CN111544487A - 以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在制备蔗糖酶抑制剂中的应用 - Google Patents

以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在制备蔗糖酶抑制剂中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在制备蔗糖酶抑制剂中的应用，属于生物技术领域。本发明公开的以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物对蔗糖酶有很好的抑制作用，而蔗糖酶在减肥降糖、预防龋齿中都有应用。

Description

以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在制备蔗糖酶抑制剂中的 应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，更具体的说是涉及以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在制备蔗糖酶抑制剂中的应用。
背景技术
蔗糖酶抑制剂可以作为肥胖和糖尿病防治的药物、保健品或者食品：蔗糖的使用由来已久，人们尤其是少年儿童对蔗糖甜味的特有味感依赖性是难以撼动的。蔗糖酶抑制剂在胃肠道中可以抑制胃肠道内蔗糖酶的活性，使食物中蔗糖的消化吸收减慢，从而抑制血糖浓度的升高，可以有效地配合糖尿病人的饮食治疗。对于肥胖患者，可减少糖向脂肪转化，延缓肠道的排空，增加脂肪的消耗以减少体重。蔗糖酶抑制剂通过对蔗糖酶的抑制作用而发挥减肥、降糖效应，并经胃肠道排出体外，因此不必进入血液循环***，不作用于大脑中枢，减肥降糖的同时不抑制食欲，使用剂量很高时也无副作用，符合世界卫生组织的减肥原则。蔗糖酶抑制剂可以预防龋齿：唾液中的蔗糖酶并非来源于人体正常口腔组织，而是由口腔中的产酸菌群分泌的，如变形链球菌等。蔗糖酶能够将蔗糖水解为葡萄糖和果糖，为牙菌斑中糖的分解代谢提供底物，以利于糖代谢的顺利进行。已证实蔗糖是重要的致龋性碳水化合物，在牙菌斑中，蔗糖酶活性代表牙菌斑中细菌对蔗糖的利用速度，牙菌斑合成蔗糖酶的能力反映牙菌斑致龋力的大小。因此，抑制变形链球菌蔗糖酶的活性，减少细菌的营养供应和糖代谢的发生，对于减低致龋菌的致龋能力有重要意义。
荔枝为无患子科常绿植物的果实，主产于我国广东、广西、福建等地，目前我国荔枝年产量约160万吨，占世界荔枝总产量80％以上。在荔枝的深加工过程中产生了约20％鲜果质量的果皮废弃物，荔枝果皮作为大宗农产品废弃物至今未能较好地得到有效开发和利用。
因此，提供以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在制备蔗糖酶抑制剂中的应用是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在制备蔗糖酶抑制剂中的应用。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在制备蔗糖酶抑制剂中的应用。
进一步，所述以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物的制备方法如下：
(1)将新鲜荔枝果皮和8倍体积浓度80％乙醇水溶液在室温条件下提取2次，每次浸泡7d，过滤，合并滤液；
(2)将上述滤液在3500rpm条件下离心10min，收集上清液，得到药液；
(3)将药液过XDA-7大孔树脂进行柱层析纯化，用体积分数为60％乙醇水溶液洗脱，得到提取物洗脱液；所述柱层析纯化的条件为：上样液质量浓度为3.5mg/mL，药液的pH值为4.5，上样速率为4BV/h；洗脱液的流速为6BV/h；
(4)将所述提取物洗脱液在真空度95kPa，加热浴温度40℃，冷却水温度15℃的条件下进行减压浓缩，将得到的回流液进行喷雾干燥，进料速率51mL/min，进风温度160℃，排风温度60℃，料液浓度22％，雾化器转速21000r/min，得到荔枝皮提取物。
进一步，所述以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在制备减肥、降血糖、预防龋齿药物中的应用。
以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物的具体应用方法为：取以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物，加入或不加入辅料，按常规方法制备成各种制剂；具体可以制成胶囊剂、片剂、颗粒剂或水溶剂等现有常规剂型。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在制备蔗糖酶抑制剂中的应用，荔枝果皮中含有大量的多酚类化合物，多酚类物质具有抗氧化、抗肿瘤、预防心血管疾病、延缓衰老等多种生物活性。本发明研究证明以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物对蔗糖酶有很好的抑制作用，而蔗糖酶在减肥降糖、预防龋齿中都有应用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明荔枝皮提取物各极性部分含量比例图；
图2附图为本发明不同浓度的以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物对猪小肠蔗糖酶的抑制曲线；
图3附图为本发明不同浓度的以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物对变形链球菌蔗糖酶的抑制曲线。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
荔枝皮提取物的制备方法，具体步骤如下：
将新鲜荔枝果皮和8倍体积浓度80％乙醇水溶液在室温条件下提取2次，每次浸泡7d，过滤，合并滤液；将上述滤液在3500rpm条件下离心10min，收集上清液，得到药液；将药液过XDA-7大孔树脂进行柱层析纯化，用体积分数为60％乙醇水溶液洗脱，得到提取物洗脱液；所述柱层析纯化的条件为：上样液质量浓度为3.5mg/mL，药液的pH值为4.5，上样速率为4BV/h；洗脱液的流速为6BV/h；将所述提取物洗脱液在真空度95kPa，加热浴温度40℃，冷却水温度15℃的条件下进行减压浓缩，将得到的回流液进行喷雾干燥，进料速率51mL/min，进风温度160℃，排风温度60℃，料液浓度22％，雾化器转速21000r/min，得到荔枝皮提取物。
采用Folin-酚比色法进行测定，测得多酚含量为77.8％。
实施例2
对实施例1获得的荔枝皮提取物进行成分分离研究，具体操作如下：
取实施例1获得的荔枝皮提取物用正己烷、乙酸乙酯/无水***(1:1)分步萃取，得到荔枝皮提取物浸提液的正己烷相、乙酸乙酯/无水***相和水相，分别测定此三相中总酚的含量，结果表明水相的总酚含量最高，乙酸乙脂/无水***相的总酚含量次之，正己烷相最小(图1)。水相中含有的酚类物质为多酚的多聚体，而正己烷相以及乙酸乙酯/无水***相则为多酚的低聚体和单体。因此，荔枝皮提取物主要以多酚的多聚体为主，其次是低聚体和单体，其中多聚体多酚约占79％。
实施例3以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物对猪小肠蔗糖酶的抑制作用(一)配制试验试剂：
(1)pH＝7.0的0.01mol/L的PBS溶液的配制：
加0.2mol/L磷酸氢二钠61.0ml，加0.2mol/L磷酸二氢钠39.0ml，然后加0.8％氯化钠溶液至1L，既可以得到pH＝7.0的0.01mol/L PBS缓冲液。
0.2mol/L磷酸氢二钠：取Na2HPO4·12H2O 35.81g加500ml蒸馏水，充分溶解后保存；
0.2mol/L磷酸二氢钠：取NaH2PO4·2H2O 15.6g加500ml蒸馏水，充分溶解后保存；
0.8％氯化钠的配制：取NaCl4g加500ml蒸馏水，充分溶解后保存。
(2)猪小肠蔗糖酶的制备：使用预冷的pH＝7.0的0.01mol/L PBS缓冲液充分清洗猪小肠，将内容物保存到离心管中，然后将猪小肠破开，使用洁净的载玻片刮取小肠内表面，将刮取物与上述内容物混合，于4℃、4000r/min离心30min，上清液作为酶原液存于-20℃备用。
(3)0.1mol/L的蔗糖溶液的配制：取34.2克蔗糖溶于100mlpH＝7.0的0.01mol/LPBS缓冲液，使其配制成0.1mol/L的蔗糖溶液，充分溶解后保存。
(4)猪小肠蔗糖酶酶活的测定：分别量取稀释10倍的酶原液0.2mL，0.1mol/L蔗糖溶液0.2mL及pH＝7.0的0.01mol/L PBS缓冲液0.4ml分别在37℃条件下恒温10min，然后混匀加入同一试管中，在恒温条件下反应30min，然后用南京建成生产的葡萄糖试剂盒检测葡萄糖浓度，按照试剂盒的方法计算猪小肠蔗糖酶的活性。
(5)以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物溶液的配置：将以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物溶于pH＝7.0的0.01mol/L PBS缓冲液中，配成各种浓度的以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物溶液。
(二)以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物对猪小肠蔗糖酶抑制活性的测定
空白组：分别量取稀释10倍的猪小肠蔗糖酶原液0.2mL，0.1mol/L蔗糖溶液0.2mL及pH＝7.0的0.01mol/L PBS缓冲液0.6ml分别在37℃条件下恒温10min，然后混匀加入同一试管中，在恒温条件下反应30min，然后用南京建成生产的葡萄糖试剂盒检测葡萄糖浓度。
测定组：分别量取稀释10倍的猪小肠蔗糖酶原液0.2mL，0.1mol/L蔗糖溶液0.2mL，0.2ml不同浓度的以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物溶液及pH＝7.0的0.01mol/L PBS缓冲液0.4ml分别在37℃条件下恒温10min，然后混匀加入同一试管中，在恒温条件下反应30min，然后用南京建成生产的葡萄糖试剂盒检测葡萄糖浓度。
对照组：分别量取0.1mol/L蔗糖溶液0.2mL，0.2ml不同浓度的以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物溶液及pH＝7.0的0.01mol/L PBS缓冲液0.6ml分别在37℃条件下恒温10min，然后混匀加入同一试管中，在恒温条件下反应30min，然后用南京建成生产的葡萄糖试剂盒检测葡萄糖浓度。
计算不同浓度的以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物对猪小肠蔗糖酶的抑制率，结果见图2。图2结果显示，当提取物的浓度不断升高时对猪小肠蔗糖酶的抑制效果也在不断提高，以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在浓度为1000ng/ml时对猪小肠蔗糖酶的抑制率达到75.1％，由此可以看出以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物对猪小肠蔗糖酶有很好的抑制作用。经SPSS17.0计算软件计算得出，以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物对猪小肠蔗糖酶的半数抑制浓度(IC50)为421.6ng/ml。
实施例4以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物对变形链球菌蔗糖酶的抑制作用
(一)配制试验试剂：
(1)菌液的制备：将复苏的变形链球菌菌种接种于TSB液体培养基中，37℃下培养24h，以3000r/min离心15min，收集细菌，无菌生理盐水洗菌2次，用无菌生理盐水调成合适的浓度，备用。
(2)以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物溶液的配置：将以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物溶于含2％蔗糖的TSB液体培养基中，配成各种浓度的以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物溶液。
(二)以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物对变形链球菌蔗糖酶抑制活性的测定
空白组：将1ml变形链球菌菌液加入到10ml含2％蔗糖的TSB液体培养基中，37℃下培养24h，以3000r/min离心15min，取上清液，然后用南京建成生产的葡萄糖试剂盒检测葡萄糖浓度。
测定组：将1ml变形链球菌菌液加入到10ml各种浓度的以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物溶液中，37℃下培养24h，以3000r/min离心15min，取上清液，然后用南京建成生产的葡萄糖试剂盒检测葡萄糖浓度。
计算不同浓度的以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物对变形链球菌蔗糖酶的抑制率，结果见图3。图3结果显示，当提取物的浓度不断升高时对变形链球菌蔗糖酶的抑制效果也在不断提高，以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在浓度为120μg/ml时对猪小肠蔗糖酶的抑制率达到72.2％，由此可以看出以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物对变形链球菌蔗糖酶有很好的抑制作用。经SPSS17.0计算软件计算得出，以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物对变形链球菌蔗糖酶的半数抑制浓度(IC50)为52.1μg/ml。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (3)

1.以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在制备蔗糖酶抑制剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在制备蔗糖酶抑制剂中的应用，其特征在于，所述以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物的制备方法如下：
(1)将新鲜荔枝果皮和8倍体积浓度80％乙醇水溶液在室温条件下提取2次，每次浸泡7d，过滤，合并滤液；
(2)将上述滤液在3500rpm条件下离心10min，收集上清液，得到药液；
(3)将药液过XDA-7大孔树脂进行柱层析纯化，用体积分数为60％乙醇水溶液洗脱，得到提取物洗脱液；所述柱层析纯化的条件为：上样液质量浓度为3.5mg/mL，药液的pH值为4.5，上样速率为4BV/h；洗脱液的流速为6BV/h；
(4)将所述提取物洗脱液在真空度95kPa，加热浴温度40℃，冷却水温度15℃的条件下进行减压浓缩，将得到的回流液进行喷雾干燥，进料速率51mL/min，进风温度160℃，排风温度60℃，料液浓度22％，雾化器转速21000r/min，得到荔枝皮提取物。
3.根据权利要求1所述的以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在制备蔗糖酶抑制剂中的应用，其特征在于，所述以多聚体多酚为主的荔枝皮提取物在制备减肥、降血糖、预防龋齿药物中的应用。
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