CN111426645A - 一种快速测定植株不同器官氮含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定植株不同器官氮素含量的方法。该方法包括:取植株样品并按照器官分离,样品烘干后磨粉过筛;利用高光谱相机获取粉末样品的反射率光谱;同时采用凯氏定氮法测定样品中的氮含量;建立氮含量的光谱预测模型。本方法对小麦植株不同器官进行氮含量测定,建立器官特异的氮含量预测模型可以有针对性的开展器官间氮素转移研究。本方法利用光谱相机进行反射率光谱数据获取,一方面对样品量要求小,另外可以同时进行多组样品采集,提高检测通量。本方法采用未经处理的原始光谱进行预测模型构建,采用开源的算法进行模型构建,简化了光谱分析的门槛,使光谱技术可以更好的应用到农学技术领域。
Description
技术领域
本发明涉及农业技术领域,尤其涉及一种快速测定植株不同器官氮含量的方法。
背景技术
小麦是我国重要的粮食作物,2019年全国小麦总产量1.3亿吨,仅次于玉米和水稻。而且小麦是北方人民主食,为人们提供了充足的能量来源和丰富的营养供应。同时其营养价值全面,富含多种蛋白质、矿物质和维生素等。氮素是小麦体内第一大矿质元素,在小麦生长发育、产量与品质的形成中起着十分关键的作用。一方面,氮素作为叶绿素和一些功能蛋白的重要组成部分,参与小麦发育生长程中的光合作用和其他生理代谢过程,并直接决定最终产量。另一方面,氮素还参与小麦籽粒中醇溶蛋白和谷蛋白等结构蛋白的组成,其含量的高低决定了小麦籽粒蛋白品质的优劣。通过氮素的养分管理措施,可以对小麦的产量和蛋白品质进行调控,从而达到高产优质的生产目标。而精准的氮素管理则需要以准确快速的氮含量测定为前提。利用获得的小麦氮素含量信息提前了解小麦生长状态,结合小麦氮素吸收规律,适时适量追施氮肥,从而达到高产优质的目的。然而目前植物氮含量测定方法大多采用传统的化学方法进行,操作步骤繁琐,且耗费时间长,很难满足植物生长管理的需求。因此,亟待需要一种能够快速测定植株氮素的方法。此外,植物体内氮素分布广泛,叶片和非叶器官中具有,且执行的功能各有不同。以往的单纯叶片氮含量的测定不能满足精准评估植物体内氮素的需求,因此有必要将植株各个器官分离并同时进行测定氮素测定。
光谱分析作为一种化学计量手段在定量分析化学成分方面已经有了较多应用,并取得很好的效果。利用样品的光学特性进行化学成分定量分析具有快速和环保的优点,同时还节约成本,降低环境污染,减少劳动力和时间的消耗。常用的近红外光谱分析仪对样品量要求高,而且每次仅能采集一个样本,在一定程度上限制了应用范围。随着技术的发展,基于光谱成像技术的高光谱相机弥补了近红外光谱分析仪的缺陷。一方面,高光谱相机包含可见光和近红外两个波段,光谱信息比单纯的近红外光谱要丰富。另一方面,高光谱相机与近红外光谱仪相比,对样品量需求少,仅需要3-5g样品即可满足要求。此外,高光谱相机可以同时对多个样品进行拍照获取其光谱,这样极大的减小了光谱采集的工作量。目前,利用光谱对氮含量的监测已有相关报道,而大部分研究仅关注植物整体或者叶片器官的氮含量,很少针对植株不同器官开展氮含量的精准预测。
发明内容
本发明的目的是提供一种快速测定植株不同器官氮素含量的方法。
本发明所提供的测定植株不同器官氮素含量的方法,包括如下步骤:
1)采集不同品种、生长条件和发育阶段的地上部植株;
2)将步骤1)中的植株按照器官分为若干部分,将分离后的植株器官样品分别烘干至恒重,称重;
3)将步骤2)烘干的植株器官样品各自粉碎,过筛,得到不同植株器官粉末样品,备用;
4)将步骤3)制得的粉末样品分别置于高光谱成像采集***中,利用高光谱相机进行高光谱图像获取,将获得的高光谱原始图像经过辐射定标和波长校正后得到反射率光谱图像,所得反射率光谱图像中每个像素对应一组反射率光谱,选择反射率光谱图像中每个样品中心区域,得到该样品的平均反射率光谱;
5)称取步骤3)制得的不同植株器官粉末样品,利用凯氏定氮法进行全氮测定;依据样品质量,分别计算不同植株器官粉末样品的氮含量(即氮浓度);
6)基于步骤4)获得的样品的平均反射率光谱及步骤5)获得的对应的该植株器官粉末样品的氮含量,分别构建光谱与氮含量的回归模型,共不同器官的回归模型;
7)采集氮素含量待测的植株器官,烘干至恒重,粉碎,过筛;将得到的粉末样品置于高光谱成像采集***中,获取高光谱图像,由高光谱图像得到样品的平均反射率光谱;将所得平均反射率光谱输入建立好的模型,预测出该植株器官的氮素含量。
上述方法步骤1)中,所述植株具体可为小麦植株;
所述植株为小麦植株,
所述小麦品种具体可为济麦22和农大399;
所述生长条件可为5种灌溉模式,即播种后不灌溉、起身期灌溉、拔节期灌溉、起身期和开花期灌溉以及拔节期和开花期灌溉,其中每个灌溉时期单次灌水量为75mm;
所述发育阶段为开花期至成熟期;
步骤1)中地上部植株的样本数量为60-300,具体可为150;
上述方法步骤2)中,所述植株为小麦植株,
所述不同器官为穗(不含籽粒,如无特殊说明,以下所述穗器官均为不含籽粒的穗)、旗叶、倒二叶、倒三叶、余叶(其余所有叶)、倒一节(包含叶鞘,下同)、倒二节、倒三节和余节(其余所有节间)9个部分的器官;
所述烘干的具体操作可为:放入105℃烘箱15分钟,然后烘箱温度调80℃烘干至恒重;
上述方法步骤3)中,所述过筛为过100目筛;
上述方法步骤4)中,所述高光谱相机型号为SCO710-VP,波段范围为375-1050nm,每隔5nm一个波段,共计128个波段;
所述高光谱图像一次采集样品大于等于1个;
上述方法步骤5)中,所述凯氏定氮法采用福斯全自动定氮仪Kjeltec 8400进行。
上述方法步骤6)中,采用偏最小二乘回归法构建模型;
模型构建前将全部数据的75%划分为测试集,剩余的25%为验证集,测试集用于构建模型,验证集用于验证模型效果;
为保证测试集和验证集数据内部样本数据分布的均匀性,数据集划分时按照取样时间点进行分层采样;
模型训练过程中,采用10次5折交叉验证进行模型输入参数的控制,防止出现过拟合
所述高光谱为包含可见光与近红外两个波段的原始光谱,未经预处理。
本发明提供了上述方法在植株不同器官氮素快速测定中的应用;所述应用中,所述植株可为小麦植株。
本发明可以快速高效的测定植株中氮素,针对不同器官进行特异性建模,利用本方法建立的氮含量预测模型精度(R2)可达0.92。本发明方法还可以针对不同生长条件的其他作物的各个不同器官进行氮含量预测,操作简单,易于实现。
本发明方法对植株不同器官进行氮含量测定,建立器官特异的氮含量预测模型可以有针对性的开展器官间氮素转移研究。本方法利用光谱相机进行反射率光谱数据获取,一方面对样品量要求小,另外可以同时进行多组样品采集,提高检测通量。本方法采用未经处理的原始光谱进行预测模型构建,采用开源的算法进行模型构建,简化了光谱分析的门槛,使光谱技术可以更好的应用到农学技术领域。
附图说明
图1为9个不同器官的平均光谱和光谱变异范围。
图2为模型预测值与真实值比较。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明,但本发明并不局限于此。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法;下述实施例中所用的试剂、材料等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
实施例1、基于高光谱图像的小麦叶片氮含量预测,步骤如下:
1)试验样本及试验处理:采样时间为2019年,地点为中国农业大学河北吴桥实验站,小麦品种为济麦22(高产抗寒)和农大399(生长发育快抗旱)。灌溉模式分为播种后不灌溉、起身期灌溉、拔节期灌溉、起身期和开花期灌溉以及拔节期和开花期灌溉。每个灌溉时期单次灌水量为75mm。所有处理施肥方式和施肥量均相同。
2)样本采集:从小麦开花期开始,每隔5天采集一次样本,直至成熟。样本采集时每个实验处理选取2m2区域,将小麦地上部植株取回室内,并按照叶片位置分为旗叶、倒二叶、倒三叶和余叶。将分离后的小麦植株器官样品放入105℃烘箱15分钟进行杀青,然后烘箱温度调80℃烘干至恒重,取出称重。烘干样品用高速粉样机粉碎,过100目筛,用于植株全氮测定和高光谱图像采集。
3)光谱数据采集:将粉末样品放置于高光谱成像采集***中,利用高光谱相机进行高光谱图像获取。每组图像采集时,同时放置多个粉末样品。高光谱原始图像经过辐射定标和波长校正后得到反射率光谱图像。反射率光谱图像中,每个像素对应一组反射率光谱。选择反射率光谱图像中每个样品中心区域的样品图像,得到该样品的平均反射率光谱。
4)氮含量化学法测定:将粉末样品称取一定质量,利用凯氏定氮法进行全氮测定;依据样品质量,计算氮含量(即氮浓度)。
5)数据处理与建立预测模型:依据获得的样品氮含量实测数据和光谱反射率数据,建立反射率光谱对氮含量的回归预测模型。模型建立所用算法为偏最小二乘回归算法。各不同位置叶片分别建立单独模型。模型构建前将全部数据的75%划分为测试集,剩余的25%为验证集,测试集用于构建模型,验证集用于验证模型效果。为保证测试集和验证集数据内部样本数据分布的均匀性,数据集划分时按照取样时间点进行分层采样。模型训练过程中,采用10次5折交叉验证进行模型输入参数的控制,防止出现过拟合。
6)模型评估:以验证集数据评估模型效果。评价指标包括决定系数R2和均方根误差(RMSE),其中R2越大,模型准确率越高,RMSE越小,模型精度越高。
实施例2、基于高光谱图像的小麦节间氮含量预测
除在步骤2)中样品部位分为倒一节、倒二节、倒三节和余节(其余所有节间)外,其他条件均相同。
实施例3、基于高光谱图像的小麦穗氮含量预测
除在步骤2)中样品部位分离穗外,其他条件均相同。
图1为9个不同器官的平均光谱和光谱变异范围。
图2为针对9个不同器官的模型预测值与真实值比较。
表1小麦不同器官实测氮含量(单位:g/kg)
器官 | 均值 | 标准差 | 最小值 | 最大值 |
旗叶 | 34.8 | 11.1 | 8.72 | 50.7 |
倒二叶 | 29.2 | 10.9 | 7.52 | 42.9 |
倒三叶 | 23.2 | 9.62 | 7.53 | 36.9 |
余叶 | 16 | 5.08 | 9.04 | 28 |
倒一节 | 13.1 | 4.07 | 4.36 | 23.8 |
倒二节 | 7.08 | 1.92 | 2.79 | 11.9 |
倒三节 | 5.39 | 1.15 | 2.68 | 8.82 |
余节 | 5.55 | 0.885 | 3.95 | 7.87 |
穗 | 11.2 | 3.82 | 4.43 | 18.6 |
表1为采用凯氏定氮法得到的实测氮含量数据。结果表明,叶片中氮含量整体高于节间和穗部氮含量,而穗部氮含量又高于节间。而且三种类型器官中,旗叶的氮含量变异范围最大(极差为41.98g/kg),节间氮含量变异范围较小,且变化最小的为余节(极差为3.92g/kg)。
表2小麦不同叶片、节间和穗氮含量光谱预测模型参数对比
Bias为所有预测值的均值与真实值均值的差,Bias绝对值越小,模型预测越准。
表2显示各不同器官氮含量的光谱预测结果。从结果可以看出,穗和叶片中的旗叶、倒二叶、倒三叶光谱预测效果最好,决定系数R2均大于0.92,而节间部位中的倒一节也表现较好,决定系数R2为0.88。表明该方法可以用于不同器官的氮含量预测,尤其是穗、旗叶、倒二叶、倒三叶和倒一节等器官的氮含量预测。
Claims (8)
1.一种测定植株不同器官氮素含量的方法,包括如下步骤:
1)采集不同品种、生长条件和发育阶段的地上部植株;
2)将步骤1)中的植株按照器官分为若干部分,将分离后的植株器官样品分别烘干至恒重,称重;
3)将步骤2)烘干的植株器官样品各自粉碎,过筛,得到不同植株器官粉末样品,备用;
4)将步骤3)制得的粉末样品分别置于高光谱成像采集***中,利用高光谱相机进行高光谱图像获取,将获得的高光谱原始图像经过辐射定标和波长校正后得到反射率光谱图像,所得反射率光谱图像中每个像素对应一组反射率光谱,选择反射率光谱图像中每个样品中心区域,得到该样品的平均反射率光谱;
5)称取步骤3)制得的不同植株器官粉末样品,利用凯氏定氮法进行全氮测定;依据样品质量,分别计算不同植株器官粉末样品的氮含量;
6)基于步骤4)获得的样品的平均反射率光谱及步骤5)获得的对应的该植株器官粉末样品的氮含量,分别构建光谱与氮含量的回归模型,共不同器官的回归模型;
7)采集氮素含量待测的植株器官,烘干至恒重,粉碎,过筛;将得到的粉末样品置于高光谱成像采集***中,获取高光谱图像,由高光谱图像得到样品的平均反射率光谱;将平均反射率光谱输入建立好的模型,预测出该植株器官的氮素含量。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤1)中,所述植株为小麦植株;
所述生长条件为5种灌溉模式,即播种后不灌溉、起身期灌溉、拔节期灌溉、起身期和开花期灌溉以及拔节期和开花期灌溉,其中每个灌溉时期单次灌水量为75mm;
所述发育阶段为开花期至成熟期。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:步骤2)中,所述植株为小麦植株;
所述植株不同器官为穗、旗叶、倒二叶、倒三叶、余叶、倒一节、倒二节、倒三节和余节。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其特征在于:步骤2)中,所述烘干的操作为:放入105℃烘箱15分钟,然后烘箱温度调80℃烘干至恒重。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法,其特征在于:步骤4)中,所述高光谱图像的光谱范围为375-1050nm。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法,其特征在于:采用偏最小二乘回归法构建模型。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法在植株不同器官氮素快速测定中的应用。
8.根据权利要求7所述应用,其特征在于:所述植株为小麦植株。
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