CN111588742A - 没药倍半萜提取物在制备慢性阻塞性肺病药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种没药倍半萜提取物,以及其在制备慢性阻塞性肺疾病药物中的应用,本发明提取物能够提高对慢性阻塞性肺疾病患者的炎症的抑制作用,改善慢性阻塞性肺疾病患者的肺功能,对慢性阻塞性肺疾病具有很好的预防和治疗作用。
Description
技术领域
本发明属于药物化学领域,具体涉及一种没药倍半萜提取物及其在制备慢性阻塞性肺病药物中的应用。
背景技术
慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种具有气流阻塞特征的慢性支气管炎和(或)肺气肿,可进一步发展为肺心病和呼吸衰竭的常见慢性疾病。与气道和肺脏对有毒颗粒或气体的慢性炎性反应增强有关,致残率和病死率很高,全球40岁以上发病率已高达9%~10%,确切病因不清楚,一般认为与慢支和阻塞性肺气肿发生有关的因素都可能参与慢性阻塞性肺病的发病。已经发现的危险因素大致可以分为外因(即环境因素)与内因(即个体易患因素)两类。外因包括吸烟、粉尘和化学物质的吸入、空气污染、呼吸道感染及社会经济地位较低的人群(可能与室内和室外空气污染、居室拥挤、营养较差及其他与社会经济地位较低相关联的因素有关)。内因包括遗传因素、气道反应性增高、在怀孕期、新生儿期、婴儿期或儿童期由各种原因导致肺发育或生长不良的个体。
没药为橄榄科植物地丁树(Commiphora myrrha Engl.)或哈地丁树(Commiphoramolmol Engl.)的干燥树脂,其主产于非洲东北部、肯尼亚北部、***半岛南部,另在苏丹、马达加斯加、利比亚、印度、中国等地也有分布,是一种传统香料,兼做药用,有行气活血、消炎消肿、祛风止痛的功效。药学中常用的是胶质没药,据报道有抗炎、杀菌、退热、健胃、通经、止痛、止血、促进伤口愈合等作用,可用于外伤、溃疡、肺结核、贫血、风湿病、蠕虫病、妇科病等。
没药中的化学成分主要有单萜、倍半萜、三萜、甾体、木脂素等,已报道的药理活性包括抗炎、抗微生物、抗肿瘤、保肝、凝血、镇痛、神经保护、降血脂、保护黏膜等,目前临床上主要将没药与其他中药配伍用于治疗软组织损伤、乳痈、血栓性外痔、药物性唇周炎等,目前没有文献报道单独将没药用于慢性阻塞性肺疾病,也没有文献报道没药倍半萜对慢性阻塞性肺疾病的治疗作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种没药倍半萜提取物及其在制备慢性阻塞性肺病药物中的用途,该倍半萜提取物对慢性阻塞性肺疾病,具有显著的疗效。
本发明所采用的技术方案:
本发明提供了没药倍半萜提取物在制备治疗和预防慢性阻塞性肺疾病药物中的用途。
作为本发明可选的一种实施方案,所述没药倍半萜提取物中倍半萜的含量高于50%,并且所述没药倍半萜提取物的给药剂量是每日每公斤体重50~150mg。
作为本发明可选的一种实施方案,所述没药倍半萜提取物中含有重量份25~35%的式Ⅰ化合物和重量份30~40%的式Ⅱ化合物,其中式Ⅰ和式Ⅱ化合物分别具有以下结构式:
本发明所述的式Ⅰ化合物为已知化合物,英文名为2-methoxyfuranoguaia-9-ene-8-one。其结构式、1H-NMR谱、13C-NMR谱及分析检测方法均为本领域技术人员已知的。
本发明所述的式Ⅱ化合物为已知化合物,英文名为2ɑ-methoxy-6-oxogermacra-1(10),7(11)-dien-8,12-olide。其结构式、1H-NMR谱、13C-NMR谱及分析检测方法均为本领域技术人员已知的。
作为本发明可选的一种实施方案,所述没药倍半萜提取物的制备方法包含以下步骤:
S1、粗提:干燥没药树脂粉碎后,用95%的乙醇常温浸提3次,每次2天,合并乙醇提取液浓缩成浸膏,将浸膏置于纯水中,搅拌均匀后,用乙酸乙酯萃取4次,合并乙酸乙酯萃取液;
S2、分离:用硅胶柱分离S1所得的乙酸乙酯萃取液,以氯仿-丙酮(体积比14:1)作为流动相A洗脱,得到洗脱液A,以氯仿-丙酮(体积比20:1)作为流动相B再次洗脱,得到洗脱液B,合并洗脱液A和洗脱液B,得到混合洗脱液;
S3、纯化:利用Sephadex LH-20柱层析纯化S2所得的混合洗脱液,以甲醇-水(体积比95:5)为流动相洗脱,得到洗脱液,洗脱液浓缩后经半制备HPLC以甲醇-水(体积比80:20)为流动性洗脱,分别收集保留时间为18.0~18.5min的馏分和保留时间为22.3~22.7min的馏分,各馏分挥干流动相,得到的固体混合均匀即得药倍半萜提取物。
本发明还提供了一种用于慢性阻塞性肺疾病的药物组合物,所述药物组合物包括治疗有效量的所述没药倍半萜提取物和药学上可接受的载体。
作为本发明可选的一种实施方案,所述药物组合物的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、缓释片剂、缓释胶囊、分散片、肠溶片、肠溶胶囊、微丸、含有微丸或小片的胶囊。
本发明还提供了所述的药物组合物在制备治疗和预防慢性阻塞性肺疾病药物中的用途。
与现有技术相比,本发明的有益技术效果:
本发明发现没药倍半萜提取物,尤其是倍半萜含量高于50%,并且含有重量份25~35%的式Ⅰ化合物和重量份30~40%的式Ⅱ化合物的倍半萜提取物,能够提高对慢性阻塞性肺疾病患者的炎症的抑制作用,改善慢性阻塞性肺疾病患者的肺功能,对慢性阻塞性肺疾病具有很好的预防和治疗作用。
具体实施方式
以下通过对比例和较佳的实施例对本发明的内容作进一步说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下具体实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
除非特别注明,本发明具体实施例方式中述及的原辅料、设备均为已知产品,均可通过购买市售产品获得。
试验例1没药提取物的制备
1.1没药提取物1的制备
称取干燥没药树脂1kg,粉碎后,以10倍重量的水煎煮2次,每次提取2h,合并滤液,浓缩至5000ml,以石油醚萃取4次,得到没药水提液的石油醚萃取部位,萃取液收集后浓缩得到提取物1。经检测,提取物1中不含有倍半萜类成分。
1.2没药提取物2的制备
称取干燥没药树脂1kg,粉碎后,以10倍重量的95%乙醇提取2次,每次48h,合并浸提液,浓缩至无醇味,以乙酸乙酯萃取4次,得到没药醇提液的乙酸乙酯萃取部位,萃取液收集后浓缩得到提取物2。经检测,提取物2中含有24.7%的倍半萜类成分,其中式Ⅰ化合物占8.6%,式Ⅱ化合物占12.3%。
1.3没药提取物3的制备
S1、粗提:称取干燥没药树脂1kg,粉碎后,用95%的乙醇常温浸提3次,每次2天,合并乙醇提取液浓缩成浸膏,将浸膏置于纯水中,搅拌均匀后,用乙酸乙酯萃取4次,合并乙酸乙酯萃取液;
S2、分离:用硅胶柱分离S1所得的乙酸乙酯萃取液,以氯仿-丙酮(体积比14:1)作为流动相A洗脱,得到洗脱液A,以氯仿-丙酮(体积比20:1)作为流动相B再次洗脱,得到洗脱液B,合并洗脱液A和洗脱液B,得到混合洗脱液;
S3、纯化:利用Sephadex LH-20柱层析纯化S2所得的混合洗脱液,以甲醇-水(体积比95:5)为流动相洗脱,得到洗脱液,洗脱液浓缩后经半制备HPLC以甲醇-水(体积比80:20)为流动性洗脱,分别收集保留时间为18.0~18.5min的馏分和保留时间为22.3~22.7min的馏分,各馏分挥干流动相,得到的固体混合均匀即得没药提取物3(没药倍半萜提取物),经检测,提取物3中含有54.8%的倍半萜类成分,其中式Ⅰ化合物占28.1%,式Ⅱ化合物占34.6%。
试验例2没药提取物对COPD模型大鼠炎性因子的影响
1.材料与方法
1.1实验动物
C57BL/6大鼠,50只,SPF级,雄性,8周龄,体重200±10g。
1.2试剂与药品
没药提取物1、没药提取物2、没药提取物3、ELISA检测试剂。
1.3分组与造模
实验设置5组,每组10只
空白组:灌胃生理盐水
模型组:灌胃生理盐水
提取物1组:灌胃没药提取物1,50mg/kg
提取物2组:灌胃没药提取物2,50mg/kg
提取物3组:灌胃没药提取物3,50mg/kg
除空白组外,对其他组所有小鼠称重,置于封闭容器中,留1小孔保证空气的进入,30min吸入5支万宝路香烟,尽量使所有烟雾进入容器,然后置于新鲜无烟环境中30min,每天重复4次上述过程,共重复8周,建立小鼠COPD模型。
期间,空白组以生理盐水1ml/100g灌胃,1次/d;对其他组所有小鼠在烟熏时间外,模型组以生理盐水1ml/100g灌胃,1次/d,提取物组分别用没药提取物1、2和3各50mg/kg灌胃,1次/d,均连续灌胃8周。
1.4炎症指标的检测
大鼠心脏采血法致死后,收集支气管肺泡灌洗液6ml,离心后取上清液,采用ELISA法检测BALF中IL-8、IL-17和TNF-ɑ的含量,观察药物对炎症指标的影响。
1.5数理统计
采用SPSS软件进行统计分析,数据采用平均值±标准差(x±SD)表示。采用单因素方差分析,方差齐时采用LSD法进行组间比较,反之,则采用t检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
2.实验结果
各组大鼠炎症指标测定结果见下表。
表1各组大鼠炎症指标测定结果
注:与空白组比较,*P<0.05;与模型组相比较,#P<0.05。
实验结果表明,含有没药倍半萜的提取物可以改善炎症指标,尤其当倍半萜含量高于50%,并且含有重量份25~35%的式Ⅰ化合物和重量份30~40%的式Ⅱ化合物的倍半萜提取物,呈现出明显的改善作用。表明没药倍半萜可以缓解COPD模型大鼠的炎症状态。
试验例3没药提取物对COPD模型小鼠肺功能的影响
1.材料与方法
1.1实验动物
ICR小鼠,50只,SPF级,雌性,8周龄,体重25±10g。
1.2试剂与药品
没药提取物1、没药提取物2、没药提取物3。
1.3分组与造模
同试验例2。
1.4肺功能检测
采用Buxco的非束缚清醒动物全身体积描记***检测各组小鼠的肺功能,具体检测指标为吸气峰流速(PIF)、呼气峰流量(PEF)及每分钟通气量(MV)。
1.5数理统计
采用SPSS软件进行统计,数据采用平均值±标准差(x±SD)表示。采用单因素方差分析,方差齐时采用LSD法进行组间比较,反之,则采用t检验。P<0.05表示诧异有统计学意义。
3.实验结果
不同没药提取物对小鼠肺功能影响结果见下表。
表2各试验组小鼠肺功能指标测定结果
试验组 | PIF(ml/s) | PEF(ml/s) | MV(ml/s) |
空白组 | 5.36±0.65 | 4.25±0.15 | 45.25±1.47 |
模型组 | 2.24±0.54<sup>*</sup> | 2.24±0.12<sup>*</sup> | 22.64±1.95<sup>*</sup> |
提取物1组 | 2.08±0.49 | 2.28±0.10 | 20.51±1.45 |
提取物2组 | 2.67±0.64 | 2.59±0.08 | 27.85±1.36 |
提取物3组 | 3.89±0.35<sup>#</sup> | 3.04±0.14<sup>#</sup> | 36.78±1.67<sup>#</sup> |
注:与空白组比较,*P<0.05;与模型组相比较,#P<0.05。
实验结果表明,含有没药倍半萜的提取物可以改善COPD小鼠的肺功能数值,尤其当倍半萜含量高于50%,并且含有重量份25~35%的式Ⅰ化合物和重量份30~40%的式Ⅱ化合物的倍半萜提取物,呈现出明显的改善作用。表明没药倍半萜可以提高COPD模型小鼠的肺功能。
实施例1
处方:
制备工艺:称取没药提取物3、淀粉、乳糖、羟丙甲纤维素、CMS-Na混合均匀,加水混合制软材,过20目筛制成湿颗粒,60℃干燥,20目筛整粒,加入硬脂酸镁,混匀,压片,即得。
以上内容仅仅为本发明的较佳实施例,对于本领域的普通技术人员,依照本发明的思路,在具体实施例方式及其应用范围上均会有所改变之处,本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
Claims (7)
1.没药倍半萜提取物在制备治疗和预防慢性阻塞性肺疾病药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述没药倍半萜提取物中倍半萜的含量高于50%,并且所述没药倍半萜提取物的给药剂量是每日每公斤体重50~150mg。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途,其特征在于,所述没药倍半萜提取物的制备方法包含以下步骤:
S1、粗提:干燥没药树脂粉碎后,用95%的乙醇常温浸提3次,每次2天,合并乙醇提取液浓缩成浸膏,将浸膏置于纯水中,搅拌均匀后,用乙酸乙酯萃取4次,合并乙酸乙酯萃取液;
S2、分离:用硅胶柱分离S1所得的乙酸乙酯萃取液,以氯仿-丙酮(体积比14:1)作为流动相A洗脱,得到洗脱液A,以氯仿-丙酮(体积比20:1)作为流动相B再次洗脱,得到洗脱液B,合并洗脱液A和洗脱液B,得到混合洗脱液;
S3、纯化:利用Sephadex LH-20柱层析纯化S2所得的混合洗脱液,以甲醇-水(体积比95:5)为流动相洗脱,得到洗脱液,洗脱液浓缩后经半制备HPLC以甲醇-水(体积比80:20)为流动性洗脱,分别收集保留时间为18.0~18.5min的馏分和保留时间为22.3~22.7min的馏分,各馏分挥干流动相,得到的固体混合均匀即得药倍半萜提取物。
5.一种用于慢性阻塞性肺疾病的药物组合物,所述药物组合物包括治疗有效量的如权利要求3所述的没药倍半萜提取物和药学上可接受的载体。
6.根据权利要求5所述的药物组合物,其特征在于,所述药物组合物的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、缓释片剂、缓释胶囊、分散片、肠溶片、肠溶胶囊、微丸、含有微丸或小片的胶囊。
7.权利要求5-6中任一项所述的药物组合物在制备治疗和预防慢性阻塞性肺疾病药物中的用途。
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