CN111650368B - 一种免疫胶体金均相标记用受体分散剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种免疫胶体金均相标记用受体分散剂及其应用，属于免疫胶体金技术领域。该免疫胶体金均相标记用受体分散剂，包括以下按照质量分数的组分：鸡卵白蛋白0~30%、聚乙烯吡咯烷酮0~30%、聚乙二醇0~30%，余量为溶剂，所述三组分的含量不可同时为0%。该受体分散剂可以应用于免疫胶体金均相标记受体中。本发明通过上述技术方案可显著提高标记效果的一致性，以及降低待标记样品的投料用量。
Description
技术领域
本发明涉及免疫胶体金技术领域，具体是一种免疫胶体金均相标记用受体分散剂及其应用。
背景技术
免疫胶体金技术（Immune colloidal gold technique）是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体检测的免疫标记技术，英文缩写为：GICT。胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如抗坏血酸、枸橼酸钠等作用下，还原聚合成为特定大小的纳米金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。胶体金颗粒带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。
目前，常规的免疫胶体金标记受体（受体属于膜蛋白，分子量在20~35KD）的方法包括以下步骤：调整pH值；添加受体等结合物；封闭处理；添加稳定剂；因其是直接添加结合物，故该方法也称为直接标记法。在生产实践中，基于受体与胶体金颗粒结合的电吸附理论，受体与胶体金颗粒的反应速度非常快；另外，不同的的免疫金颗粒结合的受体分子的数量不同，在受体投料后，先接触受体分子的胶体金颗粒优先结合受体分子，结合的受体分子的数量也要显著大于后接触受体分子的胶体金颗粒结合受体分子的数量；由上可知，影响免疫胶体金标记效果的关键影响因素主要有两个，一是静电吸附反应速度非常快，几乎是瞬时完成；二是胶体金颗粒对蛋白的吸附容量大。这两个因素综合作用造成受体投料后瞬时被先接触受体分子的胶体金颗粒所优先吸附。因此，目前免疫胶体金直接标记法存在标记效果的一致性较差、结合物投料量较大等问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种免疫胶体金均相标记用受体分散剂，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：
一种免疫胶体金均相标记用受体分散剂，包括以下按照质量分数的组分：鸡卵白蛋白0~30%、聚乙烯吡咯烷酮0~30%、聚乙二醇0~30%，余量为溶剂，所述三组分含量不可同时为0%。
作为本发明实施例的一个优选方案，所述受体分散剂包括以下按照质量分数的组分：鸡卵白蛋白10%~20%、聚乙烯吡咯烷酮10%~20%、聚乙二醇10%~20%，余量为溶剂。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述溶剂为水。
本发明实施例的另一目的在于提供一种上述受体分散剂在免疫胶体金均相标记受体中的应用。
与现有技术相比，本发明实施例的有益效果是：本发明实施例提供了一种免疫胶体金均相标记用受体分散剂，将该受体分散剂与待标记样品进行混合后，再进行免疫胶体金标记，可显著提高标记效果的一致性，以及降低待标记样品（受体）的投料用量，从而可以达到提高生产效率和降低成本的目的。具体的，本发明采用高分子空间位阻和占位的方法，应用生物大分子和高分子聚合物的混合物与待标记样品（受体）混合，使胶体金颗粒结束混合物即达到吸附容量饱和，进而使得受体分子均匀的分散于标记体系，达到每一个胶体金颗粒吸附的受体分子数量相同的标记效果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。另外，下述实施例中所涉及的设备和试剂未经特别注明的话，均是采用市售的设备和试剂。
实施例1
该实施例提供了一种免疫胶体金均相标记用受体分散剂，其是由30g的鸡卵白蛋白、30g的聚乙二醇以及40g的纯化水混合而得的。
实施例2
该实施例提供了一种免疫胶体金均相标记用受体分散剂，其是由30g的鸡卵白蛋白、30g的聚乙烯吡咯烷酮以及40g的纯化水混合而得的。
实施例3
该实施例提供了一种免疫胶体金均相标记用受体分散剂，其是由30g的聚乙烯吡咯烷酮、30g的聚乙二醇以及40g的纯化水混合而得的。
实施例4
该实施例提供了一种免疫胶体金均相标记用受体分散剂，其是由10g的鸡卵白蛋白、20g的聚乙烯吡咯烷酮、20g的聚乙二醇以及50g的纯化水混合而得的。
实施例5
该实施例提供了一种免疫胶体金均相标记用受体分散剂，其是由20g的鸡卵白蛋白、10g的聚乙烯吡咯烷酮、10g的聚乙二醇以及60g的纯化水混合而得的。
实施例6
该实施例提供了一种免疫胶体金均相标记用受体分散剂，其是由15g的鸡卵白蛋白、15g的聚乙烯吡咯烷酮、15g的聚乙二醇以及55g的纯化水混合而得的。
实施例7
该实施例提供一种免疫胶体金均相标记受体的方法，其包括以下步骤：
（1）将待标记样品（受体）、水以及上述实施例4提供的的受体分散剂进行涡旋混匀，得到混合液，备用；该混合液中，受体分散剂的体积分数为40%；待标记样品的质量浓度为1μg/mL。
（2）往5mL离心管的离心管中加入2.4mL的胶体金溶液，接着，往离心管中添加15μL摩尔浓度为0.3mol/L的碳酸钾溶液进行涡旋混匀2轮，调节胶体金溶液的pH值。
（3）取30μL上述混合液添加至上述离心管中，盖好离心管盖，涡旋混匀2轮，静置10min；接着，添加24μL质量百分比浓度为12%的牛血清白蛋白溶液，盖好离心管盖，涡旋混匀2轮，静置5min；然后，添加24μL质量百分比浓度为12%的聚乙二醇溶液，盖好离心管盖，涡旋混匀2轮后，再使用台式高速离心机，将离心管置于10000rpm的转速进行离心处理4min，弃上清，得到沉淀物。
（4）除去上述沉淀物表面的残液，然后加入300μL的复溶液进行摇晃重悬处理，并涡旋混匀2轮，得到标记溶液，即可完成对待标记样品的标记。该标记溶液可以直接加到侧向层析试纸条上进行测试分析。
实施例8
该实施例提供一种免疫胶体金均相标记受体的方法，其包括以下步骤：
（1）将待标记样品（受体）、水以及上述实施例5提供的受体分散剂进行涡旋混匀，得到混合液，备用；该混合液中，受体分散剂的体积分数为60%；待标记样品的质量浓度为1μg/mL。
（2）往5mL离心管的离心管中加入3.6mL的胶体金溶液，接着，往离心管中添加30μL摩尔浓度为0.1mol/L的碳酸钾溶液进行涡旋混匀2轮，调节胶体金溶液的pH值。
（3）取30μL上述混合液添加至上述离心管中，盖好离心管盖，涡旋混匀2轮，静置10min；接着，添加36μL质量百分比浓度为8%的牛血清白蛋白溶液，盖好离心管盖，涡旋混匀2轮，静置5min；然后，添加36μL质量百分比浓度为8%的聚乙二醇溶液，盖好离心管盖，涡旋混匀2轮后，再使用台式高速离心机，将离心管置于15000rpm的转速进行离心处理4min，弃上清，得到沉淀物。
（4）除去上述沉淀物表面的残液，然后加入300μL的复溶液进行摇晃重悬处理，并涡旋混匀2轮，得到标记溶液，即可完成对待标记样品的标记。该标记溶液可以直接加到侧向层析试纸条上进行测试分析。
实施例9
该实施例提供一种免疫胶体金均相标记受体的方法，其包括以下步骤：
（1）将待标记样品（受体）、水以及上述实施例6提供的受体分散剂进行涡旋混匀，得到混合液，备用；该混合液中，受体分散剂的体积分数为50%；待标记样品的质量浓度为0.6μg/mL。
（2）往5mL离心管的离心管中加入3mL的胶体金溶液，接着，往离心管中添加19.5μL摩尔浓度为0.2mol/L的碳酸钾溶液进行涡旋混匀2轮，调节胶体金溶液的pH值。
（3）取30μL上述混合液添加至上述离心管中，盖好离心管盖，涡旋混匀2轮，静置10min；接着，添加30μL质量百分比浓度为10%的牛血清白蛋白溶液，盖好离心管盖，涡旋混匀2轮，静置5min；然后，添加30μL质量百分比浓度为10%的聚乙二醇溶液，盖好离心管盖，涡旋混匀2轮后，再使用台式高速离心机，将离心管置于12000rpm的转速进行离心处理4min，弃上清，得到沉淀物。
（4）除去上述沉淀物表面的残液，然后加入300μL的复溶液进行摇晃重悬处理，并涡旋混匀2轮，得到标记溶液，即可完成对待标记样品的标记。该标记溶液可以直接加到侧向层析试纸条上进行测试分析。
对比例1
该对比例提供了一种现有免疫胶体金直接标记受体的方法，其与实施例9的唯一区别在于，混合液中不添加受体分散剂，并直接将浓度为5μg/mL的待标记样品溶液与胶体金溶液进行混合。
将上述实施例9和对比例1提供的标记方法分别对15种不同受体进行标记效果一致性测试，其测试结果如下表1所示。其中，标记效果一致性的判断标准如下：一种样品，相同标记条件，相同加金量，相同反应模式，同一批次试纸条测试，若显色强度读值在正负15%之间，则判为标记效果一致；若显色强度读值超出正负15%，则判为标记效果不一致；标记效果一致的样品数与总样品数的比值即为标记效果一致性的结果。
表1
从上表1可以看出，本发明实施例通过先将受体分散剂与待标记样品进行混合后，再进行免疫胶体金标记，可显著提高标记效果的一致性，以及降低待标记样品（受体）的投料用量，从而可以达到提高生产效率和降低成本的目的。
以上述依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。
Claims (1)
1.一种免疫胶体金均相标记用受体分散剂的应用，其特征在于，所述受体分散剂组分包括以下按照质量分数的组分：鸡卵白蛋白10%~20%、聚乙烯吡咯烷酮10%~20%、聚乙二醇10%~20%，余量以水作为溶剂；所述免疫胶体金均相标记用受体分散剂的应用方法包括以下步骤：
将该受体分散剂与待标记样品进行混合后，再用免疫胶体金溶液进行标记。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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