CN111793679A - 一种pcr扩增中减少蒸发与非特异性反应的方法和装置 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种PCR扩增中减少蒸发与非特异性反应的方法与装置,在PCR反应的全过程进行电控跟踪热盖升降,以减少试管内的液体蒸发,具体的,当PCR反应处于高温变性和中温延伸阶段时,将热盖下降并在热盖上施加一定的压力,以减少非特异性扩增;当PCR反应处于低温退火阶段时,将热盖升起。本发明采用电控热盖跟踪试管的PCR反应过程,减少非特异性扩增,并通过与试管顶部接触区域安装填充DBE液体的液体压垫,能够大幅度减少蒸发,与试管接触区域通过液体压垫可提高温度均匀性到0.5℃以内,并通过液体压垫所产生的包裹作用大幅度减少蒸发,比常规仪器能减少蒸发量的80%以上,从而提高扩增效率和后级检测的精确度。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程PCR反应控制技术领域,具体说是一种PCR扩增中减少蒸发与非特异性反应的方法和装置。
背景技术
PCR技术(聚合酶链反应技术),是一种在体外扩增核酸的技术,该技术是为了模拟体内天然DNA的复制过程,在体外扩增DNA分子的一种分子生物学技术,主要用于扩增位于两段已知序列之间的DNA区段。其基本原理是在模板、引物、4种dNTP和赖热DNA聚合酶存在的条件下,特异扩增位于两段已知序列之间的DNA区段的酶促合成反应。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物,经变性、退火和延伸若干个循环后,DNA扩增2n倍。
PCR的每个循环过程包括高温变性、低温退火、中温延伸三个不同的事件:①变性:加热使模板DNA在高温下(94℃左右)双链间的氢键断裂而形成两条单链;②退火:使溶液温度降至50~60℃,模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合;③延伸:溶液反应温度升至72℃,耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板,在引物的引导下,利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸(dNTP),按5'-3'方向复制出互补DNA。
目前的PCR反应控制***中的热盖***的升降部分一般采用手动螺杆螺母进行调节或电动升降,在手动调节时若试管较少集中于一侧时,容易出现压偏的情况,并且手动试压的压力因人而异,不容易掌控,在PCR反应过程中蒸发量大;电动升降一般采用涡轮螺杆机构,尺寸大,压力大,也存在容易压偏的问题,而且由于无论手动或电动,在试管接触时均采用硬制金属材料进行接触,由于试管尺寸不同,试管盖的形式不同(如圆盖和平盖),从而导致与试管接触部分较小(尤其在圆盖情况下),试管顶部的温度无法均匀,从而导致较大的蒸发。
另外目前的PCR反应控制***,无论手动或电动,均在PCR反应前热盖即开始升温加压,而且在PCR反应过程中,热盖一直加压、保温,由于试管顶部的热传导导致PCR反应的非特异性,为后级分析带来误差,甚至产生错误的检测分析结果。
发明内容
为解决PCR扩增过程中蒸发量大,非特异性反应多的问题,本发明的目的是提供一种PCR扩增中减少蒸发与非特异性反应的方法和装置。
本发明为实现上述目的,通过以下技术方案实现:
一种PCR扩增中减少蒸发与非特异性反应的方法,在PCR反应的全过程进行电控跟踪热盖升降,以减少试管内的液体蒸发,具体的,当PCR反应处于高温变性和中温延伸阶段时,将热盖下降并在热盖上施加一定的压力,以减少非特异性扩增;当PCR反应处于低温退火阶段时,将热盖升起;为了大幅度减少蒸发,在试管顶部和热盖接触区域安装填充有DBE液体的液体压垫。
优选的,PCR反应前,热盖运动到试管顶部,避免热盖对试管的热传递而发生的PCR的非特异性反应,在PCR反应开始后热盖开始下降并施加所加的压力。
一种实现上述PCR扩增中减少蒸发与非特异性反应方法的装置,包括支撑架,所述支撑架1由上板、下板和支腿组成,所述支撑架1内放置三组烧杯,所述三组烧杯各放置在下板上,三组烧杯内各设有两层固定架,所述上板上设有三组电动推杆,各电动推杆与上板固定连接,所述电动推杆各与推板连接,所述推板各固定在固定盖上,各固定盖通过隔热垫、电热板和压盖连接,各压盖上设有橡胶垫,所述电热板和压盖形成空腔,所述各压盖上设有第一通孔,各橡胶垫上设有第二通孔,空腔与第一通孔和第二通孔相通,所述空腔内设有温度传感器,空腔上各设有进气管,进气管与空腔相通,各压盖内壁与各烧杯外壁紧密配合,各烧杯内多个试管,试管放置在烧杯内的固定架上,所述试管端口各与压盖上的橡胶垫配合,各压盖与对应的烧杯扣合后,该烧杯内的试管通过第一通孔和第二通孔与空腔相通。
本发明相比现有技术具有以下优点:
本发明采用电控热盖跟踪试管的PCR反应过程,减少非特异性扩增,并通过与试管顶部接触区域安装填充DBE液体的液体压垫,能够大幅度减少蒸发,与试管接触区域通过液体压垫可提高温度均匀性到0.5℃以内,并通过液体压垫所产生的包裹作用大幅度减少蒸发,比常规仪器能减少蒸发量的80%以上,从而提高扩增效率和后级检测的精确度。
本发明PCR扩增中减少蒸发与非特异性反应方法的装置,同时可进行三组不同的试验,可以分别进行低压、中压和高压的设置,同时每个各烧杯内多个试管,可以进行多组平行试验,减少***误差,在减少蒸发和非特异性反应的同时,可以减少装置的***误差,提高了PCR反应检测精度。
附图说明
图1是本发明所述PCR扩增中减少蒸发与非特异性反应装置的结构示意图。
具体实施方式
按照本发明的技术方案,本发明给出了一种PCR扩增中减少蒸发与非特异性反应的方法,该方法对试管在PCR反应的全过程采用电控跟踪热盖升降,在低温退火时热盖升起,在高温变性和中温延伸时热盖下降并施加用户所定义的压力。
以下给出一种实现上述方法的PCR扩增中减少蒸发与非特异性反应装置的实施例,本发明不限于该实施例。
参照图1,一种实现PCR扩增中减少蒸发与非特异性反应方法的装置,包括支撑架1,所述支撑架1由上板101、下板102和支腿103组成,所述支撑架1内放置三组烧杯2,所述三组烧杯2各放置在下板102上,三组烧杯2内各设有两层固定架3,所述上板101上设有三组电动推杆4,各电动推杆4与上板101固定连接,所述电动推杆4各与推板5连接,所述推板5各固定在固定盖6上,各固定盖6通过隔热垫7、电热板8和压盖9连接,各压盖9上设有橡胶垫10,所述电热板8和压盖9形成空腔11,所述各压盖9上设有第一通孔15,各橡胶垫10上设有第二通孔16,空腔11与第一通孔15和第二通孔16相通,所述空腔11内设有温度传感器12,空腔11上各设有进气管13,进气管10与空腔11相通,各压盖9内壁与各烧杯2外壁紧密配合,各烧杯2内多个试管14,试管14放置在烧杯2内的固定架3上,所述试管14端口各与压盖9上的橡胶垫10配合,各压盖9与对应的烧杯2扣合后,该烧杯2内的试管14通过第一通孔15和第二通孔16与空腔11相通。
本发明PCR扩增中减少蒸发与非特异性反应方法的装置,同时可进行三组不同试验,可以依次根据自身需要设计压力范围,在减少蒸发和非特异性反应的同时,可以减少装置的***误差,具有非常好的试验效果。
在PCR反应过程中,动态的热盖压力和位置控制可降低PCR的非特异性反应,反应过程的控制以一般PCR扩增试验流程为例,表示了热盖控制与PCR过程的互动控制。具体过程是:
(1)开机;
(2)热盖首先被提升至试管顶部;
(3)由用户进行PCR反应参数的配置;
(4)热盖温度压力及控制方式配置;然后
(5)热盖根据用户配置加热到预定温度;
(6)用户确认PCR反应开始;在PCR反应开始后,热盖开始加压,并根据压力传感器的反馈施加用户定义的压力(1-10kg)。
(7)此时热盖下降,并加压达到预定压力;然后
(8)进行PCR的常规反应前处理,如酶热启动;
(9)然后经历高温变性,此时热盖保持恒压;
(10)低温退火,此时热盖上升,泄压;
(11)中温延伸的过程,在此过程中,热盖保持恒压;
(12)循环数的判断,如果循环数达到要求,PCR反应结束,如果未达到循环数,则返回到步骤(9)。
根据用户的配置,可在步骤(9)和步骤(11)的阶段将热盖均匀加压,而在低温退火(10)的过程中,热盖释放压力,并根据压力传感器的反馈施加用户定义的压力(1-10kg)。具体是否释放用户可以合理配置,在PCR达到设定的循环数后,PCR反应结束。
为了防止平行试验中每组试验需要重新运行,***误差大的的情况,本实施例通过3组烧杯平行设置,可以分别进行低压、中压和高压的设置,每个各烧杯内多个试管,可以进行多组平行试验,减少***误差,提高了PCR反应检测精度。
上述仅为一般的PCR过程控制的举例,在具体的PCR反应过程中,热盖的位置和压力都是可以用户配置的。
Claims (3)
1.一种PCR扩增中减少蒸发与非特异性反应的方法,其特征在于:在PCR反应的全过程进行电控跟踪热盖升降,以减少试管内的液体蒸发,具体的,当PCR反应处于高温变性和中温延伸阶段时,将热盖下降并在热盖上施加一定的压力,以减少非特异性扩增;当PCR反应处于低温退火阶段时,将热盖升起;为了大幅度减少蒸发,在试管顶部和热盖接触区域安装填充有DBE液体的液体压垫。
2.根据权利要求1所述的一种PCR扩增中减少蒸发与非特异性反应的方法,其特征在于:PCR反应前,热盖运动到试管顶部,避免热盖对试管的热传递而发生的PCR的非特异性反应,在PCR反应开始后热盖开始下降并施加所加的压力。
3.一种实现权利要求1所述PCR扩增中减少蒸发与非特异性反应方法的装置,其特征在于:包括支撑架(1),所述支撑架(1)由上板(101)、下板(102)和支腿(103)组成,所述支撑架(1)内放置三组烧杯(2),所述三组烧杯(2)各放置在下板(102)上,三组烧杯(2)内各设有两层固定架(3),所述上板(101)上设有三组电动推杆(4),各电动推杆(4)与上板(101)固定连接,所述电动推杆(4)各与推板(5)连接,所述推板(5)各固定在固定盖(6)上,各固定盖(6)通过隔热垫(7)、电热板(8)和压盖(9)连接,各压盖(9)上设有橡胶垫(10),所述电热板(8)和压盖(9)形成空腔(11),所述各压盖(9)上设有第一通孔(15),各橡胶垫(10)上设有第二通孔(16),空腔(11)与第一通孔(15)和第二通孔(16)相通,所述空腔(11)内设有温度传感器(12),空腔(11)上各设有进气管(13),进气管(10)与空腔(11)相通,各压盖(9)内壁与各烧杯(2)外壁紧密配合,各烧杯(2)内多个试管(14),试管(14)放置在烧杯(2)内的固定架(3)上,所述试管(14)端口各与压盖(9)上的橡胶垫(10)配合,各压盖(9)与对应的烧杯(2)扣合后,该烧杯(2)内的试管(14)通过第一通孔(15)和第二通孔(16)与空腔(11)相通。
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