CN111491638A - 用于在婴儿和幼儿中促进消化能力的包含至少一种n-乙酰化低聚糖和至少一种岩藻糖基化低聚糖的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于在婴儿或幼儿中促进小肠的表面区域的发育和/或生长以及相关的消化能力的改善的组合物。
Description
技术领域
本发明涉及用于在婴儿或幼儿中促进小肠的表面区域的发育和/或生长以及相关的消化能力的改善的组合物。
背景技术
婴儿和幼儿的肠的发育是婴儿和儿童发育的关键，特别是对于婴儿或幼儿来说，具有最佳的消化能力是非常重要的。因此希望开发在婴儿和幼儿中促进消化能力发展的组合物。
在蛋白质和碳水化合物的情况下，这些蛋白质和碳水化合物首先在肠腔中消化成较小的片段，然后通过位于小肠肠细胞的顶端侧的多种酶将它们进一步消化成氨基酸、二肽和三肽以及单糖，然后被身体吸收。
与蛋白质和碳水化合物类似，膳食脂质和脂溶性维生素在肠腔中被不同类型的脂肪酶水解。在胃脂肪酶在胃中消化的第一步骤之后，大滴未消化的脂肪和脂肪消化产物进入肠，在肠中它们与胆汁盐混合以形成胰脂肪酶易于触及的细乳液。
然后将脂质消化产物进一步掺入肠腔中的胆汁盐胶束中并形成所谓的混合胶束。该方法显著增加了脂质消化产物的溶解度，这继而大大促进了它们被肠细胞吸收。胆汁盐的最小浓度(称为临界胶束浓度)是在肠腔中形成胆汁盐胶束所需的。在健康成人中，餐后状态期间胆汁盐的肠腔浓度高于临界胶束浓度，这确保了高效的脂质消化和吸收。在婴儿，尤其是早产婴儿中(参见Lindqvist等人Lipid digestion and absorption in earlylife:an update,Current Opinion in Clinical Nutrition and Metabolic Care；13(2010):314-320)，并且在一些疾病状态(例如囊性纤维化)下，胆汁盐的肠腔浓度较低，低于临界胶束浓度，这导致低效的脂质消化和吸收。
这种低效脂质消化的主要后果是粪便中营养物质损失，即脂溶性维生素和脂肪诸如必需脂肪酸和LC-PUFA的损失，以及相关能量的损失。因此，此类营养物质和能量不可用于婴儿的生长和发育。此外，此类低效消化与例如腹泻、喂食不耐受和肠道微生物群的改变相关联。因此，特别期望找到改善婴儿和幼儿的消化，特别是早产或低出生体重婴儿的消化的解决方案。
肠腔中的胆汁盐沿着小肠传输并且在健康成人的回肠中被有效吸收(高达95％)。剩余的胆汁盐经由门静脉再循环到肝脏中，在肝脏中吸收剩余的胆汁盐以再次分泌到肠腔中。因此，大部分腔内胆汁盐库依赖于该肠-肝循环，并且仅一小部分由从头合成产生。然而，在幼小婴儿中肠-肝循环过程是有缺陷的(参见Belle等人；Intestinal absorption ofbile salts:immature development in the neonate；J Pediatr 94(1979):472-476)，特别是在早产婴儿和某些疾病状态如短肠综合征中。具体地讲，增加吸收的回肠表面可改善胆汁盐的肠肝循环、肝脏的再利用以及增加的腔内胆汁盐库，从而导致更好的脂肪和脂溶性维生素消化。
小肠在此类消化过程中起关键作用。影响消化能力的一个重要参数是小肠的形态。小肠上皮的表面积是关键参数(参见Helander等人；Surface area of the digestivetract–revisited；Scandinavian Journal of Gastroenterology；49(2014)：681-689)。上皮的表面积越大，可用于最终消化营养物质诸如脂质、脂溶性维生素、碳水化合物和蛋白质的胆汁盐和消化酶的库越高。增加小肠中的绒毛长度引起表面积的有利增加以及相关的宏量营养素诸如脂质、脂溶性维生素、蛋白质和碳水化合物的消化改善。绒毛长度和小肠的表面积的相关增加对消化能力的此类效应在文献中有详细记载。例如，L.Montagne等人的综述，A review of interactions between dietary fibre and the intestinal mucosa,and their consequences on digestive health in young non-ruminant animals(Animal Feed Science and Technology 108(2003)p.95-117)，特别是第105页的段落4.3，引用了若干研究，突出显示了增加绒毛长度对动物的消化能力的积极影响。
希望改善所有婴儿和幼儿的消化能力。然而，婴儿和幼儿中的一些特定人群特别需要能够总体上促进其发育并且特别是能够促进其消化和/或吸收能力的组合物。此类婴儿和幼儿是例如早产婴儿、低出生体重婴儿、患有短肠综合征的婴儿和幼儿和/或生长迟缓的婴儿或幼儿，特别是宫内生长迟缓(IUGR)婴儿。
已经进行了许多尝试来使婴儿和幼儿以及幼龄动物的消化能力发育。具体地讲，若干研究评估了各种类型的纤维对幼龄动物、婴儿或幼儿的肠形态和消化能力的影响。上述L.Montagne等人的综述引用了多项研究，这些研究示出了不同类型的膳食纤维的可变效应，一些与对消化能力的积极效应相关联，而另一些似乎是有害的。
膳食纤维已显示出积极效应的研究的一个示例是P.Liu和al，Effects of chito-oligosaccharide supplementation on the growth performance,nutrientdigestibility,intestinal morphology,and fecal shedding of Escherichia coliand Lactobacillus in weaning pigs(J.Anim.Sci.86(2008):p.2609-2618)。在该研究中，与对照饮食相比，回肠和空肠中的绒毛高度和绒毛:隐窝比的增加与补充含壳寡糖的猪饮食后断奶仔猪的消化率的增加相关联。相反，van Meer等人的研究；Prebioticoligosaccharides and the enterohepatic circulation of bile salts in rats；Am JPhysiol Gastrointest Liver Physiol 294(2008):G540–G547已表明，用低聚半乳糖补充大鼠仔鼠饮食不会有助于更大的胆汁盐库大小或改变胆汁盐库动力学，因此不能成功促进脂肪的消化。
已经评估了其他成分促进消化的能力。例如，WO 2011/65552描述了包含来自发酵乳(例如，来自干酪)的蛋白质的水解产物、脂质和异麦芽酮糖的组合物，该组合物用于有效增加小肠中的绒毛长度。然而，此类组合物不适用于婴儿和幼儿，因为不希望在此类组合物中使用异麦芽酮糖。
鉴定特别适于人类婴儿和/或幼儿并且能够改善此类婴儿和/或幼儿的消化能力的成分将是特别有利的。
建议所有婴儿采用母乳喂养。然而，在一些情况下，由于某些医学原因，母乳喂养并不足够或不成功，或者母亲不选择母乳喂养。已针对这些情况研发了婴儿配方食品。还研发了用特殊成分丰富母乳或婴儿配方食品的强化剂。
显然需要开发合适的方法来增加婴儿和幼儿消化宏量营养素诸如脂质、脂溶性维生素、蛋白质和/或碳水化合物的能力。
此外，由于这类婴儿或幼儿特别娇弱，因此需要递送这种健康益处的方式应当是特别适合年幼个体(婴儿和幼儿)的方式，不涉及传统的药物干预的方式。
需要以下列方式向这些婴儿或幼儿递送此类健康有益效果：不引发副作用的方式和/或不仅容易递送还能获得父母或健康护理人员广泛认可的方式。
还需要以保持此类输送价格合理且大多数人可负担的方式递送此类健康益处。
因此，至少由于抗生素抗性发展的相关风险，显然需要开发替代方法，而不是传统的药物干预法诸如使用抗生素。
发明内容
本发明人已发现，包含至少一种岩藻糖基化低聚糖和至少一种N-乙酰化低聚糖的组合物可有利地用于在婴儿或幼儿中促进消化能力，优选消化脂肪、脂溶性维生素、蛋白质和碳水化合物的能力。不希望受理论约束，但据信，这些低聚糖对这些特定健康状况协同发挥作用。
因此，本发明因此提供了包含至少一种岩藻糖基化低聚糖和至少一种N-乙酰化低聚糖的营养组合物，该营养组合物用于在婴儿或幼儿中促进消化能力的方法中。
本发明还提供了包含至少一种岩藻糖基化低聚糖和至少一种N-乙酰化低聚糖的成长乳，该成长乳用于在儿童中促进消化能力的方法中。
本发明的营养组合物或成长乳特别有利于用于以下方法：
-改善肠肝循环，特别地胆汁盐的肠肝循环，以及
-促进小肠中表面积的增加；以及
-在婴儿或幼儿、或儿童的小肠中促进绒毛长度的增加。
在一个特别有利的实施方案中，该营养组合物或成长乳包含2’-岩藻糖基乳糖(2-FL)和乳糖-N-新四糖(LNnT)。
附图说明
图1表示以下幼鼠组中绒毛的长度：
-在子宫内生长正常的动物(正常组；阳性对照)
-已经历子宫生长迟缓并喂食正常饮食的动物(IUGR组；阴性对照)，
-具有子宫内生长迟缓、饮食补充有2-FL的动物(IUGR/2FL测试组)，
-具有子宫内生长迟缓、饮食补充有LNnT的动物(IUGR/LNnT测试组)，
-具有子宫内生长迟缓、饮食补充有2-FL和LNnT的组合的动物(IUGR/HMO混合测试组)。
每组大鼠的平均绒毛长度由水平线表示。2-FL和LNnT组与IUGR组无显著差异。相比之下，2-FL和LNnT组显示出比其他组显著更长的绒毛。因此，可在2-FL和LNnT之间观察到协同作用。
具体实施方式
如本文所用，下列术语具有下列含义。
术语“婴儿”是指年龄在12个月以下的儿童。表述“幼儿”是指年龄介于一岁和小于三岁之间的儿童，也称为学步儿童。表述“儿童”是指介于三岁和七岁之间的儿童。
“剖腹产出生的婴儿或幼儿”是指通过剖腹产术分娩的婴儿或幼儿。这意味着婴儿或幼儿不是经***分娩的。
“***娩出婴儿或幼儿”是指经***分娩而不是通过剖腹产术分娩的婴儿或幼儿。
“早产儿”是指不足月出生的婴儿或幼儿。通常是指在妊娠满37周之前出生的婴儿或幼儿。
“低出生体重婴儿”是指由于早产或胎儿生长受限，体重低于2500g(5.5磅)的新生婴儿。因此其涵盖：
-出生时体重为1500g至2500g的婴儿或幼儿(通常称为“低出生体重”或LBW)
-出生时体重为1000g至1500g的婴儿或幼儿(称为“极低出生体重”或VLBW)
-出生时体重不足1000g的婴儿或幼儿(称为“超低出生体重”或ELBW)。
“小于胎龄出生的婴儿(SGA)”是指出生体重低于相同胎龄婴儿的第10个百分位数的婴孩。
表述“营养组合物”是指供给个体养分的组合物。这种营养组合物通常为口服或静脉内施用，并且其通常包括脂质或脂肪源以及蛋白质源。
在一个具体实施方案中，本发明的组合物是低变应原营养组合物。表述“低变应原营养组合物”是指不大可能引起过敏反应的营养组合物。
在一个具体实施方案中，本发明的组合物是“合成营养组合物”。表述“合成的营养组合物”是指通过化学和/或生物方法所获得的混合物，该混合物的化学性质可能与哺乳动物乳汁中天然存在的混合物相同(也就是说，合成的组合物不是母乳)。
如本文所用，表述“婴儿配方食品”是指旨在专用于供给在生命的头几个月期间的婴儿营养，而且本身满足这类人的多种营养需求的食料(符合欧盟委员会2006年12月22日颁发的针对婴儿配方食品和较大婴儿配方食品的第91/321/EEC 2006/141/EC号指令中第2(c)条的规定)。也是指旨在用于婴儿的营养组合物，并且如在食品法典委员会(法典STAN72-1981)和婴儿特殊品(包括针对特殊医学目的的食物)中所定义。表述“婴儿配方食品”既涵盖“一段婴儿配方食品”，也涵盖“二段婴儿配方食品”或“较大婴儿配方食品”。
“二段婴儿配方食品”或“较大婴儿配方食品”从第6个月开始给予。婴儿配方食品构成了这类人逐渐多样化饮食中的主要液体元素。
表述“婴孩食物”是指旨在专用于供给在生命的头一年期间的婴儿或幼儿营养的食料。
表述“婴儿谷物组合物”是指旨在专用于供给在生命的头一年期间的婴儿或幼儿营养的食料。
表述“成长乳”(或GUM)是指通常添加有维生素和矿物质的乳基饮料，其旨在用于幼儿或儿童。
术语“强化剂”是指适于与母乳或婴儿配方食品混合的液体或固体营养组合物。
表述“离乳期”是指在婴儿或幼儿的饮食中逐步用其它食物替代母乳期间的时期。
表述“天龄/周龄/月龄/年龄”和“出生天数/周数/月数/年数”可互换使用。
表述“促进消化能力”涵盖以下中的一者或多者：
-增大小肠、特别是回肠的表面积；
-增加小肠、特别是回肠中的绒毛长度；以及
-改善肠肝循环、特别是胆汁盐的肠肝循环。
“母乳”应理解为母亲的乳汁或初乳。
“低聚糖”为含有少量(通常三份至十份)普通糖(单糖)的糖类聚合物。
术语“HMO”是指人乳低聚糖。这些碳水化合物高度耐受酶促水解，这表明其表现的重要功能可能不与其热值直接相关。本领域已特别指出，这些碳水化合物在婴儿和幼儿的早期发育(诸如，免疫***的成熟)过程中发挥关键作用。在人乳中发现了许多不同种类的HMO。每种单独的低聚糖都基于葡萄糖、半乳糖、唾液酸(N-乙酰神经氨酸)、岩藻糖和/或N-乙酰基葡糖胺与这些分子间各式各样的键的组合，因此人乳含有大量种类各不相同的低聚糖，迄今已鉴定出逾130种此类结构。几乎所有低聚糖的还原端都有乳糖分子，且非还原端的末端位置都由唾液酸和/或岩藻糖(如果有的话)占据。HMO可以呈酸性(例如，含带电唾液酸的低聚糖)或呈中性(例如，岩藻糖基化低聚糖)。
“岩藻糖基化低聚糖”是具有岩藻糖残基的低聚糖。这种低聚糖呈中性。一些示例为2-FL(2'-岩藻糖基乳糖)、3-FL(3-岩藻糖基乳糖)、二岩藻糖基乳糖、乳糖-N-岩藻五糖(例如，乳糖-N-岩藻五糖I、乳糖-N-岩藻五糖II、乳糖-N-岩藻五糖III、乳糖-N-岩藻五糖V)、乳糖-N-岩藻六糖、乳糖-N-二岩藻六糖I、岩藻糖基乳糖-N-六糖、岩藻糖基乳糖-N-新六糖、二岩藻糖基乳糖-N-六糖I、二岩藻糖基乳糖-N-新六糖II以及这些物质的任意组合。尽管不希望受理论约束，但据信，岩藻糖基化低聚糖的岩藻糖基表位可在粘膜表面处充当“诱饵(decoy)”。该表位可利用竞争效应来防止并/或限制致感染的病原体(病毒或细菌来源)或病原体所分泌物质(如毒素)发挥作用，尤其是避免病原体或病原体所分泌物质与天然配体结合，并且不希望受理论约束，但据信这将因此降低感染/炎症风险，特别是LRT/耳部感染和/或炎症风险。另外，岩藻糖基化低聚糖被认为可促进特定共生微生物的生长和代谢活动，从而降低炎症反应并形成不利于病原体的环境，因此产生定植抗力。
表述“包含2'-岩藻糖基表位的岩藻糖基化低聚糖”和“2-岩藻糖基化低聚糖”涵盖了具有一定同源形式的岩藻糖基化低聚糖，这些同源形式的岩藻糖基化低聚糖都含有2’-岩藻糖基表位，因而可推测它们具有一定同源功能。不希望受理论约束，但据信，这些岩藻糖基化低聚糖的2’-岩藻糖基表位特别针对与LRT和/或耳部感染相关的病原体(或病原体所分泌物质)。
表述“N-乙酰化低聚糖”涵盖“N-乙酰基-乳糖胺”和“含N-乙酰基-乳糖胺的低聚糖”两者。这种低聚糖是具有N-乙酰基-乳糖胺残基的中性低聚糖。合适的示例为乳糖-N-新四糖(LNnT)、乳糖-N-四糖(LNT)、对-乳糖-N-新六糖(对-LNnH)、二唾液酸基乳糖-N-四糖(DSLNT)或它们的任意组合。其他示例为乳糖-N-六糖、乳糖-N-新六糖、对-乳糖-N-六糖、对-乳糖-N-新六糖、乳糖-N-八糖、乳糖-N-新八糖、异-乳糖-N-八糖、对-乳糖-N-八糖和乳糖-N-十糖。
表述“至少一种岩藻糖基化低聚糖”和“至少一种N-乙酰化低聚糖”是指“至少一种类型的岩藻糖基化低聚糖”和“至少一种类型的N-乙酰化低聚糖”。
“HMO前体”是干涉制造HMO的关键化合物，诸如唾液酸和/或岩藻糖。
“唾液酸化低聚糖”是含带电唾液酸的低聚糖，即具有唾液酸残基的低聚糖。这种低聚糖呈酸性。一些示例为3-SL(3'唾液酸基乳糖)和6-SL(6'唾液酸基乳糖)。
本发明的营养组合物可为固体形式(例如，粉末)或液体形式。各种成分(例如低聚糖)的量在组合物为固体形式(例如粉末)时可按照基于干重的g/100g组合物来表示，或者在组合物是指液体形式时表示为g/L组合物的浓度(后者还涵盖可由粉末在液体(诸如乳、水……)中重构之后获得的液体组合物，例如重构的婴儿配方食品或较大/二段婴儿配方食品或成长乳或婴儿谷物产品或任何其他被设计用于为婴儿提供营养的配制物)。
术语“益生元”是指通过选择地刺激健康细菌(诸如，人类结肠中的双歧杆菌)的生长和/或其活性，而对宿主产生有利作用的非消化性碳水化合物(Gibson GR,RoberfroidMB.Dietary modulation of the human colonic microbiota:introducing the conceptof prebiotics.J Nutr.1995；125:1401-12)。
术语“益生菌”是指对宿主的健康或良好状态具有有益效果的微生物细胞制剂或微生物细胞组分。(Salminen S,Ouwehand A.Benno Y.等人，“Probiotics:how shouldthey be defined”Trends Food Sci.Technol.1999:10107-10).微生物细胞一般为细菌或酵母。
术语“cfu”应理解为菌落形成单位。
除非另外指明，否则所有百分比均按重量计。
另外，在本发明的上下文中，术语“包含”或“包括”不排除其它可能的要素。本发明的组合物(包括本文所述的多个实施方案)可包含下列要素、由或基本上由下列要素组成：本文所述的本发明的基本要素和必要限制，以及本文所述的或视需求而定的任何另外的或任选的成分、组分或限制。
不能将本说明书中对现有技术文献中的任何参考视为承认此类现有技术为众所周知的技术或形成本领域普遍常识的一部分。
现在开始更详细描述本发明。应当注意，本申请中描述的各个方面、特征、实施例和实施方案可以相容和/或可以组合在一起。
因此本发明的第一目的在于包含至少一种岩藻糖基化低聚糖和至少一种N-乙酰化低聚糖的营养组合物，该营养组合物用于在婴儿或幼儿中促进消化能力。
因此本发明的第二目的在于包含至少一种岩藻糖基化低聚糖和至少一种N-乙酰化低聚糖的成长乳，该成长乳用于在儿童中促进消化能力。
优选地，本发明的营养组合物用于在婴儿或幼儿中、或本发明的成长乳用于在儿童中促进消化脂肪、脂溶性维生素、蛋白质和碳水化合物的能力。
为了实现这些益处，本发明的营养组合物、或成长乳优选用于以下方法：
在婴儿或幼儿、或儿童中，
-增大小肠的表面积，优选回肠的表面积；
-增加小肠中、优选回肠中的绒毛长度；以及
-改善肠肝循环，特别是胆汁盐的肠肝循环。
本发明的营养组合物、或成长乳包含至少一种岩藻糖基化低聚糖。可存在一种或若干种类型的岩藻糖基化低聚糖。岩藻糖基化低聚糖实际上可选自下述：2'-岩藻糖基乳糖、3’-岩藻糖基乳糖、二岩藻糖基乳糖、乳糖-N-岩藻五糖(诸如，乳糖-N-岩藻五糖I、乳糖-N-岩藻五糖II、乳糖-N-岩藻五糖III、乳糖-N-岩藻五糖V)、乳糖-N-岩藻六糖、乳糖-N-二岩藻六糖I、岩藻糖基乳糖-N-六糖、岩藻糖基乳糖-N-新六糖(诸如，岩藻糖基乳糖-N-新六糖I、岩藻糖基乳糖-N-新六糖II)、二岩藻糖基乳糖-N-六糖I、二岩藻糖基-乳糖-N-新六糖、二岩藻糖基乳糖-N-新六糖I、二岩藻糖基乳糖-N-新六糖II、岩藻糖基-对-乳糖-N-六糖、三岩藻基-对-乳糖-N-六糖I以及它们的任意组合。
在一些具体实施方案中，岩藻糖基化低聚糖包含2'-岩藻糖基表位。该岩藻糖基化低聚糖可选自下述：2’-岩藻糖基乳糖、二岩藻糖基乳糖、乳糖-N-岩藻五糖、乳糖-N-岩藻六糖、乳糖-N-二岩藻六糖、岩藻糖基乳糖-N-六糖、岩藻糖基乳糖-N-新六糖、二岩藻糖基乳糖-N-六糖、二岩藻糖基-乳糖-N-新六糖、二岩藻糖基乳糖-N-新六糖、岩藻糖基-对-乳糖-N-六糖以及它们的任意组合。
在一个优选的实施方案中，根据本发明的营养组合物、或成长乳包含2’-岩藻糖基乳糖(或2FL、或2’FL、或2-FL或2’-FL)。在一个具体实施方案中，不存在除2’-岩藻糖基乳糖以外的其它类型的岩藻糖基化低聚糖，即，本发明的营养组合物或成长乳仅包含2’-岩藻糖基乳糖作为岩藻糖基化低聚糖。
可通过色谱技术或过滤技术从天然源诸如动物乳来分离岩藻糖基化低聚糖。或者，也可使用特殊的岩藻糖基转移酶和/或岩藻糖苷酶，通过生物技术手段，通过使用基于酶(重组酶或天然酶)的发酵技术或微生物发酵技术，来制备岩藻糖基化低聚糖。在后一者情况下，微生物可表达其天然酶和底物，或者可被工程改造成能够产生相应的底物和酶。可使用单一微生物培养物和/或混合培养物。可以最初具有任意聚合度(DP)的受体底物开始形成岩藻糖基化低聚糖，从DP＝1开始。另选地，可以通过由乳糖和游离岩藻糖化学合成来制备岩藻糖基化低聚糖。岩藻糖基化低聚糖也可从例如日本协和发酵工业株式会社(Kyowa,Hakko,Kogyo)购得。
本发明的营养组合物或成长乳包含至少一种N-乙酰化低聚糖。可存在一种或若干种类型的N-乙酰化低聚糖。N-乙酰化低聚糖可以是例如乳糖-N-四糖(LNT)、乳糖-N-新四糖(LNnT)或它们的任意组合。在一些具体实施方案中，N-乙酰化低聚糖为乳糖-N-新四糖(LNnT)、乳糖-N-四糖(LNT)、对-乳糖-N-新六糖(对-LNnH)、二唾液酸基乳糖-N-四糖(DSLNT)或它们的任意组合。在一些具体实施方案中，N-乙酰化低聚糖为LNnT。在一些具体实施方案中，N-乙酰化低聚糖为LNT。在一些其它具体实施方案中，N-乙酰化低聚糖为LNT与LNnT的混合物。在一些具体实施方案中，营养组合物或成长乳包含LNT和LNnT两者，其比率LNT:LNnT为介于5:1和1:2之间，或介于2:1至1:1之间，或介于2:1.2至2:1.6之间。
在一个优选的实施方案中，根据本发明的营养组合物或成长乳包含乳糖-N-新四糖(LNnT)。在一个具体实施方案中，除了乳糖-N-新四糖(LNnT)之外不存在其它类型的N-乙酰化低聚糖，即本发明的营养组合物或成长乳只包含乳糖-N-新四糖(LNnT)作为N-乙酰化低聚糖。
N-乙酰化低聚糖可采用酶转移法，即使用糖基转移酶将供体部分的糖单元转移到受体部分来化学合成，如例如美国专利号5,288,637和WO96/10086所述。另选地，LNT和LNnT可通过将游离的或与低聚糖(例如，乳果糖)结合的酮-六糖(例如，果糖)化学转化成N-乙酰六糖胺或包含N-乙酰六糖胺的低聚糖来制备，如Wrodnigg,T.M.；Stutz,A.E.(1999)Angew.Chem.Int.Ed.38:827-828。然后可将用这种方式制得的N-乙酰基-乳糖胺转移到作为受体部分的乳糖。
在本发明的具体有利实施方案中，营养组合物或成长乳包含2'-岩藻糖基乳糖(2FL)和乳糖-N-新四糖(LNnT)。
在另一个具体实施方案中，本发明的营养组合物或成长乳包含由2’-岩藻糖基乳糖(2-FL)和乳糖-N-新四糖(LNnT)组成的低聚糖混合物。换句话讲，本发明的营养组合物或成长乳仅包含2’-岩藻糖基乳糖(2-FL)作为岩藻糖基化低聚糖并且仅包含乳糖-N-新四糖(LNnT)作为N-乙酰化低聚糖。
在本发明的一个特别有利的实施方案中，岩藻糖基化低聚糖和N-乙酰化低聚糖以一些特定量存在于营养组合物或成长乳中。除非另外指明，否则术语“量”是指营养组合物或成长乳中这两种组分各自的总量。因此，除非存在这些组分的单个类型(在这种情况下总量和单个量相等)，否则它不指单个量。作为示例性实施例，如果组合物中存在仅一种(即，仅一种类型的)岩藻糖基化低聚糖(例如2FL)，则其单个量(及因此岩藻糖基化低聚糖的总量)将在0.75-1.65g/L的范围内。如果存在若干种(即，若干种类型的)岩藻糖基化低聚糖，则其单个量将较低(例如，如果存在2种不同类型的岩藻糖基化低聚糖例如2FL+3FL，则每一者可例如具有0.5g/L的单个量)，但岩藻糖基化低聚糖的总量将在0.75-1.65g/L的范围内。
岩藻糖基化低聚糖可以0.75g/L-1.65g/L组合物的总量存在于根据本发明的营养组合物或成长乳中。在一些实施方案中，岩藻糖基化低聚糖的总量可为0.005g/L-5g/L组合物，诸如0.01g/L-3g/L组合物、或0.02g/L-2g/L组合物、或0.1g/L-2.5g/L组合物、或0.15g/L-2g/L组合物、或0.25g/L-1.9g/L组合物。在一个具体实施方案中，岩藻糖基化低聚糖的总量为1g/L组合物。在另一个具体实施方案中，一种或多种岩藻糖基化低聚糖的总量为0.26g/L组合物。
基于干重，岩藻糖基化低聚糖以0.004g/100g-3.8g/100g组合物的总量存在于营养组合物或成长乳中。岩藻糖基化低聚糖的总量可为0.008g/100g-2.3g/100g组合物，诸如0.015g/100g-1.5g/100g组合物、或0.08g/100g-1.9g/100g组合物、或0.12g/100g-1.5g/100g组合物、或0.15g/100g-1.5g/100g组合物、或0.19-1.5g/100g组合物。在一个具体实施方案中，一种或多种岩藻糖基化低聚糖的总量为0.78g/100g组合物。在另一个具体实施方案中，一种或多种岩藻糖基化低聚糖的总量为0.2g/100g组合物。
N-乙酰化低聚糖可以0.1g/L-3g/L组合物的总量存在于根据本发明的营养组合物或成长乳中。在一些实施方案中，N-乙酰化低聚糖的总量可为0.01g/L-2.5g/L组合物，诸如0.05g/L-1.5g/L组合物、或0.05g/L-1g/L组合物、或0.05g/L-0.8g/L组合物、或0.08g/L-0.8g/L组合物、或0.09g/L-0.8g/L组合物。在一个具体实施方案中，N-乙酰化低聚糖的总量为0.5g/L组合物。在另一个具体实施方案中，一种或多种N-乙酰化低聚糖的总量为0.13g/L组合物。
基于干重，N-乙酰化低聚糖以0.008g/100g-2.3g/100g组合物的总量存在于营养组合物或成长乳中。N-乙酰化低聚糖的总量可为0.008g/100g-1.9g/100g组合物，诸如0.04g/100g-1.2g/100g组合物、或0.04g/100g-0.8g/100g组合物、或0.04g/100g-0.6g/100g组合物、或0.06g/100g-0.6g/100g组合物、或0.07g/100g-0.6g/100g组合物。在一个具体实施方案中，N-乙酰化低聚糖的总量为0.38g/100g组合物。在另一个具体实施方案中，一种或多种N-乙酰化低聚糖的总量为0.1g/100g组合物。
因此，在本发明的一个实施方案中，营养组合物或成长乳包含至少一种岩藻糖基化低聚糖和至少一种N-乙酰化低聚糖，其中：
-一种或多种岩藻糖基化低聚糖的总量为0.005-5g/L组合物，和/或以干重计，总量为0.004-3.8g/100g组合物；和/或
-一种或多种N-乙酰化低聚糖的总量为0.1-2.5g/L组合物，和/或以干重计，总量为0.08-1.9g/100g组合物。
在另一个具体实施方案中，本发明的营养组合物或成长乳包含至少一种岩藻糖基化低聚糖和至少一种N-乙酰化低聚糖，其中：
-一种或多种岩藻糖基化低聚糖的总量为0.005-5g/L组合物，和/或以干重计，总量为0.004-3.8g/100g组合物；和/或
-一种或多种N-乙酰化低聚糖的总量为0.05-1.5g/L组合物，和/或以干重计，总量为0.04-1.2g/100g组合物。
在另一个具体实施方案中，本发明的营养组合物或成长乳包含至少一种岩藻糖基化低聚糖和至少一种N-乙酰化低聚糖，其中：
-一种或多种岩藻糖基化低聚糖的总量为0.02-2g/L组合物，和/或以干重计，总量为0.015-1.5g/100g组合物；和/或
-一种或多种N-乙酰化低聚糖的总量为0.5-1g/L组合物，和/或以干重计，总量为0.4-0.8g/100g组合物。
在另一个具体实施方案中，本发明的营养组合物或成长乳包含至少一种岩藻糖基化低聚糖和至少一种N-乙酰化低聚糖，其中：
-一种或多种岩藻糖基化低聚糖的总量为0.1-2.5g/L组合物，和/或以干重计，总量为0.08-1.9g/100g组合物；和/或
-一种或多种N-乙酰化低聚糖的总量为0.5-0.8g/L组合物，和/或以干重计，总量为0.4-0.6g/100g组合物。
在一个具体实施方案中，根据本发明的营养组合物或成长乳包含至少一种岩藻糖基化低聚糖和至少一种N-乙酰化低聚糖，其中：
-一种或多种岩藻糖基化低聚糖的总量为1g/L组合物，和/或以干重计，总量为0.77g/100g组合物；和/或
-一种或多种N-乙酰化低聚糖的总量为0.5g/L组合物，和/或以干重计，总量为0.38g/100g组合物。
在另一个具体实施方案中，根据本发明的营养组合物或成长乳包含至少一种岩藻糖基化低聚糖和至少一种N-乙酰化低聚糖，其中：
-一种或多种岩藻糖基化低聚糖的总量为0.26g/L组合物，和/或以干重计，总量为0.2g/100g组合物；和/或
-一种或多种N-乙酰化低聚糖的总量为0.13g/L组合物，和/或以干重计，总量为0.1g/100g组合物。
根据本发明的营养组合物或成长乳中包含的岩藻糖基化低聚糖和N-乙酰化低聚糖通常以1:20至2:1，优选地1:15至1:1，最优选地1:10至1:2的N-乙酰化低聚糖:岩藻糖基化低聚糖的比率存在。在特别有利的实施方案中，该比率为1:2或约1:2。
在一个具体实施方案中，岩藻糖基化低聚糖以一定量提供于本发明的营养组合物或成长乳中，使得营养组合物或成长乳的正常食用将提供给婴儿或幼儿、或儿童，食用0.003g/天-6.5g/天、优选0.006g/天-3.9g/天，例如0.012g/天-2.6g/天的总日剂量。
对于早产、低出生体重和小于胎龄婴儿，岩藻糖基化低聚糖的日剂量优选为0.05g/kg体重/天至1g/kg体重/天，优选0.06g/kg体重/天至0.9g/kg体重/天或0.07g/kg-0.8g/kg体重/天或0.08g/kg-0.7g/kg体重/天或0.09g/kg-0.6g/kg体重/天或0.1g/kg-0.5g/kg体重/天或0.2g/kg-0.4g/kg体重/天，最优选0.34g/kg体重/天。
在一个具体实施方案中，N-乙酰化低聚糖以一定量提供于本发明的营养组合物或成长乳中，使得营养组合物或成长乳的正常食用将提供给婴儿或幼儿、或儿童，食用0.003g/天-3.9g/天、优选0.006g/天-3.25g/天或0.03g/天-1.95g/天或0.03g/天-1.3g/天或0.03g/天-1g/天，例如0.05g/天-1g/天的总日剂量。
对于早产、低出生体重和小于胎龄婴儿，日剂量优选为0.005g/kg体重/天至0.1g/kg体重/天，优选0.006g/kg-0.09g/kg体重/天或0.007g/kg-0.08g/kg体重/天或0.008g/kg-0.07g/kg体重/天或0.009g/kg-0.06g/kg体重/天或0.01g/kg-0.05g/kg体重/天或0.02g/kg-0.04g/kg体重/天，最优选0.034g/kg体重/天。
根据本发明的营养组合物或成长乳可还包含至少另外的低聚糖(即，除了必需存在于组合物中的岩藻糖基化低聚糖和N-乙酰化低聚糖以外)和/或至少一种纤维和/或至少一种其前体。另一种低聚糖和/或纤维和/或其前体可选自下述：低聚半乳糖(GOS)、低聚果糖(FOS)、菊粉、低聚木糖(XOS)、聚右旋糖、唾液酸化低聚糖、唾液酸、岩藻糖以及它们的任意组合。它们的量可介于组合物的0重量％和10重量％之间。在一个具体实施方案中，营养组合物或成长乳还可含有至少一种BMO(牛乳低聚糖)。
除了包含在低聚糖混合物中的低聚糖外，还可用以制备根据本发明的营养组合物或成长乳的合适商用产品包括FOS与菊粉的组合，诸如由BENEO公司以商标Orafti出售的产品，或者由泰莱公司(Tate&Lyle)以商标
出售的聚右旋糖。
在一个具体实施方案中，根据本发明的营养组合物或成长乳可包含唾液酸化低聚糖。可存在一种或若干种唾液酸化低聚糖。该唾液酸化低聚糖可选自包括下列各项的组：3'-唾液酸基乳糖(3-SL)、6'-唾液酸基乳糖(6-SL)以及它们的任意组合。在本发明的一些实施方案中，该组合物包含3-SL和6-SL。在一些具体的实施方案中，3'-唾液酸基乳糖(3-SL)和6'-唾液酸基乳糖(6-SL)之间的比率的范围可为介于5:1和1:10之间、或介于3:1和1:1之间、或介于1:1至1:10之间。在一些具体实施方案中，该组合物中的唾液酸化低聚糖为6'-唾液酸基乳糖(6-SL)。
可通过色谱技术或过滤技术从天然源诸如动物乳分离唾液酸化低聚糖。另选地，也可使用特定唾液酸基转移酶或唾液酸酶、神经氨酸苷酶，通过生物技术手段，通过基于酶(重组酶或天然酶)的发酵技术、通过化学合成或通过微生物发酵技术，来制备唾液酸化低聚糖。在后一种情况下，微生物可表达其天然酶和底物，或者可经工程化以产生相应的底物和酶。可使用单一微生物培养物或混合培养物。可以最初具有任意聚合度(DP)的受体底物开始形成唾液酸基低聚糖，从DP＝1开始。另选地，可通过由乳糖和游离N'-乙酰神经氨酸(唾液酸)的化学合成来产生唾液酸基乳糖。唾液酸基乳糖也可从例如日本的Kyowa HakkoKogyo商购获得。
在本发明的另一个优选的实施方案中，营养组合物或成长乳可包含0.005g/L-5g/L，或0.008g/L-2.5g/L、或0.01g/L-1g/L、或0.02g/L-0.7g/L，例如0.03g/L-0.5g/L的唾液酸化低聚糖。
基于干重，根据本发明的营养组合物或成长乳可含有0.004g-3.8g唾液酸化低聚糖/100g组合物，例如基于干重，可含有0.006g-1.9g或0.008g-0.8g或0.015g-0.5g唾液酸化低聚糖/100g组合物，例如可含有0.023g-0.4g唾液酸化低聚糖/100g组合物。
在本发明的一些具体实施方案中，基于干重，营养组合物或成长乳以低于0.1g/100g组合物的量包含唾液酸化低聚糖。
在一个具体实施方案中，唾液酸化低聚糖以一定量提供于本发明的营养组合物或成长乳中，使得营养组合物或成长乳的正常食用将提供给婴儿或幼儿、或儿童，食用0.003g/天-6.5g/天、优选0.005g/天-3.3g/天或0.006g/天-1.3g/天或0.01g/天-0.9g/天，例如0.018g/天-0.65g/天的总日剂量。
在本发明的一些具体实施方案中，营养组合物或成长乳不含任何唾液酸化低聚糖。
根据本发明的营养组合物或成长乳可任选地还包含至少一种低聚糖的前体。可存在一种或若干种低聚糖前体。例如，人乳低聚糖的前体为唾液酸、岩藻糖或者它们的混合物。在一些具体实施方案中，该组合物包含唾液酸。
在具体示例中，该营养组合物或成长乳包含0g/L至3g/L的低聚糖的前体，或0g/L至2g/L、或0g/L至1g/L、或0g/L至0.7g/L、或0g/L至0.5g/L、或0g/L至0.3g/L、或0g/L至0.2g/L的低聚糖的前体。以干重计，根据本发明的组合物可包含0g至2.1g低聚糖前体/100g组合物，例如0g至1.5g、或0g至0.8g、或0g至0.15g低聚糖前体/100g组合物。
本发明的营养组合物或成长乳可还包含至少一种益生菌(或益生菌菌株)，诸如益生细菌菌株。
最常用的益生微生物主要是以下属的大部分细菌和酵母：乳酸杆菌属菌种(Lactobacillus spp.)、链球菌属菌种(Streptococcus spp.)、肠球菌属菌种(Enterococcus spp.)、双歧杆菌属菌种(Bifidobacterium spp.)和酵母属菌种(Saccharomyces spp.)。
在一些具体实施方案中，益生菌为益生细菌菌株。在一些具体实施方案中，其特别地为双歧杆菌(Bifidobacteria)和/或乳酸杆菌(Lactobacilli)。
合适的益生菌细菌菌株包括得自芬兰瓦利奥公司(Valio Oy,Finland)的商标为LGG的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)ATCC 53103、鼠李糖乳杆菌CGMCC1.3724、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)CNCM I-2116、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)CNCM I-1225、新西兰BLIS科技有限公司(BLIS TechnologiesLimited,New Zealand)以商品名KI2销售的唾液链球菌(Streptococcus salivarius)DSM13084、丹麦克里斯蒂安汉森公司(Christian Hansen company,Denmark)以商标Bb 12特别销售的乳酸双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)CNCM 1-3446、日本森永乳业株式会社(Morinaga Milk Industry Co.Ltd.,Japan)以商标BB536销售的长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)ATCC BAA-999、丹尼斯克公司(Danisco)以商标Bb-03销售的短双岐杆菌(Bifidobacterium breve)、森永(Morinaga)以商标M-16V销售的短双岐杆菌、宝洁公司(Procter&GambIe Co.)以商标Bifantis销售的婴儿双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)，以及加拿大Rosell生物研究所(Institut Rosell-Lallemand)以商标R0070销售的短双岐杆菌。
基于干重，根据本发明的营养组合物或成长乳每g组合物可含有10e3cfu至10e12cfu的益生菌菌株、更优选介于10e7 cfu和10e12 cfu之间、诸如介于10e8 cfu和10e10 cfu之间的益生菌菌株。
在一个实施方案中，益生菌是活的。在另一个实施方案中，益生菌是非复制的或失活的。在一些其它实施方案中，可同时存在活的益生菌和失活的益生菌。还可添加益生菌组分和代谢物。
根据本发明的营养组合物可为例如婴儿配方食品、一段婴儿配方食品、较大或二段婴儿配方食品、成长乳、婴孩食物、婴儿谷物组合物、强化剂(诸如人乳强化剂)或补充剂。在一些具体实施方案中，本发明的组合物为旨在针对前4月龄或6月龄的婴儿配方食品、强化剂或补充剂。在一个优选的实施方案中，本发明的营养组合物是婴儿配方食品。
在一些其他实施方案中，本发明的营养组合物是强化剂。强化剂可为母乳强化剂(例如，人乳强化剂)或配方食品强化剂(诸如婴儿配方食品强化剂或较大/二段婴儿配方食品强化剂)。
当营养组合物是补充剂时，其可以单位剂量的形式提供。在此类情况下，特别有用的是，根据施用给婴儿或幼儿的每日剂量来限定N-乙酰化低聚糖和任选地其它低聚糖的量，诸如上文所述。
本发明的营养组合物可为固体(例如粉末)、液体或凝胶形式。
在一个具体实施方案中，营养组合物是粉末形式的补充剂，并且在小袋中提供或以糖浆形式提供。当补充剂为粉末形式时，其可包含载体。然而，优选的是补充剂不含载体。当补充剂为糖浆形式时，HMO优选溶解或悬浮于用柠檬酸盐酸化的水中。
根据本发明的营养组合物或成长乳通常含有蛋白质源。蛋白质的量可为1.6g/100kcal至3g/100kcal。在一些实施方案中，特别是当组合物旨在用于早产婴儿时，蛋白质的量可介于2.4g/100kcal和4g/100kcal之间或超过3.6g/100kcal。在一些其他的实施方案中，蛋白质的量可低于2.0g/100kcal，例如介于1.8g/100kcal至2g/100kcal之间，或者量低于1.8g/100kcal。
只要满足必需氨基酸含量的最低要求并确保令人满意的生长，蛋白质的类型被认为对本发明无关紧要。因此，可使用基于乳清、酪蛋白以及其混合物的蛋白质源，也可使用基于大豆的蛋白质源。就所关注的乳清蛋白质而言，蛋白质源可基于酸乳清或甜乳清或其混合物，并且可包含任何所需比例的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白。
在一些有利的实施方案中，蛋白质源以乳清为主(即超过50％的蛋白质来自乳清蛋白质，诸如60％或70％)。
该蛋白质可为完整的或水解的，或为完整蛋白质和水解蛋白质的混合物。所谓的术语“完整的”是指蛋白质的主要部分是完整的，即分子结构未发生改变，例如至少80％的蛋白质未发生改变，诸如至少85％的蛋白质未发生改变，优选至少90％的蛋白质未发生改变，甚至更优选至少95％的蛋白质未发生改变，诸如至少98％的蛋白质未发生改变。在一个具体实施方案中，100％的蛋白质未发生改变。
术语“水解的”是指在本发明的上下文中，蛋白质已被水解或分解成其组成氨基酸。该蛋白质可以是完全水解或部分水解的。例如，对于被认为处于发生牛乳变应性风险的婴儿或幼儿而言，提供部分水解的蛋白质(水解程度介于2％和20％之间)可能是可取的。如果需要水解的蛋白质，则可根据需要并且如本领域已知的那样进行水解过程。例如，可通过在一个或多个步骤中对乳清级分进行酶法水解来制备乳清蛋白质水解产物。如果用作原料的乳清级分基本上不含乳糖，则发现该蛋白质在水解过程期间经受少得多的赖氨酸封闭(lysine blockage)。这使得能够将赖氨酸封闭的程度从约15重量％的总赖氨酸减少至小于约10重量％的赖氨酸；例如约7重量％的赖氨酸，这大大地改善蛋白质源的营养质量。
在本发明的一个实施方案中，至少70％的蛋白质被水解，优选至少80％的蛋白质被水解，诸如至少85％的蛋白质被水解，甚至更优选至少90％的蛋白质被水解，诸如至少95％的蛋白质被水解，特别地至少98％的蛋白质被水解。在一个具体实施方案中，100％的蛋白质被水解。
在一个具体实施方案中，营养组合物的蛋白质是水解的、完全水解的或部分水解的。蛋白质的水解程度(DH)可为介于8和40之间、或介于20和60之间、或介于20和80之间，或超过10、20、40、60、80或90。
另选地，蛋白质组分可替换为混合物或合成氨基酸，例如用于早产或低出生体重婴儿。
在一个具体实施方案中，根据本发明的营养组合物或成长乳是低变应原组合物。在另一个具体实施方案中，根据本发明的组合物是低变应原营养组合物或成长乳。
根据本发明的营养组合物或成长乳通常含有碳水化合物源。这在本发明的营养组合物为婴儿配方食品的情况下是特别优选的。在这种情况下，可使用通常存在于婴儿配方食品中的任何碳水化合物源，诸如乳糖、蔗糖(sucrose)、糖精(saccharose)、麦芽糖糊精、淀粉以及它们的混合物，但是优选的碳水化合物源之一是乳糖。
根据本发明的营养组合物或成长乳通常含有脂质源。这在本发明的营养组合物为婴儿配方食品的情况下为特别相关的。在这种情况下，脂质源可为适合用于婴儿配方食品的任何脂质或脂肪。一些合适的脂肪源包括棕榈油、结构化甘油三酯油、高油酸葵花油和高油酸红花油、中链甘油三酯油。也可添加必需脂肪酸亚油酸和α-亚麻酸，以及少量含有大量预先形成的花生四烯酸和二十二碳六烯酸的油，诸如鱼油或微生物油。脂肪源中n-6脂肪酸与n-3脂肪酸的比例可为约5:1至约15:1；例如约8:1至约10:1。
本发明的营养组合物或成长乳可还含有被认为是日常饮食所必需的且以营养显著量的所必需的所有维生素和矿物质。已确定某些维生素和矿物质的最低需求。矿物质、维生素和任选地存在于本发明组合物中的其他营养物质的示例包括维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素E、维生素K、维生素C、维生素D、叶酸、肌醇、烟酸、生物素、泛酸、胆碱、钙、磷、碘、铁、镁、铜、锌、锰、氯、钾、钠、硒、铬、钼、牛磺酸和左旋肉碱。矿物质通常呈盐形式添加。特定矿物质和其它维生素的存在和量将根据目标群体而有所不同。
如有必要，本发明的营养组合物或成长乳可含有乳化剂和稳定剂，诸如大豆、卵磷脂、柠檬酸甘油单酯和柠檬酸甘油二酯等。
本发明的营养组合物或成长乳可还含有可能具有有益效果的其它物质，诸如乳铁蛋白、核苷酸、核苷等。
本发明的营养组合物或成长乳可还含有类胡萝卜素。在本发明的一些具体实施方案中，本发明的营养组合物不包含任何类胡萝卜素。
根据本发明的营养组合物或成长乳可以任何合适的方式制备。现将以举例的方式描述组合物。
例如，可通过将蛋白质源、碳水化合物源和脂肪源以适当的比例共混在一起来制备配方食品诸如婴儿配方食品。如果使用，则乳化剂可在此时加入。可在此时添加维生素和矿物质，但其通常在稍后添加以避免热降解。在共混之前，可先将任何亲脂性维生素、乳化剂等溶解于脂肪源中。然后可混入水(优选经受反渗透的水)，以形成液体混合物。水温适宜地在约50℃至约80℃的范围内以有助于分散成分。可使用可商购获得的液化剂来形成液体混合物。尤其是如果最终产物是液体形式，则可在此阶段加入岩藻糖基化低聚糖和N-乙酰化低聚糖。如果最终产物为粉末，可根据需要同样在此阶段添加这些成分。
然后，例如以两个阶段对液体混合物进行均质化。
然后，可对液体混合物进行热处理以减少细菌载量，例如通过将液体混合物快速加热至约80℃至约150℃的范围内的温度持续介于约5秒和约5分钟之间的持续时间。这可通过蒸汽注入、高压灭菌器或热交换器(例如，板式热交换器)来进行。
然后，例如通过急速冷却将液体混合物冷却至约60℃至约85℃。然后再次例如分两个阶段对液体混合物进行均质化，其中第一阶段的压力为约10MPa至约30MPa，并且第二阶段的压力为约2MPa至约10MPa。然后可将均质化的混合物进一步冷却以添加任何热敏组分，诸如维生素和矿物质。此时便利地调节均质化的混合物的pH和固体含量。
如果最终产物将为粉末，则将该均质化的混合物转移至合适的干燥装置，诸如喷雾干燥器或冷冻干燥器且将其转化为粉末。该粉末的水分含量应小于约5重量％。还可以或作为替代在此阶段加入岩藻糖基化低聚糖和N-乙酰化低聚糖，方法是通过将其与益生菌菌株(如果使用)干混，或通过以晶体的糖浆形式与益生菌菌株共混，然后对混合物进行喷雾干燥或冷冻干燥。
如果优选液体组合物，可对该均质化的混合物进行灭菌，然后在无菌条件下将其填充至合适的容器中或者先将其填充至容器中并且然后进行蒸馏。
在另一个实施方案中，本发明的组合物可为补充剂。补充剂可以是例如片剂、胶囊、锭剂或液体的形式。补充剂可还含有保护性亲水胶体(诸如胶类、蛋白质、改性淀粉)、粘结剂、成膜剂、包囊剂/材料、壁/壳材料、基质化合物、包衣、乳化剂、表面活性剂、增溶剂(油类、脂肪类、蜡类、卵磷脂类等)、吸附剂、载体、填充剂、共化合物、分散剂、润湿剂、加工助剂(溶剂)、流动剂、掩味剂、增重剂、胶凝剂和凝胶形成剂。补充剂可还含有常规的药物添加剂和佐剂、赋形剂和稀释剂，包括但不限于：水、任何来源的明胶、植物胶、木素磺酸盐、滑石、糖类、淀粉、***树胶、植物油、聚亚烷基二醇、风味剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、缓冲剂、润滑剂、着色剂、润湿剂、填充剂等。
另外，补充剂可含有适用于口服或非肠道施用的有机或无机载体材料，以及维生素、矿物质痕量元素和根据政府机构(诸如USRDA)推荐的其它微量营养素。
根据本发明的营养组合物用于婴儿或幼儿。婴儿或幼儿可为足月儿或早产儿。在一个具体实施方案中，本发明的营养组合物用于早产、具有低出生体重和/或小于胎龄出生(SGA)的婴儿或幼儿。在一个具体实施方案中，本发明的营养组合物用于早产婴儿、低出生体重婴儿和/或小于胎龄出生的婴儿(SGA)。
本发明的营养组合物可还用于剖腹产出生或经***分娩的婴儿或幼儿。
在一些实施方案中，根据本发明的组合物可用于离乳期之前和/或离乳期期间中。
营养组合物的施用(或给予或喂食)年龄和持续时间可根据需要而确定。
营养组合物可例如在婴儿出生后立即提供。本发明的组合物可还在婴儿的生命的头1周期间、或在生命的头2周期间、或在生命的头3周期间、或在生命的头1个月期间、或在生命的头2个月期间、或在生命的头3个月期间、或在生命的头4个月期间、或在生命的头6个月期间、或在生命的头8个月期间、或在生命的头10个月期间、或在生命的头1年期间、或在生命的头2年期间、或甚至更长时间内给予。在本发明的一些特别有利的实施方案中，营养组合物在婴儿出生后头4、6或12个月内给予(或施用于)所述婴儿。在一些其他实施方案中，本发明的营养组合物在出生之后几天(例如，1天、2天、3天、5天、10天、15天、20天…)、或几周(例如，1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周…)或几个月(例如，1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月…)给予。这可以尤其指婴儿是早产儿的情况，但这并不是必需的。
在一个实施方案中，将本发明的组合物作为母乳的补充组合物给予婴儿或幼儿。在一些实施方案中，婴儿或幼儿在至少头2周、头1个月、头2个月、头4个月或头6个月期间接收母乳。在一个实施方案中，本发明的营养组合物在用母乳提供营养的这段时间之后给予婴儿或幼儿，或者在用母乳提供营养这段时间内与母乳一起给予婴儿或幼儿。在另一个实施方案中，在至少一段时间期间(例如，在生命的第1个月、第2个月、第4个月之后)，在至少1个月、2个月、4个月或6个月期间，将该组合物作为唯一或主要的营养组合物给予婴儿或幼儿。
在一个实施方案中，本发明的营养组合物是完全营养组合物(满足个体全部或大部分营养需求)。在另一个实施方案中，营养组合物是用来例如补充人乳或者补充婴儿配方食品或较大/二段婴儿配方食品的补充剂或强化剂。
实施例
以下实施例示出了根据本发明所使用的组合物的一些特定实施方案。给出实施例仅出于说明目的，不应被理解为是对本发明的限制。
实施例1
下表1给出了根据本发明的营养组合物(例如，婴儿配方食品)的组成的示例。该组合物仅以例证的方式给出。
表1：实施例1的婴儿配方食品的组成
表1：根据本发明的营养组合物(例如，婴儿配方食品)的组成的示例
实施例2
研究说明
从查尔斯河实验室(Charles River Laboratories)购买三组时间配对的怀孕斯普拉-道来(Sprague-Dawley)雌性大鼠。在妊娠期的最后10天期间，使一组经受60％的食物限制，并且将它们的后代与正常喂食的大鼠交叉繁殖。通常在同一组雌鼠(dams)中喂食第二组怀孕雌鼠并对其后代进行交叉繁殖。紧接出生后(d＝2)，将出生的大鼠仔鼠(实验个体)分配给以下组中的一组：
·正常组(阳性对照)：由不受限制的雌鼠出生的正常体重后代，并且喂食正常的未补充饮食；
·IUGR组(阴性对照；N＝20)：在出生后用正常饮食喂食的IUGR大鼠；
·IUGR大鼠+HMO(测试组)：实验期间，幼崽由母鼠饲养21天，并补充HMO(2FL、LNnT或2FL和LNnT和混合物)。离乳期间，幼崽的喂养食谱以相同的HMO补充，参见以下细节。共有三个不同组：
-IUGR/2FL组(n＝10)：仅补充有2-FL；
-IUGR/LNnT组(n＝10)：仅补充有LNnT；以及
-IUGR/HMO混合组(n＝10)：补充有重量比为1:2的LNnT和2FL。
根据以下方案，从出生(d＝1)至多达出生后第57天(d＝57)喂养所有大鼠仔鼠：
·第1天至第6天：由雌鼠哺育所有组的大鼠(仅母乳)
·第7天至第21天：由雌鼠哺育所有大鼠(仅母乳)。而在测试组中，还以灌服法施用3g/kg体重的HMO：
-IUGR/2FL组为3g/kg体重的2FL；
-IUGR/LNnT组为3g/kg体重的LNnT；
-IUGR/HMO混合组为3g/kg体重的LNnT和2FL的混合物，重量比为1:2；
·第22天至第57天：给所有大鼠喂食如下表2中详述的饮食。
表2：从第22天至第57天喂食给不同组的饮食的组成
*来自研究饮食有限公司(Research Diets,Inc)
第57天在空腹6小时后处死大鼠，并收集小肠样品。在回肠样品上测量绒毛的长度。收集来自回肠的一个1cm样品(离盲肠1cm头部)并用PBS(Sigma D8537)冲洗。将该部分固定并相应地处理以用于组织学和形态学分析。
用苏木精和伊红对两个连续的4μm厚固定组织切片进行手动染色，以确定绒毛的长度。使用干式10倍物镜，使用计算机化图像分析仪***Axion Vision(版本4.8.2.0，
)通过光学显微镜捕获绒毛的高度。在两个不同的片段中测量十个随机选择的绒毛，以确定平均绒毛长度。
结论
在每只大鼠中测量的绒毛的长度在图1中示出。对于每个组，平均绒毛长度由水平线表示。可以看出，除了接受在回肠中具有显著更长的绒毛的2FL和LNnT的组合的组之外，所有组的平均绒毛长度相似。绒毛长度的这种增加与回肠的表面积增加相关联，这为大鼠仔鼠提供了改善的消化能力，特别是消化脂肪、蛋白质和碳水化合物。此类改善的消化、特别是脂肪消化受改善的肠肝循环、特别是胆汁盐的肠肝循环的促进，所述改善的肠肝循环与小肠、特别是回肠的表面积增加相关联。
这些结果表明，2FL和LNnT的混合物成功增加了具有生长延迟(由于母亲食物剥夺)的大鼠的回肠中的绒毛长度。用具有2FL和LNnT饮食喂养的生长迟缓的小狗的绒毛甚至比不面向宫内迟缓生长并喂食正常饮食的小狗的绒毛显著更长。
考虑到当单独使用时2FL和LNnT均未实现统计意义上的显著性效应，这些结果还示出2FL和LNnT之间的协同作用，而当两者组合使用时观察到统计意义上的显著性效应。
实施例3
制备用于早产婴儿的补充剂，诸如以提供以下日剂量：
-0.034g/kg体重/天的LNnT；以及
-0.34g/kg体重/天的2-FL。
Claims (20)
1.营养组合物或成长乳，所述营养组合物包含至少一种N-乙酰化低聚糖和至少一种岩藻糖基化低聚糖并且所述营养组合物用于在婴儿或幼儿中促进消化能力的方法中，所述成长乳包含至少一种N-乙酰化低聚糖和至少一种岩藻糖基化低聚糖并且所述成长乳用于在儿童中促进消化能力的方法中。
2.根据权利要求1所述的营养组合物或成长乳，所述营养组合物用于在婴儿或幼儿中、所述成长乳用于在儿童中促进消化脂肪、脂溶性维生素、蛋白质和碳水化合物的能力。
3.根据权利要求1或2所述的营养组合物或成长乳，所述营养组合物用于在婴儿或幼儿中、所述成长乳用于在儿童中改善肠肝循环，优选地胆汁盐的肠肝循环的方法中。
4.根据前述权利要求中任一项所述的营养组合物或成长乳，所述营养组合物用于促进婴儿或幼儿、所述成长乳用于促进儿童的小肠的表面区域的发育和/或生长的方法中。
5.根据前述权利要求中任一项所述的营养组合物或成长乳，所述营养组合物用于促进婴儿或幼儿、所述成长乳用于促进儿童的小肠中绒毛长度增加的方法中。
6.根据前述权利要求中任一项所述的营养组合物或成长乳，其中所述N-乙酰化低聚糖为乳糖-N-新四糖(LNnT)、乳糖-N-四糖(LNT)、对-乳糖-N-新六糖(对-LNnH)、二唾液酸基乳糖-N-四糖(DSLNT)或它们的任意组合。
7.根据权利要求6所述的营养组合物或成长乳，其中所述N-乙酰化低聚糖为乳糖-N-新四糖(LNnT)。
8.根据前述权利要求中任一项所述的营养组合物或成长乳，其中所述岩藻糖基化低聚糖选自下述：2’-岩藻糖基乳糖、3’-岩藻糖基乳糖、二岩藻糖基乳糖、乳糖-N-岩藻五糖I、乳糖-N-岩藻五糖II、乳糖-N-岩藻五糖III、乳糖-N-岩藻五糖V、乳糖-N-岩藻六糖、乳糖-N-二岩藻六糖I、岩藻糖基乳糖-N-六糖、岩藻糖基乳糖-N-新六糖I、岩藻糖基乳糖-N-新六糖II、二岩藻糖基乳糖-N-六糖I、二岩藻糖基乳糖-N-新六糖I、二岩藻糖基乳糖-N-新六糖II、岩藻糖基-对-乳糖-N-六糖、以及它们的任意组合。
9.根据权利要求8所述的营养组合物或成长乳，其中所述岩藻糖基化低聚糖包含2'-岩藻糖基表位。
10.根据权利要求8或9中任一项所述的营养组合物或成长乳，其中所述岩藻糖基化低聚糖为2'-岩藻糖基乳糖(2'FL)。
11.根据前述权利要求中任一项所述的营养组合物或成长乳，其包含2'-岩藻糖基乳糖和乳糖-N-新四糖(LNnT)，或包含由2'-岩藻糖基乳糖(2'FL)和乳糖-N-新四糖(LNnT)组成的低聚糖混合物。
12.根据前述权利要求中任一项所述的营养组合物或成长乳，其中所述N-乙酰化低聚糖和所述岩藻糖基化低聚糖以1:20至2:1，优选地1:15至1:1，更优选地1:10至1:2的N-乙酰化低聚糖:岩藻糖基化低聚糖的比率存在，最优选地所述比率为1:2。
13.根据前述权利要求中任一项所述的营养组合物或成长乳，其中：
a.所述一种或多种岩藻糖基化低聚糖的总量为0.005-5g/L所述组合物，和/或以干重计，总量为0.004-3.8g/100g所述组合物；和/或
b.所述一种或多种N-乙酰化低聚糖的总量为0.1-2.5g/L所述组合物，和/或以干重计，总量为0.08-1.9g/100g所述组合物。
14.根据前述权利要求中任一项所述的营养组合物或成长乳，其中：
a.所述一种或多种岩藻糖基化低聚糖的总量为0.02-2g/L所述组合物，和/或以干重计，总量为0.015-1.5g/100g所述组合物；和/或
b.所述一种或多种N-乙酰化低聚糖的总量为0.5-1g/L所述组合物，和/或以干重计，总量为0.4-0.8g/100g所述组合物。
15.根据前述权利要求中任一项所述的营养组合物或成长乳，其中：
a.所述一种或多种岩藻糖基化低聚糖的总量为0.1-2.5g/L所述组合物，和/或以干重计，总量为0.08-1.9g/100g所述组合物；和/或
b.所述一种或多种N-乙酰化低聚糖的总量为0.5-0.8g/L所述组合物，和/或以干重计，总量为0.4-0.6g/100g所述组合物。
16.根据前述权利要求中任一项所述的营养组合物或成长乳，其包含至少另一种低聚糖和/或纤维和/或它们的前体，所述至少另一种低聚糖和/或纤维和/或它们的前体选自下述：低聚半乳糖(GOS)、低聚果糖(FOS)、低聚木糖(XOS)、菊粉、聚右旋糖、唾液酸化低聚糖、唾液酸、岩藻糖以及它们的任意组合。
17.根据前述权利要求中任一项所述的营养组合物或成长乳，所述组合物还包含至少一种益生菌，所述至少一种益生菌的量为103至1012cfu/g所述组合物(干重)。
18.根据前述权利要求中任一项所述的营养组合物，其中所述营养组合物为婴儿配方食品、一段婴儿配方食品、较大或二段婴儿配方食品、成长乳、婴孩食品、婴儿谷物组合物、强化剂或补充剂。
19.根据前述权利要求中任一项所述的营养组合物，其中所述婴儿为早产婴儿、具有低出生体重的婴儿、小于胎龄出生的婴儿(SGA)和/或生长迟缓的婴儿或幼儿。
20.根据权利要求19所述的营养组合物，其中所述婴儿是IUGR婴儿。
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