CN111647567A - 一种耐酸的沙门氏菌噬菌体及其组合物、试剂盒和应用 - Google Patents

一种耐酸的沙门氏菌噬菌体及其组合物、试剂盒和应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于沙门氏菌噬菌体技术领域，尤其涉及一种耐酸的能够特异性裂解沙门氏菌的噬菌体分离物及其在杀菌和防菌中的应用。本发明主要公开了一种鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1（Salmonella pullorum phage SG4P1），保藏编号为CCTCC NO:M2018765。本发明中的沙门氏菌噬菌体是从自然界中分离的烈性噬菌体，经毒理实验证明其安全、无任何副作用。实验发现该噬菌体可以耐受极强的酸性，因此可以通过胃酸对肠道中的沙门氏菌有强烈的裂解作用。该噬菌体有望开发成为防治沙门氏菌的感染与污染的生物杀菌剂。

Description

一种耐酸的沙门氏菌噬菌体及其组合物、试剂盒和应用
技术领域
本发明属于沙门氏菌噬菌体技术领域，尤其涉及一种耐酸的能够特异性裂解沙门氏菌的噬菌体及其组合物、试剂盒和应用。
背景技术
沙门氏菌一般定殖在动物肠道内，在食品加工中若处理不当，极易污染食品，造成食品安全隐患，危害人类健康。近些年来，随着养殖户和饲料生产商抗生素的滥用导致该病菌出现越来越多的耐药菌株，使得众多治疗沙门氏菌感染病症的抗生素失效。据报道，中国沙门氏菌对磺胺类抗生素的耐药性已经接近100％，人们不得不寻求别的能有效对抗该病菌感染的防治方法。
噬菌体是一类专性寄生或感染细菌的病毒，它们广泛存在于自然界中。烈性噬菌体可以在敏感宿主菌胞内增殖，最后裂解宿主菌释放出子代噬菌体，从而达到破坏宿主菌的作用。目前，烈性噬菌体应用广泛，尤其是利用其治疗泛耐药的“超级细菌”引起的感染，取得了良好的效果。
现有技术公告号为CN106497888B的中国发明专利，公开了一种沙门氏菌噬菌体和噬菌体抗菌组合物及其应用。该发明提供的噬菌体为肠炎沙门氏菌噬菌体LPSE1和鼠伤寒沙门氏菌噬菌体LPST10，无论是噬菌体LPSE1还是LPST10，均可对沙门氏菌具有良好的抑制作用。该现有技术披露的噬菌体LPSE1在pH为4～12之间稳定于108PFU/mL，在pH＜3时，噬菌体效价降为0，在pH＝13时，噬菌体效价为13PFU/mL，效价明显降低，pH为14时降为0。
上述中的现有技术存在以下缺陷：肠炎沙门氏菌噬菌体LPSE1在pH＜3时，噬菌体效价就降为0，表明该菌株的沙门氏菌噬菌体的耐酸性较弱。而沙门氏菌可生存在酸性的肠消化***环境中，甚至是其它更恶劣的酸性环境中，故亟需寻找一株耐酸的能够特异性裂解沙门氏菌的噬菌体分离物。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的之一是提供一种耐酸的沙门氏菌噬菌体，具有极强的耐酸能力，可以特异性地部分或完全灭活沙门氏菌。
本发明的上述发明目的一是通过以下技术方案得以实现的：一种耐酸的沙门氏菌噬菌体，沙门氏菌噬菌体为鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phageSG4P1)，保藏编号为CCTCC NO:M2018765。
通过采用上述技术方案，提供了一种鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonellapullorum phage SG4P1)，具有极强的耐酸能力，可以特异性地部分或完全灭活沙门氏菌，对沙门氏菌具有广谱的杀菌能力。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：所述鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)pH值1～4条件下具有耐酸性。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：MOI＝0.001条件下培养8～10h，其效价为3×1010PFU/mL。
本发明的目的之二是提供一种含有耐酸的沙门氏菌噬菌体的组合物，鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)具有极强的耐酸能力，也可以与其它物质混合，满足一些特异性的用途要求。
本发明的上述发明目的二是通过以下技术方案得以实现的：一种含耐酸的沙门氏菌噬菌体的组合物，组合物中至少含有一株鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonellapullorum phage SG4P1)。
通过上述技术方案，将鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)和其他噬菌体联合使用，以获得较宽的裂解谱范围。作为示例性的说明，鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1与其他噬菌体之间的比例关系可以由本领域技术人员结合本发明以及实际的应用领域以及本领域常识进行确定。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：组合物还包括有肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)，肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)，长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的一种或几种。
本发明在一较佳示例中可以进一步配置为：组合物还包括浓度为0.0002％的二氧化氯。
将鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)和其他抗菌剂混合使用，以获得抗菌广谱性的同时还可对沙门氏菌特异性杀灭。此处能与本方案中的噬菌体联合使用的抗菌剂包括但不限于抗生素和化学抗菌剂。作为示例性的说明，鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1与其他抗菌剂之间的比例关系可以由本领域技术人员结合本发明以及实际的应用领域以及本领域常识进行确定。
本发明的目的之三是提供一种含有耐酸的沙门氏菌噬菌体的组合物的试剂或试剂盒。
本发明的上述发明目的三是通过以下技术方案得以实现的：一种含有耐酸的沙门氏菌噬菌体的组合物的试剂或试剂盒，试剂盒中带有所述鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)或鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonellapullorum phage SG4P1)的组合物。
本发明的目的之四是提供一种耐酸的沙门氏菌噬菌体的应用。
本发明的上述发明目的四是通过以下技术方案得以实现的：所述鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)作为生物杀菌剂使用。
通过采用上述技术方案，将鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)新型的安全的环境生物杀菌剂，可以特异性地杀灭环境中的沙门氏菌，改善环境中的微生物分布。
将鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)用于畜禽产品养殖、运输及保存的生物杀菌剂，可以防治在畜禽养殖、运输及保存过程中致病性的沙门氏菌污染。
将鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)单独或与其他抗菌物质混合使用，对被沙门氏菌污染的食品表面喷洒105～106PFU/mL的噬菌体，可以在12h内完全灭活沙门氏菌，可以应用于防治食品表面的沙门氏菌污染。
将鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)作为杀菌剂，喷洒于食品生产车间，可特异性、持续性地防治该环境中的沙门氏菌，同时可防治食品加工过程中沙门氏菌的污染。
本发明的目的之五是提供一种耐酸的沙门氏菌噬菌体的应用。
本发明的上述发明目的五是通过以下技术方案得以实现的：在由沙门氏菌引起的细菌感染疾病中的应用，可用作于保健品、预防药物、治疗药物或医疗器械。
通过采用上述技术方案，将鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)作为一种潜在药物或保健品，治疗和预防因沙门氏菌引起的细菌感染。
将鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)可以做为一种保健品，治疗和预防因沙门氏菌引起的细菌感染。
本发明的目的之六是提供一种耐酸的沙门氏菌噬菌体的应用。
本发明的上述发明目的六是通过以下技术方案得以实现的：所述鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)作为饲料添加剂。
通过采用上述技术方案，将鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)单独或混合使用，作为潜在的饲料添加剂，添加于饲料中，可特异性、持续性地防治饲料生产储存及动物养殖中沙门氏菌的污染。
综上所述，本发明包括以下至少一种有益技术效果：
1.本发明的鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)，在较长的测量时间后，例如6h后，仍具有极强的耐酸能力，可以特异性地部分或完全灭活沙门氏菌，同时其MOI为0.001，仅需少量初始噬菌体即可完成大量增殖，为工业化生产噬菌体杀菌剂提供了优质噬菌体株来源；本领域技术人员可以根据本发明的记载及本领域常识将本发明所述鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1或其组合物制备成应用于医疗，检测，消毒及食品防护等方面的各种产品加以工业应用。
2.本发明鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)是从自然界中分离的烈性噬菌体，经毒理实验证明其安全、无任何副作用；供试噬菌体不含毒力基因或不良基因；本发明未对供试噬菌体进行任何遗传修饰。
3.本发明的鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)，可以单独或混合使用，在浓度为102～103PFU/mL的沙门氏菌培养基中105～106PFU/mL的噬菌体对该浓度的沙门氏菌的灭菌率达到99％以上，对沙门氏菌具有广谱的杀菌能力。鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1可作为应用于环境消毒的各种产品的有效成分，例如包括但不限于以液体浸泡、喷洒、与含水性载体联合使用等形式对配水***、医疗设施、养殖业设施、公共及私人设施或其他环境表面进行消毒去污，可有效控制目标细菌的生长及活性。所述液体浸泡、喷洒形式包括但不限于洗涤剂、消毒剂、去污剂等；所述含水性载体包括但不限于磷酸盐缓冲液、LB培养基、氯游离水等。
4.本发明的鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)，可以有效杀灭鸡肉表面的沙门氏菌并防治鸡肉在保存过程中沙门氏菌的污染，可作为食品防护的各种产品的有效成分。本发明包括但不限于以液体浸泡、喷洒、与合成组分联合使用等形式对由沙门氏菌侵染所导致的食品腐坏进行预防，尤其适用于熟食或不宜灭菌的食品。所述液体浸泡、喷洒形式包括但不限于食品除菌剂、食品消毒剂、食品防腐剂等；本发明中合成组分包括但不限于苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙等。
5.本发明的鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)，可用于制备组合物，试剂，或试剂盒，可应用于沙门氏菌的快速检测，其包括但不限于以试纸、试剂盒等形式对目标样本中的沙门氏菌进行检测，或对临床样本中的目标致病菌进行筛选，可有效确保检测的灵敏度。
6.本发明的鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)可以单独或混合使用，可以由本领域技术人员根据本发明的记载和本领域常识制备成生物杀菌剂，饲料添加剂及治疗药物，应用于治疗或预防由沙门氏菌引起的感染性疾病。可被沙门氏菌感染的寄主包括人类、家畜(猪、牛、羊等)、家禽(鸡、鸭、鹅等)，以及各种兽类、鱼类、鼠类等。
7.本发明的鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)可以应用于工业生产，可由宿主菌特异性扩增，可应用标准病毒纯化方法高度纯化，可以开发为一种生物杀菌剂，用于防治沙门氏菌感染。产品形式可包括但不限于以载体携带、浓缩注射或药剂浸泡等形式施用于被防治的寄主体表、口部、直肠、胸膜内部等部位；作为实施方案之一，所述载体携带形式包括但不限于口服含水性载体、口服无水性载体、乳膏制剂等；浓缩注射形式包括但不限于疫苗注射、胸膜腔注射、经脉注射等；药剂浸泡形式包括但不限于气雾剂、漂洗剂等。
附图说明
图1是噬菌体SG4P1的噬菌斑形态照片。
图2是噬菌体SG4P1单个电镜图示意图。
图3是噬菌体SG4P1耐酸性能测试结果柱状图。
具体实施方式
以下实施例结合附图对本发明作进一步详细说明，但不以任何的方式限制本发明的有效范围。
鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)，保藏编号为CCTCCNO:M2018765，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2018年11月09日。
肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)，保藏编号为CCTCC NO:M 2015146，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏日期为2015年3月23日。
肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)保藏编号为CCTCC NO:M 2015145，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏日期为2015年3月23日。
长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)保藏编号为CCTCC NO:M 2015141，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，地址为湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏日期为2015年3月23日。
以下实例中，
LB液体培养基的配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH7.0。
LB固体培养基的配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，pH 7.0。
半固体琼脂培养基配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂7g，蒸馏水1000mL，pH 7.0。
SM缓冲液配方为：氯化钠8.5g，硫酸镁2g，1mol/L Tris-HCl 50mL，明胶0.25g，蒸馏水1000mL。
鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)、肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-636)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的组合物1～组合物7均依实施例5所述方法制备。
鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)和终浓度为0.0002％的二氧化氯的组合物(组合物8)依实施例6所述方法制备。
实施例1：噬菌体的筛选和纯化
(一)样品采集及处理本实施例中的样品采集自山东、河南、江苏的养殖场污水与附近农田土壤。
采集的样品经过5000r/min离心10min，过0.22μm滤膜，获得滤液。
(二)针对样品中目标沙门氏菌噬菌体的富集将上述滤液以1:1的比例与2倍LB液体培养基混合，接种目标沙门氏菌菌株100μL，过夜富集培养，获得富集液。
(三)噬菌体筛选将上述富集液离心取上清液过0.22μm膜后，取1mL滤液以SM液进行梯度稀释，将各梯度稀释液分别与5mL含有目标沙门氏菌的LB半固体培养基混匀，倾倒于盛有LB固体培养基的培养皿上，待半固体培养基凝固后，37℃过夜培养，第二天观察是否有噬斑，记录实验结果。
(四)噬菌体纯化挑取上述单噬菌斑于1mL SM缓冲液中，150rpm震荡15min并过0.22μm膜，将滤液以SM液进行梯度稀释，将各梯度稀释液与5mL含有目标沙门氏菌的LB半固体培养基混匀，倾倒于盛有LB固体培养基的培养皿上，待半固体培养基凝固后，37℃过夜培养。重复该步骤3～5次，得到噬菌体单克隆样品，命名为鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)。鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonellapullorum phage SG4P1)噬菌斑形态如图1所示；鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonellapullorum phage SG4P1)透射电子显微镜照片如图2所示。鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1的生物学特征为：在电子显微镜下观察SG4P1噬菌体形态发现，其头部为二十面体，长度约为90～100nm，横径约为60～70nm；为有尾噬菌体，无折叠，具有可收缩尾部，尾长约95～115nm，直径约20～30nm，基于其独特的大小及形态，根据病毒分类国际委员会(ICTV)定义，该噬菌体被***分类为肌尾噬菌体科(Myoviridae)。
鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)，保藏编号为CCTCC NO:M2018765。
(五)噬菌体颗粒制备
应用宿主菌将鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)扩增，待培养基澄清后，8000g离心10min，去除杂质，加入固体聚乙二醇(PEG8000)至终浓度为10％(w/v)，搅拌溶解，4℃过夜。4℃8000g离心20min,将沉淀重悬于SM缓冲液中。将得到的噬菌体悬液4℃保存待用。
实施例2鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)对沙门氏菌最佳感染复数(MOI)的测定
挑取沙门氏菌单个菌落，接种到盛有3mL LB培养液的试管中，37℃150rpm振荡培养12h，得到宿主菌悬液。将菌悬液以1:100比例转接到l0mL LB培养液，37℃150rpm振荡培养至对数前期。按照感染复数比例加入鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1的纯培养液(由实施例1制得)和宿主菌(MOI＝噬菌体数量/细菌数量)，加入LB液体培养基使各管总体积相同。在37℃摇床中150rpm过夜摇培。培养完毕后5000g离心l0min并收集上清液，测定噬菌体效价。各点均作双份复管培养取平均值，以产生最高噬菌体效价的MOI为最佳感染复数。实验重复3次。
表1不同感染复数下鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1的效价
Figure BDA0002532716200000071
结果如表1所示，鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1效价达到最高(2.0x1010PFU/mL)时，其MOI为1:1000。其初始投入量少，繁殖速度快，可应用于工业生产中。
实施例3：鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1的毒力基因或不良基因缺失检测试验选取65种经鉴定源自病原细菌体内溶源性噬菌体的毒力基因(表2)，通过测定鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1的全基因组并对其进行生物信息学分析，以确定其是否含有上述毒力基因。结果显示，鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1不含有下列毒力基因。供试噬菌体无不良基因。
表2病原细菌体内溶源性噬菌体的主要已知毒性基因
Figure BDA0002532716200000081
Figure BDA0002532716200000091
本发明所述的鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1不含毒力基因或不良基因，其中所述的不含毒力基因或不良基因是指表2所记载的毒力基因或不良基因。
实施例3：毒理实验
实验小鼠20只，雌雄各半，适应性饲养三天后，随机分为两组(噬菌体组、对照组)，每组10只(雌雄各5只)，给予噬菌体组剂量为1010PFU/kg的鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)，对照组给予等量生理盐水，连续给药15d，将实验鼠断颈处死，检查内脏情况。
实验结果显示，此剂量的鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)对小鼠日常行为没有影响。解剖检查内脏未见异常。具有生物安全性，可应用于饲料添加剂。
实施例4：鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1耐酸性能测试
1.噬菌体计数方法(效价)
将所得鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)样品按10倍比例梯度稀释，取其中一定稀释比例的样品100μL，按照实施例1所述的步骤(四)中的方法铺双层平皿，取合适比例的平皿计算噬斑个数，一个噬菌斑代表一个噬菌体单体。
2.将效价为1x109PFU/mL的鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)样品(实施例1制得)分别调节至pH 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0、13.0、14.0，处理4h后，分别测定效价。测试结果见图3。
结果显示：鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)在pH2.0～9.0之间都可以维持较高的效价，从pH为1.0时便开始高速增长，在pH为7.0时效价最高。对酸性环境耐受性极强，证明其可以耐受动物胃肠道的低pH环境，在治疗动物胃肠道沙门氏菌感染方面有极强的潜力。
实施例5：鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1噬菌体组合物的耐酸性能测试分别取效价为1x108PFU/mL鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)和肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)的原液，将2株噬菌体等体积均匀混合制成鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)和肌尾噬菌体BP-63(Myoviridaesp.BP-663)的1:1的组合物(组合物1)。
分别取效价为1x108PFU/mL鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonellapullorumphage SG4P1)和肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)的原液，将2株噬菌体等体积均匀混合制成鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)和肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)的1:1的组合物(组合物2)。
分别取效价为1x108PFU/mL鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonellapullorumphage SG4P1)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的原液，将2株噬菌体等体积均匀混合制成鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的1:1的组合物(组合物3)。
分别取效价为1x108PFU/mL鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonellapullorumphage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)和肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)的原液，将3株噬菌体等体积均匀混合制成鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)和肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)的1:1:1的组合物(组合物4)。
分别取效价为1x108PFU/mL鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonellapullorumphage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的原液，将3株噬菌体等体积均匀混合制成鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的1:1:1的组合物(组合物5)。
分别取效价为1x108PFU/mL鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonellapullorumphage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的原液，将3株噬菌体等体积均匀混合制成鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的1:1:1的组合物(组合物6)。
分别取效价为1x108PFU/mL鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonellapullorumphage SG4P1)、肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)、肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-636)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的原液，将4株噬菌体等体积均匀混合制成鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphageSG4P1)、肌尾噬菌体BP-63(Myoviridae sp.BP-63)、肌尾噬菌体BP-66(Myoviridae sp.BP-66)和长尾噬菌体BP-12(Chilikevirus sp.BP-12)的1:1:1:1的组合物(组合物7)。
将组合物1、组合物2、组合物3、组合物4、组合物5、组合物6、组合物7样品分别调节至pH 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0、13.0、14.0，处理6h后，分别测定效价,效价测定方法见实施例4。结果参见表3。
表3反应不同时间后各组合物的pH值稳定性
Figure BDA0002532716200000111
Figure BDA0002532716200000121
结果如表3所示，各个组合物在pH为5～8的范围内的效价相对较稳定，在pH范围为1～4时，各个组合物仍然具有较高活性。
实施例6：鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1及其组合物在液体中的杀菌效果
1.沙门氏菌计数方法
采用BS沙门氏菌选择性培养基，应用稀释涂布的方法计数，37℃培养24h，黑色有金属光泽的菌落为阳性菌落。
2.鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1在液体中杀菌效果实验培养沙门氏菌至对数生长期，分装进不同试管中，用等体积的液体LB培养基稀释菌液至沙门氏菌的终浓度为1000cfu/mL，接种进不同浓度的鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)，使样品中鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phageSG4P1)的浓度分别是1x102PFU/mL、1x103PFU/mL、1x104PFU/mL、1x105PFU/mL，1x106PFU/mL。同时设置对照组和空白组(CK)，对照组给予终浓度1x103cfu/mL的沙门氏菌；空白组给予等量生理盐水。4h后检测沙门氏菌的残留量。结果参见表4。
表4不同浓度鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1在液体中的杀菌效果
Figure BDA0002532716200000131
表4的测试结果显示：鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1浓度为105～106PFU/mL时，噬菌体SG4P1对液体LB培养基中沙门氏菌的杀菌效果最好，杀灭率在99％以上。表明鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1具有应用为生物杀菌剂的潜力。
3.高浓度鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1的组合物在液体中杀菌效果实验将效价为1x108PFU/mL鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)原液和终浓度为0.0002％的二氧化氯等体积均匀混合制成1:1的组合物(组合物8)。
培养沙门氏菌至对数生长期，分装进不同试管中，用液体LB培养基稀释菌液至使沙门氏菌的终浓度为1x103cfu/mL，接种带有终浓度为1x106PFU/mL浓度的鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)的组合物1～组合物8，组合物1～组合物7的配制方法参照实施例5。设置对照组和空白组(CK)，对照组给予终浓度1x103 cfu/mL的沙门氏菌；空白组给予等量生理盐水。4h后检测沙门氏菌的残留量，检测方法见实施例6。
结果参见表5。
表5高浓度鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1的组合物在液体中杀菌效果
Figure BDA0002532716200000132
表5测试结果显示：鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1浓度为高浓度106PFU/mL时，带有其的组合物不仅杀菌效果好，而且对其它组合成分无拮抗作用。鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1的组合物具有应用为生物杀菌剂的潜力。
实施例7：噬菌体SG4P1及其组合物对雏鸡养殖过程中沙门氏菌感染的防治组合物1、组合物2、组合物3、组合物4、组合物5、组合物6、组合物7参见实施例5的制备。组合物8见实施例6的制备。
实验雏鸡550只，适应性饲养3天后，随机分为11组(噬菌体SG4P1组、组合物1、组合物2、组合物3、组合物4、组合物5、组合物6、组合物7、组合物8、对照组和空白组)，每组50只，各处理实验组给予剂量为1x108PFU/kg的供试噬菌体和1x108PFU/kg的沙门氏菌；对照组给予1x108PFU/kg的沙门氏菌；空白组给予等量生理盐水，连续给药15d。统计雏鸡日常生长情况及存活率，结果参见表6。
表6鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1及其组合物对雏鸡存活率的影响
Figure BDA0002532716200000141
表6结果显示：对照组在第7天雏鸡全部死亡；空白组成活率96％，雏鸡生活有大量的腹泻，白痢现象；单噬菌体SG4P1组雏鸡成活率80％；噬菌体SG4P1与二氧化氯的组合物8雏鸡成活率82％，表明噬菌体SG4P1可与其它组分协调使用，并不影响其性能；其中，组合物7的雏鸡成活率最高，为94％。表明鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phageSG4P1)及其组合物可以用作为生物杀菌剂或饲料添加剂，有效防治鸡养殖过程中沙门氏菌的感染。
实施例8：鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)及其组合物对鸡肉样品保存过程中沙门氏菌污染的防治
1.噬菌体计数方法：同实施例4所述的方法。
2.沙门氏菌计数方法：同实施例6所描述的方法。
3.组合物1～组合物7的配制方法：同实施例5所描述的方法；组合物8的配制方法同实施例7所述方法。
4.将高压蒸汽灭菌的鸡胸肉切成1cm见方的小方块55块，分为11组(单噬菌体SG4P1组、组合物1、组合物2、组合物3、组合物4、组合物5、组合物6、组合物7、组合物8、对照组和空白组)，每组5块，置于无菌平皿中。实验组每块接种105PFU沙门氏菌和剂量为108PFU/kg的供试噬菌体；对照组每块接种105PFU沙门氏菌和等量无菌水；空白组给与等量无菌生理盐水。将各处理置于37℃培养箱中培养。每2h取一块鸡肉置于10mL无菌水中，充分震荡，测定该液体的沙门氏菌含量，结果参见表7。
表7鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1及其组合物对鸡肉样品保存过程中沙门氏菌污染的防治结果
Figure BDA0002532716200000151
表7结果显示：8h后对照组的鸡肉表面生长了大量的沙门氏菌；而各实验组由于鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)及其组合物的添加，鸡肉表面的沙门氏菌始终控制在极低的水平。鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorumphage SG4P1)及其组合物可以用作为生物杀菌剂，有效杀灭鸡肉表面的沙门氏菌并防治鸡肉在保存过程中沙门氏菌的污染。当然，鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1也可以应用成保健品去运用或药剂去应用，实施例3也证明是安全的。
实施例11：鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)及其组合物的试剂盒的制备及使用试剂盒中含有5～10mL的效价为1×107的鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)或鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)的组合物，1L LB半固体培养基，1L LB固体培养基。
试剂盒的使用方法为：取效价为1×107PFU/mL鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)噬菌体液体或鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)的组合物的液体，采用双层平板点滴法来测定供试噬菌体的裂解谱。挑取待检测单菌落，将其接种于目标液体培养基中，于目标温度下结合待检测菌株生长特性进行振荡培养，制得待检测菌株菌液。取300μL待检测菌株菌悬液分别与5mL LB半固体培养基混合铺于LB固体平板上，取10μL鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonella pullorum phage SG4P1)液体或鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1(Salmonellapullorum phage SG4P1)的组合物点滴于平板上。待自然风干后根据待检测菌株生长特性于目标温度下进行培养，观察结果即可。
本具体实施方式的实施例均为本实施例的较佳实施例，并非依此限制本实施例的保护范围，故：凡依本实施例的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本实施例的保护范围之内。
序列表
<110> 菲吉乐科（南京）生物科技有限公司
<120> 一种耐酸的沙门氏菌噬菌体及其组合物、试剂盒和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 35258
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
gccgttgttg aatgtcgtca gtccatgatt tatgtggaac ctattagcca tagacatgta 60
aattctttcc gcgaaagcgt cctctattct gtcaaatgtt ttactaatct gcttaccgtt 120
gacaacggca taagctctcc acttagcctt tcctttccgc gccatctgtt attttacgag 180
ttaccatgct tatttcctga ttgtttaaga caaatctgat tctaataatg taagtttaat 240
ttagccagat tatttaccat taacattaga gttacaggcc cagatgagag ccccaaccca 300
cggcagaaga atccacccca gtaaaagatt acatacgaat attcctaatt tagctttatg 360
attacgtagc aaggctacca ggaacgggat gaaatagata aacgcgataa taccgacaaa 420
aacgcccatg ttcttaacct catattgttt agttgacgta gagataatag gacactatta 480
acggttatgc aagctatttt gttattctta tttggcgtct acggtcgcac cggaaaagcg 540
ggtggttccc gcctggcgca actaccaacc agtaaccgac taaccaaagg gcattactat 600
gaaacttagc gatttttact acgaagccga agccgagaaa ggcgcgcgca tgccgacgct 660
gttaccggcc tggccgccgt cgtagccgct gcagcctata aggcggctca ggaactagtc 720
gagtcacaac ggcaactgga taagatgtcg gccagcctga aaacactaac cggaagcaca 780
caaggtgcaa aacaggccct gagtatatta caggacttcg ctcgtgacac accttacggc 840
cttgaacagg cggtagaagg gttccgtaaa ctggtagctc taggcctcac cccatcagaa 900
gaagcgctac gctcttacgg caatactgca tcagcgatgg gtaaagacct taaccagatg 960
attgaggccg tcgcagatgc gagcaccttt gaattcgaac gtctgaaaga attcggcatt 1020
aaagccaagc agaaccaaag tgatatcgaa tttaccttcc aggggacgac tactgtagtt 1080
aagaaaaacg ctgccgatat tgagcaatat ctcctcaaca taggcaacgt taacttcgcc 1140
ggggcgatgg ctgaccaggc taataccctg aacggagcta tcgctagtgc ggaggactca 1200
tggtcccagt tgaagatgac tctcgctact agtctggatg tagggtcgct ggcggaacct 1260
ttacgttata ttgacgacct gatacaggag ataaacgctc aggtcgcatc cggtgagttc 1320
gtagccgaga tgcggatgtg gggtgacatg gcatccgatg ttgggggtgc gatagaggct 1380
tcattcgacg cggcgtttgg gatggttgca gacgcgttaa acgctttgaa ctccgcctgg 1440
acttacacca gtgaaagcat taccggaagc ggagaggaga ccgcatctac gatagctgag 1500
tcagcggcgg atgcgctgga cttcattgcc caggaattta cggcaatgga gcggtttttt 1560
gaagatatgg ttaaaggtgc tcaggatgca ggacgtcttg taaaggccgc attgacgccg 1620
ggagagtcgg tagccgaggc caagaacctt aacttccagt tagcgcttgc tatggatacc 1680
caaagagctg tgactgacct gacacgtaaa agtttccgtg aacaggtaga agctcaggaa 1740
gaccttatcg cattgaagcg cgcggcttac gacaccgata aagaagcggc caaggccgag 1800
ggtcttggta agtttaaagt gtcgggtaaa gacaacggtt ctacaggaga ttccgcggac 1860
aatgccgcta agaaatccgt cgacgcattc gaacgtcaga agaaagccgc tgaggatttc 1920
tattatcagt caatccacct taacgatgac gtattccaga agatacaagc taaccaagaa 1980
gagcaactta ctaagctaca ggagttctac agcaaccgtc tccttagtga ccagcaatac 2040
gaaaccgcta agacgcagat tatgctcgag gcggatacgg cccgccaggc tgaattagat 2100
aaacgcgaga aagagcgcct ggaaaaacaa ttctccgcag atgcctacgt cgctcagatg 2160
caggcccttg ctgaagggga attcgccgag ttagatcgtc agtacgaggt caagctacaa 2220
aaacttaacg actttcatgc gcagggttta atcgcggaag aaacatacca gcaggcccta 2280
aacgcaatga atgatactta cgcattagac cgagcgaagg cgacaggcac cgcatttggc 2340
aatatggcta gtaacatcgg ggccgcgcta ggagaggctt ccacggcata caaagcattt 2400
gcaattgctc aggcgaccat agctacgtac acatcagcgg tcgaagcgta taaatcaaca 2460
gcagccatac cggtagtcgg cccgtatctg gcgcctgttg ctgcggctgc tgcggtggcg 2520
gctggtttag caaacgtagg tattccttta aaagatggta cagattcagg agaatggttg 2580
aacgttgtct ccccggaggc cgatgtcgcg gttaaagcta tgcgtgcctt caccctggcg 2640
taccgagcgg cggtaggcaa attaaaaccg cttcgggata aatgcgaaga gcaaaaagac 2700
ttctcagaat acaatttaaa aatggaagac gcggcaggag acctaaaccg acaattggct 2760
ctcgaattgg tgaatggctg gagtctcgat gatgagttca ctaaggaaaa tcttaagact 2820
cttctcaccc aatataagcg cctggcggaa catgtagtcg tattccacca cgaacagttg 2880
cgtcaattgc aggaaaagta gacgcgttgt ttcagtttgc ccgttggaac ttcataaccc 2940
gccacgaaag gcgcaagttt gacagtatcg ccgatgggca caaagccgcg cttatctcta 3000
tgggggtaat aaaagacgcg ggagaaacaa cgcaggacgc cgggcctgaa tgcccccctg 3060
aactactcac cacttttgag aagtatcgtg atgttaaatt cacccgccgc gttgatgacg 3120
acggcgtaaa gctataccca agagggcaac ttagttggtc agatttagtg gcgtatagca 3180
ctatttcagg tcagaatata gggatgtttg aatctgaaat tatcatgggc ttagacgcca 3240
tttttgaggg tagaaacgat ggctgatgta gctagcttag tagtaaaggt aaccgaacaa 3300
ggcgcgaagg ccacatcaga ccgtcttgat aacctctcta aatctgcaaa agttgcgggt 3360
gcagattcgc tccgcccgag aacagggtgg taacctggcc gcagggcaga tatccactat 3420
tgcagaacgt ggtaaaccag aagtaatcat gcctgctagc gcctcccgtg tccggacggc 3480
ggagcagatg cgacagatta tgggcgagaa cgacgctaaa tccggcgggg ataatgttac 3540
tattgtgaac aataccaccg gaagaattga ttctgctgca acagaacgtg acgatgaagg 3600
acggttgcgt attataatca gtgaaaccgt aagttcagcg ttgctggata gtaacagcgc 3660
catttctaag tcacgtcgcg ctacacgcgg ccaaccagga tattgatatg agcgattacc 3720
atttcccggc ctctttgagg ccgatagtat cgaaaggcta ctcgatgacg cgaggtaaca 3780
acgtgtggcg agtaaacctg gccggtggcg gggttcgcca ggggcgtgat acatactttg 3840
atgtgttccc gattagcgtt acgctggtcg tgtcgccact gggtagacaa gcattcctca 3900
gtttcatgga gaaggtagac ggaggggctt ccagtttctg gatgaaacac gacttgggtc 3960
agggtatcga ggattaccag gttactctaa catctacgtg gaacgagtcc accgacgacg 4020
ggaagaactg ggtaataact ttcacggcca cagccgagaa atcaccattc caggaagtcg 4080
gcagcgcctg tcttaaccag aatctgcccg acttatatgg atgctacggc gattgtcttg 4140
gcgaatttct aaaaacttac ggagtgtacc aaactacatt ccctcgaatt tgggacccaa 4200
tgcaatgagt caggaatcag tagaagcggc ataccggcgt aagctggcgt ccaatcccga 4260
tggcgagatg gattttatta ccctggagat atcccaccct cttctttcta agcgctggtt 4320
gcttgtgcgc ggggttaacg acttgaccgc tactctagag actggggagg ttgttacatt 4380
cgagggtacg ccgatggagg ccaagaacgc cgccaacaat aacgacatgg accagaccgc 4440
ctctttctct ttgccggatg tgctcaacat tctcgatgaa gaaatggaca gaatccctta 4500
cgacaataag gaattaccta aattcatctt ccggcgttac gtaagcaccg acctgtcgta 4560
cccatgcgac ggcccggtgg tatatgaatt gcaaacactc acgcaagaga aaggtgtatt 4620
caccgcggaa actggtacgc cgatgcttaa ccaacgggct accggaatcc tgatgacacc 4680
agaagaaata cctttactcc gcgggatact gacatcgtga atattaatga ttacactggc 4740
ctgccatatg acttccgtcg tcgtaattgc tggcatcacg tccgcaacgt ccgcgcggac 4800
gctgggttat cgaccccgat gttcgatgta acaagcccaa cggcaataga cgccgccttc 4860
gacgatggcc actctaatcc gaaaggatta acccgcgcgt ttatccctca gaatttcgac 4920
gctgtcttgc tgggggtgaa acatcgaggg cgaatagtgt ggcacgctgg ggtatattac 4980
gaaggaatgg ttagccactg tgagctggcg tccagacagg ttagactgga tagtctggaa 5040
gaccttaaag atacttattc ggagattgaa ttttggcgct agtaatccac tatacccgta 5100
acgaagacgg cacatttgac gttaaacgtt atcgcgataa tccgatgaac ttcgtcgtga 5160
accacgttcc cgatggggtg ccggtgcgtg ttttcattga cgaaatcgga gaagataacg 5220
acgtaacaga agacttcgaa gcactgaaag aaaacgcgac tttccacatt gtggaatcag 5280
ctggtggtgg cgccattaaa ggcgtcatga agatttttag cgttatcctt aaaccgctgg 5340
cgaaactatt atcgccgtcc gtgaaaggtg cgtcctcgaa ccttgcgaac tcgcaggcgg 5400
attccccgaa caacagtctc accgaccgta acaacaaggc ccgcccatac gagcgcagct 5460
acgacatctg cggaacggtg caaactatcc caaataacct tatgtctact tataaggtgt 5520
ttaacgccgc tggtaaaatt gtagagtacg gctattacga cgccgggcgt ggttacctag 5580
acatacaccc tgaaggtata actgacgggg acacccgcgt atcagacata acaggcacgt 5640
cggttgccgt gtacgcaccc tatacatcac ccaataacac atctacaccg caggtcatgg 5700
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cctgttctgg accgagcgac gggcaggtat ttatcaggtg gacattaacg ttgggtctac 33000
cttgggttgc gcccctctca accggttagc tgataagcta aacgccacct tcgccgccgg 33060
taactgtttt agtcgtaacg aaatctgtgc tgaggtacaa tcagtaagcc tcggtcctct 33120
tattgttgag aatggatggg cgaagaggcc tctctcaatt aatttcatag cctttacagc 33180
gaggattaga taatggcgtt acaaccatac aaaggcgcga tgaccgcgca attttacgtt 33240
cttgaggcga cgccgggggt gacgccagcg aacccggtat ggcagccgct ccgcaacact 33300
gggggtattc ccgccgtaac gcgcgacgcc ctcatttcca acgagctcga cggcagtcgt 33360
gaaacctcat ccatccgcac cggtaaccgc caggtaacag gtgaatacgc tattgaactg 33420
agcgcgacca gtcaggacga gctgttggcc ggtgcgatga ctagttcatg ggtggccggg 33480
tcaactctat ccggcattgg tatcaccgta gacccagcag cgaaaacttt tacacgcgct 33540
gccggtagct ttgtgacaga cggcgttgaa gtaggcgacc tggtgcaatt cgatggtttg 33600
tcgggtaata acgataaagc tttcctcgtt accgcagtaa ccgctacagt cgtaaccggt 33660
gcgggtatcc agcataccct taccgccgaa tccgacgtcc gggccgattt gcgtatcgca 33720
gataaacttg aaactggtaa cttgtgtaaa acctattcaa tcttgacatg gttgaaaggt 33780
aaatgcggaa acccggattc atacatcata acccgcggag tcgagtttac cgggttcact 33840
atcgaacagg cagttaacgc gatggtgacc ggctctttcc cgttcatcgg cttgaatcag 33900
gaaatcctac aagcaccgcc gagtggttca gatttcacga ccaattttag cgcccgtccg 33960
tttgcatcgg ttgacgtatc cgcctatgac ggcgccgctc cgcttaaact tatagacacg 34020
ttcaccatta ctaacgacaa cagcgcgtcc gcacagttcg agttaggaaa taacagcgtg 34080
gcatttgtcg aacgtggccg cgcagctaac accttctcgc tggcgggtaa gctgtacgac 34140
atgacgttat tgaataaatt cctgaacgaa acgcaaatgg aggtatcttc tgttctgaac 34200
ggcccagacg gtgccatgag tttcacctta aaacgcgctt cgttgacgtc agcaactccg 34260
gaaatcggcg gccccgaatc tgtcaccctt tctcttgagg gccaggcaac cggcaaccag 34320
ttccagtctt caattgttat ccagcgcatt aagtacgcct aagaaaaagg ccccgaaagg 34380
ggccttagtt ttaaatcaaa ccttcttctg ttaacttacc aataatccac atctcacctt 34440
ctgcaaagaa catggcctgt gaatgcccgg tttctgtttc acgcataatg ccgtaaccct 34500
tatcgatgaa ccattgctgg aagacacgac cgcgttttac agagcgattg tatacgccaa 34560
attgttcaag ttgtttattc atccacacgg cagattgacc gaacttctgg gcaacctgcg 34620
tcgcgttata tagattattg cggtcaacta tacggtcgta gacatcggcc tttggtgcca 34680
tttccttgtt ctcaagcgca aggcgttctt tctcctccca caagtccgca gccaacctta 34740
aagcctcccc cattgtcttg ggcaccggta aggatggttt gctcgcttgt gactccagtt 34800
cctgccaacg gcggatgatg gcagcgcgca ttttgatgct gtaccctgaa atcaggatta 34860
atgtttcctc tttatccaaa agaagcattt tatacgtgcg ccccttgctg tctttgtaat 34920
cggctgactt ttcagccgat tgaatctcag acaacatttt gcggatatca gccagaacat 34980
ttttatgctc tttccccgtc aattccgcaa tctcacggct ggacatggtt tgtgcttcac 35040
taacattcat taatccgttc atggtttcat ctcctcttgt tggtgtggtt atatttaacc 35100
ccgaacacgc ccaccgccca aaccagaccc cccaccgcga cgacaaaaaa aagccccgaa 35160
aggggccccc cccccaccca ccaacaccac cacggcaccc ccgcaacccc cccagacccc 35220
caaccgcccc cgccaagccg gcccccgcgc ccccgcgc 35258

Claims (10)

1.一种耐酸的沙门氏菌噬菌体，其特征在于：沙门氏菌噬菌体为鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1（Salmonella pullorum phage SG4P1），保藏编号为CCTCCNO: M2018765。
2.根据权利要求1所述的耐酸的沙门氏菌噬菌体，其特征在于：所述鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1（Salmonella pullorum phage SG4P1）pH值1～4条件下具有耐酸性。
3.根据权利要求1所述的耐酸的沙门氏菌噬菌体，其特征在于：MOI=0.001条件下培养8～10h，其效价为3×1010PFU/mL。
4.一种含有权利要求1～3任一项所述的耐酸的沙门氏菌噬菌体的组合物，其特征在于：组合物中至少含有一株鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1（Salmonella pullorum phageSG4P1）。
5.根据权利要求3所述的耐酸的沙门氏菌噬菌体的组合物，其特征在于：组合物还包括有肌尾噬菌体 BP-66（Myoviridae sp. BP-66），肌尾噬菌体 BP-63（Myoviridae sp. BP-63），长尾噬菌体 BP-12（Chilikevirus sp. BP-12）的一种或几种。
6.根据权利要求3所述的耐酸的沙门氏菌噬菌体的组合物，其特征在于：组合物还包括终浓度为0.0002%的二氧化氯。
7.一种含有权利要求3所述的耐酸的沙门氏菌噬菌体的组合物的试剂或试剂盒，其特征在于：试剂盒中含有所述鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1（Salmonella pullorum phageSG4P1）或鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1（Salmonella pullorum phage SG4P1）的组合物。
8.一种权利要求1 所述的耐酸的沙门氏菌噬菌体的应用，其特征在于：所述鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1（Salmonella pullorum phage SG4P1）作为生物杀菌剂使用。
9.一种权利要求1 所述的耐酸的沙门氏菌噬菌体的应用，其特征在于：所述鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1（Salmonella pullorum phage SG4P1）在由沙门氏菌引起的细菌感染疾病中的应用，可用作于保健品、预防药物、治疗药物或医疗器械。
10.一种权利要求1 所述的耐酸的沙门氏菌噬菌体的应用，其特征在于：所述鸡白痢沙门氏菌噬菌体SG4P1（Salmonella pullorum phage SG4P1）作为饲料添加剂。
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