CN111494466A - 一种含***提取物的外用组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含***提取物的外用组合物,它是以***提取物为活性成分,加上化妆品中可接受的辅料制备而成的制剂;所述***提取物是质量比为5~7:2~4:1的***叶、***花和***杆,加乙醇水溶液提取制成的提取物。本发明外用组合物不但能抑制透明质酸酶、清除自由基,还能提高皮肤屏障相关蛋白(AQP‑3,FLG,Caspase‑14)表达量,对治疗皮肤敏感有显著效果,同时不受常规治疗敏感皮肤的仪器和专业皮肤科医生的限制,使用方便,具有较好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于中医药领域,具体涉及一种含工业***提取物的外用组合物及其应用。
背景技术
敏感皮肤是一种局部反应性增高的皮肤状态,患者特定部位皮肤对轻微的常规外界刺激敏感,对常用护肤品及清洁用品不能耐受,或在长期使用这些产品后皮肤的耐受性降低,有不同程度瘙痒、烧灼、紧绷、干燥、刺痛、肿胀等症状,严重者可出现红斑、脱屑、丘疹、脓疱等。而导致敏感皮肤的三大主要诱因则是过分护肤,糖皮质激素滥用,遗传易感基因。目前对于敏感皮肤的发病机制研究尚无完全定论,大多数皮肤科医生和科学研究者认为敏感肌主要是由于皮肤屏障受损,皮肤的含水量降低,角质层结构不完整,皮下血管扩张或炎症因素等。
工业***(Cannabis sative L.)具有重要的农用及医用价值,随着***提取物的各个功效成分(***酚类、***酮、***酚萜、***酚酸、不饱和脂肪酸等)被更深入的研究,***提取物在医药,日用,纺织,化妆品中的应用受到了越来越广泛的关注。工业***中除含有的微量致幻成分四氢***酚(THC)受到严格的监控,其它百余种***素的医用价值被不断挖掘。***提取物中非精神活性***二酚(CBD)具有抗炎、抗菌、镇痛舒缓、控油、抗疟、保护胃黏膜、调节皮脂腺分泌、抑制乙酰胆碱酯酶等生理活性,具有重要的临床应用前景。
现有技术中已有将***提取物应用于皮肤护理的报道,如专利CN 107802530 A公开了一种含***提取物的组合物,该组合物通过控制***提取物中***酚类物质含量,使其具备了保湿抗炎抗衰老的功效,但就其效果实验,该组合物仅能用于普通皮肤的日常护理,对角质层较薄的敏感皮肤无法起到保养护理的作用,同时,***酚中含有如四氢***酚这种对中枢神经***作用强的活性成份,用量不当会让使用者产生精神依赖,其潜在的危害也是无法忽视的。
目前还没有通过控制能阻碍四氢***酚作用的***二酚含量的工业***提取物,也没有能用于敏感皮肤护理的工业***提取物,更没有能用于敏感皮肤护理对人体安全性更高的相关护肤品的研究报道。
发明内容
为解决上述问题,本发明提供了一种含工业***提取物的外用组合物,它是以工业***提取物为活性成分,加上化妆品中可接受的辅料制备而成的制剂;所述工业***提取物是质量比为5~7:2~4:1的工业***叶、工业***花和工业***杆,加乙醇溶液提取制成的提取物。
进一步地,所述工业***提取物是质量比为6:3:1的工业***叶、工业***花和工业***杆,加乙醇溶液提取制成的提取物。
进一步地,所述乙醇溶液的浓度为50~100%,v/v。
进一步地,所述制剂是水剂、乳剂、喷雾、霜、膏、膜剂或凝胶剂。
更进一步地,所述制剂是由下述重量百分比的原料组成:
工业***提取物3~10%,甘油2~4%,丁二醇5~7%,防腐剂0.05~0.15%,其余为去离子水;
或:
工业***提取物3~10%,聚乙烯醇PVA 13-16%,甘油2.8-4.0%,吐温 20 0.1-0.3%,EDTA-2Na 0.04-0.06%,透明质酸0.5-1.5%,防腐剂0.05-0.15%,其余为去离子水;
或:
工业***提取物3~10%,甘油3.0-4.0%,1,2-戊二醇1-3%,甘油硬脂酸酯0.4-0.6%,烷基糖苷SS 0.6-0.8%,烷基糖苷SSE-20 0.6-0.8%,角鲨烷1-3%,β-葡聚糖0.5-1.5%,透明质酸0.4-0.6%,防腐剂0.05-0.15%,其余为去离子水。
更进一步地,所述制剂是由下述重量百分比的原料组成:
工业***提取物5%,甘油3%,丁二醇6%,防腐剂0.1%,其余为去离子水;
或:
工业***提取物5%,聚乙烯醇PVA 15%,甘油3.5%,吐温20 0.2%,EDTA-2Na0.05%,透明质酸1%,防腐剂0.1%,其余为去离子水;
或:
工业***提取物5%,甘油3.5%,1,2-戊二醇2%,甘油硬脂酸酯
0.5%,烷基糖苷SS 0.7%,烷基糖苷SSE-20 0.7%,角鲨烷2%,β- 葡聚糖1%,透明质酸0.5%,防腐剂0.1%,其余为去离子水。
本发明还提供了一种前述外用组合物的制备方法,它包括如下步骤:
1)按配比称取原辅料;
2)甘油,丁二醇和去离子水混匀作为A相;工业***提取物作为B相;防腐剂作为C相;
3)将A相和B相混匀,再加入C相混匀,即得;
或:
1)按配比称取原辅料;
2)聚乙烯醇PVA,甘油,吐温20,EDTA-2Na和去离子水混匀作为A 相;工业***提取物和透明质酸作为B相;防腐剂作为C相;
3)将A相和B相混匀,再加入C相混匀,投入面膜纸浸泡5-10min,即得;
或:
1)按配比称取原辅料;
2)1,2-戊二醇,甘油和去离子水加热混匀作为A相;甘油硬脂酸酯,烷基糖苷SS,烷基糖苷SSE-20和角鲨烷加热混匀作为B相;工业***提取物,β-葡聚糖和透明质酸混匀作为C相;防腐剂作为D相;
3)将A相和B相50-60℃加热搅拌至乳液状,降温至35-40度,再依次加入C相、D相混匀,即得。
本发明还提供了一种前述工业***提取物的制备方法,它包括如下步骤:
取工业***的叶,杆和花,加10倍量(v/w,ml/g),50~100%乙醇水溶液超声提取1.5-2.0h,共计2次,60℃减压浓缩至相对密度1.03,即得。
本发明最后还提供了一种前述外用组合物在制备治疗皮肤敏感的药物中的用途。
进一步地,所述皮肤敏感是皮肤刺痛、红斑、干燥、脱屑、疼痛、紧绷感、瘙痒和/或发烫。
进一步地,所述药物是抑制透明质酸酶、清除自由基和/或提高皮肤屏障相关蛋白表达量的药物。
更进一步地,所述皮肤屏障相关蛋白为AQP-3、FLG和/或Caspase-14 蛋白。
本发明外用组合物不但能抑制透明质酸酶、清除自由基,起到抗炎抗老化的作用,还能提高皮肤屏障相关蛋白(AQP-3,FLG,Caspase-14)表达量,对治疗皮肤敏感有显著效果,同时不受常规治疗敏感皮肤的仪器和专业皮肤科医生的限制,使用方便,安全性高,具有广阔的应用前景。
根据本发明的上述内容,按照本发明相关领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1工业***提取物对透明质酸酶的抑制率
图2工业***提取物对DPPH自由基清除能力
图3工业***提取物对皮肤屏障相关蛋白表达的影响
图4本发明使用1个月后,患者的Visia图像及自评表统计
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品,通过购买市售产品获得。
实施例1本发明工业***提取物的制备
取600g工业***叶,300g工业***杆和100g工业***花,混合,加10 L 50%乙醇水溶液,超声提取1.5h,共提取2次,合并提取液,60℃浓缩减压至-0.10MPa干燥,至相对密度1.03,即得。
实施例2本发明工业***提取物的制备
取300g工业***叶,150g工业***杆和50g工业***花,混合,加5L 70%乙醇水溶液,超声提取2.0h,共提取2次,合并提取液,60℃浓缩减压至-0.10 MPa干燥,至相对密度1.03,即得。
实施例3本发明工业***提取物的制备
取1200g工业***叶,600g工业***杆和200g工业***花,混合,加 20L无水乙醇,超声提取1.8h,共提取2次,合并提取液,60℃浓缩减压至-0.10MPa干燥,至相对密度1.03,即得。
实施例4含工业***提取物的面膜
配方:
制备方法:分别称取A,B相,各自混合均匀后,再将A,B两相混合,最后加入C相,随后用面膜纸浸泡5-10min,即得。
使用方法:取面膜直接贴于面部,停留15-20min。
实施例5含工业***提取物的喷雾
配方:
制备方法:分别称取A,B相,各自混合均匀后,再将A,B两相混合,最后加入C相,混匀,即得。
使用方法:直接喷洒于面部或其他敏感皮肤部位。
实施例6含工业***提取物的乳液
配方:
制备方法:分别称取A,B相,各自加热混合均匀后,再将A,B两相混合,加热搅拌,直至成乳液状,待温度下降至35-40℃,加入C相混匀,最后加入D相混匀,即得。
使用方法:在皮肤清洁后,直接涂抹于敏感皮肤处。
以下通过实验例的方式进一步说明本发明的有益效果:
试验例1工业***提取物成分分析和功效验证
(1)工业***提取物成分分析
取低温避光保存按实施例1制备工业***提取物,用于成分分析。
以获取***二酚(CBD)为主要活性成分的分离条件进行高效液相色谱 (HPLC)分离鉴定提取物。以***二酚为标准对照物,分离条件为色谱柱: Inertsoil ODS-3(150mm×4.6mm×5μm),流动相(甲醇:水,80:20,v/v), 流速1.0mL/min,紫外检测器波长220nm,柱温:35℃。结果见表1。
表1.***二酚含量测定结果
物质名称 | 待测目标物 | 含量(mg/g) |
工业***提取物 | ***二酚(CBD) | 1.3~2.9 |
(2)工业***提取物的细胞安全性实验
任何物质的应用首先一定是安全的,在安全的前提下,才能讨论其功效性,本实验研究了工业***提取物对人皮肤角质形成细胞的安全性。
具体操作如下:在无菌操作台中将培养皿中生长至80%左右的皮肤角质形成细胞HaCaT回收至离心管中,通过细胞计数仪计数,按照2.0~ 8.0×104cells/well接种至24孔细胞培养板中,培养24h。将工业***提取物(实施例1制备)配制成相应浓度,0.22μm滤膜过滤除菌。加入目标浓度待测样品至HaCaT细胞内,37℃培养箱中继续培养24h。培养板内加入适量CCK-8 液体后继续培养4h,测定450nm吸光度,计算细胞在各浓度作用下的存活率,具体结果见表2。
表2.工业***提取物作用HaCaT细胞存活率
结果表明:工业***提取物在浓度不高于5%质量浓度条件下,对HaCaT 细胞是安全的。
(3)工业***提取物对透明质酸抑制率
透明质酸(hyaluronic acid,HA)是细胞外基质(ECM)中含量最多、所占比例最大的成分,具有很强的吸水能力和粘附性,可调控细胞因子的分泌,影响细胞的生长增殖、迁移和分化,因而在维持皮肤水分和弹性、创伤愈合和血管形成等过程中起主要的作用。透明质酸酶是透明质酸的特异性裂解酶,抑制透明质酸酶的活性即可保证透明质酸的含量和正常功能。透明质酸酶抑制实验是最典型的抗敏活性评价体外方法,以透明质酸酶抑制率为指标评价物质的抗过敏活性,透明质酸酶抑制率越大则抗过敏活性越强。
用醋酸缓冲溶液现配透明质酸酶(500U/mL),透明质酸钠(0.5mg/mL),同时配制乙酰丙酮溶液50mL,P-DAB显色剂(0.8g对二甲氨基苯甲醛溶于 15mL浓盐酸和15mL无水乙醇),CaCl2(2.5M),NaOH(5M)。采用 Elson-Morgan改良法测定工业***提取物(实施例1制备)与透明质酸酶作用,简述如下:0.5mL样品/蒸馏水加0.5mL 500U/mL的透明质酸酶,37℃保温20min,加入0.1mL CaCl2(2.5M),再次37℃保温20min,随后样品和蒸馏水试管各一根加入0.5mL透明质酸钠(0.5mg/mL),另一根加入0.5 mL pH=5.4缓冲溶剂,37℃保温40min,随后室温放置10min。加入0.5mL 乙酰丙酮溶液,0.1mL NaOH(5M)溶液和0.5mL蒸馏水,沸水浴15min,冷却5min,冰水浴10min,室温5min。最后加入1mL P-DAB显色剂,加入无水乙醇,室温放置30min,显色,于530nm处测定吸光度值,测定出工业***提取物对透明质酸酶的抑制率,结果如图1所示。
从图1可见:工业***提取物对于透明质酸酶的抑制,在质量浓度为 0.001%-1%范围内,作用随浓度增大而递增,当浓度增至5%时,对透明质酸酶抑制率达到最大72%,随后保持稳定。
(4)工业***提取物的自由基清除率
机体正常代谢产生的自由基对生命活动是有益的,然而过量的自由基则可能导致细胞膜,细胞器,细胞核等出现不同程度的损伤,导致细胞衰老,甚至死亡,进而损伤皮肤屏障,从而诱发皮肤敏感。抑制自由基活性可以有效缓解外界刺激后产生的过量自由基作用下细胞结构功能的退化,从而维护包括皮肤在内各种器官的正常屏障结构。采用DPPH清除实验,简述如下:移取2.0mL 60μM的DPPH乙醇溶液于10mL具塞试管中,加入3mL 5mg/mL 的样液,室温下封闭反应30min,在517nm下测定吸光值,计算清除率。以水代替DPPH测定吸光值,以水分别代DPPH和替样品测定吸光值,测定工业***提取物(实施例1制备)的DPPH自由基清除能力。具体结果如图2所示。
从图2可见:在质量浓度为0.01%-2.5%范围内,工业***提取物对于 DPPH自由基的清除率逐渐升高,且具有线性相关性。当浓度逐渐高于2.5%后,其对DPPH自由基的抑制率开始降低。
(5)工业***提取物对皮肤屏障相关结构蛋白表达的影响
皮肤作为机体和环境之间的屏障,对外界环境因素非常敏感,是直接暴露在外界环境中的最大器官。AQP-3参与细胞的物质吸收与分泌,有助于弹性保持和损伤修复;丝聚蛋白(FLG)是构成真核细胞骨架细胞细丝间的基质蛋白,参与角质细胞终末分化时细胞间交叉联结膜的形成,其分解产生的天然保湿因子对于皮肤水合作用和皮肤屏障非常重要;Caspase-14参与角质细胞终末分化,颗粒层中的pro-FLG被Caspase-14迅速磷酸化成为FLG,形成完整角质层。采用蛋白质印迹(Western blot,WB)方法对AQP-3,Caspase-14、FLG蛋白表达量测定,实验方法如下:收集细胞后,用冰裂解液重悬浮细胞沉淀,用BCA试剂盒测定蛋白浓度;将细胞溶解产物进行凝胶电泳,并且将免疫印记蛋白转印到PVDF膜上,加入AQP-3、Caspase-14、 FLG抗体于4℃孵育过夜,洗涤后放入二抗工作液中,室温、避光缓慢摇动 80-120min,洗膜,曝光后用凝胶成像***拍照,采用图象分析软件测定显影条带光密度值并分析灰度值,以GAPDH作为内参分析蛋白表达。测定工业***提取物(实施例1制备)对AQP-3、Caspase-14、FLG蛋白表达量作用结果见图3。
从图3可见:工业***提取物有助于皮肤屏障相关的AQP-3、Caspase-14、 FLG蛋白表达量的提高,恢复外界刺激(诸如紫外光照,空气污染等)对皮肤屏障造成的损伤,增强皮肤屏障的锁水、保湿等性能,同时将受损的皮肤角质层修复,对敏感皮肤有良好的恢复作用。
(6)工业***提取物对TRPV家族基因表达量的影响
温度对敏感皮肤的影响非常明显,皮肤状态随着环境温度的变化而急剧变化。皮肤表皮角质形成细胞HaCaT表达热敏性瞬时受体(TRPV)电位阳离子通道。根据现有报道,TRPV4蛋白在小鼠表皮角化细胞中和β-catenin 以及钙粘蛋白一起形成一个五角的结构,这种相互作用在角质形成细胞连接中起重要作用,进一步对皮肤屏障的健康状况具有重要作用。
HaCaT细胞首先在含有0.04mM钙的培养基中培养(低钙培养基),随后转入添加了1.5mM CaCl2的培养基中(高钙培养基),通过高钙开关诱导分化HaCaT细胞。随后,将高钙开关诱导分化后的细胞培养维持在33℃(皮肤生理温度)或28℃(阈值温度)培养24h。分别加入工业***提取物(实施例1制备),观测TRPV4的表达量变化。表达结果如表3所示。
对TRPV4的基因表达量的测定,设计了TRPV4的序列,具体如下所示:
TRPV4 R:5’-CGTGAGAACACCAAGTTTGTTAC-3’
TRPV4 L:5’-CTTGCTGTTGTACACCAGGATC-3’
GAPDH R:5’-TGAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGT-3’
GAPDH L:5’-CATGTGGGCCATGAGGTCCACCAC-3’
表3.工业***提取物对TRPV4基因相对表达值
由表3可见,工业***提取物对外界温度环境刺激HaCaT细胞表达TPRV4 有抑制作用,推测对于敏感皮肤具有修复作用。
试验例3含工业***提取物的组合物临床功效验证
将实施例4、实施例5、实施例6制备的面膜、喷雾、乳液系列产品给30 位敏感皮肤患者(临床皮肤科医生诊断确认)使用,针对刺痛、红斑、皮肤干燥、脱屑、疼痛、紧绷感、瘙痒、发烫等维度进行自我评估,分数从0-5 (0分代表无刺痛,无红斑,皮肤干燥程度低,不脱屑,不疼痛,无紧绷感,无瘙痒症状,不发烫,从0至5分,程度逐渐加重)。敏感皮肤患者在使用面膜产品前根据评分表自我评分,随后使用面膜产品,在面膜使用后15min, 1天,3天,5天,15天,30天分别再进行评分,
其中典型效果如图4所示,根据结果显示,使用工业***提取物面膜后,敏感皮肤患者面部刺痛、红斑、皮肤干燥、脱屑、疼痛、紧绷感、瘙痒、发烫有明显改善。
综上,本发明外用组合物不但能抑制透明质酸酶、清除自由基,还能提高皮肤屏障相关蛋白(AQP-3,FLG,Caspase-14)表达量,对治疗皮肤敏感有显著效果,同时不受常规治疗敏感皮肤的仪器和专业皮肤科医生的限制,使用方便,安全性高,具有广阔的应用前景。
Claims (12)
1.一种含工业***提取物的外用组合物,其特征在于:它是以工业***提取物为活性成分,加上化妆品中可接受的辅料制备而成的制剂;所述工业***提取物是质量比为5~7:2~4:1的工业***叶、工业***花和工业***杆,加乙醇溶液提取制成的提取物。
2.根据权利要求1所述的外用组合物,其特征在于:所述工业***提取物是质量比为6:3:1的工业***叶、工业***花和工业***杆,加乙醇溶液提取制成的提取物。
3.根据权利要求1所述的外用组合物,其特征在于:所述乙醇溶液的浓度为50~100%,v/v。
4.根据权利要求1~3任意一项所述的外用组合物,其特征在于:所述制剂是水剂、乳剂、喷雾、霜、膏、膜剂或凝胶剂。
5.根据权利要求4所述的外用组合物,其特征在于:所述制剂是由下述重量百分比的原料组成:
工业***提取物3~10%,甘油2~4%,丁二醇5~7%,防腐剂0.05~0.15%,其余为去离子水;
或:
工业***提取物3~10%,聚乙烯醇PVA 13-16%,甘油2.8-4.0%,吐温20 0.1-0.3%,EDTA-2Na 0.04-0.06%,透明质酸 0.5-1.5%,防腐剂0.05-0.15%,其余为去离子水;
或:
工业***提取物3~10%,甘油 3.0-4.0%,1,2-戊二醇 1-3%,甘油硬脂酸酯 0.4-0.6%,烷基糖苷SS 0.6-0.8%,烷基糖苷SSE-20 0.6-0.8 %,角鲨烷1-3%,β-葡聚糖 0.5-1.5%,透明质酸0.4-0.6%,防腐剂0.05-0.15%,其余为去离子水。
6.根据权利要求5所述的外用组合物,其特征在于:所述制剂是由下述重量百分比的原料组成:
工业***提取物5%,甘油3%,丁二醇6%,防腐剂0.1%,其余为去离子水;
或:
工业***提取物5%,聚乙烯醇PVA 15%,甘油3.5%,吐温20 0.2%,EDTA-2Na 0.05%,透明质酸 1%,防腐剂0.1%,其余为去离子水;
或:
工业***提取物5%,甘油 3.5%,1,2-戊二醇 2%,甘油硬脂酸酯 0.5%,烷基糖苷SS0.7%,烷基糖苷SSE-20 0.7 %,角鲨烷2%,β-葡聚糖 1%,透明质酸0.5%,防腐剂0.1%,其余为去离子水。
7.一种权利要求5或6所述外用组合物的制备方法,其特征在于;它包括如下步骤:
1)按配比称取原辅料;
2)甘油,丁二醇和去离子水混匀作为A相;工业***提取物作为B相;防腐剂作为C相;
3)将A相和B相混匀,再加入C相混匀,即得;
或:
1)按配比称取原辅料;
2)聚乙烯醇PVA,甘油,吐温20,EDTA-2Na和去离子水混匀作为A相;工业***提取物和透明质酸作为B相;防腐剂作为C相;
3)将A相和B相混匀,再加入C相混匀,投入面膜纸浸泡5-10 min,即得;
或:
1)按配比称取原辅料;
2)1,2-戊二醇,甘油和去离子水加热混匀作为A相;甘油硬脂酸酯,烷基糖苷SS,烷基糖苷SSE-20和角鲨烷加热混匀作为B相;工业***提取物,β-葡聚糖和透明质酸混匀作为C相;防腐剂作为D相;
3)将A相和B相50-60℃加热搅拌至乳液状,降温至35-40℃,再依次加入C相、D相混匀,即得。
8.一种权利要求1~4任意一项所述的工业***提取物的制备方法,其特征在于,它包括如下步骤:
按配比称取***的叶,杆和花,加10倍量(v/w,ml/g)50~100%乙醇水溶液超声提取1.5-2.0 h,共计2次,合并提取液,60 ℃减压浓缩至相对密度1.03,即得。
9.一种权利要求1~6任意一项所述外用组合物在制备治疗皮肤敏感的药物中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途,其特征在于,所述皮肤敏感是皮肤刺痛、红斑、干燥、脱屑、疼痛、紧绷感、瘙痒和/或发烫。
11.根据权利要求9所述的用途,其特征在于,所述药物是抑制透明质酸酶、清除自由基和/或提高皮肤屏障相关蛋白表达量的药物。
12.根据权利要求11所述的用途,其特征在于,所述皮肤屏障相关蛋白为AQP-3、FLG和/或Caspase-14蛋白。
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