CN111494371B - Pyr3的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及Pyr3的用途。本发明通过实验证明，Pyr3能够显著降低荷瘤小鼠的肿瘤体积、抑制肿瘤细胞的增殖与迁移，对癌症的治疗存在积极意义。因此，本发明提供了Pyr3在制备治疗抗肿瘤的药物中的应用，并提供了一种含有Pyr3的抗肿瘤药物。研究表明，对于荷瘤动物而言，从药物干预后的第24天开始直至32天，Pyr3组的皮下瘤体积明显小于NC组，差异有统计学意义(p＜0.05)。

Description

Pyr3的用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及Pyr3的用途。

背景技术

癌症是恶性肿瘤的统称。特点为不正常细胞失控***、无限增殖、侵入并破坏周围正常组织。按其组织来源可分为癌、肉瘤、母细胞瘤、恶性瘤等。来自上皮组织的称做癌；起源于脂肪组织、纤维组织、肌肉组织(统称间叶组织)及淋巴网状组织的称为肉瘤；来源于胚胎组织的称母细胞瘤；不宜用以上名称的叫恶性瘤，如恶性神经鞘瘤；还有些特殊称呼的癌症，如血液细胞的恶性肿瘤也称做白血病。癌症细胞经血液和淋巴液转移，也可直接蔓延。癌症的病因复杂，主要诱发因素有化学致癌物、特殊的病毒、射线、激素、自由基等；遗传、饮食、心理状态是重要的促进因素。

肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是全球第五常见的癌症类型，也是全球癌症相关死亡的第三大原因。在过去的几十年里，HCC的诊断和治疗取得了很大的进展，但其长期预后仍差强人意。HCC的长期预后差往往是由于诊断较晚、治疗后复发率高和化疗耐药。因此，迫切需要进一步探索更有效、更安全的抑制HCC进展的抗癌策略。

1-(4-(2，3，3-三氯丙烯酰胺基)苯基)-5-(三氟甲基)-1H-吡唑-4羧酸乙酯，简称Pyr3，CAS NO.1160514-60-2；其结构式如式I

TRPC3通道是瞬时感受器电位(transient receptor potential，TRP)通道家族的成员之一，TRPC3通道是非选择性阳离子通道，主要分布细胞膜，其开放时允许钙离子及钠离子等阳离子通过，从而参与细胞内钙离子稳态。Pyr3是TRPC3通道特异性抑制剂，可以有效阻断TRPC3通道，从而影响TRPC3通道的生物学功能。现有技术中，Pyr3被报道对压力负荷诱导的大鼠左心室肥厚存在影响，也有报道称Pyr3能够改善小鼠脑出血后的预后等。但Pyr3或其类似物对于癌症的治疗作用，此前并未见相关的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供Pyr3的用途，本发明研究发现，Pyr3能够降低荷瘤小鼠的肿瘤体积、抑制肿瘤细胞的增殖与迁移，对癌症的治疗存在积极意义。

本发明提供了Pyr3或其类似物在制备抑制肿瘤细胞增殖的药物中的应用。

在本发明实施例中，所述抑制肿瘤细胞增殖包括：抑制细胞数量的增加和/或抑制克隆的形成。

本发明还提供了Pyr3或其类似物在制备抑制肿瘤细胞迁移的药物中的应用。

本发明还提供了Pyr3或其类似物在制备抑制肿瘤体积增长的药物中的应用。

本发明还提供了Pyr3或其类似物在制备***的药物中的应用。

本发明中，所述肿瘤为恶性肿瘤，选自癌、肉瘤和/或母细胞瘤。

一些实施例中，所述肿瘤发生的部位包括头颈部、脑部、甲状腺、食管、胰腺、肺脏、肝脏、胃、乳腺、肾脏、胆囊、结肠、直肠、卵巢、子宫颈、子宫、***、膀胱、睾丸中的一种或多种。

一些具体实施例中，所述肿瘤为肝癌。

一些具体实施例中，所述肝癌为肝细胞肝癌或肝母细胞瘤。

在具体实施例中，以Huh7细胞验证Pyr3对肝细胞肝癌的治疗作用。以HepG2细胞验证Pyr3对肝母细胞瘤的治疗作用。

在本发明中，对于细胞实验，Pyr3或其类似物的处理浓度为1μmol/L～4μmol/L。对于动物实验，Pyr3或其类似物的剂量为10mg/kg·d^-1。给予方式为腹腔注射，注射的溶剂为DMSO。

本发明还提供了一种***的药物，其包括Pyr3或其类似物。

本发明所述的药物中，还包括药学上可接受的辅料。

本发明所述的药物中，还可以包括其他具有抗肿瘤功能的药物。

在本发明提供的一些实施例中，药学上可接受的辅料为矫味剂、渗透压调节剂、填充剂、润滑剂、防腐剂、助悬剂、食用色素、稀释剂、乳化剂、崩解剂或增塑剂中的一种或两者以上的混合物。

作为优选，所述药物为口服制剂或注射用剂。其中口服制剂的剂型为片剂、丸剂、口服液剂、胶囊剂、糖浆剂、滴丸剂或颗粒剂。优选的，胶囊剂为硬胶囊剂或软胶囊剂。片剂为口服片剂或口腔片剂。所述口服片剂指供口服的片剂，多数此类片剂中的药物是经胃肠道吸收而发挥作用，也有的片剂中的药物是在胃肠道局部发挥作用。在本发明提供的一些实施例中，口服片剂为普通压制片、分散片、泡腾片、咀嚼片、包衣片或缓控释片。所述注射用剂包括注射粉针剂或注射液。

本发明还提供了一种***的方法，其包括给予Pyr3或其类似物。

本发明中，所述Pyr3的类似物为Pyr3的可药用的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体或包合物。

本发明所述的药物可在联合治疗中使用，即与一种或多种其它药剂联合应用，其中所述联合应用包括Pyr3与其它药剂一起施用，或者依次施用。例如，所述其它药剂可在施用Pyr3或其类似物之前、期间或之后施用。施用的方式可相同也可不同，例如Pyr3与其它药剂可皆以注射形式给予，也可皆通过口服形式给予，也可一者通过注射形式给予另一者通过口服形式给予。

本发明通过实验证明，Pyr3能够显著降低荷瘤小鼠的肿瘤体积、抑制肿瘤细胞的增殖与迁移，对癌症的治疗存在积极意义。因此，本发明提供了Pyr3在制备治疗抗肿瘤的药物中的应用，并提供了一种含有Pyr3的抗肿瘤药物。研究表明，对于荷瘤动物而言，从药物干预后的第24天开始直至32天，Pyr3组的皮下瘤体积明显小于NC组，差异有统计学意义(P＜0.05)。

附图说明

图1示小鼠皮下瘤实验结果，其中，A示对照组(NC)组和给予Pyr3干预的瘤体；B示以时间为横坐标两组小鼠瘤体积变化的曲线；

图2示MTT实验结果，其中，A示HepG2细胞的增殖；B示Huh7细胞的增殖；

图3示平板克隆实验结果；其中，A示各组HepG2细胞的克隆形成情况；B示各组Huh7细胞的克隆形成情况；

图4示划痕实验结果；其中，A示各组HepG2细胞的迁移情况；B示各组Huh7细胞的迁移情况。

具体实施方式

本发明提供了Pyr3的用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。

在本发明的实施例中，使用的6周龄雄性NOD/SCID小鼠由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，许可证号：SCXK(湘)2016-0002。小鼠饲养于SPF级实验室。Pyr3(编号：B7494)购自ApexBio公司。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1：皮下瘤模型试验

清洁级饲养，1周适应期后以HepG2肝癌细胞2*10^6/只接种于小鼠颈背部皮下，待皮下瘤体积达到约100mm³后将小鼠平均分为两组(NC组：DMSO溶剂组，TRPC3抑制剂组：Pyr3组)，每组5只，两组小鼠每天分别腹腔注射溶剂DMSO和Pyr3(10mg/kg)，连续32天，每隔3-4天测量肿瘤体积，32天后收集皮下瘤标本。

如图1A、1B所示，从药物干预后的第24天开始直至32天，Pyr3组的皮下瘤体积明显小于NC组，差异有统计学意义(P＜0.05)。

实施例2：MTT实验

肝癌细胞HepG2和Huh7以5×10³细胞/孔铺板于96孔板，用不同浓度的Pyr3干预24、48、72h。接下来，20μL MTT(5mg/ml，圣路易斯，美国)添加到每个孔，继续孵育4h。结晶紫在150μL DMSO的振荡下溶剂。以490nm波长进行吸光度测量。

如图2A、2B所示，分别以4uM和1uM的Pyr3干预肝癌细胞HepG2和Huh7，肝癌细胞的增殖能力与NC组比较明显降低，差异有统计学意义(P＜0.0001)。

实施例3：平板克隆实验

将肝癌细胞HepG2和Huh7接种于2mL完全培养基中的6孔板(1.5×10³/孔)，然后在37C、含5％CO2的空气中培养2周。期间以不同浓度Pyr3的培养基每两天更换一次培养基。2周后用0.5％结晶紫对细胞进行染色，放大50倍计数。

如图3A、3B所示，分别以4uM和1uM的Pyr3干预肝癌细胞HepG2和Huh7，肝癌细胞的增殖能力与NC组比较明显降低，差异有统计学意义(P＜0.01)。

实施例4：划痕实验

在划痕实验中，将肝癌细胞HepG2和Huh7接种到6孔板中，培养至融合单层。用10ul无菌tip头对单层细胞进行平行划痕。用1ml含不同浓度Pyr3的无血清培养基代替培养基。划痕愈合过程分别在0、24和48小时拍摄。

如图4A、4B所示，分别以4uM和1uM的Pyr3干预肝癌细胞HepG2和Huh7，肝癌细胞的迁移能力与NC组比较明显降低，差异有统计学意义(P＜0.01)。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.Pyr3在制备抑制肝癌细胞增殖的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制肝癌细胞增殖包括：抑制细胞数量的增加和/或抑制克隆的形成。

3.Pyr3在制备抑制肝癌细胞迁移的药物中的应用。

4.Pyr3在制备抑制肝癌体积增长的药物中的应用。

5.Pyr3在制备治疗肝癌的药物中的应用。

6.根据权利要求1～5任一项所述的应用，其特征在于，所述肝癌为肝细胞肝癌或肝母细胞瘤。

7.根据权利要求1～5任一项所述的应用，其特征在于，Pyr3的剂量为10mg/kg·d^-1。

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