CN111763218B - 一种噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物及其制备方法与应用 - Google Patents

一种噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物及其制备方法与应用 Download PDF

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CN111763218B CN202010672542.9A CN202010672542A CN111763218B CN 111763218 B CN111763218 B CN 111763218B CN 202010672542 A CN202010672542 A CN 202010672542A CN 111763218 B CN111763218 B CN 111763218B
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Abstract

本发明涉及一种噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物及其制备方法和应用。所述化合物具有式I或II所示的结构。本发明还涉及含有式I或II结构化合物的制备方法以及药物组合物。本发明还提供上述化合物在制备抗痛风的药物中的应用。

Description

一种噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于有机化合物合成与医药应用技术领域，具体涉及一种噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物及其制备方法及应用。
背景技术
痛风是由于嘌呤代谢紊乱造成尿酸生成增多或者***减少，形成的单钠尿酸盐晶体沉积于关节组织中所引起的一种代谢性疾病，高尿酸血症是其主要临床表现。嘌呤在体内的代谢终产物是尿酸，高尿酸血症是由于体内嘌呤代谢异常所引起的一种代谢性疾病。近几十年来，全球痛风和高尿酸血症患者人数不断增多，严重影响着人类的生活质量，给社会带来沉重负担。我国是痛风高发国，痛风患者人数约为1％-3％，而高尿酸血症患者人数更是达到了5.0％-23.4％。目前，临床上用于治疗痛风和高尿酸血症的药物主要有抗炎药、以黄嘌呤氧化酶抑制剂为主的尿酸生成抑制剂以及促尿酸***药，但由于这些药物愈后效果差或存在严重的毒副作用，极大地限制了临床使用。尿酸盐转运蛋白1(URAT1)是目前促进尿酸***药物的一个新型靶标，其基因突变所导致的URATI活性增加或基因表达增加是高尿酸血症的重要发病机制之一。Lesinurad是一种新近上市的用于治疗痛风的增加尿酸***口服药，可抑制肾脏近端小管尿酸转运子URAT1。但该化合物肝脏毒性较为严重，因此将该类化学结构进行修饰，对发现高效、低毒且具有自主知识产权的新型抗痛风药物具有重大意义。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物及其制备方法，本发明还提供了上述化合物作为抗痛风药物的活性筛选结果及其应用。
本发明的技术方案如下：
一、噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物
本发明的噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物，具有如下通式I或II所示的结构：
Figure GDA0003038802590000011
其中，
R为-H,-CH3或
Figure GDA0003038802590000021
R1为-CH2-,-*CH(CH3)-或-C(CH3)2-；*代表手性碳原子；
R2为-OH或-OCH3。
根据本发明优选的，噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物是下列之一：
表1.化合物M1～T8的结构式
Figure GDA0003038802590000022
Figure GDA0003038802590000031
Figure GDA0003038802590000041
Figure GDA0003038802590000051
二、噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物的制备方法
本发明噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物的制备方法如下列之一：
(1)4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶类目标化合物(I)的制备方法
4-氧代-3,4-二氢噻吩并[3,2-d]嘧啶类目标化合物制备方法，步骤如下：
以4-溴-1-萘胺为起始原料与环丙基硼酸发生Suzuki偶联反应生成中间体4-环丙基-1-萘胺a，再与1,1’-硫羰基二咪唑反应得到中间体b，接着与含有不同取代基的3-氨基噻吩-2-甲酸甲酯在无水乙醇或者吡啶溶液中反应得到中间体I-1(a-c)，然后在DMF溶液中K2CO3的催化下与取代溴乙酸甲酯发生亲核取代反应得到目标产物I-2(a-i)，最终在四氢呋喃和甲醇的混合溶液中用氢氧化锂或氢氧化钠水解得到目标产物I-3(a-i)。
合成路线一如下：
Figure GDA0003038802590000052
试剂及条件:(i)K3PO4，Pd(PPh3)4，环丙基硼酸，甲苯：水＝25:2v/v，N2保护，100℃，12h；(ii)CH2Cl2，1,1'-硫羰基二咪唑，室温，12h；(iii)3-氨基噻吩-2-甲酸甲酯或3-氨基-5-甲基噻吩-2-甲酸甲酯，无水乙醇，90℃，4h，3-氨基-4-甲基噻吩-2-甲酸甲酯，吡啶，50℃，12h，NaOH，90℃，12h；(iv)K2CO3，DMF，2-溴异丁酸甲酯或2-溴丙酸甲酯或溴乙酸甲酯，100℃，3h；(v)甲醇，四氢呋喃，氢氧化锂/氢氧化钠，常温，12h.
(2)4-氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶类目标化合物(II)的制备方法
4-氧代-3,4-二氢噻吩并[2,3-d]嘧啶类目标化合物的制备方法，步骤如下：
以4-溴-1-萘胺为起始原料与环丙基硼酸发生Suzuki偶联反应生成中间体4-环丙基-1-萘胺a，再与1,1’-硫羰基二咪唑反应得到中间体b，再与含有不同取代基的2-氨基噻吩-3-甲酸甲酯在吡啶或者无水乙醇中反应生成中间体II-1(a-e)，接着在DMF溶液中，在K2CO3催化下与多种酯发生亲核取代反应得到相应的目标产物II-2(a-o)，最终在四氢呋喃和甲醇的混合溶液中用氢氧化锂或氢氧化钠水解得到目标产物II-3(a-o)。
合成路线二如下：
Figure GDA0003038802590000061
试剂及条件:(i)K3PO4，Pd(PPh3)4，环丙基硼酸，甲苯：水＝25:2v/v，N2保护，100℃，12h；(ii)CH2Cl2，1,1'-硫羰基二咪唑，室温，12h；(iii)各种取代2-氨基噻吩-3-甲酸甲酯，无水乙醇，90℃，4h，吡啶，50℃，12h，NaOH，90℃，12h；(iv)K2CO3，DMF，2-溴异丁酸甲酯或2-溴丙酸甲酯或溴乙酸甲酯，100℃，3h；(v)甲醇，四氢呋喃，氢氧化锂或氢氧化钠，常温，12h.
本发明所述的室温是指20-30℃。
三、噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物的应用
本发明公开了噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物降血尿酸活性筛选结果及其作为抗痛风药物的首次应用。通过实验证明本发明噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物可作为降血尿酸药物应用。具体地说，作为降血尿酸化合物用于制备抗痛风药物。本发明还提供上述化合物在制备抗痛风的药物中的应用。
目标化合物的抗痛风活性
对按照上述方法合成的48个化合物(化合物的结构式见表1)，并对其中羧酸类化合物进行了体外靶标抑制活性筛选，它们的靶标抑制活性数据列于表2中，以Lesinurad为阳性对照。由表2可以看出化合物I-3a、I-3b、I-3e、II-3a、II-3b、II-3h均呈现出较好的URAT1抑制活性，且均强于阳性对照药物。
因此，本发明的噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物是一系列结构新颖的URAT1抑制剂，可作为抗痛风的先导化合物加以利用。
本发明的噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物可作为URAT1抑制剂应用。具体地说，作为URAT1抑制剂用于制备抗痛风药物。
一种抗痛风药物组合物，包括本发明的噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
附图说明
图1是化合物II-3a口服和注射平均血药浓度-时间曲线。
具体实施方式
通过下述实例有助于理解本发明，但是不能限制本发明的内容，在下列实例中，所有目标化合物的编号与表1相同。
合成路线：
Figure GDA0003038802590000071
实施例1.中间体1-环丙基-4-异硫氰基萘(b)的制备
中间体4-环丙基-1-萘胺(a)的制备：
将原料4-溴-1-萘胺(3.0g，13.50mmol)与环丙基硼酸(1.5g，17.55mmol)混合置于250mL双颈瓶中，再向瓶中加入K3PO4(10.2g，47.10mmol)、四三苯基膦钯(1.5g，1.35mmol)，混合后加入约60mL甲苯与5mL水作溶剂，密封，进行N2保护，100℃加热回流反应12h；TLC监测，待反应结束后，将反应液冷却至室温，过滤，乙酸乙酯洗涤(20mL×3)，收集滤液，然后将滤液干燥得到深棕色残余物，再向残余物中加入约30mL水，用乙酸乙酯萃取(40mL×3)，合并有机相，加入适量无水硫酸镁进行干燥，2h后过滤干燥得粗品a，经柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝6:1)即可得到相应的中间体，产物为棕红色油状物，收率：60％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34–8.21(m,1H),8.02(d,J＝8.3Hz,1H),7.48(ddd,J＝8.2,6.6,1.3Hz,1H),7.42(ddd,J＝8.3,6.7,1.4Hz,1H),7.00(d,J＝7.7Hz,1H),6.57(d,J＝7.7Hz,1H),5.58(s,2H),2.16(ddd,J＝13.5,8.4,5.3Hz,1H),1.00–0.85(m,2H),0.63–0.49(m,2H).
中间体1-环丙基-4-异硫氰基萘(b)的制备
将中间体a(0.62g，3.36mmol)加入到250mL圆底烧瓶中，再加入约40mL二氯甲烷溶解，接着加入1,1’-硫羰基二咪唑(1.0g，5.6mmol)常温下搅拌12h，TLC监测，待反应结束后蒸干溶剂，洗脱(纯石油醚)纯化得到中间体b，为无色油状物，收率80.0％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54–8.42(m,1H),8.02(dd,J＝7.9,2.0Hz,1H),7.74(td,J＝7.4,6.7,3.5Hz,2H),7.55(d,J＝7.7Hz,1H),7.24(d,J＝7.7Hz,1H),2.42(td,J＝8.4,4.3Hz,1H),1.13–1.02(m,2H),0.73(dd,J＝5.5,1.8Hz,2H).
实施例2.中间体3-(4-环丙基萘-1-基)-2-巯基噻吩并[3,2-d]嘧啶-4(3H)-酮(I-1a)的制备
将中间体b(0.507g，2.25mmol)与3-氨基噻吩-2-甲酸甲酯(0.307g，1.95mmol)溶于20mL无水乙醇中，90℃下加热回流反应4h；TLC监测，反应完全后冷却至室温，析出晶体，过滤，取滤饼，再加入少量乙醇重结晶，过滤取出固体，再加入30mL 2mol/L KOH溶液，90℃加热回流至化合物溶解后，停止加热，冷却至室温，此时有少量絮状物析出，再用3mol/LHCl将pH调至3左右，析出大量白色固体，此时缓慢过滤，再用清水(10mL×2)洗涤，干燥得中间体I-1a，为白色固体，收率为18.3％；熔点：>250℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.63(s,1H),8.48(d,J＝8.4Hz,1H),8.26(d,J＝5.3Hz,1H),7.72–7.57(m,2H),7.54–7.46(m,1H),7.44–7.30(m,2H),7.15(d,J＝5.3Hz,1H),2.47(dd,J＝8.3,5.5Hz,1H),1.12(d,J＝8.4Hz,2H),0.90–0.76(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ176.91,157.34,146.57,140.18,138.29,134.64,134.07,129.88,127.22,127.03,126.53,125.17,123.51,123.29,117.98,115.74,13.34,7.51,7.23.ESI-MS:m/z 349.3[M-H]-,C19H14N2OS2[350.05]
实施例3.中间体3-(4-环丙基萘-1-基)-2-巯基-7-甲基噻吩并[3,2-d]嘧啶-4(3H)-酮(I-1b)的制备
将中间体b(0.224g，0.99mmol)与反应物3-氨基-5-甲基噻吩-2-甲酸甲酯(0.135g，0.79mmol)溶于约5mL吡啶溶液中，45℃加热反应12h，TLC监测，待反应完全后，冷却至室温，加入约40mL冰水，再用二氯甲烷(40mL×3)萃取，合并有机相，无水硫酸镁干燥，过滤，取滤液，蒸干，再用30mL 1％的NaOH溶液于90℃加热回流12h，冷却至室温后，过滤，取滤液，再用1mol/L盐酸将pH调至3左右，析出了大量白色固体，过滤，滤饼用清水洗涤，得中间体I-1b，为白色固体，收率53.0％；熔点：>250℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.40(s,1H),8.48(d,J＝8.5Hz,1H),7.90(s,1H),7.64–7.54(m,2H),7.52–7.46(m,1H),7.36(q,J＝7.6Hz,2H),2.47(dd,J＝8.3,5.5Hz,1H),2.39(s,3H),1.18–1.09(m,2H),0.83(q,J＝8.0,5.4Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ177.48,157.36,145.70,140.15,134.74,134.12,133.23,129.87,127.66,127.23,127.01,126.51,125.19,123.53,123.25,116.12,13.78,13.36,7.52,7.26.ESI-MS:m/z 363.3[M-H]-,C20H16N2OS2[364.07].
实施例4.中间体3-(4-环丙基萘-1-基)-2-巯基-6-甲基噻吩并[3,2-d]嘧啶-4(3H)-酮(I-1c)的制备
该中间体的制备方法同实施例3，为白色固体，收率50.0％；熔点：209-211℃；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.53(s,1H),8.47(d,J＝8.4Hz,1H),7.65–7.53(m,2H),7.51–7.45(m,1H),7.34(q,J＝7.6Hz,2H),6.91(s,1H),2.61(s,3H),2.48–2.42(m,1H),1.11(d,J＝8.6Hz,2H),0.81(tt,J＝12.1,7.6Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ176.88,156.81,152.88,146.72,140.14,134.69,134.09,129.91,127.24,127.00,126.49,125.17,123.47,123.25,116.53,113.54,16.66,13.33,7.50,7.24.ESI-MS:m/z 363.3[M-H]-,C20H16N2OS2[364.07].
实施例5.化合物I-2a的制备
将中间体I-1a(0.17mmol)与K2CO3(0.61mmol)混合于25mL圆底烧瓶中，再用约8mLDMF溶解，90℃加热反应5min后，再逐滴加入溴乙酸甲酯(0.30mmol)，继续加热至100℃，回流反应3h，TLC监测，待反应完全后，将体系冷却至室温，再往反应液中缓慢加入冰水，溶液先变澄清后浑浊，滴加至没有新固体产生，过滤，清水洗涤滤饼，取滤饼干燥，得目标产物I-2a；白色固体，产率：85.2％，熔点：157-159℃.
化合物I-2a波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(d,J＝8.4Hz,1H),8.28(d,J＝5.2Hz,1H),7.69(t,J＝7.6Hz,1H),7.66–7.52(m,2H),7.43(d,J＝7.9Hz,2H),7.38(d,J＝5.3Hz,1H),4.03–3.85(m,2H),3.64(s,3H),2.56(dq,J＝8.2,4.2,2.7Hz,1H),1.15(dq,J＝8.5,3.2,2.8Hz,2H),0.86(dq,J＝14.0,9.2,7.4Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.09,159.78,157.66,156.64,142.80,136.96,134.13,130.47,129.67,128.48,128.05,127.26,125.48,125.14,123.22,122.60,119.45,52.85,34.61,13.42,7.83,7.54.ESI-MS:m/z 423.3[M+H]+,C22H18N2O3S2[422.08].
实施例6.化合物I-2b的制备
操作同实施例5，所不同的是使用的酯是2-溴丙酸甲酯，白色固体，产率：75.5％，熔点：165-167℃。
化合物I-2b波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(d,J＝8.4Hz,1H),8.29(d,J＝5.2Hz,1H),7.69(t,J＝7.5Hz,1H),7.60(dq,J＝14.0,7.0,6.3Hz,2H),7.50–7.31(m,3H),4.44(dq,J＝14.7,7.3Hz,1H),3.64(d,J＝18.9Hz,3H),2.63–2.54(m,1H),1.37(dd,J＝13.4,7.3Hz,3H),1.22–1.08(m,2H),0.87(ddd,J＝29.7,9.9,5.3Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ172.06,159.13,157.65,156.60,142.82,137.01,134.10,130.40,129.64,128.46,128.05,127.27,125.49,125.07,123.20,122.49,119.54,53.01,44.38,17.25,13.40,7.94,7.49.ESI-MS:m/z437.4[M+H]+,C23H20N2O3S2[436.09].
实施例7.化合物I-2c的制备
操作同实施例5，所不同的是使用的酯是2-溴异丙酸甲酯，白色固体，产率68.7％，熔点：198-201℃。
化合物I-2c波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(d,J＝8.4Hz,1H),8.27(d,J＝5.3Hz,1H),7.69(t,J＝7.6Hz,1H),7.59(dd,J＝7.6,4.1Hz,2H),7.39(dd,J＝7.9,4.5Hz,2H),7.27(d,J＝5.2Hz,1H),3.66(s,3H),2.56(dd,J＝9.6,4.3Hz,1H),1.52(s,3H),1.46(s,3H),1.22–1.08(m,2H),0.97–0.75(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ173.86,158.99,157.58,156.48,142.70,137.08,134.10,130.37,129.56,128.36,128.08,127.24,125.49,124.74,123.15,122.42,119.34,53.28,53.07,26.03,25.80,13.39,8.04,7.42.ESI-MS:m/z 451.3[M+H]+,C24H22N2O3S2[450.11].
实施例8.化合物I-2d的制备
操作同实施例5，所不同的是使用的是中间体I-1b，白色固体，产率：81.7％，熔点：96-98℃。
化合物I-2d波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(d,J＝8.5Hz,1H),7.93(s,1H),7.69(t,J＝7.6Hz,1H),7.64–7.54(m,2H),7.42(t,J＝7.8Hz,2H),3.90(d,J＝3.7Hz,2H),3.65(s,3H),2.56(dq,J＝8.2,4.2,2.8Hz,1H),2.33(s,3H),1.23–1.10(m,2H),0.87(h,J＝9.7,8.4Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.29,159.67,157.81,155.45,142.79,134.15,133.49,131.65,130.51,129.66,128.42,128.04,127.25,125.47,123.21,122.59,119.17,52.78,34.86,13.42,12.56,7.82,7.55.ESI-MS:m/z 437.4[M+H]+,C23H20N2O3S2[436.09].
实施例9.化合物I-2e的制备
操作同实施例8，所不同的是使用的酯是2-溴丙酸甲酯，白色固体，产率：80.0％，熔点：152-154℃。
化合物I-2e波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(d,J＝8.5Hz,1H),7.93(s,1H),7.69(t,J＝7.5Hz,1H),7.64–7.52(m,2H),7.47–7.32(m,2H),4.35(dq,J＝14.8,7.3Hz,1H),3.64(d,J＝11.5Hz,3H),2.62–2.53(m,1H),2.34(s,3H),1.39(t,J＝6.8Hz,3H),1.21–1.09(m,2H),0.96–0.77(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ172.34,158.99,157.77,155.48,142.77,134.12,133.56,131.63,130.47,129.63,128.41,128.07,127.25,125.49,123.18,122.47,119.25,52.95,44.41,16.47,13.40,12.62,7.94,7.50.ESI-MS:m/z 451.4[M+H]+,C24H22N2O3S2[450.11].
实施例10.化合物I-2f的制备
操作同实施例8，所不同的是使用的酯是2-溴异丙酸甲酯，白色固体，产率：83.0％，熔点：130-132℃。
化合物I-2f波谱数据：1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.52(d,J＝8.5Hz,1H),7.60(t,J＝7.5Hz,1H),7.54–7.47(m,1H),7.42(d,J＝7.8Hz,3H),7.37(d,J＝7.6Hz,1H),3.71(s,3H),2.45(td,J＝8.3,4.0Hz,1H),2.39(s,3H),1.59(s,3H),1.56(s,3H),1.14(dd,J＝8.4,4.3Hz,2H),0.88(dq,J＝22.5,5.6Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ173.91,158.74,157.74,155.55,142.68,134.11,133.75,131.53,130.43,129.57,128.35,128.06,127.23,125.49,123.14,122.41,119.12,53.13,53.06,26.00,25.73,13.38,12.74,8.04,7.41.ESI-MS:m/z 465.3[M+H]+,C25H24N2O3S2[464.12].
实施例11.化合物I-2g的制备
操作同实施例5，所不同的是使用的中间体是I-1c，白色固体，产率：86.4％，熔点：179-181℃。
化合物I-2g波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.69(q,J＝7.5Hz,1H),7.63–7.54(m,2H),7.40(t,J＝7.4Hz,2H),7.12(s,1H),3.98–3.84(m,2H),3.63(s,3H),2.63(s,3H),2.59–2.52(m,1H),1.15(d,J＝8.3Hz,2H),0.90–0.81(m,2H).13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.07,159.74,157.08,156.89,151.24,142.75,134.14,130.54,129.70,128.44,128.02,127.23,125.46,123.56,123.18,122.57,117.74,52.81,34.59,16.76,13.41,7.80,7.55.ESI-MS:m/z 437.3[M+H]+,C23H20N2O3S2[436.09].
实施例12.化合物I-2h的制备
操作同实施例11，所不同的是使用的酯是2-溴丙酸甲酯，白色固体，产率：62.7％，熔点：178-180℃。
化合物I-2h波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(t,J＝7.4Hz,1H),7.63–7.53(m,2H),7.38(dd,J＝18.1,7.5Hz,2H),7.12(s,1H),4.38(dt,J＝14.6,7.5Hz,1H),3.63(d,J＝18.4Hz,3H),2.63(s,3H),2.59–2.53(m,1H),1.43–1.27(m,3H),1.15(d,J＝8.3Hz,2H),0.86(d,J＝20.4Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ172.14,159.03,157.07,156.85,151.30,142.77,138.45,134.11,129.67,128.43,128.07,127.24,125.48,123.49,123.17,122.53,117.83,52.98,44.37,17.18,16.75,13.39,7.92,7.50.ESI-MS:m/z 451.4[M+H]+,C24H22N2O3S2[450.11].
实施例13化合物I-2i的制备
操作同实施例11，所不同的是使用的酯是2-溴异丙酸甲酯，白色固体，产率：66.5％，熔点：176-178℃。
化合物I-2i波谱数据:1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(t,J＝7.5Hz,1H),7.57(dd,J＝14.0,7.4Hz,2H),7.43–7.32(m,2H),7.04(s,1H),3.66(s,3H),2.62(s,3H),2.58–2.52(m,1H),1.50(s,3H),1.44(s,3H),1.15(d,J＝7.4Hz,2H),0.97–0.75(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ173.84,158.96,157.02,156.74,151.42,142.65,134.10,130.44,129.59,128.33,128.05,127.22,125.48,123.21,123.12,122.39,117.6353.24,53.05,26.03,25.79,16.71,13.37,8.02,7.43.ESI-MS:m/z 465.3[M+H]+,C25H24N2O3S2[464.12].
实施例14.化合物I-3a的制备
将化合物I-2a(40mg)溶于5mL甲醇和2.5mL THF的混合溶液中，搅拌溶解后加入新配制的LiOH溶液(210mg LiOH溶于5mL水，配制成2M的氢氧化锂溶液)约1-2mL，常温下搅拌反应12h，TLC监测，待反应完全后，加入5mL清水，蒸干体系中的甲醇和THF，然后再用1mol/LHCl将溶液pH调至3左右，析出固体，过滤，清水洗涤，干燥，得目标化合物，白色固体，产率：88.3％，熔点：134-136℃。
化合物I-3a波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.86(s,1H),8.55(d,J＝8.4Hz,1H),8.27(d,J＝5.3Hz,1H),7.68(t,J＝7.5Hz,1H),7.62(d,J＝7.6Hz,1H),7.59–7.54(m,1H),7.42(dt,J＝10.0,4.5Hz,3H),3.88(s,2H),2.56(dq,J＝8.2,4.2,2.8Hz,1H),1.15(q,J＝10.0Hz,2H),0.86(tt,J＝9.8,5.5Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.69,160.07,157.71,156.74,142.72,136.88,134.13,130.57,129.72,128.47,128.01,127.22,125.47,125.16,123.24,122.64,119.38,35.22,13.43,7.81,7.53.ESI-MS:m/z 407.4[M-H]-,C21H16N2O3S2[408.06].
实施例15.化合物I-3b的制备
操作同实施例14，所不同的是水解的化合物使I-2b，白色固体，产率：91.8％，熔点：152-155℃。
化合物I-3b波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.92(s,1H),8.55(d,J＝8.5Hz,1H),8.28(d,J＝5.2Hz,1H),7.68(t,J＝7.5Hz,1H),7.58(dt,J＝13.4,7.3Hz,2H),7.49–7.31(m,3H),4.41(p,J＝7.0Hz,1H),2.64–2.53(m,1H),1.40(dd,J＝24.6,7.2Hz,3H),1.15(d,J＝8.4Hz,2H),0.98–0.74(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ172.83,159.33,157.72,156.72,142.71,136.87,134.10,130.50,129.69,128.46,128.05,127.22,125.48,125.13,123.23,122.57,119.50,45.01,17.87,13.41,7.89,7.48.ESI-MS:m/z 421.3[M-H]-,C22H18N2O3S2[422.08].
实施例16.化合物I-3c的制备
操作同实施例14，所不同的是被水解的化合物为I-2c。白色固体，产率：86.6％，熔点：158-161℃。
化合物I-3c波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),8.54(d,J＝8.5Hz,1H),8.26(d,J＝5.3Hz,1H),7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.57(dd,J＝7.5,4.7Hz,2H),7.39(t,J＝7.7Hz,2H),7.28(d,J＝5.2Hz,1H),2.55(dq,J＝8.3,4.2,2.8Hz,1H),1.52(s,3H),1.48(s,3H),1.13(dd,J＝15.0,8.6Hz,2H),0.98–0.76(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ174.73,159.38,157.65,156.58,142.57,136.88,134.10,130.51,129.63,128.35,127.98,127.18,125.48,124.81,123.17,122.44,119.28,53.53,26.14,25.89,13.38,8.02,7.41.ESI-MS:m/z 435.3[M-H]-,C23H20N2O3S2[436.09].
实施例17.化合物I-3d的制备
操作同实施例14，所不同的是被水解的化合物为I-2d，白色固体，产率：91.4％，熔点：139-141℃。
化合物I-3d波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.75(s,1H),8.48(d,J＝8.5Hz,1H),7.86(s,1H),7.61(t,J＝7.6Hz,1H),7.56–7.45(m,2H),7.35(dd,J＝7.7,5.6Hz,2H),3.77(s,2H),2.53–2.46(m,1H),2.29(s,3H),1.13–1.03(m,2H),0.79(tt,J＝9.8,6.0Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.87,159.87,157.89,155.55,142.69,134.13,133.58,131.57,130.60,129.69,128.39,128.00,127.22,125.47,123.23,122.63,119.04,35.39,13.42,12.73,7.81,7.54.ESI-MS:m/z 421.3[M-H]-,C22H18N2O3S2[422.08].
实施例18.化合物I-3e的制备
操作同实施例14，所不同的是被水解的化合物为I-3e，白色固体，产率：95.7％，熔点：210-213℃。
化合物I-3e波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.79(s,1H),8.48(d,J＝8.5Hz,1H),7.86(s,1H),7.61(t,J＝7.6Hz,1H),7.51(q,J＝9.0,8.2Hz,2H),7.33(dd,J＝13.1,8.7Hz,2H),4.24(dq,J＝14.7,7.3Hz,1H),2.49(dq,J＝8.2,4.2,2.7Hz,1H),2.30(s,3H),1.33(dd,J＝18.0,7.3Hz,3H),1.07(dd,J＝13.4,8.7Hz,2H),0.88–0.70(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ173.12,159.25,157.86,155.59,142.68,134.11,133.64,131.53,130.56,129.67,128.39,127.98,127.22,125.48,123.23,122.55,119.13,45.36,17.19,13.41,12.78,7.90,7.49.ESI-MS:m/z435.4[M-H]-,C23H20N2O3S2[436.09].
实施例19.化合物I-3f的制备
操作同实施例14，所不同的是被水解的化合物为I-2f。白色固体，产率：93.4％，熔点：242-245℃。
化合物I-3f波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.54(s,1H),8.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.90(s,1H),7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.56(t,J＝8.0Hz,2H),7.38(dd,J＝14.4,8.0Hz,2H),2.56(d,J＝5.1Hz,1H),2.35(s,3H),1.51(d,J＝19.9Hz,6H),1.19–1.11(m,2H),0.95–0.77(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ174.76,159.05,157.83 155.70,142.57,134.10,133.94,131.39,130.53,129.60,128.31,127.99,127.20,125.49,123.18,122.44,118.91,53.50,26.10,25.81,13.38,12.79,8.01,7.41.ESI-MS:m/z 449.4[M-H]-,C24H22N2O3S2[450.11].
实施例20.化合物I-3g的制备
操作同实施例14，所不同的是被水解的化合物为I-2g，白色固体，产率：51.7％，熔点：218-221℃。
化合物I-3g波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.84(s,1H),8.55(d,J＝8.4Hz,1H),7.73–7.65(m,1H),7.58(dd,J＝14.2,7.3Hz,2H),7.41(dd,J＝7.9,3.0Hz,2H),7.15(s,1H),3.87(s,2H),2.63(s,3H),2.56(dt,J＝10.8,5.8Hz,1H),1.16(d,J＝8.6Hz,2H),0.95–0.79(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.67,159.99,157.13,156.98,151.15,142.67,134.13,130.62,129.74,128.44,127.98,127.20,125.45,123.59,123.20,122.60,117.69,35.13,16.76,13.41,7.79,7.54.ESI-MS:m/z 421.3[M-H]-,C22H18N2O3S2[422.08].
实施例21.化合物I-3h的制备
操作同实施例14，所不同的是被水解的化合物为I-2h，白色固体，产率：89.9％，熔点：230-233℃。
化合物I-3h波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.97(s,1H),8.54(d,J＝8.5Hz,1H),7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.57(q,J＝6.7Hz,2H),7.39(t,J＝8.4Hz,2H),7.15(s,1H),4.37(p,J＝6.8Hz,1H),2.63(s,3H),2.59–2.53(m,1H),1.38(dd,J＝24.3,7.2Hz,3H),1.14(d,J＝8.4Hz,2H),0.95–0.78(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ172.92,159.28,157.14,156.97,151.22,142.66,134.10,130.55,129.70,128.44,127.98,127.21,125.49,123.57,123.18,122.53,117.75,44.96,17.79,16.77,13.41,7.87,7.49.ESI-MS:m/z 435.3[M-H]-,C23H20N2O3S2[436.09].
实施例22.化合物I-3i的制备
操作同实施例14，所不同的是被水解化合物为I-2i，白色固体，产率：95.2％，熔点：241-244℃。
化合物I-3i波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.65(s,1H),8.53(d,J＝8.4Hz,1H),7.67(t,J＝7.3Hz,1H),7.55(dd,J＝14.2,7.7Hz,2H),7.36(dd,J＝14.0,8.0Hz,2H),7.04(s,1H),2.62(s,3H),2.58–2.53(m,1H),1.49(d,J＝12.7Hz,6H),1.14(d,J＝8.0Hz,2H),0.94–0.77(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ174.75,159.73,157.11,156.87,151.16,142.47,134.10,130.60,129.65,128.32,127.96,127.16,125.48,123.34,123.17,122.42,117.53,67.77,26.11,23.29,16.71,13.38,7.99,7.41.ESI-MS:m/z 449.4[M-H]-,C24H22N2O3S2[450.11].
实施例23.中间体3-(4-环丙基萘-1-基)-2-巯基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(II-1a)的制备
操作同实施例2，所不同的是使用2-氨基噻吩-3-甲酸甲酯，白色固体，产率：15.1％，熔点：>250℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.92(s,1H),8.47(d,J＝8.3Hz,1H),7.67–7.54(m,2H),7.52–7.44(m,1H),7.35(q,J＝7.7Hz,3H),7.26(d,J＝5.6Hz,1H),2.46(dd,J＝8.3,5.5Hz,1H),1.11(d,J＝8.4Hz,2H),0.91–0.70(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ175.81,157.46,151.92,140.10,134.75,134.09,129.86,127.12,126.97,126.51,125.15,123.51,123.33,122.89,120.50,118.79,13.34,7.50,7.23.ESI-MS:m/z 349.4[M-H]-,C19H14N2OS2[350.05].
实施例24.中间体3-(4-环丙基萘-1-基)-2-巯基-6-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(II-1b)的制备
操作同实施例2，所不同的是使用2-氨基-5-甲基噻吩-3-羧酸甲酯，白色固体，产率：16.5％，熔点：>250℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.89(s,1H),8.47(d,J＝8.5Hz,1H),7.64–7.53(m,2H),7.51–7.45(m,1H),7.34(s,2H),6.98(s,1H),2.48(s,1H),2.46(s,3H),1.12(d,J＝8.6Hz,2H),0.87–0.76(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ175.34,157.07,150.47,140.05,134.78,134.09,133.87,129.83,127.12,126.97,126.49,125.15,123.50,123.28,120.13,118.51,15.31,13.34,7.49,7.22.ESI-MS:m/z 363.3[M-H]-,C20H16N2OS2[364.07].
实施例25.中间体3-(4-环丙基萘-1-基)-2-巯基-5-甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(II-1c)的制备
操作同实施例2，所不同的是使用2-氨基-4-甲基噻吩-3-羧酸甲酯，白色固体，产率：16.3％，熔点：>250℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.85(s,1H),8.47(d,J＝8.6Hz,1H),7.65–7.57(m,2H),7.52–7.46(m,1H),7.39–7.31(m,2H),6.95(s,1H),2.47(dd,J＝8.4,5.4Hz,1H),2.32(s,3H),1.12(d,J＝8.5Hz,2H),0.80(dq,J＝24.7,5.8Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ175.68,158.06,152.86,139.99,134.78,134.69,134.08,129.96,127.13,126.94,126.46,125.11,123.47,123.39,116.85,114.74,19.04,15.96,13.33,7.19.ESI-MS:m/z 363.3[M-H]-,C20H16N2OS2[364.07].
实施例26.中间体3-(4-环丙基萘-1-基)-2-巯基-5,6-二甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(II-1d)的制备
操作同实施例2，所不同的是使用2-氨基,4，5-二甲基噻吩-3-羧酸甲酯白色固体，产率：14.5％，熔点：>250℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.77(s,1H),8.46(d,J＝8.5Hz,1H),7.65–7.57(m,1H),7.55(d,J＝8.3Hz,1H),7.52–7.42(m,1H),7.32(s,2H),2.45(dd,J＝8.3,5.5Hz,1H),2.32(s,3H),2.23(s,3H),1.09(dd,J＝18.8,7.7Hz,2H),0.89–0.71(m,2H)，ESI-MS:m/z 377.4[M-H]-,C21H18N2OS2[378.09].
实施例27.中间体3-(4-环丙基萘-1-基)-2-巯基-5,6,7,8四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮(II-1e)的制备
操作同实施例3，所不同的是使用2-氨基-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-羧酸甲酯，白色固体，产率：35.9％，熔点：>250℃；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.84(s,1H),8.47(d,J＝8.5Hz,1H),7.59(dd,J＝18.0,8.3Hz,2H),7.52–7.45(m,1H),7.33(s,2H),2.71(s,4H),2.47(d,J＝7.0Hz,1H),1.88–1.67(m,4H),1.13(t,J＝9.7Hz,2H),0.91–0.72(m,2H).13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ175.09,157.59,139.96,134.79,134.08,131.56,129.93,128.98,127.12,126.94,126.46,125.12,123.47,123.35,116.46,25.27,24.47,22.94,22.03,13.32,7.50,7.18.ESI-MS:m/z 403.5[M-H]-,C23H20N2OS2[404.10].
实施例28.目标化合物II-2a的制备方法
操作同实施例5，所不同的是该实施例选用的是中间体II-1a，白色固体，产率：88.2％，熔点：142-144℃.
化合物II-2a波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(d,J＝8.5Hz,1H),7.69(t,J＝7.5Hz,1H),7.65–7.52(m,3H),7.49–7.32(m,3H),4.01–3.84(m,2H),3.64(s,3H),2.62–2.52(m,1H),1.23–1.08(m,2H),0.87(dt,J＝9.6,5.0Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.03,163.61,158.93,157.79,142.76,134.14,130.58,129.56,128.34,128.03,127.26,125.47,123.49,123.23,122.59,122.57,120.98,52.89,34.60,13.41,7.82,7.55.ESI-MS:m/z 423.3[M+H]+,C22H18N2O3S2[422.08].
实施例29.化合物II-2b的制备
操作同实施例28，所不同的是此实施例选用的是2-溴丙酸甲酯。白色固体，产率：67.0％，熔点：200-203℃。
化合物II-2b波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.55(d,J＝8.4Hz,1H),7.69(t,J＝7.3Hz,1H),7.61(d,J＝8.1Hz,1H),7.57(d,J＝5.7Hz,2H),7.46(d,J＝8.4Hz,1H),7.40(d,J＝5.7Hz,2H),4.40(dq,J＝14.6,7.2Hz,1H),3.64(d,J＝17.0Hz,3H),2.59–2.52(m,1H),1.37(dd,J＝10.8,7.3Hz,3H),1.15(d,J＝8.2Hz,2H),0.96–0.78(m,2H).13C NMR(100MHz,Chloroform-d)δ172.58,172.18,158.24,142.74,134.59,127.50,127.44,127.28,126.70,125.41,123.61,123.42,122.73,122.16,121.98,121.48,121.07,52.72,44.26,16.82,13.57,7.03,6.65.ESI-MS:m/z 437.4[M+H]+,C23H20N2O3S2[436.09].
实施例30.化合物II-2c的制备
操作同实施例28，所不同的是此实施例选用的是2-溴异丙酸甲酯。白色固体，产率：76.8％，熔点：204-206℃。
化合物II-2c波谱数据：1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.52(d,J＝8.4Hz,1H),7.63–7.57(m,1H),7.54–7.49(m,1H),7.46–7.41(m,2H),7.41–7.35(m,2H),7.13(d,J＝5.7Hz,1H),3.77(s,3H),2.44(p,J＝8.4Hz,1H),1.55(d,J＝10.9Hz,6H),1.19–1.10(m,2H),0.95–0.82(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ173.78,163.32,158.11,157.73,142.66,134.11,130.45,129.46,128.25,128.06,127.24,125.48,123.47,123.16,122.57,122.43,120.99,53.41,53.14,26.06,25.84,13.38,8.03,7.42.ESI-MS:m/z 451.4[M+H]+,C24H22N2O3S2[450.11].
实施例31.化合物II-2d的制备
操作同实施例5，所不同的是此实施例使用的是中间体II-1b，白色固体，产率：68.5％，熔点：194-196℃。
化合物II-2d波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(d,J＝8.5Hz,1H),7.66(t,J＝7.6Hz,1H),7.56(t,J＝8.8Hz,2H),7.39(t,J＝7.2Hz,2H),7.08(s,1H),3.97–3.81(m,2H),3.61(s,3H),2.54(dd,J＝8.4,5.4Hz,1H),2.49–2.45(m,3H),1.24–1.03(m,2H),0.83(tt,J＝9.4,5.7Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.04,162.52,158.08,157.32,142.70,136.81,134.14,130.64,129.54,128.29,128.01,127.24,125.47,123.21,122.56,121.18,119.95,52.86,34.56,15.96,13.41,7.80,7.54.ESI-MS:m/z 437.4[M+H]+,C23H20N2O3S2[436.09].
实施例32.化合物II-2e的制备
操作同实施例31，所不同的是此实施例选用的是2-溴丙酸甲酯，白色固体，产率：70.1％，熔点：100-102℃。
化合物II-2e波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(d,J＝8.5Hz,1H),7.66(t,J＝7.6Hz,1H),7.55(dd,J＝11.7,5.7Hz,2H),7.45–7.30(m,2H),7.08(s,1H),4.42–4.29(m,1H),3.61(d,J＝17.2Hz,3H),2.54(dd,J＝8.5,5.2Hz,1H),2.48(s,3H),1.33(dd,J＝10.0,7.4Hz,3H),1.13(q,J＝5.1Hz,2H),0.93–0.75(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ172.10,172.00,162.41,157.31,142.69,136.91,134.11,130.51,129.52,128.28,128.01,127.25,125.48,123.20,122.45,121.29,119.96,53.02,44.34,17.13,15.97,13.39,7.93,7.48.ESI-MS:m/z 451.2[M+H]+,C24H22N2O3S2[450.11].
实施例33.化合物II-2f的制备
操作同实施例31，所不同的是此实施例选用的是2-溴异丙酸甲酯，白色固体，产率：73.22％，熔点：182-184℃。
化合物II-2f波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(d,J＝8.5Hz,1H),7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.57(dd,J＝15.5,7.7Hz,2H),7.44–7.33(m,2H),7.09(s,1H),3.65(s,3H),2.56(dd,J＝8.3,5.5Hz,1H),2.51(s,3H),1.47(d,J＝26.2Hz,6H),1.15(q,J＝6.6Hz,2H),0.97–0.74(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ173.77,162.22,157.27,142.61,136.84,134.12,130.53,129.45,128.19,128.03,127.22,125.48,123.13,122.39,121.19,119.93,53.36,53.09,26.07,25.85,15.95,13.37,8.02,7.41.ESI-MS:m/z 465.3[M+H]+,C25H24N2O3S2[464.12].
实施例34.化合物II-2g的制备
操作同实施例5，所不同的是此实施例选用中间体II-1g，白色固体，产率：59.1％，熔点：108-110℃。
化合物II-2g波谱数据：1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.51(d,J＝8.4Hz,1H),7.60(t,J＝7.4Hz,1H),7.52(q,J＝8.3Hz,2H),7.46–7.35(m,2H),6.73(s,1H),3.96–3.78(m,2H),3.73(s,3H),2.51(s,3H),2.42(td,J＝8.3,4.3Hz,1H),1.14(dt,J＝8.1,3.8Hz,2H),0.97–0.74(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.01,164.16,158.67,158.41,142.66,134.42,134.14,130.56,129.69,128.37,128.00,127.21,125.43,123.19,122.65,119.26,117.78,52.87,34.51,16.49,13.40,7.80,7.56.ESI-MS:m/z 437.3[M+H]+,C23H20N2O3S2[436.09].
实施例35.化合物II-2h的制备
操作同实施例34，所不同的是此实施例选用的是2-溴丙酸甲酯。白色固体，产率：75.2％，熔点：101-103℃。
化合物II-2h波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(d,J＝8.5Hz,1H),7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.58(q,J＝8.7,7.5Hz,2H),7.51–7.37(m,2H),7.14(s,1H),4.39(dq,J＝14.6,7.2Hz,1H),3.63(d,J＝16.6Hz,3H),2.55(dq,J＝8.3,4.2,2.9Hz,1H),2.40(s,3H),1.36(dd,J＝10.1,7.4Hz,3H),1.15(q,J＝5.1Hz,2H),0.97–0.74(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ172.07,164.07,158.41,158.02,142.65,134.44,134.11,130.50,128.35,129.66,128.01,127.22,125.45,123.15,122.54,119.38,117.86,52.99,44.12,17.16,16.49,13.38,7.92,7.51.ESI-MS:m/z 451.4[M+H]+,C24H22N2O3S2[450.11].
实施例36.化合物II-2i的制备
操作同实施例34，所不同的是此实施例选用的是2-溴异丙酸甲酯。白色固体，产率：73.0％，熔点：183-185℃。
化合物II-2i波谱数据：1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.51(d,J＝8.4Hz,1H),7.60(t,J＝7.5Hz,1H),7.57–7.44(m,2H),7.43–7.34(m,2H),6.71(s,1H),3.77(s,3H),2.49(s,3H),2.43(td,J＝8.4,4.3Hz,1H),1.56(s,6H),1.22–1.05(m,2H),0.97–0.77(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ173.78,163.87,158.37,157.90,142.58,134.46,134.11,130.44,129.58,128.27,128.04,127.20,125.45,123.12,122.48,119.29,117.74,53.34,53.12,26.09,25.87,16.47,13.36,8.02,7.43ESI-MS:m/z 465.2[M+H]+,C25H24N2O3S2[464.12].
实施例37.化合物II-2j的制备
操作同实施例5，所不同的是所用的中间体为2-氯丙酸乙酯。白色固体，产率：84.7％，熔点：99-102℃。
化合物II-2j波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(d,J＝8.3Hz,1H),7.79–7.63(m,1H),7.63–7.50(m,2H),7.41(d,J＝7.6Hz,2H),4.00–3.77(m,2H),3.62(s,3H),2.55(s,1H),2.38(s,3H),2.32(s,3H),1.15(d,J＝7.4Hz,2H),0.94–0.68(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.05,161.23,158.16,157.61,142.61,134.14,130.68,129.67,129.33,128.99,128.32,127.99,127.20,125.44,123.18,122.61,119.76,52.85,34.46,13.40,13.22,13.07,7.79,7.55.ESI-MS:m/z 451.4[M+H]+,C24H22N2O3S2[450.11].
实施例38.化合物II-2k的制备
操作同实施例37，所不同的是本实施例所用酯为2-溴丙酸甲酯。白色固体，产率：95.8％，熔点：108-110℃。
化合物II-2k波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(t,J＝7.4Hz,1H),7.57(dt,J＝16.9,7.7Hz,2H),7.46–7.36(m,2H),4.42–4.31(m,1H),3.62(d,J＝17.0Hz,3H),2.56(dd,J＝8.7,5.0Hz,1H),2.39(s,3H),2.31(s,3H),1.44–1.29(m,3H),1.21–1.10(m,2H),0.92–0.78(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ172.02,161.13,158.15,155.89,142.62,134.11,130.63,129.65,129.36,129.09,128.31,128.00,127.21,125.46,123.17,122.58,119.88,53.00,44.04,17.13,13.38,13.22,13.08,7.90,7.49.ESI-MS:m/z 465.3[M+H]+,C25H24N2O3S2[464.12].
实施例39.化合物II-2l的制备
操作同实施例37，所不同的是此实施例所用酯为2-溴异丙酸甲酯。白色固体，产率：61.9％，熔点：175-178℃。
化合物II-2l波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.59(t,J＝7.6Hz,1H),7.53(d,J＝7.6Hz,1H),7.38(d,J＝7.8Hz,2H),3.65(s,3H),2.60–2.52(m,1H),2.37(s,3H),2.30(s,3H),1.49(s,3H),1.43(s,3H),1.15(q,J＝6.6Hz,2H),0.95–0.73(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ173.80,160.93,158.11,156.84,142.52,134.10,130.55,129.55,129.35,129.00,128.22,128.03,127.19,125.46,123.11,122.43,119.79,53.27,53.09,26.10,25.87,13.36,13.21,13.07,8.00,7.42.ESI-MS:m/z479.3[M+H]+,C26H26N2O3S2[478.14].
实施例40.化合物II-2m的制备
操作同实施例5，所不同的是此实施例选用中间体II-1e。白色固体，产率：74.1％，熔点：114-116℃。
化合物II-2m波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.58(dd,J＝11.9,7.8Hz,2H),7.41(d,J＝7.2Hz,2H),3.97–3.82(m,2H),3.62(s,3H),2.82–2.74(m,4H),2.55(d,J＝5.0Hz,1H),1.81(s,2H),1.74(s,2H),1.15(d,J＝8.3Hz,2H),0.83(dd,J＝16.1,6.8Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.03,161.94,157.87,157.77,142.62,134.14,131.93,131.44,130.63,129.66,128.32,127.99,127.21,125.44,123.19,122.63,118.95,52.84,34.49,25.60,24.93,22.93,22.19,13.40,7.80,7.53.ESI-MS:m/z 477.2[M+H]+,C26H24N2O3S2[476.12].
实施例41.化合物II-2n的制备
操作同实施例40，所不同的是此实施例中选用2-溴丙酸甲酯。白色固体，产率：81.4％，熔点：108-110℃。
化合物II-2n波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(t,J＝7.3Hz,1H),7.56(dt,J＝17.0,7.8Hz,2H),7.47–7.35(m,2H),4.37(dq,J＝14.7,7.1Hz,1H),3.62(d,J＝16.6Hz,3H),2.83–2.71(m,4H),2.59–2.53(m,1H),1.80(s,2H),1.74(s,2H),1.35(t,J＝8.0Hz,3H),1.14(d,J＝8.2Hz,2H),0.94–0.76(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ172.08,161.84,157.86,157.11,142.61,134.11,132.03,131.46,130.58,129.64,128.30,128.04,127.22,125.45,123.18,122.53,119.07,53.00,44.26,25.61,24.94,22.93,22.19,17.13,13.39,7.89,7.48.ESI-MS:m/z 491.4[M+H]+,C27H26N2O3S2[490.14].
实施例42.化合物II-2o的制备
操作同实施例40，所不同的是此实施例中选用2-溴异丙酸甲酯。白色固体，产率：86.2％，熔点：188-192℃。
化合物II-2o波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.68(t,J＝7.5Hz,1H),7.59(t,J＝7.3Hz,1H),7.51(d,J＝7.6Hz,1H),7.39(d,J＝7.6Hz,2H),3.65(s,3H),2.83–2.72(m,4H),2.55(d,J＝4.8Hz,1H),1.78(d,J＝25.9Hz,4H),1.47(d,J＝23.9Hz,6H),1.16(d,J＝7.8Hz,2H),0.95–0.75(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ173.76,161.65,157.82,156.99,142.52,134.12,131.92,131.45,130.52,129.57,128.15,127.92,127.10,125.38,123.05,122.42,118.96,53.26,52.94,25.98,25.76,25.57,24.89,22.90,22.16,13.29,7.84,7.27.ESI-MS:m/z 505.4[M+H]+,C28H28N2O3S2[504.15].
实施例43.化合物II-3a的制备
操作同实施例14，所不同的是，此实施例中水解的化合物为II-2a，白色固体，产率：25.5％，熔点：142-144℃。
化合物II-3a波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,1H),8.55(d,J＝8.5Hz,1H),7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.57(dd,J＝18.6,6.8Hz,3H),7.49–7.32(m,3H),3.86(s,2H),2.55(dq,J＝8.2,4.3,2.8Hz,1H),1.14(t,J＝8.9Hz,2H),0.96–0.73(m,2H).13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.58,163.72,159.72,157.83,142.67,134.15,130.68,129.63,128.33,127.96,127.21,125.45,123.34,123.24,122.63,122.54,120.94,35.16,13.41,7.80,7.54.ESI-MS:m/z407.4[M-H]-,C21H16N2O3S2[408.06].
实施例44.化合物II-3b的制备
操作同实施例14，所不同的是，此实施例中水解的化合物为II-2b。白色固体，产率：33.6％，熔点：152-154℃。
化合物II-3b波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.91(s,1H),8.54(d,J＝8.5Hz,1H),7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.58(q,J＝6.8,5.3Hz,3H),7.42(dt,J＝14.2,7.2Hz,3H),4.35(p,J＝7.2Hz,1H),2.55(dd,J＝10.9,5.7Hz,1H),1.39(dd,J＝22.1,7.3Hz,3H),1.21–1.09(m,2H),0.96–0.78(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ172.83,163.66,158.57,158.46,157.85,142.67,134.11,130.61,129.59,128.34,128.03,127.22,125.47,123.44,123.22,122.55,121.04,45.00,17.68,13.40,7.88,7.48.ESI-MS:m/z 421.3[M-H]-,C22H18N2O3S2[422.08].
实施例45.化合物II-3c的制备
操作同实施例14，所不同的是，所水解的化合物为II-2c。白色固体，产率：88.5％，熔点：155-157℃。
化合物II-3c波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.72(s,1H),8.54(d,J＝8.5Hz,1H),7.68(t,J＝7.5Hz,1H),7.56(q,J＝6.6,5.6Hz,3H),7.48–7.30(m,3H),2.55(dq,J＝8.4,4.2,3.0Hz,1H),1.50(s,3H),1.46(s,3H),1.22–1.09(m,2H),0.97–0.77(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ174.68,163.39,158.39,157.80,142.55,134.11,130.56,129.50,128.25,128.00,127.20,125.49,123.36,123.19,122.50,122.42,120.93,53.44,26.15,25.88,13.38,8.03,7.41.ESI-MS:m/z 435.4[M-H]-,C23H20N2O3S2[436.09].
实施例46.化合物II-3d的制备
操作同实施例14，所不同的是，所水解的化合物为II-2d。白色固体，产率：94.7％，熔点：139-142℃。
化合物II-3d波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.89(s,1H),8.54(d,J＝8.5Hz,1H),7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.56(t,J＝9.0Hz,2H),7.41(d,J＝7.7Hz,2H),7.10(s,1H),3.84(s,2H),2.54(s,1H),2.52(s,3H),1.15(d,J＝8.5Hz,2H),0.90–0.80(m,2H).13CNMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.62,162.67,158.43,157.38,142.60,136.64,134.14,130.75,129.60,128.28,127.96,127.20,125.46,123.24,122.61,121.13,119.93,35.28,15.97,13.41,7.79,7.52.ESI-MS:m/z 421.3[M-H]-,C22H18N2O3S2[422.08].
实施例47.化合物II-3e的制备
操作同实施例14，所不同的是，所水解的化合物为II-2e。白色固体，产率：91.3％，熔点：162-165℃。
化合物II-3e波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.94(s,1H),8.54(d,J＝8.5Hz,1H),7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.56(t,J＝7.8Hz,2H),7.46–7.34(m,2H),7.10(s,1H),4.32(p,J＝7.2Hz,1H),2.56(dd,J＝8.6,5.5Hz,1H),2.52–2.46(m,3H),1.38(dd,J＝23.6,7.3Hz,3H),1.15(p,J＝4.7Hz,2H),0.96–0.77(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ172.83,162.60,157.67,157.38,142.60,136.72,134.12,130.65,129.58,128.27,127.94,127.19,125.48,123.20,122.54,121.24,119.94,45.08,17.79,15.97,13.40,7.86,7.47.ESI-MS:ESI-MS:m/z 435.4[M-H]-,C23H20N2O3S2[436.09].
实施例48.化合物II-3f的制备
操作同实施例14，所不同的是，此实例中被水解的化合物为II-2f。白色固体，产率：94.1％，熔点：158-161℃。
化合物II-3f波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.69(s,1H),8.53(d,J＝8.5Hz,1H),7.67(t,J＝7.6Hz,1H),7.56(dd,J＝14.9,7.6Hz,2H),7.37(dd,J＝14.1,8.0Hz,2H),7.08(s,1H),2.56(dd,J＝8.4,5.4Hz,1H),2.50(s,3H),1.46(d,J＝14.7Hz,6H),1.15(q,J＝6.4Hz,2H),0.96–0.76(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ174.65,162.32,157.52,157.33,142.49,136.70,134.11,130.65,129.50,128.23,127.96,127.18,125.48,123.16,122.40,121.17,119.86,53.35,26.17,25.89,15.98,13.37,8.01,7.40.ESI-MS:m/z 449.4[M-H]-,C24H22N2O3S2[450.11].
实施例49.化合物II-3g的制备
操作同实施例14，所不同的是，此实例中被水解的化合物为II-2g。白色固体，产率：75.14％，熔点：132-134℃。
化合物II-3g波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.86(s,1H),8.54(d,J＝8.5Hz,1H),7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.57(t,J＝6.5Hz,2H),7.43(dd,J＝15.6,8.0Hz,2H),7.13(s,1H),3.84(s,2H),2.55(dq,J＝8.1,4.2,2.6Hz,1H),2.40(s,3H),1.13(dd,J＝17.6,5.9Hz,2H),0.84(dq,J＝11.8,6.7,6.1Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.60,164.30,159.03,158.47,142.57,134.39,134.14,130.68,129.74,128.36,127.96,127.17,125.43,123.21,122.69,119.20,117.66,35.23,16.51,13.41,7.79,7.55.ESI-MS:m/z421.3[M-H]-,C22H18N2O3S2[422.08].
实施例50.化合物II-3h的制备
操作同实施例14，所不同的是，此实例中被水解的化合物为II-2h。白色固体，产率：85.7％，熔点：221-224℃。
化合物II-3h波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.00(s,1H),8.54(d,J＝8.5Hz,1H),7.68(t,J＝7.6Hz,1H),7.62–7.52(m,2H),7.50–7.34(m,2H),7.14(s,1H),4.32(p,J＝7.0Hz,1H),2.55(dq,J＝8.2,4.2,2.9Hz,1H),2.40(s,3H),1.38(dd,J＝23.7,7.2Hz,3H),1.15(d,J＝8.4Hz,2H),0.95–0.76(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ172.85,164.25,158.49,158.35,142.54,134.39,134.11,130.62,129.71,128.34,127.94,127.17,125.44,123.21,122.62,119.29,117.70,45.02,17.75,16.51,13.40,7.86,7.50.ESI-MS:m/z 435.4[M-H]-,C23H20N2O3S2[436.09].
实施例51.化合物II-3i的制备
操作同实施例14，所不同的是，此实例中被水解的化合物为II-2i。白色固体，产率：93.7％，熔点：238-240℃。
化合物II-3i波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.62(s,1H),8.47(d,J＝8.4Hz,1H),7.61(t,J＝7.6Hz,1H),7.56–7.42(m,2H),7.33(t,J＝7.2Hz,2H),7.05(s,1H),2.55–2.45(m,1H),2.32(s,3H),1.40(d,J＝12.8Hz,6H),1.14–1.01(m,2H),0.88–0.67(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ174.66,163.93,158.43,158.16,142.46,134.36,134.10,130.55,129.64,128.27,127.96,127.15,125.45,123.14,122.48,119.24,117.65,53.35,26.17,25.91,16.50,13.36,8.00,7.42.ESI-MS:m/z 449.4[M-H]-,C24H22N2O3S2[450.11].
实施例52.化合物II-3j的制备
操作同实施例14，所不同的是，此实例中被水解的化合物为II-2j，白色固体，产率：87.8％，熔点：162-165℃。
化合物II-3j波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.95(s,1H),8.54(d,J＝8.5Hz,1H),7.68(t,J＝7.5Hz,1H),7.56(t,J＝7.7Hz,2H),7.41(dd,J＝7.6,5.3Hz,2H),3.82(s,2H),2.60–2.52(m,1H),2.37(d,J＝7.0Hz,3H),2.31(d,J＝6.6Hz,3H),1.21–1.07(m,2H),0.85(tt,J＝11.7,6.3Hz,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.61,161.44,158.23,158.19,142.45,134.14,130.85,129.74,129.28,128.74,128.29,127.92,127.14,125.42,123.22,122.67,119.67,35.77,13.40,13.23,13.07,7.76,7.52.ESI-MS:m/z 435.5[M-H]-,C23H20N2O3S2[436.09].
实施例53.化合物II-3k的制备
操作同实施例14，所不同的是，此实例中被水解的化合物为II-2k，白色固体，产率：95.18％，熔点：150-153℃。
化合物II-3k波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.00(s,1H),8.53(d,J＝8.5Hz,1H),7.67(t,J＝7.6Hz,1H),7.61–7.49(m,2H),7.46–7.34(m,2H),4.31(dt,J＝12.8,7.1Hz,1H),2.55(dt,J＝10.8,5.6Hz,1H),2.38(s,3H),2.31(s,3H),1.37(dd,J＝25.5,7.2Hz,3H),1.20–1.09(m,2H),0.95–0.76(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ172.99,161.34,158.23,157.30,142.46,134.11,130.74,129.70,129.32,128.92,128.30,127.98,127.15,125.45,123.18,122.58,119.83,45.12,17.89,13.39,13.23,13.08,7.84,7.48.ESI-MS:m/z 449.4[M-H]-,C24H22N2O3S2[450.11].
实施例54.化合物II-3l的制备
操作同实施例14，所不同的是，此实例中被水解的化合物为II-2l，白色固体，产率：86.2％，熔点：163-165℃。
化合物II-3l波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.68(s,1H),8.53(d,J＝8.4Hz,1H),7.67(t,J＝7.4Hz,1H),7.63–7.48(m,2H),7.46–7.29(m,2H),2.55(dd,J＝9.2,4.1Hz,1H),2.38(s,3H),2.31(s,3H),1.48(d,J＝8.7Hz,3H),1.44(d,J＝5.3Hz,3H),1.22–1.07(m,2H),0.97–0.72(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ174.70,161.03,158.18,157.06,142.38,134.10,130.69,129.62,129.25,128.86,128.23,127.95,127.14,125.46,123.14,122.44,119.76,53.24,26.10,25.87,13.37,13.23,13.10,7.99,7.40.ESI-MS:m/z463.4[M-H]-,C25H24N2O3S2[464.12].
实施例55.化合物II-3m的制备
操作同实施例14，所不同的是，此实例中被水解的化合物为II-2m，白色固体，产率：85.8％，熔点：158-162℃。
化合物II-3m波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.82(s,1H),8.47(d,J＝8.5Hz,1H),7.61(t,J＝7.6Hz,1H),7.49(t,J＝8.6Hz,2H),7.40–7.31(m,2H),3.77(s,2H),2.80–2.65(m,4H),2.56–2.47(m,1H),1.75(s,2H),1.68(s,2H),1.08(d,J＝8.5Hz,2H),0.87–0.70(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ169.63,162.09,158.12,157.92,142.52,134.13,131.78,131.40,130.73,129.71,128.31,127.95,127.17,125.46,123.22,122.67,118.90,35.21,25.61,24.93,22.94,22.20,13.41,7.78,7.52.ESI-MS:m/z 461.4[M-H]-,C25H22N2O3S2[462.58].
实施例56.化合物II-3n的制备
操作同实施例14，所不同的是，此实例中被水解的化合物为II-2n，白色固体，产率：92.9％，熔点：155-157℃。
化合物II-3n波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.90(s,1H),8.47(d,J＝8.4Hz,1H),7.60(t,J＝7.5Hz,1H),7.54–7.43(m,2H),7.34(dd,J＝13.1,8.3Hz,2H),4.26(p,J＝6.9Hz,1H),2.75–2.65(m,4H),2.52–2.46(m,1H),1.74(s,2H),1.67(s,2H),1.30(dd,J＝23.3,7.2Hz,3H),1.14–1.02(m,2H),0.87–0.69(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ172.85,162.01,157.93,157.42,142.53,134.10,131.91,131.43,130.62,129.68,128.32,128.01,127.17,125.45,123.21,122.60,119.06,44.91,25.62,24.94,22.94,22.20,17.62,13.39,7.86,7.47.ESI-MS:m/z 475.4[M-H]-,C26H24N2O3S2[476.12].
实施例57.化合物II-3o的制备
操作同实施例14，所不同的是，此实例中被水解的化合物为II-2o，白色固体，产率：80.7％，熔点：172-174℃。
化合物II-3o波谱数据：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),8.52(d,J＝8.5Hz,1H),7.67(t,J＝7.5Hz,1H),7.60–7.54(m,1H),7.50(d,J＝7.5Hz,1H),7.37(d,J＝7.2Hz,2H),2.84–2.70(m,4H),2.53(s,1H),1.77(d,J＝28.1Hz,4H),1.47(s,3H),1.44(s,3H),1.19–1.09(m,2H),0.95–0.74(m,2H).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ174.68,161.72,157.88,157.23,142.40,134.10,131.81,131.37,130.65,129.61,128.21,127.94,127.14,125.45,123.14,118.95,53.30,26.18,25.90,25.61,24.96,22.95,22.21,13.36,8.00,7.38.ESI-MS:m/z 489.4[M-H]-,C27H26N2O3S2[490.14].
实施例58.目标化合物的体外靶点抑制活性测试(分两个批次)
测试原理
在稳定表达hURAT1蛋白的HEK293T细胞中，利用14C标记的底物尿酸，检测在不同浓度下的化合物以及阳性对照药物雷西纳德对于hURAT1所介导的底物尿酸的摄入影响，再通过测定细胞摄取的尿酸的放射性强度，来计算各化合物对于该蛋白的抑制作用(IC50)。
实验材料
pcDNA3.1(+)-hURAT1-T2A-eGFP质粒(深圳前海东泽生物科技有限公司)；质粒提取试剂盒(OMEGA生物技术公司)；脂粉Agar(美国OXOID公司)；酵母提取物Yeast Extract(美国OXOID公司)；蛋白胨Tryptone(美国OXOID公司)；氨苄青霉素(美国Sigma公司)；纯化水；甘油(碧云天生物技术有限公司)；胎牛血清(美国Corning公司)；DMEM培养基(美国Corning公司)；DMSO(美国Sigma公司)；96孔微孔板(美国Corning公司)；PBS(美国Corning公司)；HEPES(美国Sigma公司)；14C-Uric acid(美国American Radiolabeled Chemicals公司)。
测试方法
将96孔板与聚-D-赖氨酸溶液(0.1mg/mL)预孵育12小时，以获得更好的细胞粘附性。然后将细胞接种到平板中，当细胞达到90％融合时，将opti和lip 3000分别以5μL/孔和0.15μL/孔相混匀，静置5min；同时将opti、P3000和质粒DNA分别以5μL/孔和0.2μL/孔和500ng/孔相混匀，静置5min；上两步混匀的液体相混匀，室温静置15min；加入到更换了完全培养基的96孔板中。置于37℃，含5％CO2培养箱中培养16-20h，用荧光倒置显微镜观察绿色荧光蛋白EGFP的表达验证转染是否成功，成功后除去培养基，并用PBS洗涤细胞两次。为了评价药物对URAT1的抑制效果，我们以雷西纳德为阳性药，对药物进行了初筛(20uM)，吸收率＝(加药组CPM-空白组CPM)/(模型组CPM-空白组CPM)。并进行了IC50的测定。吸收实验前，吸弃孔内液体，向每孔加入50μl含各种特定浓度化合物(20μM、10μM、5μM、2.5μM、1.25μM)，模型组与空白组不加药物。孵育15分钟后吸弃，后加入含50μM 14C-尿酸的尿酸吸收缓冲液以开始尿酸吸收，置于37℃孵育15min。吸弃孔内液体同时加入100μL冰冷的DPBS洗三次，向每孔加入40μL 0.1M NaOH以裂解细胞。室温裂解30分钟后，向每孔加入0.2mL闪烁液，将板放置于震板机上以260rpm/min震摇15分钟。使用液体闪烁计数仪测定14C-尿酸的放射值(CPM)，重复测定三次，取平均值。
表2.I系列化合物以及II系列化合物体外靶点抑制活性
Figure GDA0003038802590000251
Figure GDA0003038802590000261
结论：由表2可以看出I系列中，化合物I-3a、I-3b、I-3e以及II系列化合物II-3a、II-3b、II-3h均呈现出显著的体外靶点抑制活性，均优于或相当于阳性对照药物雷西纳德；II系列中，II-3a和II-3b的活性远优于药物lesinurad，取得了意想不到的效果。可作为全新结构的药物先导物进一步开发。
实施例59.目标化合物的体内抗痛风活性试验。
测试材料和方法
(1)实验动物：雄性昆明小鼠，由山东大学实验动物中心提供。
(2)样品处理：选出靶点抑制活性明显优于lesinurad的待测化合物及其相应的酯，临用前用CMC-Na配成适当的浓度。
(3)造模药物：黄嘌呤、氧嗪酸钾。
(4)阳性对照药：Lesinurad。
(5)测试方法：将20g左右的雄性昆明小鼠适应性喂养1周，随机分为空白组和模型组，空白组给予灌胃5％CMC-Na溶液0.2mL，模型组灌胃600mg/Kg次黄嘌呤混悬液0.2mL并皮下注射400mg/kg氧嗪酸钾混悬液0.2mL，4小时后进行摘眼球取血，分离上清，进行血尿酸浓度检测。
表3动物体内活性结果
Figure GDA0003038802590000262
Figure GDA0003038802590000271
结论：由表3可以看出大部分化合物的体内降尿酸活性明显优于lesinurad,尤其是化合物II-3a在细胞实验筛选中靶标抑制活性达到了3.27μM，动物体内活性筛选实验中血尿酸下降率达到了90.2％，都表现出了明显高于雷西纳德的活性(靶标抑制活性IC50＝15.34μM，血尿酸下降率为31.4％)，值得进一步的研究。
实施例60.目标化合物II-3a的药代动力学实验
测试原理：
将化合物II-3a分别对SD大鼠进行单次静脉注射(iv)和口服(po)给药，在不同的时间点采集血液，测定II-3a在大鼠体内的血浆药物药物浓度，计算出相关药代动力学参数。
测试方法：
大鼠在进行健康评估后，在温度20-26℃，相对湿度30％-70％，12h明暗交替的条件下适应性培养至少三天。灌胃组大鼠在给药前禁食12h，并在给药后4h恢复饮食，静脉注射组大鼠在实验中自由饮食。将测试药物II-3a溶于DMSO：PEG400：生理盐水(3：60：37)的混合溶液中，超声混匀得到澄清的溶液或均匀的悬浮液。根据大鼠体重分别给与20mg/kg灌胃给药(n＝3)以及1mg/kg静脉注射给药(n＝3).分别在给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、10和24h取静脉血250μL。将血液样品收集到肝素钠处理过的离心管中，并置于冰上直到进行血浆处理。血液样本将在采集后半小时内立即通过在约4℃，3200g下离心10分钟来处理血浆。血浆样品将储存在聚丙烯试管中，在干冰上快速冷冻，并保持在-70±10℃左右，直到进行LC/MS/MS分析为止。试验结束，所有存活动物按照医药科学委员会动物实验职业道德规定处死。采用药代动力学软件Phoenix 8.0计算AUC0-t、AUC0-∞、MRT0-t和T1/2等参数。
测试结果：
表4化合物II-3a药代动力学研究
Figure GDA0003038802590000281
结论：由表4和图1结果可得，在口服给药(20mg/kg)后，达峰时间为2.33h，II-3a具有中等血浆半衰期(t1/2＝3.67h)，并且具有较高的生物利用度(II-3a:95.6％)。同时，口服给药后血浆中II-3a的最大浓度(Cmax)为18938ng/mL，平均驻留时间为5.98h。
II-3a注射给药(1mg/kg)后，最大血药浓度为11213ng/mL，半衰期为3.88h，平均驻留时间为2.72h，表观分布容积和清除率分别为0.425L/kg和2.64mL/min/kg。II-3a具有较好的药代动力学参数，实验结果初步证明了设计的合理性，值得进一步研究。

Claims (6)

1.一种噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物，其特征在于，具有如下通式I或II所示的结构：
Figure FDA0002993505970000011
其中，
R为-H,-CH3或
Figure FDA0002993505970000012
R1为-CH2-,-*CH(CH3)-或-C(CH3)2-；*代表手性碳原子；
R2为-OH或-OCH3。
2.一种噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物，其特征在于是下述结构的化合物之一：
Figure FDA0002993505970000021
Figure FDA0002993505970000031
3.如权利要求2所述的噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物的制备方法，其特征在于I-3(a-i)的制备方法如下：
以4-溴-1-萘胺为起始原料与环丙基硼酸发生Suzuki偶联反应生成中间体4-环丙基-1-萘胺a，再与1,1’-硫羰基二咪唑反应得到中间体b，接着与含有不同取代基的3-氨基噻吩-2-甲酸甲酯在无水乙醇或者吡啶溶液中反应得到中间体I-1(a-c)，然后在DMF溶液中K2CO3的催化下与取代溴乙酸甲酯发生亲核取代反应得到目标产物I-2(a-i)，最终在四氢呋喃和甲醇的混合溶液中用氢氧化锂或氢氧化钠水解得到目标产物I-3(a-i)；
合成路线一如下：
Figure FDA0002993505970000041
试剂及条件:(i)K3PO4，Pd(PPh3)4，环丙基硼酸，甲苯：水＝25:2v/v，N2保护，100℃，12h；(ii)CH2Cl2，1,1'-硫羰基二咪唑，室温，12h；(iii)3-氨基噻吩-2-甲酸甲酯或3-氨基-5-甲基噻吩-2-甲酸甲酯，无水乙醇，90℃，4h，NaOH，90℃，12h或3-氨基-4-甲基噻吩-2-甲酸甲酯，吡啶，50℃，12h，NaOH，90℃，12h；(iv)K2CO3，DMF，2-溴异丁酸甲酯或2-溴丙酸甲酯/溴乙酸甲酯，100℃，3h；(v)甲醇，四氢呋喃，氢氧化锂/氢氧化钠，常温，12h。
4.如权利要求2所述的噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物的制备方法，其特征在于II-3(a-o)的制备方法如下：
以4-溴-1-萘胺为起始原料与环丙基硼酸发生Suzuki偶联反应生成中间体4-环丙基-1-萘胺a，再与1,1’-硫羰基二咪唑反应得到中间体b，再与含有不同取代基的2-氨基噻吩-3-甲酸甲酯在吡啶或者无水乙醇中反应生成中间体II-1(a-e)，接着在DMF溶液中，在K2CO3催化下与多种酯发生亲核取代反应得到相应的目标产物II-2(a-o)，最终在四氢呋喃和甲醇的混合溶液中用氢氧化锂或氢氧化钠水解得到目标产物II-3(a-o)；
合成路线二如下：
Figure FDA0002993505970000042
试剂及条件:(i)K3PO4，Pd(PPh3)4，环丙基硼酸，甲苯：水＝25:2v/v，N2保护，100℃，12h；(ii)CH2Cl2，1,1'-硫羰基二咪唑，室温，12h；(iii)所述取代2-氨基噻吩-3-甲酸甲酯，无水乙醇，90℃，4h，NaOH，90℃，12h或所述取代2-氨基噻吩-3-甲酸甲酯，吡啶，50℃，12h，NaOH，90℃，12h；(iv)K2CO3，DMF，2-溴异丁酸甲酯或2-溴丙酸甲酯或溴乙酸甲酯，100℃，3h；(v)甲醇，四氢呋喃，氢氧化锂或氢氧化钠，常温，12h。
5.权利要求1或2所述的噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物在制备抗痛风的药物中的应用。
6.一种抗痛风药物组合物，包含权利要求1或2所述噻吩并嘧啶酮巯乙酸类衍生物和一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
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