CN111616985B

CN111616985B - 油体洗护产品及其制备方法

Info

Publication number: CN111616985B
Application number: CN202010037736.1A
Authority: CN
Inventors: 杨晶; 李海燕; 杜林娜; 李校堃; 兰馨馨
Original assignee: Jilin Agricultural University
Current assignee: Jilin Agricultural University
Priority date: 2020-01-14
Filing date: 2020-01-14
Publication date: 2023-06-02
Anticipated expiration: 2040-01-14
Also published as: CN111616985A

Abstract

本发明为油体洗护产品及其制备方法，公开了一种洗护用品，它包括植物油体乳液，所述的植物油体乳液由下述方法制备：将黄原胶加入去离子水，搅拌均匀无气泡，使其充分溶胀，在磁力搅拌器作用下，缓慢加入植物油体悬浮液；所述的植物油体为过表达oleosin的植物油体；所述的油体终浓度为10%；黄原胶的浓度为0.05‑0.5%。本发明制备的洗护用品，可以使皮肤油分减少、水分增加，使肌肤弹性增加，保湿锁水性好，安全性高。

Description

油体洗护产品及其制备方法

技术领域

本发明属于生物技术和化妆品技术领域，具体涉及油体洗护产品及其制备方法。

背景技术

油体含有高度不饱和脂肪酸，亚油酸含量高达 80 %以上，其溶液可视为油水（O /W）乳液，在食品加工中是一种重要添加剂，常规的奶油食品，沙拉酱，蛋黄酱，肉及肉制品，在食品工业中得到广泛应用。凝胶的稳定性是其许多理化性质中最重要的性能。只有在合理控制***稳定性的条件下，产品才能使其功能特性得到保证。

植物油体提取后在离体状态下，原本是非常不稳定的组分。植物油体在体外存在由于诸如空气，热和金属离子的许多因素引起异构化，氧化降解等而容易改变质量的成分。因此，油体在稳定性方面的问题备受关注。在油-水这种食品工业产品中凝胶基质的添加发挥不可或缺的作用，它可以覆盖油体，然后产生排斥力，以防止油体凝聚以保持其稳定性。

如今，国内外许多研究人员已开始研究油体结构化***，方法是将植物油体与凝胶的结构材料结合以形成粘弹性的“凝胶状”结构。所述凝胶可以有效地减少反式脂肪酸和饱和脂肪酸。油体凝胶主要分为两类，即低分子量有机凝胶体系，其主要由形成自组装或结晶网络的小分子组成。所使用的胶凝剂主要是饱和脂肪酸或醇，蜂蜡，植物甾醇和肽，或卵磷脂；另一种方法是使用疏水性生物大分子及其衍生物，例如乙基纤维素，大豆蛋白。生物大分子具有非常好的亲水性，分子相互缠绕并通过氢键和静电相互作用形成致密的网络结构。

目前市面上化工合成的洗护产品比比皆是，但所含成分却令人担忧，产品中所含的化学物质虽能清洁肌肤，但同时会对肌肤造成损伤，甚至引起过敏反应，导致肌肤老化。随着时代的发展，人们对健康的关注日益增加，国家对环境的监护力度也与日俱增，因此，一种采用纯天然无刺激植物油体原料的护肤产品的制作方法是具有重要意义的。天然的原料不仅可能避免对皮肤的损伤，而且纯天然植物油体（红花油体、大豆油体、向日葵油体等）它们具有的天然成分能够平衡皮脂，调理肤质，滋养保湿，且具有抗菌消炎的作用；有效成分的加入能够更好的清洁皮肤深处的污垢，深层清洁皮肤，同时天然成分也不会对环境造成污染，这是未来化妆品行业发展的必然趋势。

发明内容

本发明目的是提供油体洗护产品及其制备方法。

一种洗护用品，它包括植物油体乳液，所述的植物油体乳液由下述方法制备：将黄原胶加入去离子水，搅拌均匀无气泡，使其充分溶胀，在磁力搅拌器作用下，缓慢加入植物油体悬浮液；

所述的植物油体为过表达oleosin的植物油体；

所述的油体终浓度为10%；

所述黄原胶的浓度为0.05-0.5%。

所述的一种洗护用品为油体乳液，它是由下列质量分数的组分组成：10~55%重组植物油体乳液、5-10%甘油、10-20%羧乙基纤维素、1-5%PEG800、5-20%维生素C、0.1-0.5%香精，总重量为100%。

所述的一种洗护用品为油体冷制皂，它是由下列质量分数的组分组成：2-20%重组植物油体乳液，椰子油15-40%，棕榈油15-40%，蓖麻油1-10%，玫瑰果油2-10%，橄榄油2-10%，乳木果油2-10%，碱5-20%，余量蒸馏水，总重量为100%。

所述的一种洗护用品为油体护手霜，它是由下列质量分数的组分组成：5-40%重组植物油体悬浮液、0.05-0.5%黄原胶、5-10%聚乙烯吡咯烷酮PVP、三酸甘油酯3-8%、鲸蜡醇10-20%、十六十八醇15-25%、单甘脂15-20%、汉生胶1-10%、德国巴斯夫5-10%、甘油10-15%，余量为水，总重量为100%。

所述的一种洗护用品为油体润足霜，它是由下列质量分数的组分组成：5-40%重组植物油体悬浮液、0.05-0.5%黄原胶、甘油15-20%、鲸蜡醇10-20%、十六十八醇10-15%、单甘脂15-20%，余量为水，总重量为100%。

本发明提供了一种洗护用品，它包括植物油体乳液，所述的植物油体乳液由下述方法制备：将黄原胶加入去离子水，搅拌均匀无气泡，使其充分溶胀，在磁力搅拌器作用下，缓慢加入植物油体悬浮液；所述的植物油体为过表达oleosin的植物油体；所述的油体终浓度为10%；黄原胶的浓度为0.05-0.5%。本发明制备的洗护用品，可以使皮肤油分减少、水分增加，使肌肤弹性增加，保湿锁水性好，安全性高。

附图说明

图1 重组植物油体的表观；

图2 重组植物油体和野生油体显微结构对比图；A、野生油体；B、重组植物油体；C、野生油体乳液；D、野生油体乳液；

图3 重组植物油体悬浮液外观图；

图4重组植物油体悬浮液粒径检测图；

图5 重组植物油体乳液外观图；

图6 重组植物油体乳液粒径检测图；

图7 重组植物油体冷制皂成品图；

图8 重组植物油体护手霜外观图。

具体实施方式

实施例1 重组植物油体的制备

一、过表达oleosin植物的获得

构建pOBT表达载体，载体骨架pCAMBIA1301的基础上改造T-DNA区，该质粒上还有NcoI和HindIII酶切位点；将红花oleosin基因（碱基序列见序列表SEQ ID NO.1）***pOBT表达载体，得到重组pOTB-Oleosin载体，转染农杆菌感受态细胞，以菌液为模板，进行PCR鉴定；将转染后的农杆菌，转化红花，采用农杆菌介导法：在萌发的种子还未长出真叶时，横切子叶下方生长点处，外植体的表面伤口处接触制备好的农杆菌菌液中进行侵染10min，25℃继续暗箱中培养4天。经过4天暗培养的子叶节转移到芽增殖培养基上，待子叶节伤口处长出1～3个绿色的芽点后，转移至伸长培养基，培养约4周，进行炼苗、移栽；收种后，获得T1代过表达oleosin红花植株。

二、过表达oleosin植物种子基因水平和蛋白水平检测

提取过表达oleosin的红花基因组DNA，分别以特异引物：

F:3’-5’:ATGGGTACGGTTGAAACGACA

R:3’-5’:AGCTCCGACAACCGACCAA

进行PCR检测，扩增出与oleosin蛋白大小一致的目标条带，初步确定已经***植物基因组中；提取重组油体进行SDS-PAGE检测，最终获得T3代过表达oleosin的红花种子。

三、重组植物油体的制备

取20g T3代过表达oleosin的红花种子，清洗2~3次，吸水晾干；使用超高速粉碎机进行破碎10s；加入200 mL PBS缓冲溶液，榨汁机进行研磨，纱布粗过滤，滤液放置在50 mL离心管中，利用超速离心机4℃ 12000 r/min，15 min；上层固体物质用PBS缓冲溶液重悬，玻璃棒搅拌至无颗粒，超速离心机4℃12000 r/min，15min重复一次；上层固体物质用PBS缓冲溶液重悬，玻璃棒搅拌至无颗粒，超速离心机4℃ 12000 r/min，15 min重复2次；得到的上层白色固体即为重组植物油体（过表达oleosin油体），4℃储存备用。

实施例2 重组植物油体的制备

一、过表达oleosin植物的获得

构建pOBT表达载体，载体骨架pCAMBIA1301的基础上改造T-DNA区，该质粒上还有NcoI和HindIII酶切位点；将拟南芥oleosin基因（碱基序列见序列表SEQ ID NO.2）***pOBT表达载体，得到重组pOTB-Oleosin载体，转染农杆菌感受态细胞，以菌液为模板，进行PCR鉴定；采用Flora Dip法，将转染后的农杆菌，转化拟南芥外植体：拟南芥在露白花和夹的状态时，倒扣于制备好的农杆菌菌液中侵染8-15min，暗培养2-3天，收种后，进行抗性筛选，获得T1代过表达oleosin拟南芥植株。

二、过表达oleosin植物种子基因水平和蛋白水平检测

提取过表达oleosin的拟南芥基因组DNA，分别以特异引物：

F:3’-5’:ATGGCGGATACAGC TAGAGGAA

R:3’-5’:CACCGGGTGGAGTAGTGTGCTGG；

进行PCR检测，扩增出与oleosin蛋白大小一致的目标条带，初步确定已经***拟南芥植物基因组中；提取重组油体进行SDS-PAGE检测，最终获得T3代过表达oleosin的拟南芥种子。

三、重组植物油体的制备

取20g T3代过表达oleosin的拟南芥种子，清洗2~3次，吸水晾干；加入200 mL PBS缓冲溶液，使用研钵进行研磨，纱布粗过滤，滤液放置在50 mL离心管中，利用超速离心机4℃ 12000 r/min，15 min；上层固体物质用PBS缓冲溶液重悬，玻璃棒搅拌至无颗粒，超速离心机4℃12000 r/min，15min重复一次；上层固体物质用PBS缓冲溶液重悬，玻璃棒搅拌至无颗粒，超速离心机4℃ 12000 r/min，15 min重复2次；得到的上层白色固体即为重组植物油体（过表达oleosin油体），4℃储存备用。

实施例3 重组油体悬浮液的制备

利用1 moL的HCl或NaOH将PBS缓冲液的pH调节为6-9，离子浓度为10mM，将重组植物油体加入PBS缓冲液中，磁力搅拌器充分搅拌均匀，无颗粒，制备重组油体悬浮液，重组油体悬浮液浓度为10%，外观如图3所示；重组油体悬浮液粒径大小在400-900nm，野生型油体悬浮液粒径大小在700-1500nm（表1，图4）。

实施例4 重组油体乳液的制备

从卡波姆、羧甲基纤维素钠、Tween-80、Tween-20，黄原胶，葡聚糖等多种稳定剂中筛选合适的稳定剂；称取适量的稳定剂加入去离子水，搅拌均匀无气泡，使其充分溶胀。在磁力搅拌器下缓慢加入植物油体悬浮液，最终制备成重组植物油体乳液，稳定剂浓度范围在0.3%，并且油体终浓度为10%；利用显微结构，粒径及电位指标的测定，最终定为黄原胶为最佳稳定剂（表2），重组植物油体乳液外观见图5。

实施例5 重组油体乳液稳定性的检测

1）将制备好的植物油体乳液（黄原胶为稳定剂）分别放置恒温水浴锅中，进行30℃、60℃、90℃的恒温处理30min，和50w-250w的高超声处理30min、60min、90min；利用显微结构，粒径及电位指标的测定，发现植物油体乳液对温度及超声有良好的稳定性。

2）耐碱实验：向植物油体乳液（黄原胶为稳定剂）加入5%氢氧化钠，仍呈乳白色油体乳液，感观无变化。

实施例6 重组油体护肤乳液的制备

按照原料质量百分比称重，10~55%重组植物油体乳液（重组油体悬浮液加黄原胶），5-10%甘油，10-20%羧乙基纤维素，1-5%PEG800，5-20%维生素C，0.1-0.5%香精，上述所有成分的百分比含量最终为100%；将甘油，羧乙基纤维素，PEG800，维生素C首先加入到搅拌杯中，置于1000rpm-12000rpm剪切力下进行乳化，30min；再向其中加入10~55%重组植物油体乳液，搅拌均匀，最后加入0.1-0.5%香精，混匀分瓶。

实施例7 植物油体冷制皂的制备方法

按照原料质量比例，将椰子油15-40%，棕榈油15-40%，蓖麻油0-10%，玫瑰果油2-10%，橄榄油2-10%，乳木果油2-10%，碱5-20%，蒸馏水20-30%，上述所有成分的百分比含量最终为100%；将椰子油，棕榈油，蓖麻油，玫瑰果油，橄榄油，乳木果油加入到搅拌杯中，充分混匀，倒入提前配置已恢复为45±5℃的碱液，并置于45±5℃水浴加热搅拌3-4小时，至皂液均匀，再向其中加入2-20%重组植物油体悬浮液，混合，倒入模具并干燥1-2天，得手工皂初品；将所得的手工皂初品脱模，于阴凉通风处继续皂化8-12周，修皂，包装后得到成品手工皂（附图6）。10名志愿者使用上述冷制皂，测定使用前后肌肤指标，结果见表5。

实施例8 植物油体冷制皂的制备方法

原料质量比例，2-20%重组植物油体乳液，椰子油15-40%，棕榈油15-40%，蓖麻油1-10%，玫瑰果油2-10%，橄榄油2-10%，乳木果油2-10%，碱5-20%，余量蒸馏水，上述所有成分的百分比含量最终为100%；

按比例将椰子油，棕榈油，蓖麻油，玫瑰果油，橄榄油，乳木果油加入到搅拌杯中，充分混匀，倒入提前配置已恢复为45±5℃的碱液，并置于45±5℃水浴加热搅拌3-4小时，至皂液均匀；再向其中加入皂液总质量的2-20%重组植物油体乳液（重组油体悬浮液加黄原胶），混合，倒入模具并干燥1~2天，得手工皂初品；将所得的手工皂初品脱模，于阴凉通风处继续皂化8~12周，修皂，包装后得到成品手工皂。10名志愿者使用上述冷制皂，测定使用前后肌肤指标，结果见表6。

本发明冷制皂采用纯天然植物油体原料制作而成，具有高效清洁，滋润肌肤，改善肤质和抗菌消炎的功效，温和不刺激，天然无污染，无分男女，老少皆宜。植物油体成分使得本发明的产品具有保湿、锁水、清洁等功效（见表7）。

实施例9 重组植物油体护手霜的制备

各物质质量分数分别为：5-40%重组植物油体悬浮液、0.05-0.5%黄原胶、5-10%聚乙烯吡咯烷酮PVP、三酸甘油酯3-8%、鲸蜡醇10-20%、十六十八醇15-25%、单甘脂15-20%、汉生胶1-10%、德国巴斯夫5-10%、甘油10-15%，余量为水，总重量为100%；

具体步骤如下：

1）称取聚乙烯吡咯烷酮PVP 5-10%、三酸甘油酯3-8%、鲸蜡醇10-20%、十六十八醇15-25%、单甘脂15-20%、汉生胶1-10%、德国巴斯夫5-10%、甘油10-15%，加水，75℃水浴，玻璃棒搅拌，直至固体颗粒全部溶解；2）黄原胶先溶于pH7.0的0.05 mol/L 磷酸盐缓冲液中，加热至60°C，磁力搅拌2h吸水溶胀后与重组植物油体悬浮液混合，再搅拌2h，形成重组植物油体乳液；

3）步骤1）和2）液体混合，搅拌，利用乳化器间歇乳化30min，直至乳液颜色为乳白色，色泽均一无颗粒；加入少量纯天然植物精油，搅拌，混合，分装，得到重组植物油体护手霜；选择10名志愿者使用上述护手霜，测定使用前后肌肤指标，结果如表8，志愿者使用护手霜后手部油分下降，水分含量上升。

实施例10 重组植物油体润足霜的制备

各物质质量分数分别为：5-40%重组植物油体悬浮液、0.05-0.5%黄原胶、甘油15-20%、鲸蜡醇10-20%、十六十八醇10-15%、单甘脂15-20%，余量为水，总重量为100%；

具体步骤如下：

1）称取甘油15-20%、鲸蜡醇10-20%、十六十八醇10-15%、单甘脂15-20%基础护手霜基质物质加入420mL水，75℃水浴，玻璃棒搅拌，直至固体颗粒全部溶解；

2）黄原胶先溶于pH7.0的0.05 mol/L 磷酸盐缓冲液中，加热至60°C，磁力搅拌2h吸水溶胀后与重组植物油体悬浮液混合，再搅拌2h，形成重组植物油体乳液；

3）步骤1）和2）液体混合，搅拌，利用乳化器间歇乳化30min后，分装。10名志愿者使用上述润足霜，测定使用前后肌肤指标，结果如表9，润足霜油分含量上升，肌肤弹性增强，水分含量提高。

。/>

序列表

<110> 吉林农业大学

<120> 油体洗护产品及其制备方法

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 447

<212> DNA

<213> 红花(Carthamus tinctorius L.)

<400> 1

atgggtacgg ttgaaacgac attcgacacg atggatcgac gacgagtgga tcaaatcact 60

ggcgagacga tgctactcgc gaccttagtc gccatagctg ttgccggacc actgatggtc 120

ctgatggtta tcagtttttg taccacattg acactgtttc tagtcagtgc tccacttttc 180

ataatcttcg gccctttgct gttgggtgcc ggttttgtgc tcacgatggt gttggtgggg 240

ttcggtatgg ccgccatgat ggcgatggcg gggcttgcta cgttgggatg ggttttcaga 300

tcgcttagag gcgacactgg gaaggtgatc agagacatgg tcgtggagtt gggggacagg 360

gttaaagatg ccaaaagcaa ttgggctatt catttgaatc agaaggtgca taatatgccg 420

gaaaattggt cggttgtcgg agcttag 447

<210> 2

<211> 731

<212> DNA

<213> 哥伦比亚型拟南芥(Arabidopsis thanliana)

<400> 2

atggcggata cagctagagg aacccatcac gatatcatcg gcagagacca gtacccgatg 60

atgggccgag accgagacca gtaccagatg tccggacgag gatctgacta ctccaagtct 120

aggcagattg ctaaagctgc aactgctgtc acagctggtg gttccctcct tgttctctcc 180

agccttaccc ttgttggaac tgtcatagct ttgactgttg caacacctct gctcgttatc 240

ttcagcccaa tccttgtccc ggctctcatc acagttgcac tcctcatcac cggttttctt 300

tcctctggag ggtttggcat tgccgctata accgttttct cttggattta caagtaagca 360

cacatttatc atcttacttc ataattttgt gcaatatgtg catgcatgtg ttgagccagt 420

agctttggat caattttttt ggtcgaataa caaatgtaac aataagaaat tgcaaattct 480

agggaacatt tggttaacta aatacgaaat ttgacctagc tagcttgaat gtgtctgtgt 540

atatcatcta tataggtaaa atgcttggta tgatacctat tgattgtgaa taggtacgca 600

acgggagagc acccacaggg atcagacaag ttggacagtg caaggatgaa gttgggaagc 660

aaagctcagg atctgaaaga cagagctcag tactacggac agcaacatac tggtggggaa 720

catgaccgtg a 731

Claims

1.一种洗护用品，其特征在于：它包括重组植物油体乳液，所述的重组植物油体乳液由下述方法制备：将黄原胶加入去离子水，搅拌均匀无气泡，使其充分溶胀，在磁力搅拌器作用下，缓慢加入重组植物油体悬浮液；

所述的重组植物油体为过表达oleosin的植物油体；

所述的重组植物油体悬浮液终浓度为10%；

所述的黄原胶的浓度为0.3-0.5%。

2.根据权利要求1所述的一种洗护用品，其特征在于，所述的洗护用品为油体护肤乳液，它是由下列质量分数的组分组成：10~55%重组植物油体乳液、5-10%甘油、10-20%羧乙基纤维素、1-5%PEG800、5-20%维生素C、0.1-0.5%香精，总重量为100%。

3.根据权利要求1所述的一种洗护用品，其特征在于，所述的洗护用品为油体冷制皂，它是由下列质量分数的组分组成：2-20%重组植物油体乳液，椰子油15-40%，棕榈油15-40%，蓖麻油1-10%，玫瑰果油2-10%，橄榄油2-10%，乳木果油2-10%，碱5-20%，余量蒸馏水，总重量为100%。