鼠体内，免疫剂量为150μg/只，使其产生抗血清；小鼠血清测定结果较高后，取其脾细胞，按数量配比8:1比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，采用间接竞争ELISA测定细胞上清液，筛选阳性孔；利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化，直到得到分泌牛血清白蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株；将单克隆杂交瘤细胞株用冻存液制成1×106个/mL的细胞悬液，在液氮中长期保存；复苏时取出冻存管，立即放入37℃水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养；将Balb/c小鼠腹腔注入灭菌石蜡油0.5mL/只，7天后腹腔注射稳定的单克隆杂交瘤细胞株5×105个/只，7天后采集腹水；用辛酸-饱和硫酸铵法进行腹水纯化，-20℃保存。
CN202010684592.9A 2020-07-16 2020-07-16 疫苗中牛血清白蛋白等杂质的抗体制备方法及检测方法 Active CN111848792B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010684592.9A CN111848792B (zh) 2020-07-16 2020-07-16 疫苗中牛血清白蛋白等杂质的抗体制备方法及检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010684592.9A CN111848792B (zh) 2020-07-16 2020-07-16 疫苗中牛血清白蛋白等杂质的抗体制备方法及检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111848792A CN111848792A (zh) 2020-10-30
CN111848792B true CN111848792B (zh) 2023-02-24

Family

ID=72983616

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010684592.9A Active CN111848792B (zh) 2020-07-16 2020-07-16 疫苗中牛血清白蛋白等杂质的抗体制备方法及检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111848792B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114591430B (zh) * 2022-05-10 2022-08-12 翌圣生物科技(上海)股份有限公司 Bsa单克隆抗体及其应用、含有抗体的bsa检测试剂盒

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0513778A2 (en) * 1991-05-17 1992-11-19 Takeda Chemical Industries, Ltd. Hybrid monoclonal antibodies and compositions containing them
AU2001249609A1 (en) * 2000-03-28 2001-10-08 Department Of Veterans Affairs Methods for increasing a cytotoxic T lymphocyte response in vivo
WO2002008288A2 (en) * 2000-07-20 2002-01-31 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
CN101021536A (zh) * 2007-03-12 2007-08-22 北京望尔康泰生物技术有限公司 检测新霉素药物的酶联免疫试剂盒及方法
AU2015202447A1 (en) * 2008-07-18 2015-06-04 Bristol-Myers Squibb Company Compositions monovalent for cd28 binding and methods of use
CN106526167A (zh) * 2016-10-31 2017-03-22 中国农业大学 一种青霉震颤素结合抗原及其抗体的制备与应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0513778A2 (en) * 1991-05-17 1992-11-19 Takeda Chemical Industries, Ltd. Hybrid monoclonal antibodies and compositions containing them
AU2001249609A1 (en) * 2000-03-28 2001-10-08 Department Of Veterans Affairs Methods for increasing a cytotoxic T lymphocyte response in vivo
WO2002008288A2 (en) * 2000-07-20 2002-01-31 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
CN101021536A (zh) * 2007-03-12 2007-08-22 北京望尔康泰生物技术有限公司 检测新霉素药物的酶联免疫试剂盒及方法
AU2015202447A1 (en) * 2008-07-18 2015-06-04 Bristol-Myers Squibb Company Compositions monovalent for cd28 binding and methods of use
CN106526167A (zh) * 2016-10-31 2017-03-22 中国农业大学 一种青霉震颤素结合抗原及其抗体的制备与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN111848792A (zh) 2020-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8507214B2 (en) Elisa kit for detecting lincomycin
CN100445746C (zh) 一种检测19-去***的方法及其专用酶联免疫试剂盒
WO2014005298A1 (zh) 检测二硝托胺的酶联免疫试剂盒及其应用
CN101776685B (zh) 检测三甲氧苄胺嘧啶药物的酶联免疫试剂盒及其应用
CN109061169B (zh) 一种检测啶虫脒的酶联免疫试剂盒及其应用
CN110133306B (zh) 检测西马特罗的酶联免疫试剂盒及其应用
CN102876634B (zh) 孕马血清***双抗体夹心elisa试剂盒
CN111848792B (zh) 疫苗中牛血清白蛋白等杂质的抗体制备方法及检测方法
CN109307761B (zh) 一种检测糠氨酸的间接竞争elisa方法
CN100582778C (zh) 一种检测伊维菌素的方法及其专用酶联免疫试剂盒
CN111273015B (zh) 一种检测短裸甲藻毒素的酶联免疫试剂盒及其制备和应用
CN109061171B (zh) 一种检测氟节胺的酶联免疫试剂盒及其应用
CN110684188B (zh) 壬基酚聚氧乙烯醚半抗原和全抗原及其制备方法与应用
CN100348979C (zh) 一种检测链霉素药物的酶联免疫试剂盒
CN112904008A (zh) 检测生物制品中蛋白a等杂质的酶联免疫试剂盒及其应用
CN111812316B (zh) 一种甲氰菊酯人工抗原在酶联免疫试剂盒中的应用
CN109541216B (zh) 检测伊维菌素和阿维菌素的酶联免疫试剂盒及其应用
CN109324187B (zh) 一种检测甲霜灵的酶联免疫试剂盒及其应用
CN110684110A (zh) 一种甲基嘧啶磷单克隆抗体的制备及其应用
CN109813922B (zh) 检测氯丙那林的酶联免疫试剂盒及其应用
CN111505297B (zh) 一种硫丹人工抗原在酶联免疫试剂盒中的应用
CN111273041A (zh) 一种检测鬼笔环肽的酶联免疫试剂盒及其制备和应用
CN111377888A (zh) 一种闹羊花毒素iii半抗原及其制备方法与应用
CN105823872B (zh) 检测抑芽丹的酶联免疫试剂盒及其应用
CN113281501B (zh) 一种五氯硝基苯人工抗原在酶联免疫试剂盒中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant