CN111579774A - 一种校准、质量控制用的卡式标准物质及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供的卡式标准物质，包括底板、样品垫、标准物质固化膜、结合垫、基膜和吸水纸，所述标准物质固化膜上喷涂有标准物质。所述卡式标准物质的制备方法，包括以下步骤：标准物质准确定值；用缓冲溶液稀释定值的标准物质，配制成一定浓度的标准物质溶液；将一定浓度的标准物质溶液喷涂在玻璃纤维素膜上，干燥后，获得标准物质固化膜；将样品垫、标准物质固化膜、结合垫、基膜和吸水纸依次搭接在底板上，获得卡式标准物质。本发明的卡式标准物质制备方法同样适用于类似用途的卡式对照品、卡式校准品、卡式质控品及卡式参考品的制备。本发明的卡式标准物质是标准物质的全新形式，可直接用于定性检测、半定量检测、定量检测以及相关仪器的校准。

Description

一种校准、质量控制用的卡式标准物质及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于免疫层析快速检测领域，涉及一种校准、质量控制用的卡式标准物质及其制备方法和应用。

背景技术

免疫层析技术是出现于80年代初期的一种以抗原抗体间的特异性反应为基础，通过标记材料对某种物质进行定性或定量检测的免疫分析方式，由于具有快速简便、灵敏准确、价格低廉、可以实现目标物在线快速检测和监控等优点，以胶体金试纸条为代表的免疫层析技术在食品安全、医学检验、临床诊断、环境监测等领域得到了广泛的应用。

但是大部分免疫层析技术只能对目标物进行定性或半定量检测，在一定程度上限制了其应用范围。近年来，根据纳米标记材料的光学性质，已经有相应的免疫层析信号读取仪配套免疫层析检测卡通过外标法对样品中的目标物进行定量检测。基于该外标法定量检测的原理是：在样品检测前，将目标物的标准物质稀释成已知系列浓度，然后用免疫层析检测卡检测，再通过信号读取仪将检测线的信号值数字化，根据浓度与信号强度的关系绘制曲线，作为外标法定量检测的标准曲线并内嵌入免疫层析信号读取仪中；检测样品时，免疫层析信号读取仪会根据检测线的信号强度通过内嵌的标准曲线转化成浓度值并输出，从而得到样本中目标物的含量。但是这种通过稀释标准物质来绘制定量标准曲线并内嵌在仪器中的方式有以下缺点：

(1)每次建立定量标准曲线都需要重新配制系列浓度的标准物质，由于操作、环境等因素引起的实验误差会导致定量结果不准确；

(2)定量标准曲线内嵌后，灵活性较差，由于检测环境的变化，没有相应的标准物质进行校准，易导致定量检测结果不准确；

(3)由于保存、运输、使用等问题会导致溶液标准物质的生物活性下降，影响检测结果的准确性，所以一般不会配套相应的标准物质给终端用户。

发明内容

本发明针对已有免疫层析等快速检测技术中存在的不足，提供一种新颖的校准、质量控制用的卡式标准物质及其制备方法，该卡式标准物质可应用于基于固相载体的快速检测技术半定量检测标准对照及定量检测时标准曲线绘制和校准。

本发明的第一个方面提供了一种校准、质量控制用的卡式标准物质，包括底板、样品垫、标准物质固化膜、结合垫、基膜和吸水纸，所述标准物质固化膜上喷涂有标准物质。

作为优选，所述标准物质固化膜的制备方法包括以下步骤：

标准物质准确定值；

用缓冲溶液稀释定值的标准物质，配制成一定浓度的标准物质溶液；

将一定浓度的标准物质溶液以1.0-10.0μL/cm的喷速喷涂在玻璃纤维素膜上，干燥后，获得标准物质固化膜。

作为优选，所述干燥为在真空条件下25℃-37℃干燥1-10小时。

作为优选，所述卡式标准物质的样品垫、标准物质固化膜、结合垫、基膜和吸水纸分别搭接在底板上，样品垫压在标准物质固化膜上，标准物质固化膜压在结合垫上，结合垫和吸水纸分别压在基膜的两端。

作为优选，所述基膜上含有检测线和质控线。

作为优选，所述结合垫上喷涂有能特异性结合标准物质的纳米材料标记的抗原或抗体；所述检测线上包被有能特异性结合标准物质的抗原或抗体，所述质控线上包被有质控抗体。

本发明的第二个方面提供了本发明校准、质量控制用的卡式标准物质的制备方法，包括以下步骤：

标准物质准确定值；

用缓冲溶液稀释定值的标准物质，配制成一定浓度的标准物质溶液；

将一定浓度的标准物质溶液以1.0-10.0μL/cm的喷速喷涂在玻璃纤维素膜上，干燥后，获得标准物质固化膜；

将样品垫、标准物质固化膜、结合垫、基膜和吸水纸依次搭接在底板上，切成2-5mm宽的试纸条，即为卡式标准物质。

所述制备方法还可以用于制备校准、质量控制用的对照品、校准品、质控品及参考品。

本发明的第三个方面提供了本发明校准、质量控制用的卡式标准物质的应用，包括用于基于固相载体的快速检测技术中定性检测、半定量检测、定量检测以及相关仪器的校准。

作为优选，所述卡式标准物质应用于定量检测包括以下步骤：

取≥3个系列含量的卡式标准物质，分别在≥3个系列含量的卡式标准物质的样品垫上滴加阴性样本，20-40℃下孵育1-30min后，通过信号读取仪将信号数值化，以标准物质浓度为横坐标，信号强度为纵坐标绘制定量标准曲线；

通过编辑程序将标准曲线内嵌入信号读取仪中，检测样品时，信号读取仪根据检测线信号强度通过内嵌的标准曲线转化成浓度值并输出，从而得到样品中目标物的含量。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

(1)本发明通过将标准物质固定在标准物质固化膜上，从而得到一种卡式标准物质，是标准物质的一种全新形式；

(2)本发明的卡式标准物质可直接用于基于固相载体的快速检测技术中半定量检测时的对照、定量检测时标准曲线的建立和校准、以及相关仪器的校准，保证量值传递的有效性，从而提高免疫层析等快速检测数据的准确性、可比性和溯源性；

(3)本发明的卡式标准物质量值准确稳定，可以配套相应系列含量的卡式标准物质给终端用户，用户即插即用，方便快捷，避免了现有技术中每次建立定量标准曲线都需重新配制系列浓度标准物质的操作。

附图说明

图1为卡式标准物质结构示意图；

图2为实施例1的新型冠状病毒N蛋白人源IgG单克隆抗体卡式标准物质定量曲线；

图3为实施例2的新型冠状病毒S蛋白人源IgG单克隆抗体卡式标准物质定量曲线；

图1中，1、底板，2、样品垫，3、标准物质固化膜，4、结合垫，5、基膜，6、吸水纸，7、检测线，8、质控线。

具体实施方式

在下文中，针对本发明的卡式标准物质及其制备方法和应用将详细地描述实施方式，然而，这些实施方式是示例性的，本发明公开内容不限于此。且本文中所使用的附图，仅仅是为了更好地说明本发明所公开内容，对保护范围并不具有限制作用。

在本发明的一些实施方式中，所述校准、质量控制用的卡式标准物质，如图1所示，包括底板1、样品垫2、标准物质固化膜3、结合垫4、基膜5、吸水纸6、检测线7、质控线8。

优选实施方式中，所述标准物质固化膜上喷涂有标准物质，所述标准物质固化膜制备方法包括以下步骤：

标准物质准确定值；

用缓冲溶液稀释定值的标准物质，配制成一定浓度的标准物质溶液；

将一定浓度的标准物质溶液以1.0-10.0μL/cm的喷速喷涂在玻璃纤维素膜上，干燥后，获得标准物质固化膜。

标准物质对应于待测样本中的目标物，如待测样本中的目标物为新型冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白)人源IgG单克隆抗体，则标准物质为新型冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白)人源IgG单克隆抗体标准物质。标准物质可以自制，也可以商购，在使用前，需要进行定值以确保标准物质含量的准确性。采用两种或两种以上不同原理的方法对标准物质进行定值，以两种或两种以上方法定值结果的平均值作为最终标准物质定值结果。

优选实施方式中，所述干燥为在真空条件下25℃-37℃干燥1-10小时。在真空条件下，水的沸点降低，可以在较低温度下去除水分，保持标准物质活性。真空度可进一步优选为50-98kpa。

本发明的卡式标准物质的样品垫、标准物质固化膜、结合垫、基膜和吸水纸分别搭接在底板上，样品垫压在标准物质固化膜上，标准物质固化膜压在结合垫上，结合垫和吸水纸分别压在基膜的两端，基膜上含有检测线和质控线，检测线相对于质控线更靠近结合垫。

底板、样品垫、结合垫、基膜和吸水纸为本领域通用的部件，底板列举为聚氯乙烯塑料(PVC)、聚乙烯塑料，样品垫、结合垫列举为聚酯纤维素膜、玻璃纤维素膜，基膜列举为硝酸纤维素膜，吸水纸列举为植物纤维滤纸、醋酸纤维素膜，以上仅为列举不做限制作用。

所述结合垫上喷涂有纳米材料标记的抗原或抗体，该抗原或抗体可与标准物质特异性结合，纳米材料可列举为胶体金、石墨烯、量子点等；所述检测线上包被有特异性结合标准物质的抗原或抗体，所述质控线上包被有质控抗体。

结合垫、检测线上的抗原或抗体，以及质控线的质控抗体根据免疫层析法等快速检测技术中的竞争法或双抗原夹心法或双抗体夹心法或间接法或者其它原理进行配置。

举例：如标准物质为一种抗体，结合垫上为与该抗体特异性结合的纳米材料标记的抗原，检测线上为另一种可与该抗体结合的抗原或者为可与该抗体相结合的二抗，质控线上为质控抗体。如标准物质为一种抗原，结合垫上为与该抗原特异性结合的纳米材料标记的抗体，检测线上为同一种抗原，可与抗体竞争性结合，或者检测线上为可与标准物质结合的抗体，该抗体区别于结合垫上的抗体，质控线上为质控抗体。

在本发明的一些实施方式中，所述校准、质量控制用的卡式标准物质的制备方法包括以下步骤：

先制备标准物质固化膜，所述标准物质固化膜的制备方法包括以下步骤：标准物质准确定值；用缓冲溶液稀释定值的标准物质，配制成一定浓度的标准物质溶液；将一定浓度的标准物质溶液以1.0-10.0μL/cm的喷速喷涂在玻璃纤维素膜，干燥后，获得标准物质固化膜；

将样品垫、标准物质固化膜、结合垫、基膜和吸水纸依次搭接在底板上，切成2-5mm宽的试纸条，即为卡式标准物质。

结合垫在搭接之前，先喷涂能特异性结合标准物质的纳米材料标记的抗原或抗体；基膜在搭接之前，先喷涂特异性结合标准物质的抗原或抗体形成检测线，再喷涂质控抗体作为质控线。

制备的卡式标准物质中标准物质的含量根据下式获得：

卡式标准物质中标准物质的含量(ng)＝喷涂的标准物质浓度(ng/μL)*喷速(μL/cm)*试纸条宽度(cm)。

将制得的卡式标准物质装在标记有相应标准物质含量的塑料卡壳中，低温干燥密封保存。

本发明所述卡式标准物质的制备方法还可以用于制备卡式对照品、卡式校准品、卡式质控品及卡式参考品。

即在制备过程中，用对照品、校准品、质控品及参考品替换标准物质，即可获得相应的卡式对照品、校准品、质控品及参考品。

如卡式对照品的制备方法包括以下步骤：

对照品准确定值；

用缓冲溶液稀释定值的对照品，配制成一定浓度的对照品溶液；

将一定浓度的对照品溶液以1.0-10.0μL/cm的喷速喷涂在玻璃纤维素膜，干燥后，获得对照品固化膜；

将样品垫、对照品固化膜、结合垫、基膜和吸水纸依次搭接在底板上，切成2-5mm宽的试纸条，即为卡式对照品。

在本发明的一些实施方式中，所述卡式标准物质的应用包括用于基于固相载体的快速检测技术中定性检测、半定量检测、定量检测以及相关仪器的校准。

所述半定量检测是通过裸眼直接判读，对比卡式标准物质和检测样本的显色强度，然后判读检测结果，结果获得简易快速。

所述定量检测则是利用信号读取仪获取更精准的检测结果，卡式标准物质应用于定量检测具体包括以下步骤：

取≥3个系列含量的卡式标准物质，分别在≥3个系列含量的卡式标准物质的样品垫上滴加阴性样本，20-40℃下孵育1-30min后，通过信号读取仪将检测线信号数值化，以标准物质浓度为横坐标，信号强度为纵坐标绘制定量标准曲线；

通过编辑程序将标准曲线内嵌入信号读取仪中，检测样品时，信号读取仪根据样品检测线的信号强度通过内嵌的标准曲线转化成浓度值并输出，从而得到样品中目标物的含量。

在定量检测中，卡式标准物质用于绘制标准曲线，卡式标准物质的个数应该≥3，且每个卡式标准物质的标准物质含量均不同，形成系列含量。卡式标准物质的个数优选为4-6个。

≥3个系列含量的卡式标准物质的制备包括以下步骤：

标准物质准确定值；

用缓冲溶液稀释定值的标准物质，配制成≥3个系列浓度的标准物质溶液；

将≥3个系列浓度的标准物质溶液分别喷涂在≥3个玻璃纤维素膜上，干燥后得≥3个标准物质固化膜；

将样品垫、标准物质固化膜、结合垫、基膜和吸水垫依次搭接在底板上，剪切后得2-5mm宽的≥3个试纸条，即获得≥3个系列含量的卡式标准物质。

样品垫上滴加的阴性样本为不包含标准物质成分的检测样本。

在下文中，将通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步描述说明。然而，这些实施方式是示例性的，本发明公开内容不限于此。如果无特殊说明，本发明以下具体实施例中所采用的原料均为本领域常用的原料，实施例中所采用的方法，均为本领域的常规方法。

实施例1

1.1、新型冠状病毒核衣壳蛋白(N蛋白)人源IgG单克隆抗体标准物质的定值

根据NCBI GenBank中公布的新型冠状病毒N基因(28274-29533位)的序列为依据，筛选并人源化的针对N蛋白N端第30-213位氨基酸序列的单克隆抗体，由293T细胞表达，过Protein A柱纯化后得到N蛋白人源IgG单抗标准物质原料。采用氨基酸水解同位素稀释质谱法和肽段酶解同位素稀释质谱法对新型冠状病毒N蛋白人源IgG单抗标准物质进行定值，两种方法定值结果的平均值作为最终定值结果2.64±0.25g/kg。

1.2、系列含量的新型冠状病毒N蛋白人源IgG单抗卡式标准物质的制备

1.2.1标准物质固化膜的制备

将新型冠状病毒N蛋白人源IgG单抗标准物质溶液用含蛋白保护剂的缓冲液(0.01M PBS，pH＝7.4,缓冲溶液，含3％质量分数的牛血清白蛋白作为蛋白保护剂)稀释至不同浓度：50、100、200、400μg/mL，然后分别以2μL/cm的喷速喷涂在玻璃纤维素膜上得到一系列含量不同的标准物质固化膜，真空度90kpa下于30℃干燥4小时，密封干燥保存。

1.2.2金标抗原的制备

调节1mL胶体金溶液pH值至9.0，用恒速搅拌器均匀搅拌，同时逐滴加入浓度为50μg/mL的新型冠状病毒N蛋白100μL，反应1小时后，加入封闭剂(10％的牛血清白蛋白溶液)，继续搅拌30min，在4℃条件下离心30min，获得金标抗原沉淀，再加入重悬液，混匀后移至干净烧杯中备用。所述重悬液为：0.01M的PBS缓冲液，缓冲液中含1％牛血清白蛋白、0.2％蔗糖、0.1％吐温-20、0.05％PEG4000、0.05％Triton X-100、0.01％Procline300。

1.2.3结合垫、硝酸纤维素膜检测线和质控线的制备

将金标抗原溶液均匀喷在玻璃纤维素膜上，得结合垫，烘干后密封保存；将稀释好的鼠抗人IgG单抗均匀喷在硝酸纤维素膜上，得检测线；将稀释好的羊抗鼠IgG单抗均匀喷在硝酸纤维素膜上，得质控线，烘干后密封保存。

1.2.4卡式标准物质的组装

依次将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸相互叠合固定在PVC底板上，结合垫和吸水纸分别压在硝酸纤维素膜的两端，标准物质固化膜压在结合垫上，样品垫压在标准物质固化膜上，再切成3.5mm宽的试纸条，装在标记有相应标准物质含量的塑料卡壳中，制成系列含量的新型冠状病毒N蛋白人源IgG单抗卡式标准物质，根据喷速、试纸条宽度换算成标准物质含量分别为35、70、140、280ng。

1.3、新型冠状病毒N蛋白人源IgG单抗卡式标准物质的应用1.3.1标准曲线绘制

分别在上述制备的系列含量的新型冠状病毒N蛋白人源IgG单抗卡式标准物质试纸条的样品垫滴入10μL阴性血清，再加入80μL样品稀释液(0.01M的PBS缓冲液，含1％牛血清白蛋白、0.01％Procline300、0.1％吐温20)，37℃孵育15min后，通过免疫层析信号读取仪将检测线信号数值化，以标准物质浓度为横坐标，信号强度为纵坐标绘制定量标准曲线，结果如图2所示，相关系数R²＝0.9938，线性良好，可以用于血清中新型冠状病毒N蛋白IgG单抗的定量检测。

1.3.2测定临床血清样本

将1.3.1绘制的标准曲线内嵌入免疫层析信号读取仪中；

在胶体金免疫层析检测卡(该检测卡与卡式标准物质的区别仅在于，没有包括标准物质固化膜，其它与卡式标准物质相同)的样品垫中加入10μL临床血清样本，再加入80μL样品稀释液，37℃孵育15min后，用免疫层析信号读取仪获取检测线信号，根据内嵌的定量标准曲线，输出结果如下表所示。

表1临床血清样本中新型冠状病毒N蛋白IgG单抗浓度

样本编号	新型冠状病毒N蛋白IgG单抗浓度(μg/mL)
		1	0
2	17.7
		3	8.1
4	10.3
		5	6.4

实施例2

2.1、新型冠状病毒刺突糖蛋白(S蛋白)人源IgG单克隆抗体标准物质的定值

根据NCBI GenBank中公布的新型冠状病毒S基因(21563-25384位)的序列为依据，筛选并人源化的针对S蛋白S1片段受体结合序列的单克隆抗体，由293T细胞表达，过Protein A柱纯化后得到S蛋白人源IgG单抗标准物质原料。采用氨基酸水解同位素稀释质谱法和肽段酶解同位素稀释质谱法对新型冠状病毒S蛋白人源IgG单抗标准物质进行定值，两种方法定值结果的平均值作为最终定值结果1.77±0.14g/kg。

2.2、系列含量的新型冠状病毒S蛋白人源IgG单抗卡式标准物质的制备

2.1标准物质固化膜的制备

将新型冠状病毒S蛋白人源IgG单抗标准物质溶液用含蛋白保护剂的缓冲液(0.01M PBS，pH＝7.4缓冲溶液，含3％质量分数的牛血清白蛋白作为蛋白保护剂)稀释至不同浓度：100、200、400、800μg/mL，然后分别以2μL/cm的喷速喷涂在玻璃纤维素膜上得到一系列含量不同的标准物质固化膜，真空度90kpa下于32℃干燥4小时，密封干燥保存。

2.2金标抗原的制备

调节1mL胶体金溶液pH值至8.0，用恒速搅拌器均匀搅拌，同时逐滴加入浓度为80μg/mL的新型冠状病毒S蛋白100μL，反应1小时后，加入封闭剂(10％的牛血清白蛋白溶液)，继续搅拌30min，在4℃条件下离心30min，获得金标抗原沉淀，再加入重悬液，混匀后移至干净烧杯中备用。所述重悬液为：0.01M的PBS缓冲液，缓冲液中含1％牛血清白蛋白、0.2％蔗糖、0.1％吐温-20、0.05％PEG4000、0.05％Triton X-100、0.01％Procline300。

2.3结合垫、硝酸纤维素膜检测线和质控线的制备

将金标抗原溶液均匀喷在玻璃纤维素膜上，得结合垫，烘干后密封保存；将稀释好的鼠抗人IgG单抗均匀喷在硝酸纤维素膜上，得检测线；将稀释好的羊抗鼠IgG单抗均匀喷在硝酸纤维素膜上，得质控线，烘干后密封保存。

2.4卡式标准物质的组装

依次将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸相互叠合固定在PVC底板上，结合垫和吸水纸分别压在硝酸纤维素膜的两端，标准物质固化膜压在结合垫上，样品垫压在标准物质固化膜上，再切成3.5mm宽的试纸条，装在标记有相应标准物质含量的塑料卡壳中，制成系列含量的新型冠状病毒S蛋白人源IgG单抗卡式标准物质，根据喷速、试纸条宽度换算成标准物质含量分别为70、140、280、560ng。

3、新型冠状病毒S蛋白人源IgG单抗卡式标准物质的应用

3.1标准曲线绘制

分别在上述制备的系列含量的新型冠状病毒S蛋白人源IgG单抗卡式标准物质试纸条的样品垫滴入10μL阴性血清，再加入80μL样品稀释液(0.01M的PBS缓冲液，含1％牛血清白蛋白、0.01％Procline300、0.1％吐温20)，37℃孵育15min后，通过免疫层析信号读取仪将检测线信号数值化，以标准物质浓度为横坐标，信号强度为纵坐标绘制定量标准曲线，结果如图3所示，相关系数R²＝0.9908，线性良好，可以用于血清中新型冠状病毒S蛋白IgG单抗的定量检测。

3.2测定临床血清样本

将3.1绘制的标准曲线内嵌入免疫层析信号读取仪中；

在胶体金免疫层析检测卡(该检测卡与卡式标准物质的区别仅在于，没有包括标准物质固化膜，其它与卡式标准物质相同)的样品垫中加入10μL临床血清样本，再加入80μL样品稀释液(同上)，37℃孵育15min后，用免疫层析信号读取仪获取检测线信号，根据内嵌的定量标准曲线，输出结果如下表所示。

表2临床血清样本中新型冠状病毒S蛋白IgG单抗浓度

样本编号	新型冠状病毒S蛋白IgG单抗浓度(μg/mL)
		1	0
2	50.1
		3	23.0
4	38.7
		5	11.9

本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。

Claims (10)

1.一种校准、质量控制用的卡式标准物质，其特征在于，所述卡式标准物质包括底板、样品垫、标准物质固化膜、结合垫、基膜和吸水纸，所述标准物质固化膜上喷涂有标准物质。

2.根据权利要求1所述的卡式标准物质，其特征在在于，所述标准物质固化膜的制备方法包括以下步骤：

标准物质准确定值；

用缓冲溶液稀释定值的标准物质，配制成一定浓度的标准物质溶液；

将一定浓度的标准物质溶液以1.0-10.0μL/cm的喷速喷涂在玻璃纤维素膜上，干燥后，获得标准物质固化膜。

3.根据权利要求2所述的卡式标准物质，其特征在在于，所述干燥为在真空条件下25℃-37℃干燥1-10小时。

4.根据权利要求1所述的卡式标准物质，其特征在在于，所述卡式标准物质的样品垫、标准物质固化膜、结合垫、基膜和吸水纸分别搭接在底板上，样品垫压在标准物质固化膜上，标准物质固化膜压在结合垫上，结合垫和吸水纸分别压在基膜的两端。

5.根据权利要求1所述的卡式标准物质，其特征在在于，所述卡式标准物质的基膜上含有检测线和质控线。

6.根据权利要求5所述的卡式标准物质，其特征在在于，所述结合垫上喷涂有能特异性结合标准物质的纳米材料标记的抗原或抗体；所述检测线上包被有能特异性结合标准物质的抗原或抗体，所述质控线上包被有质控抗体。

7.一种权利要求1所述卡式标准物质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

标准物质准确定值；

用缓冲溶液稀释定值的标准物质，配制成一定浓度的标准物质溶液；

将一定浓度的标准物质溶液以1.0-10.0μL/cm的喷速喷涂在玻璃纤维素膜，干燥后，获得标准物质固化膜；

将样品垫、标准物质固化膜、结合垫、基膜和吸水纸依次搭接在底板上，切成2-5mm宽的试纸条，即为卡式标准物质。

8.根据权利要求7所述卡式标准物质的制备方法，其特征在于，所述制备方法还可以用于制备校准、质量控制用的卡式对照品、卡式校准品、卡式质控品及卡式参考品。

9.如权利要求1所述的卡式标准物质的应用，其特征在于，包括用于基于固相载体的快速检测技术中定性检测、半定量检测、定量检测以及相关仪器的校准。

10.根据权利要求9所述的卡式标准物质的应用，其特征在于，所述卡式标准物质应用于定量检测包括以下步骤：

取≥3个系列含量的卡式标准物质，分别在≥3个系列含量的卡式标准物质的样品垫上滴加阴性样本，20-40℃下孵育1-30min后，通过信号读取仪将信号数值化，以标准物质浓度为横坐标，信号强度为纵坐标绘制定量标准曲线；

将标准曲线内嵌入信号读取仪中，检测样品时，信号读取仪根据样品信号强度通过内嵌的标准曲线转化成浓度值并输出，从而得到样品中目标物的含量。

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