CN111499628B

CN111499628B - 一种2-呋喃甲酰胺类化合物及其制备与应用

Info

Publication number: CN111499628B
Application number: CN202010228950.5A
Authority: CN
Inventors: 王鸿; 郑伟豪; 鲍晓泽; 陈建伟; 叶欣艺; 李亚胜
Original assignee: Zhejiang University of Technology ZJUT
Current assignee: Zhejiang University of Technology ZJUT
Priority date: 2020-03-27
Filing date: 2020-03-27
Publication date: 2021-07-27
Anticipated expiration: 2040-03-27
Also published as: CN111499628A

Abstract

本发明公开了一种2‑呋喃甲酰胺类化合物及其制备方法与和应用，所述2‑呋喃甲酰胺类化合物是在缚酸剂的存在下，由式II化合物与9H‑吡啶[3,4‑b]吲哚进行反应而得。该制备方法简单便捷，绿色环保，制备的化合物结构新颖。所述2‑呋喃甲酰胺类化合物在不影响铜绿假单胞菌正常生长的前提下能降低铜绿假单胞菌蛋白水解酶或绿脓菌素的产量，在降低铜绿假单胞菌毒力因子形成的方面有潜在的应用前景。

Description

一种2-呋喃甲酰胺类化合物及其制备与应用

(一)技术领域

本发明涉及一种2-呋喃甲酰胺类化合物及其制备与在抑制铜绿假单胞菌蛋白水解酶或绿脓菌素产量中的应用，属于精细有机化学及生物医药技术领域。

(二)背景技术

抗生素是20世纪最伟大的发现之一，但是抗生素的过度使用，使得病原菌的耐药率逐年上升，给人类的生存带来了新的威胁。因此，开发新型抗感染药物迫在眉睫。传统抗生素的抗菌策略为杀菌或抑菌，这种强大的生存压力催生了细菌的耐药性(Eur.J.Med.Chem.2019,161,154-178)。因此，研究者们将目光转向了“抗毒力药物”的研究，这类药物通过阻断病原菌的毒力，使其无法破坏宿主免疫***，从而更易于机体清除病原菌(Nat Rev Microbiol 2008,6,17-27)。阻断毒力通常不会抑制细菌的生长，不易造成选择压力和耐药性。现已证明多种病原菌的毒力由群体感应(QS)***参与调控，因此细菌QS***成为开发抗感染药物的新突破口。

铜绿假单胞菌是常见的致病菌之一(Clin.Infect.Dis.2003,37,745-751)，铜绿假单胞菌中包含有4种群体感应(QS)***，即las***、rhl***、PQS***和IQS***，它们之间相互关联、相互调控，导致细菌在宿主体内的感染。QS使铜绿假单胞菌群体适时地、协同地合成和释放绿脓菌素、鼠李糖脂、蛋白酶类等大量胞外毒力因子，从而形成致病力(Prorein Cell 2015,6,26-41)。研究显示，阻断铜绿假单胞菌的QS***后，其毒力因子的分泌和生物被膜的形成能力会显著下降，感染宿主的毒力和侵袭力也会显著降低(NatProtoc 2010,5,282-293)。现已公认的由QS***直接调控的铜绿假单胞菌的毒力因子包括绿脓菌素、弹性蛋白酶、蛋白水解酶、鼠李糖脂等，铜绿假单胞菌生物被膜的形成和运动行为能力也由QS***参与调控(Protein Cell,2015,6,26-41)。绿脓菌素是铜绿假单胞菌感染中分泌的一种重要的吩嗪类毒性产物，它能对宿主细胞的电子传递、细胞呼吸、能量代谢、基因表达以及宿主自身的免疫机制起到一定的干扰作用，从而达到致病的效果(TrendsMicrobiol 2013,21,73-81)。

(三)发明内容

本发明的目的是提供一种2-呋喃甲酰胺类化合物及其制备方法与其在抑制铜绿假单胞菌蛋白水解酶或绿脓菌素产量中的应用，降低了铜绿假单胞菌致病毒力因子的表达水平，在与抗生素联合用药方面具有潜在应用前景。

本发明采用的技术方案：

第一方面，本发明提供一种式(I)所示2-呋喃甲酰胺类化合物，结构式如下：

式(I)中，R为一个或多个(优选一个)，所述R为氢、卤素、硝基、C1～C4的烷基或C1～C4烷氧基。

进一步，优选所述R为4-甲氧基、2-氯基、3-氯基、4-氯基、4-溴基、2-氟基、3-氟基、4-氟基、2，4-二氟基、2，6-二氟基、2-硝基、3-硝基或4-硝基。

进一步，优选式(I)所示2-呋喃甲酰胺类化合物为下列之一：

第二方面，本发明提供一种式(I)所示2-呋喃甲酰胺类化合物的制备方法，所述方法的反应式如下：

(1)在稀释剂存在下，式(II)所示化合物与氯化亚砜(SOCl₂)在40-45℃反应完全后，除去反应溶剂，获得式(III)所示化合物；所述稀释剂为惰性有机溶剂，选自于甲苯、二氯甲烷、氯仿、***、四氢呋喃、或乙酸乙酯中的一种，最优选为二氯甲烷；

(2)在稀释剂和缚酸剂存在下，式(III)所示化合物与9H-吡啶[3,4-b]吲哚于25-30℃下反应完全后，用旋转蒸发仪除去稀释剂，用体积浓度50％乙酸乙酯水溶液进行萃取，水相再用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合并乙酸乙酯相用无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体蒸出，最后以体积比3:1的石油醚/乙酸乙酯为洗脱剂进行硅胶柱层析，收集Rf值为0.2～0.3的组分，得到式(I)所示2-呋喃甲酰胺类化合物；所述稀释剂同步骤(1)；所述缚酸剂选自于三乙胺、吡啶、N-甲基吗啉中的一种，最优选为三乙胺；

式(II)中，R为一个或多个，所述R为氢、卤素、硝基、C1～C4的烷基或C1～C4烷氧基；优选所述R为4-甲氧基、2-氯基、3-氯基、4-氯基、4-溴基、2-氟基、3-氟基、4-氟基、2，4-二氟基、2，6-二氟基、2-硝基、3-硝基或4-硝基；

式(I)和式(III)中R同式(II)。

进一步，步骤(1)式(II)所示化合物与稀释剂和SOCl₂的物质的量之比为1:60～120:10～15，更优选为1:100:13。

进一步，步骤(2)式(II)所示化合物与9H-吡啶[3,4-b]吲哚的物质的量之为1:1～1.5，更优选为1:1；所述稀释剂体积用量以9H-吡啶[3,4-b]吲哚的物质的量计为1-10mL/mmol，优选8mL/mmol，所述缚酸剂体积用量以9H-吡啶[3,4-b]吲哚的物质的量计为0.01-0.5mL/mmol，优选0.1mL/mmol。

进一步，步骤(1)具体方法为：将式(II)所示化合物用稀释剂a溶解，加入氯化亚砜，在45℃下回流反应1.5-2h，反应结束后，反应液减压浓缩去除溶剂(优选用旋转蒸发仪除去稀释剂以及剩余的氯化亚砜)，加入稀释剂b溶解后再次减压浓缩去除溶剂，氮气吹扫去除氯化亚砜，得到褐色的油状或固体物，即为式(III)所示化合物；所述式(II)所示化合物与稀释剂a物质的量之比为1:100；所述稀释剂b能够溶解即可，优选所述式(II)所示化合物与稀释剂b物质的量之比为1：156；所述稀释剂a和稀释剂b均为稀释剂，为了表述不同步骤用量不同而命名，字母本身没有含义。

进一步，步骤(2)具体方法为：向步骤(1)式(III)所示化合物中加入稀释剂c溶解，缓慢滴加用含稀释剂d和缚酸剂溶解的9H-吡啶[3,4-b]吲哚，滴加完毕，在25℃下反应完全后，减压浓缩去除溶剂(优选用旋转蒸发仪除去稀释剂)，用体积浓度50％乙酸乙酯水溶液进行萃取，水相再用乙酸乙酯萃取(优选萃取3次)，合并乙酸乙酯相用无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体蒸出，最后以体积比3:1的石油醚/乙酸乙酯为洗脱剂进行硅胶柱层析，收集Rf值为0.2～0.3的组分，获得式(I)所示2-呋喃甲酰胺类化合物；所述9H-吡啶[3,4-b]吲哚与式(II)所示化合物物质的量之比为1:1；所述稀释剂d和缚酸剂体积用量以9H-吡啶[3,4-b]吲哚物质的量计分别为2mL/mmol和0.1mL/mmol，所述稀释剂c与稀释剂d体积比为3.2:1；所述稀释剂c和稀释剂d均为稀释剂，为了表述不同步骤用量不同而命名，字母本身没有含义。

进一步，所述式(II)所示化合物按如下方法制备：

将式(Ⅳ)所示化合物与质量浓度为15％的盐酸水溶液于冰水混合物中搅拌至式(Ⅳ)化合物溶解，加入质量浓度30％的亚硝酸钠水溶液，在0～5℃下反应15～30min，随后加入2-呋喃甲酸的丙酮溶液以及氯化铜二水合物水溶液，在0～5℃下反应6h后，再转移至室温(25℃)下反应16h后，抽滤，滤饼用水洗涤后再用质量浓度10％的碳酸氢钠水溶液溶解至中性或弱碱性(优选pH为7～8)，随后加入2M盐酸至固体不再析出，过滤，滤饼干燥，得到式(II)所示化合物；所述盐酸水溶液体积用量以式(Ⅳ)所示化合物物质的量计为600mL/mol；所述亚硝酸钠水溶液体积用量以式(Ⅳ)所示化合物物质的量计为500mL/mol；所述式(Ⅳ)所示化合物与2-呋喃甲酸物质的量之比为1:1；所述丙酮体积用量以2-呋喃甲酸物质的量计为600mL/mol；所述氯化铜二水合物水溶液浓度为3g/20mL；所述式(Ⅳ)所示化合物中R同式(II)。

第三方面，本发明还提供一种式(I)所示2-呋喃甲酰胺类化合物在抑制铜绿假单胞菌蛋白水解酶或绿脓脓菌素产量中的应用，所述铜绿假单胞菌为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PAO1。

与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：首次将9H-吡啶[3,4-b]吲哚引入2-呋喃甲酰胺结构中，并且此类2-呋喃甲酰胺化合物的合成操作简便，反应条件温和。更重要的是，此类化合物具有抑制铜绿假单胞菌蛋白水解酶和绿脓菌素产量的功能，为解决铜绿假单胞菌的耐药性提供潜在选择。

(四)附图说明

图1为2-呋喃甲酰胺化合物对铜绿假单胞菌生长的影响。

图2为2-呋喃甲酰胺化合物对铜绿假单胞菌蛋白水解酶产量的抑制率。

图3为2-呋喃甲酰胺化合物对铜绿假单胞菌绿脓菌素产量的抑制率。

图4为化合物I-3的核磁共振氢谱图。

图5为化合物I-4的核磁共振氢谱图。

图6为化合物I-8的核磁共振氢谱图。

图7为化合物I-12的核磁共振氢谱图。

(五)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的解释说明，但具体实施例并不对本发明作任何限定。除非特别说明，实施例中所涉及的试剂、方法均为本领域常用的试剂和方法。

实施例1：(5-(4-氟苯基)呋喃-2-基)(9H-吡啶并[3,4-b]吲哚-9-基)甲酮(I-4)的制备

(1)化合物II-4的制备

在250mL的单口瓶中加入5.6g对氟苯胺(Ⅳ-4，0.05mol)以及30mL的质量浓度15％的盐酸水溶液，置于冰水混合物中充分搅拌直至对氟苯胺完全溶解。随后滴加25mL的质量浓度30％的亚硝酸钠水溶液，将反应体系温度控制在0～5℃之间。滴加完毕后，搅拌15分钟。往反应体系中加入5.6g(0.05mol)2-呋喃甲酸的30ml丙酮溶液和3g氯化铜二水合物的20mL水溶液，0～5℃下反应6小时，随后再在室温(25℃)下反应16小时。反应结束后，抽滤分离出悬浮的固体，滤饼用水洗涤后再用质量浓度10％的碳酸氢钠水溶液溶解至pH为7～8，随后加入2M的盐酸酸化直至无固体析出，最终过滤，干燥后得到棕黄色固体化合物II-4(5.34g)，质量产率51.6％。产物无需进一步纯化，可直接用于下一步反应。

(2)化合物(I-4)的制备

1)在100mL的两口烧瓶里加入206.17mg的5-(4-氟基苯基)呋喃-2-羧酸(II-4，1mmol)和6.4mL(100mmol)的二氯甲烷，其中一口用橡皮塞塞住，另一口上接球形冷凝管，球形冷凝管最上头接上一个氮气球。先在室温下磁力搅拌15min，随后打开冷凝水，用注射器加入1mL(13mmol)的氯化亚砜，在45℃下回流反应2小时后撤去冷凝管，用旋转蒸发仪除去反应溶剂，加入10mL(0.156mol)二氯甲烷再次旋蒸除去溶剂，随后用氮气进行氮吹，吹尽氯化亚砜气体后得到褐色油状物III-4，化合物III-4对水敏感，无需进一步分离纯化；

2)加入6.4mL(100mmol)的二氯甲烷溶解步骤1)全部化合物III-4。将168.2mg(1mmol)的9H-吡啶[3,4-b]吲哚用2ml的二氯甲烷和0.1mL的三乙胺溶解，随后将其缓缓滴加至化合物III-4中，室温下(25℃)搅拌，TLC监测反应进程(展开剂：石油醚/乙酸乙酯体积比为1/1)。反应结束后用旋转蒸发仪除去反应溶剂，加入10mL水和10mL乙酸乙酯进行萃取，水相再用乙酸乙酯(10mL)萃取3次，合并乙酸乙酯相，用饱和食盐水洗涤，再用无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体蒸出。最后硅胶柱层析(洗脱剂为体积比3:1的石油醚/乙酸乙酯)，收集Rf值为0.3的组分。最终得到160mg的黄色固体化合物I-4，质量产率44.9％。

同样条件下，分别将步骤(1)中IV-4替换为IV-1～IV-13；步骤(2)中II-4替换为II-1～II-13分别制备得到产物I-1～I-13，详情见表1。

表1化合物编号

表2式I所示化合物的理化常数及元素分析数据

表3式I所示化合物的核磁共振氢谱数据

实施例2式(I)所示2-呋喃甲酰胺类化合物对铜绿假单胞菌生长的影响

1、实验菌株：铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PAO1

2、实验方法：在无菌超净台内用无菌接种环挑取少量铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)PAO1菌体至新鲜LB固体培养基平板内，放置于生化培养箱内37℃培养24小时。培养结束后从平板内挑取单个菌落接种至新鲜LB液体培养基内，37℃，200rpm振荡培养至对数生长期，培养完毕后吸取1mL的菌液至100mL的新鲜LB液体培养基中，混匀。先往96孔板内加入浓度为20mM的式(I)化合物的甲醇溶液2μL，待溶剂甲醇全部挥发完毕后，加入200μL的混匀菌液，确保式(I)化合物的终浓度为200μM。添加完毕后将孔板放置于生化培养箱内37℃培养24小时。24小时后测试其在600nm下的吸光度(Angew.Chem.Int.Ed.2012,51,5226-5229)。生长抑制率按照如下公式计算：

表4式I所示化合物对铜绿假单胞菌生长的影响

从表4可以看出除了化合物I-13对铜绿假单胞菌的生长抑制率为-30.63％，其余的化合物对铜绿假单胞菌的生长影响均处于±20％之内，属于正常影响范围，可认为对铜绿假单胞菌的生长无太多影响。

实施例3式(I)所示2-呋喃甲酰胺类化合物对抑制铜绿假单胞菌蛋白水解酶产量的活性测试

1、实验菌株：铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PAO1

2、实验方法：在无菌超净台内用无菌接种环挑取少量铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)PAO1菌体至新鲜LB固体培养基平板内，放置于生化培养箱内37℃培养24小时。培养结束后从平板内挑取单个菌落接种至新鲜LB液体培养基内，37℃，200rpm振荡培养至对数生长期，培养完毕后吸取1mL的菌液至100mL的新鲜LB液体培养基中并混匀。

将混匀后的菌液分装至25ml的三角锥形瓶内，依次加入浓度为20mM的式(I)化合物的DMSO溶液30μL和2970μL的混匀菌液，使化合物终浓度为200μM，每个化合物设置三组平行，阴性对照组加入30μL的DMSO和2970μL的混匀菌液。将三角锥形瓶于37℃，200rpm振荡培养至对数生长期后，取1mL菌液于离心管内，10000rpm离心10分钟。吸取150μL无菌上清液，加入0.5mL用pH为7.5、0.05M的Tris-Hcl缓冲液配置的质量浓度为0.3％的偶氮酪蛋白溶液，放置于生化培养箱内37℃反应15分钟。随后加入体积浓度为10％的三氯乙酸水溶液(0.5mL)终止反应，最后10000rpm离心5分钟，吸取200μL上清液至96孔板内，测试其在400nm下的吸光度(RSC Adv,2017,7,5497-5513.)。抑制率按照如下公式计算：

表5式I所示化合物对铜绿假单胞菌蛋白水解酶产量的抑制率

从表5可以看出化合物I-3、I-4和I-8对铜绿假单胞菌蛋白水解酶的产量具有较好的抑制效果，抑制率均超过了45％。其中化合物I-4和I-8的抑制率达到了47.04％和46.59％，具有较好的抑制活性。

实施例4式(I)所示2-呋喃甲酰胺类化合物对抑制铜绿假单胞菌绿脓菌素产量的活性测试

1、实验菌株：铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PAO1

将混匀后的菌液分装至25ml的三角锥形瓶内，依次加入浓度为20mM的式(I)化合物的DMSO溶液30μL和2970μL的混匀菌液，使化合物终浓度为200μM，每个化合物设置三组平行，阴性对照组加入30μL的DMSO和2970μL的混匀菌液。将三角锥形瓶于37℃，200rpm振荡培养至对数生长期后，取1mL菌液于离心管内，10000rpm离心10分钟，最后吸取200μL上清液至96孔板内，测试其在695nm下的吸光度(PNAS,2013,110,17981-17986.)。抑制率按照如下公式计算：

表6式I所示化合物对绿脓菌素产量的抑制率

从表6可以看出化合物I-1、I-4、I-5、I-6、I-7、I-12、I-13对绿脓菌素的产量具有较好的抑制效果，抑制率均超过了50％，其中化合物I-4、I-5、I-6、I-12、I-13抑制率超过了55％，化合物I-4甚至达到了60％。

本发明公开一种2-呋喃甲酰胺类化合物，其结构新颖，制备方法简单，且具有良好的生物活性，可以用作铜绿假单胞菌蛋白水解酶以及绿脓菌素产量的抑制剂，拓展了呋喃酰胺类结构在群体感应抑制方面的应用前景。

Claims

1.一种式(I)所示2-呋喃甲酰胺类化合物：

式(I)中，R为一个或多个，所述R为氢、卤素、硝基、C1～C4的烷基或C1～C4烷氧基。

2.如权利要求1所述2-呋喃甲酰胺类化合物，其特征在于所述R为4-甲氧基、2-氯基、3-氯基、4-氯基、4-溴基、2-氟基、3-氟基、4-氟基、2，4-二氟基、2，6-二氟基、2-硝基、3-硝基或4-硝基。

3.如权利要求1所述2-呋喃甲酰胺类化合物，其特征在于式(I)所示2-呋喃甲酰胺类化合物为下列之一：

4.一种权利要求1所述式(I)所示2-呋喃甲酰胺类化合物的制备方法，其特征在于所述方法为：

(1)在稀释剂存在下，式(II)所示化合物与氯化亚砜在40-45℃反应完全后，除去反应溶剂，获得式(III)所示化合物；所述稀释剂选自于甲苯、二氯甲烷、氯仿、***、四氢呋喃、或乙酸乙酯中的一种；

(2)在稀释剂和缚酸剂存在下，式(III)所示化合物与9H-吡啶[3,4-b]吲哚于25-30℃下反应完全后，用旋转蒸发仪除去稀释剂，用体积浓度50％乙酸乙酯水溶液进行萃取，水相再用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相用无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体蒸出，最后以体积比3:1的石油醚/乙酸乙酯为洗脱剂进行硅胶柱层析，收集Rf值为0.2～0.3的组分，得到式(I)所示2-呋喃甲酰胺类化合物；所述稀释剂同步骤(1)；所述缚酸剂选自于碳酸钾、三乙胺、吡啶、N-甲基吗啉中的一种；

式(II)中，R为一个或多个，所述R为氢、卤素、硝基、C1～C4的烷基或C1～C4烷氧基；

式(I)和式(III)中R同式(II)。

5.如权利要求4所述2-呋喃甲酰胺类化合物的制备方法，其特征在于步骤(1)式(II)所示化合物与稀释剂和氯化亚砜的物质的量之比为：1:60～120:10～15。

6.如权利要求4所述2-呋喃甲酰胺类化合物的制备方法，其特征在于步骤(2)式(II)所示化合物与9H-吡啶[3,4-b]吲哚的物质的量之为1:1～1.5；所述稀释剂体积用量以9H-吡啶[3,4-b]吲哚的物质的量计为1-10mL/mmol；所述缚酸剂体积用量以9H-吡啶[3,4-b]吲哚的物质的量计为0.01-0.5mL/mmol。

7.如权利要求4所述2-呋喃甲酰胺类化合物的制备方法，其特征在于步骤(1)方法为：将式(II)所示化合物用稀释剂溶解，加入氯化亚砜，在45℃下回流反应1.5-2h，反应结束后，反应液减压浓缩去除溶剂，加入稀释剂溶解后再次减压浓缩去除溶剂，氮气吹扫去除氯化亚砜，得到褐色的油状或固体物，即为式(III)所示化合物；所述式(II)所示化合物与溶解式(II)所示化合物的稀释剂物质的量之比为1:100。

8.如权利要求4所述2-呋喃甲酰胺类化合物的制备方法，其特征在于步骤(2)方法为：向步骤(1)式(III)所示化合物中加入稀释剂溶解，缓慢滴加用含稀释剂和缚酸剂溶解的9H-吡啶[3,4-b]吲哚，滴加完毕，在25℃下反应完全后，减压浓缩去除溶剂，用体积浓度50％乙酸乙酯水溶液进行萃取，水相用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相用无水硫酸钠干燥，浓缩至无液体蒸出，最后以体积比3:1的石油醚/乙酸乙酯为洗脱剂进行硅胶柱层析，收集Rf值为0.2～0.3的组分，获得式(I)所示2-呋喃甲酰胺类化合物；所述式(II)所示化合物与9H-吡啶[3,4-b]吲哚物质的量之比为1:1；所述溶解9H-吡啶[3,4-b]吲哚的稀释剂和缚酸剂体积用量以9H-吡啶[3,4-b]吲哚物质的量计分别为2mL/mmol和0.1mL/mmol，所述溶解式(III)所示化合物的稀释剂与溶解9H-吡啶[3,4-b]吲哚的稀释剂体积比为3.2:1。

9.如权利要求4所述2-呋喃甲酰胺类化合物的制备方法，其特征在于所述式(II)所示化合物按如下方法制备：

将式(Ⅳ)所示化合物与质量浓度为15％的盐酸水溶液于冰水混合物中搅拌至式(Ⅳ)化合物溶解，加入质量浓度30％的亚硝酸钠水溶液，在0～5℃下反应15～30min，随后加入2-呋喃甲酸的丙酮溶液以及氯化铜二水合物水溶液，在0～5℃下反应6h后，再转移至室温下反应16h后，抽滤，滤饼用水洗涤后再用质量浓度10％的碳酸氢钠水溶液溶解至pH为中性或弱碱性，随后加入2M盐酸至固体不再析出，过滤，滤饼干燥，得到式(II)所示化合物；所述盐酸水溶液体积用量以式(Ⅳ)所示化合物物质的量计为600mL/mol；所述亚硝酸钠水溶液体积用量以式(Ⅳ)所示化合物物质的量计为500mL/mol；所述式(Ⅳ)所示化合物与2-呋喃甲酸物质的量之比为1:1；所述丙酮体积用量以2-呋喃甲酸物质的量计为600mL/mol；所述氯化铜二水合物水溶液浓度为3g/20mL；所述式(Ⅳ)所示化合物中R同式(II)。

10.一种权利要求1所述式(I)所示2-呋喃甲酰胺类化合物在制备抑制铜绿假单胞菌蛋白水解酶或绿脓菌素产量制剂中的应用。