CN111676188A - 一种高龄小鼠***体外成熟的优化液 - Google Patents
一种高龄小鼠***体外成熟的优化液 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111676188A CN111676188A CN202010668259.9A CN202010668259A CN111676188A CN 111676188 A CN111676188 A CN 111676188A CN 202010668259 A CN202010668259 A CN 202010668259A CN 111676188 A CN111676188 A CN 111676188A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- oocytes
- vitro maturation
- vitro
- aged mice
- maturation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 81
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 58
- 230000035800 maturation Effects 0.000 title claims abstract description 50
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 title claims abstract description 44
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 19
- 238000005457 optimization Methods 0.000 title claims abstract description 8
- YJPIGAIKUZMOQA-UHFFFAOYSA-N Melatonin Natural products COC1=CC=C2N(C(C)=O)C=C(CCN)C2=C1 YJPIGAIKUZMOQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 32
- 229960003987 melatonin Drugs 0.000 claims abstract description 32
- DRLFMBDRBRZALE-UHFFFAOYSA-N melatonin Chemical compound COC1=CC=C2NC=C(CCNC(C)=O)C2=C1 DRLFMBDRBRZALE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 32
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 claims abstract description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 16
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 claims abstract description 14
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims abstract description 8
- 230000030544 mitochondrion distribution Effects 0.000 claims description 7
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 abstract description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 13
- 238000009826 distribution Methods 0.000 abstract description 4
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 abstract description 4
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000008010 sperm capacitation Effects 0.000 description 4
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 3
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 210000004508 polar body Anatomy 0.000 description 3
- OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N (2,4-dichlorophenyl) benzenesulfonate Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 2
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 2
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 2
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 2
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- IKEOZQLIVHGQLJ-UHFFFAOYSA-M mitoTracker Red Chemical compound [Cl-].C1=CC(CCl)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 IKEOZQLIVHGQLJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 229920000089 Cyclic olefin copolymer Polymers 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010040476 FITC-annexin A5 Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0608—Germ cells
- C12N5/0609—Oocytes, oogonia
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/30—Hormones
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种高龄小鼠***体外成熟的优化液,制备方法为:首先称取0.0232g褪黑素溶解在1ml无水乙醇中制备成100mM的浓储液,将100mM的浓储液在IVM培养基中稀释至终浓度为10‑6mol/L,且无水乙醇的终浓度小于IVM培养基的0.01%,得到高龄小鼠***体外成熟的优化液。通过本发明,针对商品化的小鼠***体外成熟培养液,其培养效率远远不能满足生产以及胚胎移植的需要,对商品化小鼠***体外成熟培养液的改进,显著提高了高龄小鼠***的成熟率(87.53±2.88%)和受精后的卵裂率(79.04±3.13%)、囊胚率(65.69±2.07%),同时,还改善了线粒体的分布和活性,降低氧化应激水平和早期细胞凋亡来减弱衰老所引起的***退化。
Description
技术领域
本发明涉及一种高龄小鼠***体外成熟的优化液,属于动物繁殖领域。
背景技术
针对高龄小鼠***体外成熟培养的方法鲜有报道,目前对于市面上商品化的小鼠***体外成熟培养液直接用于高龄小鼠的体外培养,成熟率只能达到77.64±2.13%,体外受精后的卵裂率为41.77±0.59%,囊胚率为35.55±2.22%,这些数值显著低于青年小鼠的培养效果。其原因可能是由于随着随着年龄的增长,体内激素水平的改变影响了卵巢的生殖功能,降低了***的质量,因此有必要寻找一种能够优化商品化小鼠体外成熟的培养液,改善高龄小鼠***的质量。
发明内容
本发明的目的是针对上述现有问题,提供一种高龄小鼠***体外成熟的优化液。
本发明的目的是这样实现的,一种高龄小鼠***体外成熟的优化液,其特征在于,制备方法为:首先称取0.0232g褪黑素溶解在1ml无水乙醇中制备成100mM的浓储液,将100mM的浓储液在IVM培养基中稀释至终浓度为10-4mol/L或10-6mol/L或10-8mol/L,且无水乙醇的终浓度小于IVM培养基的0.01%,得到高龄小鼠***体外成熟的优化液。
利用一种高龄小鼠***体外成熟的优化液对高龄小鼠***的评价,其特征在于,从高龄小鼠卵巢中剥离获取未成熟的***放在高龄小鼠***体外成熟的优化液培养16-18h,通过第一极体率来评判***成熟效果;将体外成熟后的***进行体外受精,通过评判卵裂率和囊胚率来评估受精能力和早期胚胎的发育能力;最后通过检测线粒体分布、ROS水平和细胞早期凋亡水平,来判断体外培养***的质量。
本发明方法先进科学,通过本发明,提供的一种高龄小鼠***体外成熟的优化液,针对商品化的小鼠***体外成熟培养液,其培养效率远远不能满足生产以及胚胎移植的需要,对商品化小鼠***体外成熟培养液的改进,显著提高了高龄小鼠***的成熟率(87.53±2.88%)和受精后的卵裂率(79.04±3.13%)、囊胚率(65.69±2.07%),同时,还改善了线粒体的分布和活性,降低氧化应激水平和早期细胞凋亡来减弱衰老所引起的***退化。
本发明所述的一种高龄小鼠***体外成熟的优化液,首先称取0.0232g褪黑素溶解在1ml无水乙醇中制备成100mM的浓储液,在IVM培养基中稀释至终浓度为10-4mol/L,10-6mol/L,10-8mol/L,且无水乙醇的终浓度小于培养基的0.01%。制备IVM成熟培养滴并在在37℃,5%CO2培养箱中提前一天过夜平衡。
从高龄小鼠卵巢中剥离获取未成熟的***放在IVM成熟培养滴培养16-18h,通过第一极体率来评判***成熟效果。接下来进行体外受精,通过评判卵裂率和囊胚率来评估受精能力和早期胚胎的发育能力。最后通过检测线粒体分布、ROS水平和细胞早期凋亡水平,来判断体外培养***的质量。
以商品化小鼠***体外成熟夜为基准,其中含有10-8-10-4mol/L的褪黑素。所述体外成熟培养液为含有10-6mol/L褪黑素的小鼠体外成熟培养液。
本发明与提供了一种高龄小鼠***体外成熟的优化液,用于解决高龄小鼠***体外成熟、体外受精以及后续早期胚胎发育能力低下的缺陷,提高高龄小鼠***体外培养的质量。本发明是在商品化的小鼠体外成熟培养液中添加不同浓度(0、10-4、10-6、10-8mol/L)的褪黑素,以第一极体排出率和受精后的卵裂率、囊胚率作为***质量的评判依据筛选出最佳浓度,并通过线粒体分布检测、ROS水平检测和细胞早期凋亡水平检测,来判断***的质量。本发明筛选得到10-6mol/L的褪黑素添加于体外成熟培养液,显著提高了高龄小鼠***的成熟率(87.53±2.88%)、受精率(79.04±3.13%)和囊胚率(65.69±2.07%),且该浓度褪黑素可以通过改善线粒体的分布和活性,降低氧化应激水平和早期细胞凋亡来减弱衰老所引起的***退化。
本发明旨在寻找一种高龄小鼠***体外成熟的优化液,提高成熟、受精和早期胚胎发育能力,以期为优化动物***体外培养***以及人工辅助生殖技术(ART)提供参考。
有益效果:本发明是在商品化小鼠体外成熟培养液中添加了一种抗氧化剂—褪黑素,它可以改善线粒体的活性和分布,降低ROS水平和早期凋亡水平来提高高龄小鼠***的质量,进而改善了体外成熟、体外受精和早期胚胎发育能力。且本发明操作简单明了,还可以为高龄的大型草食类动物的***体外培养和人工辅助生殖技术提供借鉴和参考。
附图说明
图1为褪黑素对高龄小鼠***体外成熟的影响。
其中,A为不同浓度褪黑素处理后***形态,比例尺=100μm;B为不同浓度梯度褪黑素对高龄小鼠***第一极体排出率的影响(对照组:78.76±2.26%,n=165;10-4mol/L组:77.64±2.13%,n=196;10-6mol/L组:87.53±2.88%,n=221;10-8mol/L组:82.44±1.60%,n=214)。*P<0.05,数据以五次重复实验的Mean±SEM表示。
图2为褪黑素对高龄小鼠***体外受精的影响。
其中,A为不同浓度褪黑素处理后2-cell形态,比例尺=100μm;B为不同浓度梯度褪黑素对高龄小鼠***体外受精后卵裂率的影响(对照组:41.77±0.59%,n=82;10- 4mol/L:60.17±3.22%,n=107;10-6mol/L:79.04±3.13%,n=85;10-8mol/L:77.45±4.98%,n=74)。**P<0.01,数据以三次重复实验的Mean±SEM表示。
图3为褪黑素对高龄小鼠***体外胚胎发育的影响。
其中,A为不同浓度褪黑素处理后囊胚形态,比例尺=100μm;B为不同浓度梯度褪黑素对高龄小鼠囊胚率的影响(对照组:35.55±2.22%,n=34;10-4mol/L41.07±0.67%,n=63;10-6mol/L 65.69±2.07%,n=67;10-8mol/L 55.33±7.67%,n=58)。*P<0.05,**P<0.01,数据以三次重复实验的Mean±SEM表示。
图4为褪黑素对高龄小鼠***线粒体分布的影响。
其中,A为对照组和褪黑素处理组(1×10-6mol/L)***线粒体分布的典型图像。比例尺=50μm。B为对照组和褪黑素处理组(1×10-6mol/L)***线粒体异常分布率(对照组:43.06±0.69%,n=85;10-6mol/L:32.71±0.81%,n=72)。**P<0.01,数据以三次重复实验的Mean±SEM表示。
图5为褪黑素对高龄小鼠***内ROS水平的影响。
其中,A为对照组和褪黑素处理组(1×10-6mol/L)***ROS水平代表性图像。比例尺=100μm。B为对照组和褪黑素处理组(1×10-6mol/L)***ROS的相对荧光强度(对照组:1.00±0.09,n=61;10-6mol/L:0.45±0.07,n=91)。*P<0.05,数据以三次重复实验的Mean±SEM表示。
图6为褪黑素对高龄小鼠***的早期凋亡的影响。
其中,A为对照组和褪黑素处理组(1×10-6mol/L)***早期凋亡典型图像。比例尺=50μm。B为对照组和褪黑素处理组(1×10-6mol/L)***的早期凋亡率(对照组:48.54±1.40%,n=90;10-6mol/L组:30.14±2.89%,n=93)。**P<0.01,数据以三次重复实验的Mean±SEM表示。
具体实施方式
材料与方法;
1.供试动物及饲养管理;
ICR雌性小鼠(10-12月龄)和雄鼠(8-12周龄)均购自扬州大学比较医学中心,饲养于20-25℃,12h明暗间隔的控温控光环境中,自由采食与饮水,经过3-5d的适应后进行实验,操作均符合实验动物福利的相关规定。
2.主要试剂及仪器;
孕马血清***PMSG(宁波第二激素厂),M2培养液、石蜡油、透明质酸酶、褪黑素(美国sigma公司);IVM(体外成熟培养液)、TYH(***获能液)、HTF(受***)、KSOM(胚胎培养液)(南京爱贝生物技术公司);活性氧检测试剂盒、Mito-Tracker Red CMXRos线粒体红色荧光探针、AnnexinV-FITC细胞凋亡试剂盒(中国碧云天生物技术研究所);DPBS(上海生工生物工程股份有限公司)、CO2培养箱(Heal Force,HF90/HE240)、倒置荧光显微镜(德国Leica,DMIRB)、倒置荧光显微镜(德国Leica,DMi8)。
3.***的收集与培养;
选取健康的高龄母鼠(10-12月龄),腹腔注射10IU孕马血清***(PMSG),46-48h后脱颈处死,打开腹腔,取出卵巢放在M2培养液中,在体式镜下用1ml注射器针头将卵巢戳破,用捡卵针收集COCs,洗涤三次后,转移至100μlIVM微滴中进行体外成熟,其中微滴覆盖有石蜡油且在37℃,5%CO2培养箱中提前过夜平衡,16-18h后在0.1%的透明质酸酶溶液中吹打以脱去卵丘,并以第一极体排出情况判断成熟率。
4.褪黑素处理;
称取0.0232g褪黑素溶解在1ml无水乙醇中制备成100mM的浓储液,在IVM培养基中稀释至终浓度为10-4mol/L,10-6mol/L,10-8mol/L,且无水乙醇的终浓度小于培养基的0.01%。
5.体外受精和胚胎发育;
1)微滴的准备:***受精的前一天晚上在35mm的培养皿上制备一个体积为100μl和3个30μl(清洗滴)的TYH获能滴、HTF受精滴,同时也准备每皿含12个20μl的KSOM小液滴,整齐排列,盖上石蜡油,在37℃,5%CO2培养箱中过夜平衡。
2)***的获能:选取具有成功交配史的雄鼠(8-10周龄),脱颈处死,打开腹腔,剪去附睾尾,将其置于预先平衡的获能液滴中用1ml注射器在附睾尾划4-5下,用镊子挤压以释放出***,并在培养箱中获能50分钟。
3)体外受精:将体外成熟16-18h的***清洗三遍后转移至HTF微滴中,并将获能后的***液同时加入(***密度控制在1-3*106个/ml,加入体积为10-20μl),置于培养箱中,共同孵育6h左右。
4)胚胎培养:受精完成后,将受精卵在预先平衡好的KSOM微滴中清洗三遍,每个微滴中放10-15枚受精卵,继续培养,然后观察胚胎发育的情况。
6.ROS含量的检测;
按照活性氧检测试剂盒说明书,将***在含10μmol/L(1:1000)的M2培养液中,37℃,5%CO2培养箱内避光孵育30分钟,然后在DPBS中清洗三次后,将***置于倒置荧光显微镜下观察拍照,并用ImageJ软件分析***的平均荧光强度。
7.***线粒体活性的检测;
按照Mito-Tracker Red CMXRos线粒体红色荧光探针试剂盒说明书,将***在含200nmol/L的M2培养基中37℃,5%CO2培养箱内避光孵育30分钟,然后在M2培养基中洗涤3次后,活卵压片,并转移至倒置荧光显微镜下观察。
8.***早期凋亡的检测;
按照AnnexinV-FITC细胞凋亡试剂盒说明书,在避光条件下,用含5μlAnnexin-VFITC与195μl结合缓冲液在25℃下对***染色15分钟。M2培养液洗涤3次后,活卵压片,在倒置荧光显微镜下观察***,检测膜上的荧光信号。
Claims (2)
1.一种高龄小鼠***体外成熟的优化液,其特征在于,制备方法为:首先称取0.0232g褪黑素溶解在1ml无水乙醇中制备成100mM的浓储液,将100mM的浓储液在IVM培养基中稀释至终浓度为10-4mol/L或10-6mol/L或10-8mol/L,且无水乙醇的终浓度小于IVM培养基的0.01%,得到高龄小鼠***体外成熟的优化液。
2.利用权利要求1所述的一种高龄小鼠***体外成熟的优化液对高龄小鼠***的评价,其特征在于,从高龄小鼠卵巢中剥离获取未成熟的***放在高龄小鼠***体外成熟的优化液培养16-18h,通过第一极体率来评判***成熟效果;将体外成熟后的***进行体外受精,通过评判卵裂率和囊胚率来评估受精能力和早期胚胎的发育能力;最后通过检测线粒体分布、ROS水平和细胞早期凋亡水平,来判断体外培养***的质量。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010668259.9A CN111676188A (zh) | 2020-07-13 | 2020-07-13 | 一种高龄小鼠***体外成熟的优化液 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010668259.9A CN111676188A (zh) | 2020-07-13 | 2020-07-13 | 一种高龄小鼠***体外成熟的优化液 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN111676188A true CN111676188A (zh) | 2020-09-18 |
Family
ID=72438234
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202010668259.9A Pending CN111676188A (zh) | 2020-07-13 | 2020-07-13 | 一种高龄小鼠***体外成熟的优化液 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN111676188A (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113403263A (zh) * | 2021-05-15 | 2021-09-17 | 广州医科大学附属第三医院(广州重症孕产妇救治中心、广州柔济医院) | 一种改善***体外和体内成熟质量的方法与应用 |
CN113564104A (zh) * | 2021-07-02 | 2021-10-29 | 深圳韦拓生物科技有限公司 | 一种人***体外成熟液及其制备方法和应用 |
CN114717120A (zh) * | 2022-04-19 | 2022-07-08 | 沈阳农业大学 | 一种虫草属菌株的培养方法 |
CN115725496A (zh) * | 2022-11-10 | 2023-03-03 | 扬州大学 | 一种抗氧化剂在改善***体外成熟质量中的方法 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107384854A (zh) * | 2017-08-16 | 2017-11-24 | 安徽医科大学 | 人类***胞浆成熟优化液 |
CN109294978A (zh) * | 2018-11-10 | 2019-02-01 | 四川农业大学 | 一种提高玻璃化冷冻成熟***孤雌发育潜力的方法 |
WO2019147026A1 (ko) * | 2018-01-23 | 2019-08-01 | 차의과학대학교 산학협력단 | 멜라토닌을 포함하는, 배아 발달용 조성물 및 이를 이용하여 배아 발달의 효율을 향상시키는 방법 |
CN110257321A (zh) * | 2019-08-01 | 2019-09-20 | 四川农业大学 | 一种提高玻璃化冷冻生发泡期***体外成熟的方法 |
CN110527663A (zh) * | 2019-09-12 | 2019-12-03 | 河南牧业经济学院 | 一种小鼠***的体外受精方法 |
CN110833542A (zh) * | 2019-10-30 | 2020-02-25 | 南通大学 | 褪黑素在制备用于改善***质量药物中的应用 |
CN113403263A (zh) * | 2021-05-15 | 2021-09-17 | 广州医科大学附属第三医院(广州重症孕产妇救治中心、广州柔济医院) | 一种改善***体外和体内成熟质量的方法与应用 |
-
2020
- 2020-07-13 CN CN202010668259.9A patent/CN111676188A/zh active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107384854A (zh) * | 2017-08-16 | 2017-11-24 | 安徽医科大学 | 人类***胞浆成熟优化液 |
WO2019147026A1 (ko) * | 2018-01-23 | 2019-08-01 | 차의과학대학교 산학협력단 | 멜라토닌을 포함하는, 배아 발달용 조성물 및 이를 이용하여 배아 발달의 효율을 향상시키는 방법 |
CN109294978A (zh) * | 2018-11-10 | 2019-02-01 | 四川农业大学 | 一种提高玻璃化冷冻成熟***孤雌发育潜力的方法 |
CN110257321A (zh) * | 2019-08-01 | 2019-09-20 | 四川农业大学 | 一种提高玻璃化冷冻生发泡期***体外成熟的方法 |
CN110527663A (zh) * | 2019-09-12 | 2019-12-03 | 河南牧业经济学院 | 一种小鼠***的体外受精方法 |
CN110833542A (zh) * | 2019-10-30 | 2020-02-25 | 南通大学 | 褪黑素在制备用于改善***质量药物中的应用 |
CN113403263A (zh) * | 2021-05-15 | 2021-09-17 | 广州医科大学附属第三医院(广州重症孕产妇救治中心、广州柔济医院) | 一种改善***体外和体内成熟质量的方法与应用 |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
TESSA LORD等: "Melatonin Prevent Postovulatory Oocyte Aging in the Mouse and Extends the Window for Optimal Fertilization in Vitro", 《BIOLOGY OF REPRODUCTION》 * |
ZAHRAA NASHEED HAMAD ALMOHAMMED等: "The Effect of Melatonin on Mitochrondrial Function and Autophagy in In Vitro Matured Oocytes of Aged Mice", 《CELL J.》 * |
姜园园等: "褪黑素对小鼠***氧化应激及孤雌发育的影响", 《畜牧兽医学报》 * |
胡慧茹等: "褪黑素在高龄小鼠***体外成熟中的促进作用", 《扬州大学学报》 * |
胡慧茹等: "褪黑素对高龄小鼠***体外成熟的影响", 《中国兽医科学》 * |
黄健等: "褪黑素对绵羊***体外成熟的影响", 《北京农学院学报》 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113403263A (zh) * | 2021-05-15 | 2021-09-17 | 广州医科大学附属第三医院(广州重症孕产妇救治中心、广州柔济医院) | 一种改善***体外和体内成熟质量的方法与应用 |
CN113564104A (zh) * | 2021-07-02 | 2021-10-29 | 深圳韦拓生物科技有限公司 | 一种人***体外成熟液及其制备方法和应用 |
CN114717120A (zh) * | 2022-04-19 | 2022-07-08 | 沈阳农业大学 | 一种虫草属菌株的培养方法 |
CN114717120B (zh) * | 2022-04-19 | 2023-09-15 | 沈阳农业大学 | 一种虫草属菌株的培养方法 |
CN115725496A (zh) * | 2022-11-10 | 2023-03-03 | 扬州大学 | 一种抗氧化剂在改善***体外成熟质量中的方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111676188A (zh) | 一种高龄小鼠***体外成熟的优化液 | |
Eppig et al. | Capacity of mouse oocytes from preantral follicles to undergo embryogenesis and development to live young after growth, maturation, and fertilization in vitro | |
Martins et al. | The use of the acridine orange test and the TUNEL assay to assess the integrity of freeze-dried bovine spermatozoa DNA. | |
JP6905714B2 (ja) | 始原生殖細胞を機能的に成熟した卵母細胞へと分化させる培養方法 | |
CA3107040A1 (en) | A method of generating sterile and monosex progeny | |
Morrell et al. | Colloid centrifugation of boar semen | |
CN111909994B (zh) | Ccdc157基因及其突变基因作为分子标志物在诊断男性不育疾病中的应用 | |
Guimarães et al. | Reduction of centrifugation force in discontinuous percoll gradients increases in vitro fertilization rates without reducing bovine sperm recovery | |
Tagami et al. | Differentiation of female primordial germ cells in the male testes of chicken (Gallus gallus domesticus) | |
Morohaku et al. | Development of fertile mouse oocytes from mitotic germ cells in vitro | |
Canel et al. | Sperm pretreatment with heparin and l-glutathione, sex-sorting, and double cryopreservation to improve intracytoplasmic sperm injection in bovine | |
AU2014236260A1 (en) | A method and quality control molecular based mouse embryo assay for use with in vitro fertilization technology | |
Tipkantha et al. | Influence of living status (single vs. paired) and centrifugation with colloids on the sperm morphology and functionality in the clouded leopard (Neofelis nebulosa) | |
Jin et al. | Autophagy and ubiquitin-mediated proteolysis may not be involved in the degradation of spermatozoon mitochondria in mouse and porcine early embryos | |
Pu et al. | Tracking the dynamics of female germ cell development during peri-hatch periods using a gene-edited chicken model | |
CN107318719B (zh) | 锦鲤***诱导草鱼雌核发育的方法及雌核发育草鱼的应用 | |
CN109897820B (zh) | 一种延缓体外培养卵子老化的方法 | |
CN114592075B (zh) | 一种黄鳝生殖细胞异种移植及移植后嵌合性腺的检测方法 | |
Peippo et al. | Impact of in vitro fertilization of bovine oocytes with sex-sorted frozen–thawed spermatozoa on developmental kinetics, quality and sex ratio of developing embryos | |
CN1814750A (zh) | 一种哺乳动物体细胞核移植方法 | |
Tesarik et al. | Treatment of severe male infertility by micromanipulation-assisted fertilization: an update | |
CN116024296A (zh) | 一种基于有机荧光探针评估活生殖细胞及其早期胚胎线粒体状态的应用方法 | |
Sugulle et al. | Developmental competence of bovine oocytes selected by Brilliant Cresyl Blue Staining: Effect of the presence of corpus luteum on embryo development | |
Seita et al. | Full-term development of rats from oocytes fertilized in vitro using cryopreserved ejaculated sperm | |
Blackler et al. | Transmission of sex cells of one species through the body of a second species in the genus Xenopus. I. Intraspecific matings |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200918 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |