CN111544570B - 一种添加抗菌肽的抗病毒制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于兽药制剂技术领域,具体涉及一种添加抗菌肽的抗病毒制剂及其制备方法。所述制剂的有效成分由以下重量配比的组分制成:绞股蓝5‑15份、黄芪5‑15份、刺五加5‑10份、白术5‑10份、茯苓5‑10份、甘草5‑10份、桔梗5‑15份、大黄5‑10份、当归5‑10份、厚朴5‑10份、抗菌肽10‑15份。本发明所用制剂经合理配伍,能有效增强机体免疫力。经验证,服用本发明抗病毒制剂能提高妊娠母猪体内的蓝耳病抗体含量及稳定性,从而提高蓝耳病治愈率;本发明对鸡传染性法氏囊病也有显著治疗效果。
Description
技术领域
本发明属于兽药制剂技术领域,具体涉及一种添加抗菌肽的抗病毒制剂及其制备方法。
背景技术
在畜牧行业,病毒性疾病的防治一直困扰着养殖户,人用抗病毒药物的禁用曾一度使病毒性疾病爆发。中药在畜牧行业抗病毒治疗方面作用巨大,但是中药的使用有其局限,比如拌料量大,起效慢等,因此研制开发适用于畜牧行业,且抗病毒效果显著的中药产品是目前尚未解决的技术问题。
抗菌肽,是一类广泛存在于生物体内的小分子多肽,是天然免疫的主要组成成分。抗菌肽具有光谱抗菌活性,在体内除了能以直接杀死病原菌的方式起作用外,更多的时候是作为免疫效应分子来启动、调节宿主免疫防御体系,如充当单核细胞和T淋巴细胞的趋化因子,使单核细胞和淋巴细胞快速聚集在炎症反应部位;促进化学因子的表达和T辅助淋巴细胞的增殖反应;抑制细菌产物(如脂多糖、脂壁酸)诱导产生对宿主有害的细胞因子,避免内毒素血症的发生;促使巨噬细胞及激活的淋巴细胞的凋亡,具有潜在消灭感染细胞的功能等。
目前有一些关于抗菌肽应用于畜牧行业的研究报道,如专利CN106359978B公开了一种替代抗生素降低断奶仔猪腹泻的仔猪营养预混剂,包括复合益生菌、天蚕素抗菌肽、植物精油、复合酶制剂、复合酸化剂、有机铁、有机铜、纳米氧化锌、壳寡糖、微生物D3、微生物C、谷氨酰胺、抗氧化剂,以粉碎玉米为载体;该预混剂适合仔猪生长发育及生理特点,应用后能替代抗生素降低断奶仔猪腹泻率,且成本低,复合猪场的生产实际。但是该专利产品仅针对仔猪,主要作用是止泻增加营养,对于其他更严重的畜牧业常见疾病尤其是传染性疾病缺乏治疗效果。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明的目的是提供一种添加抗菌肽的抗病毒制剂,通过将中药制剂与抗菌肽组合使用,开发出一种抗病毒疗效显著,且不影响食品安全的兽用抗病毒制剂;基于一个总的发明构思,本发明还包括上述抗病毒制剂的制备方法。
为了实现上述技术目的,本发明采用以下技术方案:
一种添加抗菌肽的抗病毒制剂,所述制剂的有效成分由以下重量配比的组分制成:
绞股蓝5-15份、黄芪5-15份、刺五加5-10份、白术5-10份、茯苓5-10份、甘草5-10份、桔梗5-15份、大黄5-10份、当归5-10份、厚朴5-10份、抗菌肽10-15份。
基于一个总的发明构思,本发明还包括上述添加抗菌肽的抗病毒制剂的制备方法:按照配方量称取除抗菌肽以外的10味中药原料,用乙醇提取;过滤并浓缩滤液,然后加入二氧化硅以及配方量的抗菌肽,混匀,干燥后粉碎即得。
优选的,上述制备过程中所用乙醇的浓度为50%-70%。
优选的,所述乙醇提取分两次提取,第一次提取1~5h;第二次提取1~3h;过滤,合并两次滤液进行浓缩。
优选的,滤液浓缩时的温度为50-80℃;滤液浓缩后相对密度为1.1-1.3。
本发明所述添加抗菌肽的抗病毒制剂中,各中药的主要功能为:绞股蓝,归肺、脾、肾经;能益气健脾,化痰止咳,清热解毒。黄芪,补气升阳、托毒排脓;主增强机体免疫功能、提高免疫功能。刺五加,益气健脾,补肾安神。白术,味苦,甘,性温;归脾、胃经;能健脾益气,燥湿利水,止汗。茯苓,性味甘淡平,入心、肺、脾经;具有渗湿利水,健脾和胃,宁心安神的功效。甘草,主治清热解毒、祛痰止咳。桔梗,宣肺,利咽,祛痰,排脓;用于咳嗽痰多,胸闷不畅,咽痛,音哑,肺痈吐脓,疮疡脓成不溃。大黄,泻热通肠、凉血解毒、活瘀通经。当归,补血,活血,调经止痛;兼具润燥滑肠。厚朴,归脾经、胃经、大肠经;主要功能包括行气消积,燥湿除满,降逆平喘。
本发明所用制剂经合理配伍,能有效增强机体免疫力。经验证,服用本发明抗病毒制剂能提高妊娠母猪体内的蓝耳病抗体含量及稳定性,从而提高蓝耳病治愈率;本发明对鸡传染性法氏囊病也有显著治疗效果。经过对服药后仔猪T淋巴细胞水平的分析显示,服用本发明所得抗病毒制剂能提高猪的T淋巴细胞水平,并能使T淋巴细胞含量较长时间维持在较高范围内,因而提高了仔猪机体抵抗疾病的能力。
本发明的有益效果为:
1)所得抗病毒制剂对禽畜养殖中的多种病毒性传染病并具有较好的治疗效果;
2)采用科学的中药提取工艺,充分提取产品中的有效成分,所得制剂易于给药并利于动物体吸收;
3)制剂中不含抗生素和其他不易代谢的中间产物,不会对下游食品安全带来隐患,是一种绿色、高效的兽用抗病毒药物制剂。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。
本发明所用抗菌肽为肽菌素727C(山东宝丽来生物工程有限公司);其他药材及制剂均为普通市售,或本领域技术人员通过公开途径可以获得。
实施例
称取绞股蓝、黄芪、刺五加、白术、茯苓、甘草、桔梗、大黄、当归、厚朴10味中药3000g,用50%乙醇室温条件下分两次提取:加入50%乙醇提取2小时,固液分离;在滤渣中再次加入50%乙醇,提取1小时;过滤;合并两次滤液;将滤液于60℃减压浓缩至相对密度为1.2;然后在浓缩液中加入一定量的抗菌肽和二氧化硅,二氧化硅的添加量以将最终所得制剂质量补足至1000g为计;混匀;于80℃干燥、粉碎,即得。
不同实施例中所用中药和抗菌肽的用量配比如表1所示;
表1 不同实施方式中各组分用量配比(单位:份)
上述实施例4的中药组分配方与实施例1-3一致,但是不添加抗菌肽。针对实施例1-4所得抗病毒制剂,发明人进行以下药剂学分析。
试验例1
为了考察本发明所述抗病毒制剂用于兽体后的效果,发明人首先测试了上述药剂对猪蓝耳病的治疗效果。蓝耳病是一种高度接触性传染病,感染后表现为猪群的生产性能下降,生长缓慢,母猪群的繁殖性能下降,猪群免疫功能下降,易继发感染其他细菌性和病毒性疾病,其中以妊娠母猪和1月龄以内的仔猪最易感。
1)药物试剂
试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组:实施例1、2、3所制备的抗病毒制剂;
对照Ⅰ组:实施例4所制备的药物制剂;
对照Ⅱ组:清瘟败毒散(根据药典制备)。
2)试验方法
根据品种相同、体重相当的原则,随机选取100头妊娠母猪,试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组以及对照Ⅰ组、Ⅱ组各20头。试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和对照Ⅰ组的用法用量为:按照每1000g药剂兑水1000kg配成水溶液,随妊娠母猪饮水用,连用7天。对照Ⅱ组药物的用法用量为:混饲,每头猪每天100g,连用7天。
3)试验结果与分析
服用不同药剂对妊娠母猪蓝耳病的治疗效果如表2所示;
表2 服用不同药剂对妊娠母猪蓝耳病的治疗效果对比
从表2可以看出,服用试验组药剂对妊娠母猪蓝耳病的治疗有效率分别为85%、85%和90%;治愈率分别为65%、65%和70%,均高于对照组药剂;其中,以实施例3中所得药剂的治疗效果最优。
为了进一步揭示上述药剂对蓝耳病有效的具体原因,利用ELISA抗体检测方法,分别检测试验组和对照组母猪的体内蓝耳病抗体水平;具体检测结果见表3;
表3 不同服药条件下妊娠母猪蓝耳病抗体水平对比
注:同列数据肩标相同字母表示差异不显著(P> 0.05)。
上表中,S/P值≥0.4表示抗体阳性,S/P值<0.4表示抗体阴性。由上表可知,以上五组试验条件的S/P值均>0.4,说明上述五组妊娠母猪体内均产生蓝耳病毒抗体。
另外,表中数据S/P值0-2代表抗体水平稳定,S/P值0.7-1.8代表抗体水平良好,S/P值>2.0代表抗体水平不稳定。可以看出,试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组抗体水平稳定的比例分别为89.3%、90.8%和89.9%,高于对照Ⅰ组51.3%和对照Ⅱ组42.9%,这说明服用实施例1-3制备的药剂能显著提高妊娠母猪蓝耳病抗体水平稳定性;而试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组抗体水平不稳定的比例分别为10.7%、9.2%和10.1%,低于对照Ⅰ组的48.7%和对照Ⅱ组的57.1%,这说明服用实施例1-3能有效降低妊娠母猪蓝耳病抗体水平的不稳定性。
上述数据结果表明,采用本发明中药配伍所得制剂(实施例4)与传统抗病毒制剂清瘟败毒散相比,能在一定程度上提高妊娠母猪的蓝耳病抗体水平,从而提高蓝耳病的治愈率,但是提高程度较小;而添加抗菌肽后(实施例1-3)能提高妊娠母猪的蓝耳病抗体水平,并能增强抗体的稳定性,最终显著提高对蓝耳病的治愈率。
试验例2
发明人接着测试了上述药剂对鸡传染性法氏囊病的治疗效果。鸡传染性法氏囊病(IBD)又称甘波罗病,是传染性法氏囊病毒引起的一种急性、高度传染性疾病。由于该病发病突然、病程短、死亡率高,且可引起鸡体免疫抑制,目前是养鸡业的主要传染病之一。
1)药物试剂
采用与试验例1相同的测试药剂。
2)试验方法
根据品种相同、体重相当的原则,随机选取500只鸡(25日龄),试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组以及对照Ⅰ组、Ⅱ组各100羽。试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和对照Ⅰ组的用法用量为:按照每1000g药剂兑水1000kg配成水溶液,随鸡饮水用,服用7天。对照Ⅱ组药物的用法用量为:混饲,每只鸡2g,服用7天。
3)试验结果与分析
服用不同药剂对鸡传染性法氏囊病的治疗效果如表4所示;
表4 服用不同药剂对鸡传染性法氏囊病的治疗效果对比
从表4可以看出,试验1-3组药剂服用后对鸡传染性法氏囊病的治疗效果明显优于对照组;其中试验1组的法氏囊病治愈率71%,死亡率5%,总有效率达到89%,总体治疗效果最佳。对照Ⅰ组中不添加抗菌肽的中药制剂对鸡传染性法氏囊病的治愈率为45%,死亡率11%,总有效率66%,治疗效果略高于对照Ⅱ组。
试验例3
为了进一步揭示本发明药剂对上述疾病产生作用的原因,发明人以猪为对象测试了服药后机体T淋巴细胞含量的变化。
随机选取40头断奶仔猪,品种、日龄、体重均保持一致,试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组各10头;试验组药剂用法用量为:按照每1000g药剂兑水1000kg配成水溶液,随仔猪饮水用。以未喂服药剂的断奶仔猪为空白对照组,仔猪数量10头;
分别于服用后1、4、25、40、50、60日早上喂料前采血,制作血液涂片。用酸性α-醋酸酯酶(ANAE)染色法染色,置光学显微镜下镜检ANAE+T淋巴细胞。胞质内出现红棕色颗粒者记为tANAE+T细胞,反之为无;以 T细胞数量占视野内总细胞的比值百分比为其含量。不同服药条件下仔猪T淋巴细胞镜检结果见表5;
表5不同服药条件下仔猪T淋巴细胞测定结果对比(%)
从表5数据可以看出,试验Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组仔猪T细胞含量均高于对照组。且当服药第40~60天时,仔猪T细胞含量不但没有降低反而出现一定程度的升高。这说明,服用实施例1-3组抗病毒制剂能提高猪的T淋巴细胞水平,并能使机体免疫水平较长时间维持在高水平,从而提高仔猪机体抵抗疾病的能力。另外,从60天空白组数据可以看出,仔猪体内T细胞水平受外界环境或饲养条件影响会出现较大波动,而服药后试验组T细胞水平相对稳定,从而使机体免疫水平处于相对稳定的状态,提高仔猪抵抗力。
Claims (5)
1.一种添加抗菌肽的抗病毒制剂,其特征在于,所述制剂的有效成分由以下重量配比的组分制成:
绞股蓝5-15份、黄芪5-15份、刺五加5-10份、白术5-10份、茯苓5-10份、甘草5-10份、桔梗5-15份、大黄5-10份、当归5-10份、厚朴5-10份、抗菌肽10-15份,所用抗菌肽为肽菌素727C。
2.权利要求1所述添加抗菌肽的抗病毒制剂的制备方法,其特征在于:按照配方量称取除抗菌肽以外的10味中药原料,用乙醇提取;过滤并浓缩滤液,然后加入二氧化硅以及配方量的抗菌肽,混匀,干燥后粉碎即得。
3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于:所用乙醇的浓度为50%-70%。
4.如权利要求3所述的制备方法,其特征在于:所述乙醇提取分两次进行,第一次提取1~5h;第二次提取1~3h;过滤,合并两次滤液进行浓缩。
5.如权利要求2-4任一项所述的制备方法,其特征在于:滤液浓缩时的温度为50-80℃;滤液浓缩至相对密度为1.1-1.3。
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