CN111303283A

CN111303283A - 抗il-17a抗体及其应用

Info

Publication number: CN111303283A
Application number: CN201811515045.7A
Authority: CN
Inventors: 姚剑; 蒙丹; 冯辉; 姚盛; 武海
Original assignee: Shanghai Junshi Biosciences Co Ltd; Suzhou Junmeng Biosciences Co Ltd
Current assignee: Shanghai Junshi Biosciences Co Ltd; Suzhou Junmeng Biosciences Co Ltd
Priority date: 2018-12-12
Filing date: 2018-12-12
Publication date: 2020-06-19
Also published as: US20230159632A1; IL283881A; CN113166239B; CN113166239A; CA3123124A1; EP3896086A1; BR112021011257A2; EP3896086A4; ZA202104048B; WO2020119707A1; JP2022513224A; AU2019397309A1; KR20210102946A; SG11202106128TA; MX2021007028A

Abstract

本发明提供了以高亲和力与IL‑17A特异性结合的抗体或其功能性片段。还提供了编码本发明抗体或其功能性片段的核酸分子，用于表达本发明抗体或其功能性片段的表达载体和宿主细胞，以及本发明抗体或其功能性片段的生产方法。本发明还提供了包含本发明抗体或其功能性片段的药物组合物，以及使用本发明的抗体或其功能性片段治疗免疫功能失调性疾病的方法。

Description

抗IL-17A抗体及其应用

技术领域

本发明涉及特异性结合IL-17A的抗体及其抗原结合片段。本发明更具体地涉及抑制IL-17A介导的生物活性的抗体及其抗原结合片段，以及使用所述抗体或其抗原结合片段的组合物和治疗相关疾病的方法。本发明更具体地涉及应用抗IL-17A抗体或其抗原结合片段来治疗免疫性病理性疾病，所述疾病包括自身免疫性和炎性疾病，诸如类风湿性关节炎、银屑病、强制性脊柱炎、多发性硬化症、***性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎或慢性阻塞性肺病、哮喘、感染性肉芽肿、囊性纤维化或癌症。

背景技术

白细胞介素17(Interleukin 17,IL-17)，也称为CTLA-8或IL-17A,在免疫***中扮演着关键的协调作用。IL-17家族共六个成员，包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E和IL-17F，都含有至关重要的4个高度保守的半胱氨酸残基，但成员之间生物学效应差异较大，其中，IL-17A和IL-17F同源性和生物学功能最接近，目前研究也最深入。体内表达的IL-17A具有23个氨基酸的N-末端信号肽，其经切割产生成熟的IL-17A。成熟的IL-17A通过二硫键连接，一般以同源二聚体形式分泌与存在，有时也与IL-17F连接形成异源二聚体IL-17AF。一般IL-17A或IL-17指IL-17A同源二聚体蛋白，其主要由辅助性T细胞17(Thelper 17,Thl7)产生，也可以由其它免疫细胞如γδT细胞、LTi(Lymphoid Tissueinducer cells)、ILCs(Innate Lymphoid Cells)和NKT(Natural Killer T)细胞合成分泌(Cua DJ,Tato CM.Nature reviews.2010,10:479–489)。IL-17A的表达调控非常复杂，研究发现细胞因子IL-6、IL-1β和TGFβ等诱导初始CD4⁺T细胞分化为Th17，但此时Th17细胞稳定性弱，分泌少量IL-17A，其组织损伤作用小；当IL-23存在时，其通过促进Th17细胞稳定性并持续分泌IL-17A、上调促炎因子(IL-22、CSF-2和IFN-γ)和下调抑炎因子(IL-2、IL-27和IL-12)表达等途径，引起炎性爆发和组织损伤(McGeachy MJ,et al.Natureimmunology.2009,10:314–324)。所以，当组织中IL-23异常表达时，IL-17A途径在组织损伤中发挥着关键性的作用。

IL-17一般定点分泌，在局部组织中与靶细胞表面的IL-17受体(IL-17recptor，IL-17R)结合发挥效应。IL-17R家族包括IL-17RA、IL-17RB、IL-17RC、IL-17RD及IL-17RE五个成员，广泛表达于多种细胞膜上(Iwakura Y,et al.Immunity.2011；34:149–162)。IL-17主要与非造血细胞来源的细胞(如上皮细胞、***)表面的IL-17RA/IL-17RC复合体结合发挥效应(Ishigame H,et al.Immunity.2009；30:108–119)，促进细胞分泌细胞因子(诸如IL-6、G-CSF、GM-CSF、IL-10、TGF-β、TNF-α)、趋化因子(包括IL-8、CXCL1和MCP-1)和***素(例如，PGE2)，诱导中性粒细胞和巨噬细胞聚集，释放活性氧类物质(ROS)而损伤组织(Stark MA,et al.Immunity.2005；22:285–294)。

自身免疫性疾病严重威胁着人类的健康，如银屑病、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、克罗恩病、多发性硬化病等。研究发现，IL-17的分泌失调与该类疾病发生发展密切相关。靶向IL-17的抗体通过抑制IL-17-IL-17R信号通路，能有效地缓解自身免疫性疾病的症状(Sarah L,et al.Nat Rev Immunol.2014,14(9):585–600)。诺华公司开发的Cosentyx(secukinumab)是全球首个IL-17单抗，获批的适应症包括中度至重度斑块型银屑病(plaque psoriasis)，为广大银屑病群体提供一个重要的一线生物治疗选择。但是，开发结构不同、疗效更优、适应症更广等不同特性的抗IL-17抗体，治疗银屑病、类风湿性关节、强直性脊柱炎等自身免疫相关病症以及IL-17相关的其它疾病具有迫切的需求和重要的意义。

发明概述

本发明提供一种能特异性结合人IL-17A的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个选自SEQ ID NO：1-24、60-65的互补决定区(CDR)序列。

在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个选自SEQ ID NO：1-3、4-6、7-9、10-12或60-62的重链CDR结构域和/或至少一个选自SEQ ID NO：13-15、16-18、19-21、22-24或63-65的轻链CDR结构域。

在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，包含重链可变区(VH),其特征为所述的重链可变区包含至少一个选自SEQ ID NO：1、4、7、10或60的HCDR1，至少一个选自SEQ ID NO：2、5、8、11或61的HCDR2，和至少一个选自SEQ ID NO：3、6、9、12或62的HCDR3。

在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，包含重链可变区(VH),其特征为所述的重链可变区包含的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列选自以下序列中的一组：

组号	HCDR1	HCDR2	HCDR3
				A	SEQ ID NO：1	SEQ ID NO：2	SEQ ID NO：3
B	SEQ ID NO：4	SEQ ID NO：5	SEQ ID NO：6
				C	SEQ ID NO：7	SEQ ID NO：8	SEQ ID NO：9
D	SEQ ID NO：10	SEQ ID NO：11	SEQ ID NO：12
				E	SEQ ID NO：60	SEQ ID NO：61	SEQ ID NO：62

在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区(VL),其特征为所述的轻链可变区包含至少一个选自SEQ ID NO：13、16、19、22或63的LCDR1，至少一个选自SEQ ID NO：14、17、20、23或64的LCDR2，和至少一个选自SEQ ID NO：15、18、21、24或65的LCDR3。

在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区(VL),其特征为所述的轻链可变区包含的LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列选自以下序列中的一组：

组号	LCDR1	LCDR2	LCDR3
				F	SEQ ID NO：13	SEQ ID NO：14	SEQ ID NO：15
G	SEQ ID NO：16	SEQ ID NO：17	SEQ ID NO：18
				H	SEQ ID NO：19	SEQ ID NO：20	SEQ ID NO：21
I	SEQ ID NO：22	SEQ ID NO：23	SEQ ID NO：24
				J	SEQ ID NO：63	SEQ ID NO：64	SEQ ID NO：65

在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其特征为所述的可变区包含的6个CDR的氨基酸序列选自以下序列中的一组：

在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其特征为所述的重链可变区氨基酸序列至少一个选自SEQ IDNO：25、26、27、28、33、35、38或40，和/或所述的轻链可变区(LV)氨基酸序列至少一个选自序列编号SEQ ID NO：29、30、31、32、34、36、38、39或41。

在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其特征为所述的可变区氨基酸序列选自以下序列中的一组：

组号	VH	VL
			1	SEQ ID NO：25	SEQ ID NO：29或30
2	SEQ ID NO：26	SEQ ID NO：31
			3	SEQ ID NO：27或28	SEQ ID NO：32
4	SEQ ID NO：33或35	SEQ ID NO：34
			5	SEQ ID NO：35	SEQ ID NO：36
6	SEQ ID NO：37	SEQ ID NO：38或39
			7	SEQ ID NO：40	SEQ ID NO：41

在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链(LC)和/或重链(HC)，其特征为所述的重链(HC)氨基酸序列选自序列编号SEQ ID NO：42、44、46或49，和/或所述的轻链(LC)氨基酸序列选自序列编号SEQ ID NO：43、45、47、48或50。

在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链(LC)和重链(HC)，其特征为所述的轻链的氨基酸序列为序列编号SEQ ID NO：43和重链的氨基酸序列为序列编号SEQ ID NO：42或44；轻链的氨基酸序列为序列编号SEQ ID NO：45和重链的氨基酸序列为序列编号SEQ ID NO：44；轻链的氨基酸序列为序列编号SEQ ID NO：47或48和重链的氨基酸序列为序列编号SEQ ID NO：46；或轻链的氨基酸序列为序列编号SEQ ID NO：50和重链的氨基酸序列为序列编号SEQ ID NO：49。

在一个实施方式中，本发明所述的抗体为完全抗体，优选为IgG，更优选为IgG4型。

在一个具体的实施方式中，本发明所述的抗体为1F8、2B2、2F5、ch1、ch2、ch16、hu31、hu43、hu44、hu59、hu60或hu250。

在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，其特征为：a)特异性结合IL-17A同源二聚体和IL-17AF异源二聚体；b)阻断IL-17A与其受体之间的结合；和/或d)抑制IL-17A介导的生物活性。

在一个实施方式中，本发明所述的IL-17A、IL-17AF或IL-17F选自食蟹猴、小鼠或人的一种或多种。

在一个实施方案中，本发明所述的抗体或抗原结合片段不特异性结合a)人IL-17F同二聚体、IL-17B同二聚体、IL-17C同二聚体、IL-17D同二聚体、IL-17E同二聚体的任一种或多种，和/或b)食蟹猴IL-17F同二聚体、小鼠IL-17F同二聚体的任一种或多种。

在另一方面，本发明所述的抗体或其抗原结合片段，具有抑制IL-17A与其受体之间的结合和/或降低由IL-17A介导的细胞信号转导和/或生物活性的功能。

在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合蛋白在体外活性评估时，能够抑制IL-17A诱导上皮细胞分泌CXCL1。

在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段在体内活性评估时，能够抑制IL-17A诱导小鼠体内分泌CXCL1。在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合蛋白在体内活性评估时，能够在咪喹莫特诱导的银屑病实验模型中抵抗小鼠发病，小鼠银屑病发病的临床评分及耳部肿胀程度的显著降低。

在一个实施方式中，本发明所述的分离抗体或其抗原结合片段在体内评估时，能够在抗原诱导的关节炎实验模型诸如食蟹猴AIA-模型中抑制膝关节肿胀。

本发明所述抗体或其抗原结合片段，优选hu31、hu43、hu44、hu59、hu60或hu250作为药物的用途，更优选用于治疗由IL-17A介导的和/或通过抑制IL-17A信号转导来治疗病理性疾病的药物中的用途。

在一个具体实施方式中，由IL-17A介导的病理性疾病是炎性病症或病况，诸如关节炎、类风湿性关节炎、银屑病、强直性脊柱炎、慢性阻塞性肺病、***性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎、哮喘、多发性硬化或囊性纤维化等。

在本发明提供了治疗由IL-17A介导的病理性疾病的方法，所述方法包括施用有效量的本发明所述的分离的抗体或其抗原结合片段，优选为hu31、hu43、hu44、hu59、hu60或hu250抗体，以使所述病况被缓解。

本发明还涉及用于产生本发明的抗体或其抗原结合片段的方法。此类方法包括编码本发明的抗体或蛋白质的至少重和/或轻可变区的分离的核酸分子，或包含此类核酸的克隆性表达载体，特别是用于在宿主细胞中重组产生本发明所述的抗体或蛋白质例如hu31、hu43、hu44、hu59、hu60或hu250。

本发明还涉及包含一种或多种上述克隆性载体或表达载体的宿主细胞以及用于产生本发明的抗体或包含其抗原结合片段的蛋白质，具体地比如产生hu31、hu43、hu44、hu59、hu60或hu250抗体的方法，所述方法包括培养所述宿主细胞、纯化和回收所述抗体或蛋白质。

在一个实施方式中，本发明所述的分离抗体或包含其抗原结合片段的蛋白质缀合于其它活性部分。

在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段可以是单克隆抗体或其抗原结合片段，优选嵌合抗体、人源化抗体或人抗体或其部分。

在本发明的一方面，提供了药物组合物，其包含与一种或多种可药用的赋形剂、稀释剂或载体组合的本发明实施方式所述的抗体或包含其抗原结合片段的蛋白质。

在一个实施方式中，所述药物组合物包含一种或多种额外的活性成分。

在一个具体实施方式中，所述药物组合物是冻干粉剂。在另一个具体实施方式中，所述药物组合物是包含治疗上可接受的量的本发明所述的抗体或分子的稳定的液体制剂。

在一个实施方式中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段用于制备用于治疗任何一种由IL-17A介导的病理性病症的药物中的用途。附图简述

图1 人IL-17A-mFc重组蛋白的SDS-PAGE电泳图

图2 FACS检测人IL-17A-mFc与293F细胞上的IL-17RA结合(MFI表示平均荧光强度,实验组v.s control:7695vs308)。

图3 ELISA检测杂交瘤抗体阻断IL-17A介导的体内生物活性作用。其中杂交瘤抗体明显抑制IL-17A诱导小鼠表达CXCL1。

图4 ELISA检测嵌合抗体与人IL-17A的结合作用。其中嵌合抗体ch1，ch2，ch4，ch7和ch16与人IL-17A结合具有较高的特异性，其EC50分别为6.62ng/ml，5.17ng/ml，88.48ng/ml，39.96ng/mL和15.42ng/mL。

图5 FACS检测嵌合抗体阻断人IL-17A与293F细胞上的IL-17RA结合作用。其中嵌合抗体ch1，ch2，ch7和ch16具有高效的阻断作用，其IC50分别为4.46ug/ml，3.145ug/ml，1.220ug/ml和1.445ug/ml。

图6 ELISA检测人源化抗体与人IL-17A的结合作用。其中抗体hu31，hu43，hu44，hu59，hu60和hu250与人IL-17A结合具有较高的特异性，其EC50分别为8.13ng/mL，8.64ng/mL，6.764ng/ml，6.102ng/mL，5.776ng/mL和6.351ng/mL。

图7 FACS检测人源化抗体阻断人IL-17A与293F细胞上的IL-17RA结合作用。其中抗体hu31，hu43，hu44，hu59，hu60和hu250均具有高效的阻断作用，其IC50分别为867.6ng/mL，780.8ng/mL，828.5ng/ml，467.4ng/mL，482.8ng/mL和577.8ng/mL。

图8 ELISA检测人源化抗体阻断IL-17A介导的上皮细胞分泌CXCL1的效应。其中抗体hu31，hu43，hu44，hu59，hu60和hu250均高效抑制IL-17A诱导上皮细胞表达CXCL1，并且比对照抗体的阻断作用更强。

图9 ELISA检测人源化抗体阻断IL-17A介导的体内生物活性作用。其中抗体hu31，hu43，hu44，hu60和hu250具有高效抑制IL-17A诱导小鼠表达CXCL1，并且比对照抗体的阻断作用更强。

图10-1 人源化抗体给药对咪喹莫特诱导的银屑病小鼠临床评分影响。而给予hu31和hu44可明显抑制咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型皮肤鳞屑、硬结、红肿等情况,即临床评分降低(*P<0.05vs KLH)。

图10-2 人源化抗体对咪喹莫特诱导的银屑病小鼠耳肿胀程度的影响。给予hu31和hu44可明显改善耳肿胀程度。(*P<0.05vs KLH,**P<0.01vs KLH.)

图11-1 人源化抗体对II型胶原蛋白诱导的雌性食蟹猴体重的影响。hu31和hu59对关节炎引起的体重下降具有一定改善作用(**P<0.01，****P<0.0001，和“G2:溶媒组”相比较；One-way ANOVA/Dunnett)。

图11-2 人源化抗体对II型胶原蛋白诱导的雌性食蟹猴关节炎评分的影响。hu31显著抑制了食蟹猴关节炎临床评分的增加趋势(***P<0.001，#P<0.05，和G2:溶媒组；One-way ANOVA/Dunnett)。

发明详述

本发明涉及特异性结合人IL-17A并阻断由IL-17A参与介导的生物活性的抗体。本发明涉及在下文中进一步描述的全长IgG形式抗体及其抗原结合片段。

定义

除非另有说明，本发明的实施将采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些都在本领域的技术范围内。

为了可以更容易地理解本发明，某些科技术语具体定义如下。除非本文其它部分另有明确定义，否则本文所用的科技术语都具有本发明所属领域普通技术人员通常理解的含义。关于本领域的定义及术语，专业人员具体可参考Current Protocolsin MolecularBiology(Ausubel)。氨基酸残基的缩写是本领域中所用的指代20个常用L-氨基酸之一的标准3字母和/或1字母代码。

本文(包括权利要求书)所用单数形式包括其相应的复数形式，除非文中另有明确规定。

IL-17或IL-17A是白介素-17。除非另有表述，所述的IL-17通常指人IL-17A。

体内表达的IL-17A是具有23个氨基酸的N-末端信号肽，NCBI登录号NP_443104.1，其经切割产生成熟的IL-17A。在一个具体的实施方式中，本公开内容中IL-17A指成熟的IL-17A，而不包含N-末端信号肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO:66，核苷酸序列为SEQ ID NO:67。

体内表达的IL-17F是具有30个氨基酸的N-末端信号肽，NCBI登录号NP_443104.1，其经切割产生成熟的IL-17F。在一个具体的实施方式中，本文中IL-17F指成熟的IL-17F，而不包含N-末端信号肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO:68。

本文中IL-17AF是IL-17A亚单位与IL-17F亚单位的异二聚体，如本领域普通技术人员所理解的。

“免疫应答”是指由例如淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞、粒细胞和由上述细胞或肝产生可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用，该作用导致从人体选择性损害、破坏或清除侵入的病原体、感染病原体的细胞或组织、癌细胞或者在自体免疫或病理性炎症的情况下的正常人细胞或组织。

“信号转导途径”或“信号转导活性”是指通常由蛋白质间相互作用诸如生长因子对受体的结合启动的生化因果关系，所述关系导致信号从细胞的一部分传递至细胞的另一部分。一般地，传递包括引起信号转导的系列反应中的一种或多种蛋白质上的一个或多个酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基的特定磷酸化。倒数第二过程通常包括细胞核事件，从而导致基因表达的变化。

关于本发明的抗体或其抗原结合片段，术语“活性”或“生物活性”，或术语“生物性质”或“生物特征”此处可互换使用，并包括但不局限于表位/抗原亲和力和特异性、在体内或体外中和或拮抗IL-17A活性的能力、IC50、抗体的体内稳定性和抗体的免疫原性质。本领域公知的抗体的其它可鉴定的生物学性质或特征包括，例如，交叉反应性(即通常与靶定肽的非人同源物，或与其它蛋白质或组织的交叉反应性)，和保持哺乳动物细胞中蛋白质高表达水平的能力。使用本领域公知的技术观察、测定或评估前面提及的性质或特征，所述技术包括但不局限于ELISA、FACS或BIACORE等离子体共振分析、不受限制的体外或体内中和测定、受体结合、细胞因子或生长因子的产生和/或分泌、信号转导和不同来源(包括人类、灵长类或任何其它来源)的组织切片的免疫组织化学。

“抗体”是指具有所需生物活性的任何形式的抗体。因此，其以最广义使用，具体包括但不限于单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、人源化抗体、完全人抗体、嵌合抗体和骆驼源化单结构域抗体。

“分离抗体”是指结合化合物的纯化状态，且在这种情况下意指该分子基本不含其它生物分子，例如核酸、蛋白质、脂质、糖或其它物质例如细胞碎片和生长培养基。术语“分离(的)”并非意指完全不存在这类物质或不存在水、缓冲液或盐，除非它们以明显干扰本文所述结合化合物的实验或治疗应用的量存在。

“单克隆抗体”是指获自基本均质抗体群的抗体，即组成该群的各个抗体除可少量存在的可能天然存在的突变之外是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原表位。相比之下，常规(多克隆)抗体制备物通常包括大量针对不同表位(或对不同表位有特异性)的抗体。修饰语“单克隆”表明获自基本均质抗体群的抗体的特征，且不得解释为需要通过任何特定方法产生抗体。

“全长抗体”，天然存在时包含四条肽链的免疫球蛋白分子，两条重(H)链(全长时约50-70kDa)和两条轻(L)链(全长时约25kDa)通过二硫键互相连接。每一条重链由重链可变区(在本文中缩写为VH)和重链恒定区(在本文中缩写为CH)组成。重链恒定区由3个结构域CH1、CH2和CH3组成。每一条轻链由轻链可变区(在本文中缩写为VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可被进一步细分为具有高可变性的互补决定区(CDR)和其间隔以更保守的称为框架区(FR)的区域。每一个VH或VL区由按下列顺序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR组成。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白对宿主组织或因子(包括免疫***的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体***的第一组分(Clq))的结合。

抗体(“亲代抗体”)的“抗原结合片段”包括抗体的片段或衍生物，通常包括亲代抗体的抗原结合区或可变区(例如一个或多个CDR)的至少一个片段，其保持亲代抗体的至少一些结合特异性。抗体结合片段的实例包括但不限于Fab，Fab'，F(ab')₂和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子，例如sc-Fv；由抗体片段形成的纳米抗体(nanobody)和多特异性抗体。当抗原的结合活性在摩尔浓度基础上表示时，结合片段或衍生物通常保持其抗原结合活性的至少10％。优选结合片段或衍生物保持亲代抗体的抗原结合亲和力的至少20％、50％、70％、80％、90％、95％或100％或更高。还预期抗体的抗原结合片段可包括不明显改变其生物活性的保守或非保守氨基酸取代(称为抗体的“保守变体”或“功能保守变体”)。术语“结合化合物”是指抗体及其结合片段两者。

“单链Fv”或“scFv”抗体是指包含抗体的VH和VL结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单条多肽链中。Fv多肽一般还包含VH和VL结构域之间的多肽接头，其使scFv能够形成用于抗原结合的所需结构。

“结构域抗体”是只含有重链可变区或轻链可变区的免疫功能性免疫球蛋白片段。在某些情况下，两个或更多个VH区与肽接头共价连接形成二价结构域抗体。二价结构域抗体的2个VH区可靶向相同或不同的抗原。

“二价抗体”包含2个抗原结合部位。在某些情况下，2个结合部位具有相同的抗原特异性。然而，二价抗体可以是双特异性的。

“双抗体”是指具有两个抗原结合部位的小抗体片段，所述片段包含在同一多肽链(VH-VL或VL-VH)中与轻链可变结构域(VL)连接的重链可变结构域(VH)。通过使用短得不允许在同一链的两个结构域之间配对的接头，迫使该结构域与另一链的互补结构域配对并产生两个抗原结合部位。

“嵌合抗体”是具有第一抗体的可变结构域和第二抗体的恒定结构域的抗体，其中第一抗体和第二抗体来自不同物种。通常可变结构域获自啮齿动物等实验动物的抗体(“亲代抗体”)，而恒定结构域序列获自人抗体，使得与亲代啮齿动物抗体相比，所得嵌合抗体在人受试者中诱导不良免疫应答的可能性较低。

“人源化抗体”是指含有来自人和非人(例如鼠、大鼠)抗体的序列的抗体形式。一般而言，人源化抗体包含基本所有的至少一个、通常两个可变结构域，其中所有或基本所有的超变环相当于非人免疫球蛋白的超变环，而所有或基本所有的构架(FR)区是人免疫球蛋白序列的构架区。人源化抗体任选可包含至少一部分的人免疫球蛋白恒定区(Fc)。

“完全人抗体”是指只包含人免疫球蛋白蛋白质序列的抗体。如在小鼠中、在小鼠细胞中或在来源于小鼠细胞的杂交瘤中产生，则完全人抗体可含有鼠糖链。同样，“小鼠抗体”是指仅包含小鼠免疫球蛋白序列的抗体。或者，如果在大鼠中、在大鼠细胞中或在来源于大鼠细胞的杂交瘤中产生，则完全人抗体可含有大鼠糖链。同样，“大鼠抗体”是指仅包含大鼠免疫球蛋白序列的抗体。

“同种型”是指由重链恒定区基因提供的抗体种类(例如，IgM、IgE、IgG诸如IgGl或IgG4)。同种型还包括这些种类之一的修饰形式，其中修饰已被产生来改变Fc功能，例如以增强或减弱效应子功能或对Fc受体的结合。

术语“核酸”或“多核苷酸”是指脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)及其呈单链或双链形式的聚合物。除非明确地限制，否则术语包括具有与参照核酸相似的结合性质并且以与天然存在的核苷酸相似的方式被代谢的含有已知的天然核苷酸的类似物的核酸。(参见，属于Kariko等人的美国专利No.8,278,036,其公开了尿苷被假尿苷替代的mRNA分子，合成所述mRNA分子的方法以及用于在体内递送治疗性蛋白的方法)。可使用经修饰mRNA的方法，例如，属于Kariko等人的美国专利No.8,278,036和属于Moderna公司的专利申请W02013/090186A1中公开的那些方法。除非另有所指，否则特定核酸序列还隐含地包括其保守修饰的变体(例如，简并密码子取代)、等位基因、直系同源物、SNP和互补序列以及明确指出的序列。具体地，简并密码子取代可通过生成其中一个或多个选择的(或全部)密码子的第三位被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现(Batzer等人，Nucleic AcidRes.19:5081(1991)；Ohtsuka等人，J.Biol.Chem.260:2605-2608(1985)；和Rossolini等人，Mol.Cell.Probes 8:91-98(1994))。

“构建体”是指任何重组多核苷酸分子(诸如质粒、粘粒、病毒、自主复制多核苷酸分子、噬菌体或线性或环状单链或双链DNA或RNA多核苷酸分子)，衍生自任何来源，能够与基因组整合或自主复制，构成如下多核苷酸分子，其中已经以功能操作的方式连接(即，可操作地连接)一或多个多核苷酸分子。重组构建体通常会包含可操作地连接至转录起始调节序列的本发明的多核苷酸，这些序列会导引多核苷酸在宿主细胞中的转录。可使用异源及非异源(即，内源)启动子两者导引本发明的核酸的表达。

“载体”是指任何重组多核苷酸构建体，该构建体可用于转化的目的(即将异源DNA引入到宿主细胞中)。一种类型的载体为“质粒”，是指环状双链DNA环，可将额外DNA区段连接至该环中。另一类型的载体为病毒载体，其中可将额外DNA区段连接至病毒基因组中。某些载体能够在被引入到的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体及游离型哺乳动物载体)。在引入到宿主细胞中后，其他载体(例如，非游离型哺乳动物载体)整合至宿主细胞的基因组中，且因此与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够导引***作性连接的基因的表达。本文将此类载体称为“表达载体”。

本文所用术语“表达载体”是指能够在转化、转染或转导至宿主细胞中时复制及表达目的基因的核酸分子。表达载体包含一或多个表型选择标记及复制起点，以确保维护载体及以在需要的情况下于宿主内提供扩增。

如本文中所用，术语“IL-17A拮抗剂”或“IL-17A阻断分子”意指抑制IL-17A通过IL-17R诱导的信号转导活性，从而降低或中和IL-17A活性的抗体或其抗原结合蛋白。这可在人细胞测定诸如人细胞的依赖IL-17A的CXCL1产生测定中得以显示。此类测定在下面实施例中进行了更详细描述。

用于细胞或受体的“活化”、“刺激”和“处理”可具有相同含义，例如细胞或受体用配体活化、刺激或处理，除非上下文另外或明确规定。“配体”包括天然和合成配体，例如细胞因子、细胞因子变体、类似物、突变蛋白和来源于抗体的结合化合物。“配体”还包括小分子，例如细胞因子的肽模拟物和抗体的肽模拟物。“活化”可指通过内部机制以及外部或环境因素调节的细胞活化。“应答/反应”，例如细胞、组织、器官或生物体的应答，包括生化或生理行为(例如生物区室内的浓度、密度、粘附或迁移、基因表达速率或分化状态)的改变，其中改变与活化、刺激或处理有关，或者与例如遗传编程等内部机制有关。

如本文中所用，术语任何疾病或病症的“治疗”或“医治”在一个实施方案中是指改善疾病或病症(即，减缓或阻止或减少疾病的进展或其临床症状的至少一个)。在另一个实施方案中，“治疗”或“医治”是指缓解或改善至少一个身体参数，包括可能不能被患者辨别出的那些物理参数。在另一个实施方案中，“治疗”或“医治”是指在身体上(例如，可辨别的症状的稳定)、生理上(例如，身体参数的稳定)或在这两方面调节疾病或病症。除非在本文中明确描述，否则用于评估疾病的治疗和/或预防的方法在本领域中通常是已知的。

“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，诸如非人灵长类动物、绵羊、狗、猫、马、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。如本文中所用，术语“cyno”或“食蟹猴”是指食蟹猴。

“治疗有效量”、“治疗有效剂量”和“有效量”是指本发明的IL-17A抗体或其抗原结合片段当单独或与其它治疗药物组合给予细胞、组织或受试者时，有效预防或改善一种或多种疾病或病况的症状或该疾病或病况的发展的量。治疗有效剂量还指足以导致症状改善的抗体或其抗原结合片段的量，例如治疗、治愈、预防或改善相关医学病况或者提高这类病况的治疗、治愈、预防或改善的速度的量。当对个体施用单独给予的活性成分时，治疗有效剂量仅是指该成分。当组合施用时，治疗有效剂量是指引起治疗效果的活性成分的综合量，不论是组合、依次给予还是同时给予。治疗剂的有效量将导致诊断标准或参数提高至少10％；通常至少20％；优选至少约30％；更优选至少40％，最优选至少50％。

抗体的产生

可采用用于产生抗体的任何合适方法来产生本发明的抗体。任何合适形式的人IL-17A都可用作产生抗体的免疫原(抗原)。通过举例而非限制，任何人IL-17A同种型或其片段都可用作免疫原。实例包括但不限于本文所述的天然的成熟型人IL-17A(氨基酸序列为SEQ ID NO.:66)。

在一个优选方案中，产生鼠源的单克隆抗人IL-17A抗体的杂交瘤细胞可通过本领域公知的方法产生。这些方法包括但不限于最初由Kohler等(1975)(Nature256:495-497)研发的杂交瘤技术。优选根据标准方案，分离出小鼠脾细胞，用PEG或通过电融合与小鼠骨髓瘤细胞系融合。然后可筛选产生抗原特异性抗体的所得杂交瘤。例如，在50％PEG的情况下，可将来源于免疫小鼠的脾淋巴细胞的单细胞悬液与1/6数目的小鼠骨髓瘤细胞SP20(ATCC)融合。可将细胞以约2×10⁵个细胞/mL接种在平底微量滴定板中，接着在含有20％胎牛血清的完全培养基和1×HAT(Sigma；融合后24小时加入HAT)的选择培养基中孵育2周。2周后，可将细胞在HAT用HT替换的培养基中培养。然后可通过ELISA针对抗人IL-17A单克隆IgG抗体筛选各孔。一旦出现大规模杂交瘤生长，通常可在10-14天后对培养基进行观察。分泌抗体的杂交瘤可再次接种、筛选，如果仍为人IgG阳性，则可通过有限稀释对抗人IL-17A单克隆抗体杂交瘤进行亚克隆至少两次。然后可体外培养稳定的亚克隆以在组织培养基中产生少量的抗体用于表征。

在一个优选实施方式中，本发明获得的单克隆杂交瘤细胞为1F8、2F5和2B2，其分泌的抗体与IL-17A高特异性结合、阻断IL-17A与IL-17RA结合并抑制IL-17A介导的生物活性，如抑制CXCL1分泌。

在一个优选实施方式中，本发明利用基于简并引物PCR的方法，测定由候选杂交瘤细胞1F8、2F5和2B2免疫球蛋白可变区的DNA序列。其中杂交瘤细胞1F8具有两种抗体轻链基因和一种抗体重链基因，2F5具有两种抗体重链基因和一种抗体轻链基因。所以1F8、2F5分泌的抗体可能均含有两种混合完全抗体，在本文中，1F8分泌的抗体称为1F8-1和1F8-2，2F5分泌的抗体称为2F5-1和2F5-2。

表1杂交瘤抗体可变区的氨基酸序列

来源于啮齿动物(如小鼠)的抗体在体内用作治疗药物时可引起不需要的抗体免疫原性，重复使用导致人体产生针对治疗性抗体的免疫应答，这类免疫应答至少导致丧失治疗功效，而最高则导致潜在致死过敏反应。降低啮齿动物抗体的免疫原性的一种方法包括嵌合抗体的产生，其中将小鼠可变区与人恒定区融合(Liu等(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84:3439-43)。然而，嵌合抗体中的完整啮齿动物可变区的保留仍可在患者中引起有害的免疫原性。将啮齿动物可变结构域的互补决定区(CDR)环移植到人构架上(即人源化)已被用于进一步将啮齿动物序列减至最低(Jones等(1986)Nature321:522；Verhoeyen等(1988)Science239:1534)。

在一些实施方案中，本发明的嵌合或人源化抗体可基于所述制备的鼠单克隆杂交瘤抗体的序列来制备。编码重链和轻链免疫球蛋白的DNA可以从目标鼠杂交瘤中获得，并且使用标准分子生物学技术进行工程改造以包含非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。

在一些实施方案中，本发明所述的嵌合抗体，可使用本领域已知的方法将杂交瘤来源的编码免疫球蛋白重链和轻链可变区与人IgG恒定区有效连接(参见例如属于Cabilly等人的美国专利No.4,816,567)，获得嵌合型重链和嵌合型轻链。其中人IgG可选自任何亚型，如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，优选IgG4。

在一个具体的实施方式中，本发明的嵌合抗体可由一种嵌合型轻链与一种嵌合型重链表达质粒“混合和匹配”转染表达细胞获得，此类“混合和匹配”的抗体的IL-17A结合可使用上述结合测定和其它常规结合测定(例如，ELISA)来进行测试，优选的ch1，ch2，ch4，ch7和ch16具有最优的结合和阻断活性，其可变区氨基酸序列如表2所示。

表2嵌合抗体可变区氨基酸序列

嵌合抗体	重链可变区(VH)	轻链可变区(VL)
			ch1	SEQ ID NO.:25	SEQ ID NO.:29
ch2	SEQ ID NO.:25	SEQ ID NO.:30
			ch4	SEQ ID NO.:25	SEQ ID NO.:32
ch7	SEQ ID NO.:26	SEQ ID NO.:31
			ch16	SEQ ID NO.:28	SEQ ID NO.:32

本发明的所述抗体的可变区CDR的精确氨基酸序列边界可使用许多公知的方案的任何方案来确定，包括由Kabat等人(1991)，“Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest，第5版.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD(“Kabat”编号方案)描述的Kabat方案和Lefranc M.-P.等人描述的IMGT方案(1999Nucleic Acids Research,27,209-212)。在一些实施方式中，本发明优选的鼠源抗体可变区的CDR具体定义方案和氨基酸序列如表3所示。

表3鼠源抗体可变区CDR定义

在一些实施方案中，本发明所述的人源化抗体，可以使用本领域已知的方法将鼠源CDR区***人种系框架区。参见Winter等人的美国专利No.5,225,539及Queen等人的美国专利No.5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370。简言之，发明人藉由NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)网站中的人类免疫球蛋白基因数据库搜寻与鼠源抗体可变区的cDNA序列同源的人类种系IgG基因，原则上藉由选定的CDR嫁接实现人源化。然而，CDR环交换仍不能均匀产生具有与起始抗体相同的结合性质的抗体。在人源化抗体中，常常还需要构架残基(FR)(参与CDR环支持的残基)改变以保持抗原结合亲和力。Kabat等(1991)J.Immunol.147:1709。简言之，人源化改造过程涉及以下步骤：A、把各候选抗体的基因序列与人胚胎系抗体基因序列进行比对，找出同源性高的序列；B、分析考察HLA-DR亲和性，选出亲和力低的人胚胎系框架序列；C、利用计算机模拟技术，应用分子对接分析可变区及其周边的框架氨基酸序列，考察其空间立体结合方式。通过计算静电力，范德华力，亲疏水性和熵值，分析各候选的抗体基因序列中可与IL-17A作用以及维护空间构架的关键氨基酸个体，将其嫁接回已经选择的人胚胎系基因框架，并在此基础上标配出必须保留的框架区氨基酸位点，合成人源化抗体。

在一些实施方式中，本发明获得的优选人源化抗体为hu31，hu43，hu44，hu59，hu60和hu250。

人源化抗体hu31，hu43，hu44，hu59，hu60和hu250可变区及其对应的CDR氨基酸序列如表4所示。

表4人源化抗体可变区和CDR序列

人源化抗体hu31，hu43，hu44，hu59，hu60和hu250的轻/重链氨基酸和核苷酸序列如表5所示。

表5人源化抗体氨基酸/核苷酸序列

本发明的其它抗体包括具有已通过氨基酸缺失、***或取代突变的，但仍与上述抗体(特别地在上述序列中描绘的CDR区中)有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列的那些抗体。在一些实施方案中，本发明的抗体是hu31，hu43、hu44、hu59、hu60和hu250的任一个的突变变体，其中所述突变变异抗体包括突变氨基酸序列，在所述突变氨基酸序列中，当与上述序列中描绘的CDR区相比较时，在CDR区中已通过氨基酸缺失、***或置换的氨基酸突变不超过1、2、3、4或5个。

编码本发明的抗体的其它核酸包括已通过核苷酸缺失、***或取代突变的，但仍然与上文中所述的序列中描绘的CDR对应编码区具有至少60、70、80、90、95或100％同一性的核酸。

抗体表达

在一些实施方案中，本发明涉及包含一种或多种表达载体或表达载体的宿主细胞以及用于产生本发明的抗体或包含其抗原结合片段的方法，所述方法包括培养所述宿主细胞、纯化和回收所述抗体或抗原结合片段。

可使用例如本领域中公知的重组DNA技术与基因转染方法的组合(例如，Morrison,S.1985,Science 229:1202)在宿主表达细胞中产生本发明的抗体。例如，为了表达抗体或其抗体片段，编码部分或全长轻链和重链的DNA可利用标准分子生物学或生物化学技术(例如，DNA化学合成、PCR扩增或使用表达目标抗体的杂交瘤的cDNA克隆)来获得，并且可将所述DNA***表达载体，以便所述基因被有效地连接于转录和翻译控制序列。在本说明书中，术语“有效连接的”意指将抗体基因连接进入载体，以使载体内的转录和翻译控制序列行使它们的调节抗体基因的转录和翻译的预定功能。选择可与所使用的表达宿主细胞相容的表达载体和表达调控序列。可将抗体轻链基因和抗体重链基因***至不同的载体中，或者更通常地，将两个基因***至同一表达载体中。通过标准方法将抗体基因***至表达载体中(例如，连接抗体基因片段和载体上互补的限制性位点，或者如果不存在限制性位点，则进行平端连接)。可以使用本文所述抗体的轻链和重链可变区来生成任何抗体同种型的全长抗体基因，其通过将它们***已编码期望同种型的重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中，从而使得VH区段与载体中的CH段有效连接，VL区段与载体中的CL区段有效连接。此外/或可选择地，重组表达载体可以编码信号肽(也称为前导序列)，其有利于抗体链从宿主细胞分泌。可将抗体链基因克隆进载体中以使信号肽与抗体链基因的氨基末端连接于同一读码框中。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即来自非免疫球蛋白的信号肽)。

用于表达本发明的重组抗体的哺乳动物宿主细胞，包括可获自美国典型培养物保藏中心(ATCC)的许多永生化细胞系。这些尤其包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NS0、SP2/0细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞、A549细胞、293T细胞和许多其它细胞系。哺乳动物宿主细胞包括人、小鼠、大鼠、狗、猴、猪、山羊、牛、马和仓鼠细胞。通过测定哪种细胞系具有高表达水平来选择特别优选的细胞系。

在将编码重链或抗原结合片段或其片段、轻链和/或其抗原结合片段的重组表达载体导入哺乳动物宿主细胞中时，通过将宿主细胞培养足够的一段时间，以允许抗体在宿主细胞中表达，或者更优选抗体分泌到宿主细胞生长的培养基中,来产生抗体。可采用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收抗体。

很可能由不同细胞系表达或在转基因动物中表达的抗体彼此具有不同的糖基化。然而，由本文提供的核酸分子编码的或包含本文提供的氨基酸序列的所有抗体是本发明的组成部分，而不论抗体的糖基化如何。同样，在某些实施方式中，非岩藻糖基化抗体是有利的，因为它们通常在体外和体内具有比其岩藻糖基化对应物更强力的功效，并且不可能是免疫原性的，因为它们的糖结构是天然人血清IgG的正常组分。

医药用途

本发明的抗体或其抗原结合片段具有体外和体内诊断及治疗用途。优选地，人源化抗体hu31、hu43、hu44、hu59、hu60或hu250抗体用于治疗与IL-17A相关疾病症的用途。

一方面，本发明所述的分离抗体或其抗原结合片段在体内活性评估时，能够在咪喹莫特诱导的银屑病实验模型中抵抗小鼠发病，小鼠银屑病发病的临床评分及耳部肿胀程度显著降低。

在一个具体的实施方式中，在咪喹莫特诱导的银屑病实验模型中，人源化抗体hu31和hu44可明显抵抗小鼠的发病，小鼠银屑病发病的临床评分及耳部肿胀程度降低。

一方面，本发明所述的分离抗体或其抗原结合片段在体内评估时，能够在抗原诱导的关节炎实验模型诸如食蟹猴AIA-模型中抑制膝关节肿胀。

在一个具体的实施方式中，在食蟹猴AIA-模型中，人源化抗体hu31显著抑制食蟹猴关节炎临床评分的增加趋势。

本发明的一个方面，提供了治疗由IL-17A介导的病理性疾病的方法，所述方法包括施用有效量的根据本发明的分离的抗体或其抗原结合片段，特别地hu31、hu43、hu44、hu59、hu60或hu250抗体，以使所述病症被缓解。

在一个实施方式中，本发明所述的分离抗体或包含其抗原结合片段的蛋白质可以是单克隆抗体或其抗原结合片段，优选嵌合抗体、人源化抗体或人抗体或其部分。

在本发明的方面，提供了药物组合物，其包含与一种或多种可药用的赋形剂、稀释剂或载体组合的本发明所述的实施方式的抗体或包含其抗原结合片段的蛋白质。

在实施方式中，所述药物组合物包含一种或多种额外的活性成分。

具体地，本发明提供治疗与IL-17A相关病症和/或自身免疫性和炎性病症的方法。在某些实施方式中，所述方法包括向有此需要的受试者施用根据本发明的分离的抗体或其抗原结合片段的步骤。

本发明还提供了方法，所述方法通过将细胞与包含治疗有效剂量的本发明的抗体的组合物接触，来减弱或抑制IL-17A或IL-17AF在靶细胞或组织中诱导的信号转导应答。

在本发明中，术语“IL-17A介导的疾病”或“IL-17A相关病症”包括IL-17A或IL-17AF在疾病或医学病况中起作用(无论是直接还是间接地)的所有疾病和病况，包括疾病或病况的原因、发展、进展、持续或病理学。因此，这些术语包括与异常IL-17A或IL-17AF水平相关或以异常IL-17A或IL-17AF水平为特征的病况和/或可通过减弱或抑制IL-17A/AF在靶细胞或组织中诱导的活性(例如CXCL1)来治疗的疾病或病况。这类疾病或病况包括炎性病况和自身免疫性疾病，诸如关节炎、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、多发性硬化症或银屑病。这类疾病还包括过敏症和过敏性病况、超敏反应、慢性阻塞性肺疾病、囊性纤维化以及器官或组织移植排斥。

本发明所用“抑制”或“治疗”或“处理”包括病症相关症状的发展延迟和/或这类病症症状的严重程度减轻。该术语还包括改善现有的不受控制的或有害的症状，预防其它症状和改善或预防这类症状的根本起因。因此，该术语表明已为患有病症、疾病或症状的脊椎动物受试者或者可能发生这类病症、疾病或症状的脊椎动物受试者提供有益结果。

本发明所用术语“治疗有效量”、“治疗有效剂量”和“有效量”是指本发明的IL-17结合化合物当单独或与其它治疗药物组合给予细胞、组织或受试者时，有效预防或改善一种或多种疾病或病况的症状或该疾病或病况的发展的量。治疗有效剂量还指足以导致症状改善的结合化合物的量，例如治疗、治愈、预防或改善相关医学病况或者提高这类病况的治疗、治愈、预防或改善的速度的量。当对个体施用单独给予的活性成分时，治疗有效剂量仅是指该成分。当组合施用时，治疗有效剂量是指引起治疗效果的活性成分的综合量，不论是组合、依次给予还是同时给予。治疗剂的有效量将导致诊断标准或参数提高至少10％；通常至少20％；优选至少约30％；更优选至少40％；最优选至少50％。

类风湿性关节炎(RA)

RA是以滑膜关节的炎症为特征的进行性全身性疾病，影响约0.5％的全球人口。参见Emery(2006)BMJ332:152-155。关节炎症可导致畸形、疼痛、僵硬和肿胀，最终导致关节不可逆退化。受影响关节包括膝、肘、颈和手足关节。常规治疗包括使用NSAID缓解症状，接着给予缓解疾病的抗风湿性药物(DMRD)，例如金、青霉胺、柳氮磺吡啶和甲氨蝶呤。最近进展包括用TNF-α抑制剂的治疗，包括英利昔单抗、阿达木单抗和戈利木单抗等单克隆抗体，以及受体融合蛋白，例如依那西普。用这些TNF-α抑制剂治疗显著降低因疾病所致的结构损害。

本发明的抗IL-17A抗体可用来治疗需要这种治疗的受试者的RA。本发明的抗IL-17A抗体还可与RA的其它治疗组合，例如甲氨蝶呤、硫唑嘌呤、环磷酰胺、霉酚酸吗乙酯、NSAID或TNF-α抑制剂。

银屑病

皮肤是机体内环境与外界之间的重要屏障，防止与潜在的有害抗原接触。在抗原/病原体侵入的情况下，皮肤接触部位的T细胞、多形核细胞和巨噬细胞等局部浸润并启动炎症反应以消除抗原。(参见例如Williams和Kupper(1996)Life Sci.，58:1485-1507)。通常，由病原体引发的这种炎症反应处于严密严监控之下，并在病原体消除时停止。在某些情况下，这种炎症反应在没有外部刺激的和没有适当控制的情况下发生，导致皮肤炎症。本发明提供用于治疗和诊断皮肤炎症的方法。皮肤炎症(上述细胞浸润以及从这些细胞分泌的细胞因子的结果)，包括若干炎性病症，例如疤痕性类天疱疮、硬皮病、化脓性汗腺炎、中毒性表皮坏死松解症、痤疮、骨炎、移植物抗宿主病(GVHD)、坏疽性脓皮症(pyrodermagangrenosum)和贝切特综合征(Behcet’s Syndrome)(参见例如Williams和Griffiths(2002)Clin.Exp.Dermatol.，27:585-590)。最常见的皮肤炎症形式是银屑病。

银屑病的特征在于T细胞介导的角质形成细胞过度增殖伴发炎症浸润。该病具某些明显重叠的临床表型，包括慢性斑块病变、皮疹和脓疱病变(参见例如Gudjonsson等(2004)Clin Exp.Immunol.135:1-8)。大约10％银屑病患者发生关节炎。该疾病具有强而复杂的遗传素因，在单卵孪生中有60％一致性。

典型的银屑病病变是边界十分清楚的红斑，红斑被厚的银色鳞屑覆盖。与正常皮肤相比，银屑病组织的炎症和过度增殖与不同的组织学、抗原和细胞因子概况有关。与银屑病有关的细胞因子为：TNF-α、IL-19、IL-18、IL-15、IL-12、IL-7、IFN-γ、IL-17A和IL-23(参见Gudjonsson等，同上)。

单独或与其它作用剂组合的本发明的抗IL-17A抗体，也可用于预防、治疗、诊断和预测银屑病突发。

为了制备本发明的IL-17A抗体的药物组合物或无菌组合物，将抗体与药学上可接受的载体或赋形剂混合。参见例如Remington’s Pharmaceutical Sciences andU.S.Pharmacopeia：National Formulary,Mack Publishing Company,Easton,PA(1984)。

可通过与可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合来制备以下形式的治疗剂和诊断剂的剂型：例如冻干粉、膏剂、水溶液剂或混悬剂。在一个实施方式中，将本发明的IL-17A抗体在乙酸钠溶液(pH 5-6)中稀释到适当浓度，加入NaCl或蔗糖以利渗透压。可加入其它物质(例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80)以提高稳定性。

给药方案取决于若干因素，包括治疗性抗体的血清或组织周转率、症状水平、治疗性抗体的免疫原性和生物基质中靶细胞的可及性。优选给药方案递送足够的治疗性抗体以实现靶疾病状态的改善，同时使不良副作用降到最低。因此，递送的生物剂(biologic)的量部分取决于具体的治疗性抗体和待治疗病况的严重程度。可获得有关选择适当剂量的治疗性抗体方面的指引。例如利用本领域已知或推测影响治疗的参数或因素，临床医生可确定适当剂量。总的来讲，剂量以稍小于最佳剂量的量开始，之后以少的增量增加直到达到相对于任何负面的副作用是所需的效果或最佳效果。重要的诊断方法包括例如炎症症状或所产生的炎性细胞因子水平的诊断方法。优选可使用的生物剂来源于与靶向治疗的动物相同的物种，从而使对试剂的炎症、自身免疫或增殖应答降到最低。例如，在人受试者的情况下，优选嵌合、人源化和完全人抗体。

本发明包括所叙述特定实施方式的所有组合。本发明的进一步实施方式及可应用性的完整范畴将自下文所提供的详细描述变得显而易见。然而，应理解，尽管详细描述及特定实施例指示本发明的优选实施方式，但仅以说明的方式提供这些描述及实施例，因为本发明的精神及范畴内的各种改变及修改将自此详细描述对熟悉此项技术者变得显而易见。出于所有目的，包括引文在内的本文所引用的所有公开物、专利及专利申请将以引用的方式全部并入本文。

实施例

实施例1.重组蛋白人IL-17A-mFc

从义翘神州购买编码全长人IL-17A的cDNA序列(NCBI登录号:NP_002181.1)的质粒HG12047-G,通过常规PCR技术扩增人IL-17A成熟片段(NCBI登录号NP_002181.1的第24-155位氨基酸，氨基酸序列为SEQ ID NO.:66，核苷酸序列为SEQ ID NO.:67)。扩增片段经BSPQI酶切后，克隆到自主构建的真核表达质粒***(MXT1-Fc，包含鼠源IgG重链的Fc域)，从而产生重组融合蛋白表达质粒IL-17A-mFc。利用常规技术，将鉴定正确的质粒转染表达细胞293F，表达并纯化获取人IL-17A-mFc重组蛋白。如图1所示为人IL-17A-mFc重组蛋白的SDS-PAGE电泳图。

实施例2.构建表达人IL-17RA的293F稳转细胞株

从义翘神州购买含有编码人类全长IL-17RA的cDNA序列的质粒HG10895-G,通过常规PCR扩增编码全长人IL-17RA的DNA序列(SEQ ID NO.:69)。利用常规的克隆技术，将扩增片段克隆到自主构建的真核表达质粒***(HXP)中，其含puromycin筛选体系。将构建成功的IL-17RA重组表达质粒转染至293F(ATCC)细胞中。转染24h后，通过puromycin(2μg/ml)进行筛选，直至形成293F IL-17RA稳转细胞库。利用常规方法分离单个克隆，如通过有限稀释法，按每孔0.8个细胞，铺96孔板，15天后，挑选出IL-17RA-293F单克隆，并进行传代，形成293F IL-17RA稳转细胞株，藉由FACS等分析筛选所有克隆，及选择顶级表达克隆用于FACS结合检定以筛选杂交瘤单克隆抗体，或在功能性检定中使用。

实施例3.重组蛋白IL-17A-mFc与293F IL-17RA稳转细胞株的结合

FACS实验检测重组蛋白IL-17A-mFc与293F细胞上IL-17RA的结合特异性。简而言之，将细胞(293F IL-17RA稳转细胞株)制备成1×10⁶/ml的细胞悬液，按每孔20ul加入96孔板中，实际每孔细胞数为2×10⁴个，将重组蛋白IL-17A-mFc(3ug/ml，20ul/孔；实验组)或1％BSA(20ul/孔；阴性对照组)与细胞悬液混合，37摄氏度孵育30分钟后，FACS buffer洗脱3次后，加入Anti-mouse IgG(1：200)在室温孵育30分钟。以FACS buffer洗脱3次后上细胞流式仪检测，比较各组平均荧光强度值(MFI)。如图2所示，重组蛋白IL-17A-mFc可以与293F细胞上的IL-17RA特异性的结合。

实施例4.杂交瘤抗体的制备与筛选

使用标准分子生物学技术来产生。简言之，将从HumanZyme购买的天然人IL-17A蛋白作为抗原与等量免疫佐剂混合，取5只6周大雌性FVB小鼠进行免疫。在初次免疫以后，每周进行一次加强免疫，共进行七次免疫。在最后一针加强免疫后，选择血清中具有高抗IL-17A抗体滴度的小鼠进行细胞融合实验。使用标准杂交瘤技术，使脾细胞分离及与鼠类骨髓瘤细胞系SP2/0细胞(ATCC)融合。将融合细胞重悬于含有HAT的RPMI-1640完全培养基，涂板在具有腹膜细胞饲养层的孔中。

基于初始所希望的抗体/抗原结合特征(诸如对于IL-17A的结合亲和力、阻断IL-17A对其受体的结合的能力、种属交叉反应以及在体外测定中阻断IL-17A介导的生物效应的能力)，鉴定单克隆杂交瘤分泌上清，其中杂交瘤1F8、2B2、2F5、2F2、2H1和2H5分泌的上清抗体用于进一步表征。

实施例5.杂交瘤抗体体内阻断IL-17A生物活性的作用

大量研究表明，IL-17A在体内促进细胞因子CXCL1表达与释放，所以可通过ELISA定量检测小鼠血清中CXCL1表达变化，判断杂交瘤抗体对小鼠体内IL-17A介导的生物活性的影响。简而言之，选择40只10周龄的雌性Balb/c小鼠，分为8组，每组5只。给药前4天，搜集血清，并检测CXCL1表达量作为基础值。给药当天，心内注射候选杂交瘤抗体、生理盐水(cntrol)或参照抗体mAb317(商业抗IL-17A抗体，购自R&D)药物，剂量为1mg/kg；给药后1小时，按150ug/kg给药量通过皮下注射天然型的人IL-17A(HumanZyme)；注射人IL-17A后2小时，搜集血清检测血液中CXCL1的浓度,并与基础值进行对比,计算各组在给药前后CXCL1的浓度变化倍数(均值±标准误(mean±SEM))。各抗体组与对照组的比较分析使用Student’s-t test检验，P<0.05认为有显著差异，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

如图3所示，杂交瘤抗体同商业抗体mAb317都能显著抑制IL-17A诱导小鼠体内CXCL1表达。

实施例6.候选抗体可变区序列的获得

用基于简并引物PCR的方法，测定由杂交瘤1F8,2B2,2F5表达的抗体可变区的DNA序列。简言之，将杂交瘤细胞株1F8,2B2,2F5分别扩大培养，1000rpm离心收集细胞，并以Trizol提取总RNA。以此为模板，合成第一链cDNA后，以第一链cDNA为后续模板PCR扩增对应的可变区DNA序列,所用PCR引物基于Ig-引物组。回收纯化PCR产物并测序分析，获得候选杂交瘤抗体重链和轻链可变区序列。其中杂交瘤细胞1F8具有两种抗体轻链可变区基因序列和一种抗体重链可变区基因序列，2F5具有两种抗体重链可变区基因序列和一种抗体轻链可变区基因序列。所以1F8、2F5分泌的抗体可能均含有两种混合完全抗体，其中1F8分泌的抗体称为1F8-1和1F8-2，2F5分泌的抗体称为2F5-1和2F5-2。

1F8、2F5、2B2表达的抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列如表1(见说明书详细描述)所示。

实施例7.构建嵌合抗体重组表达载体

从人血细胞(北京血液研究所)中克隆人IgG4重链恒定区Fc片段和轻链κ恒定区，联入pCDNA3.1质粒加以改造。上述重链和轻链可变区序列片段由Genscript公司合成，重链经Bspq I酶切，轻链经Bspq I酶切后，联入相对应改造的pCDNA3.1质粒中，经测序确定IgG4嵌合型的重链(ch-HC)或轻链(ch-LC)的表达质粒。将上述不同的嵌合型重链和轻链的表达质粒混合配对转染表达细胞，获得16种嵌合抗体，编号为ch1到ch16(见表6)。后续的实验材料均由此系列质粒转染表达细胞后，提取获得。

表6嵌合抗体轻/重链来源

LC/HC	1F8-ch-HC	2B2-ch-HC	2F5-ch-HC1	2F5-ch-HC2
					1F8-ch-LC1	ch1	ch5	ch9	ch13
1F8-ch-LC2	ch2	ch6	ch10	ch14
					2B2-ch-LC	ch3	ch7	ch11	ch15
2F5-ch-LC	ch4	ch8	ch12	ch16

实施例8.嵌合抗体与人IL-17A的结合特异性

利用常规ELISA检测方法检测嵌合抗体与人IL-17A结合特异性。即将0.5μg/ml的人IL-17A-mFc包被于96孔酶标板，37摄氏度恒温孵育60-90分钟。然后弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，加入含有2％BSA的PBS溶液封闭60分钟。用洗涤缓冲液洗3次后加入不同浓度的嵌合抗体稀释液，37摄氏度孵育60分钟后用洗涤缓冲液冲洗3次，然后加入1：10000倍稀释的Biotin-anti IgG4，37摄氏度孵育1小时，经洗涤缓冲液冲洗三次后，加入用洗涤缓冲液以1：10000倍稀释的HPR-Strep，室温孵育1小时，经洗涤缓冲液冲洗3次后，加入100μlTMB底物溶液显色，室温反应30分钟后，以100μl 2M的盐酸溶液终止反应并在450nm处读出吸光度。

如图4所示，嵌合抗体ch1，ch2，ch4，ch7和ch16与人IL-17A结合具有较高的特异性，其EC50分别为6.62ng/mL，5.17ng/mL，88.48ng/ml，39.96ng/mL和15.42ng/mL。

实施例9.嵌合抗体阻断人IL-17A与IL-17RA的结合作用

采用竞争性基于细胞的流式细胞(FACS)测定，检测嵌合抗体阻断IL-17A与与细胞上IL-17RA的结合作用。简而言之，将不同浓度的嵌合抗体稀释液(起始10ug/ml，3倍滴定)与预先生物素标记的人IL-17A-mFC(3ug/ml)混合，室温孵育30分钟。然后将混合物与细胞悬液(293F IL-17RA稳转细胞株，1.5×10⁵细胞/孔)在37摄氏度孵育15分钟，以PBS洗脱3次后，加入5μg/ml的Anti-mouse IgG并室温孵育30分钟。以PBS洗脱3次后，通过流式细胞仪检测嵌合抗体对IL-17A与293F细胞表面的IL-17RA结合的抑制作用。

如图5所示，嵌合抗体ch1，ch2，ch7和ch16均能显具抑制人IL-17与293F细胞表面的IL-17RA结合。综合实验结果，选择ch1和ch16继续进行人源化改造。

实施例10抗体的人源化改造

对于抗体的人源化，首先在NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)网站中的人类免疫球蛋白基因数据库搜寻与鼠源抗体可变区的cDNA序列同源的人类种系IgG基因。再藉由Kabat编号***或IMGT编号***定义可变区CDR的氨基酸序列及其精确边界。原则上将与鼠源抗体可变区具有高同源性的人类IGVH及IGVk选为人源化模板，藉由CDR嫁接实施人源化。简言之，人源化改造过程涉及以下步骤：A、把各候选抗体的基因序列与人胚胎系抗体基因序列进行比对，找出同源性高的序列；B、分析考察HLA-DR亲和性，选出亲和力低的人胚胎系框架序列；C、利用计算机模拟技术，应用分子对接分析可变区及其周边的框架氨基酸序列，考察其空间立体结合方式。通过计算静电力，范德华力，亲疏水性和熵值，分析各候选的抗体基因序列中可与IL-17A作用以及维护空间构架的关键氨基酸个体，将其嫁接回已经选择的人胚胎系基因框架，并在此基础上标配出必须保留的框架区氨基酸位点，合成人源化抗体。

鼠源抗体可变区CDR定义方案及其氨基酸序列见本公开内容详细说明部分的表3。

基于前述实验筛选的结果，选取嵌合抗体ch1和ch16继续人源化改造。在一系列抗体/抗原结合特征(诸如对于IL-17A的结合亲和力、阻断IL-17A对其受体的结合的能力)初级筛选后，选取人源化抗体hu31，hu43，hu44，hu59，hu60和hu250继续后续验证。

人源化抗体hu31，hu43，hu44，hu59，hu60和hu250可变区及其CDR氨基酸序列见本公开内容详细说明部分的表4。

实施例11.人源化抗体与人IL-17A的结合特异性

利用常规ELISA检测方法检测人源化抗体与人IL-17A结合特异性，实验方法与步骤参见实施例8。如图6所示，人源化抗体hu31，hu43，hu44，hu59，hu60和hu250高与IL-17A特异性结合。其EC50分别为8.13ng/mL，8.64ng/mL，6.76ng/ml，6.10ng/mL，5.78ng/mL和6.35ng/mL。

实施例12.人源化抗体阻断人IL-17A与IL-17RA的结合作用

采用竞争性基于细胞的流式细胞测定(FACS)，检测嵌合抗体阻断IL-17A与与细胞上IL-17RA的结合作用，实验方法与步骤参见实施例9。如图7所示，人源化抗体hu31，hu43，hu44，hu59，hu60和hu250均能显著地抑制IL-17A与细胞上的IL-17RA特异性结合。其IC50分别为867.6ng/mL，780.8ng/mL，828.5ng/ml，467.4ng/mL，482.8ng/mL和577.8ng/mL。

实施例13人源化抗体拮抗IL-17A诱导上皮细胞表达CXCL1

IL-17A可以刺激多种上皮细胞和其它细胞分泌细胞因子CXCL1表达与释放，可通过ELISA定量检测细胞上清中CXCL1表达量变化，判断人源化抗体对IL-17A在细胞中介导的生物活性的影响。

使用标准技术在组织培养物处理的烧瓶中的培养/测定培养基中维持HT-29细胞(人结肠直肠腺癌上皮细胞，ATCC)。HT-29在组织培养瓶中生长直至它们在测定当天达到50-80％汇合。在测定当天，用PBS冲洗细胞并用胰蛋白酶+EDTA从培养瓶中脱离细胞，并制成细胞悬液。取人源化抗体hu31、hu59、hu60、hu250或参照抗体(Secukilumab)稀释液(起始浓度为55ug/ml，3倍浓度梯度稀释)与人IL-17A(1ug/ml)混合，铺入96孔板中，孵育1h。向每孔中加入100ul(2×10⁴个)HT-29细胞(ATCC,人结肠直肠腺癌上皮细胞)悬液，37℃，7％CO₂培养48h。500Xg，5min离心，将培养上清转入新的96孔板中，利用ELISA试剂盒检测CXCL1的表达。

如图8所示，相比参照抗体Secukilumab，人源化抗体hu31、hu59、hu60和hu250对IL-17A刺激上皮细胞释放CXCL1具有更强得拮抗作用。

实施例14.人源化抗体拮抗IL-17A诱导小鼠表达CXCL1

同实施例5，通过检测小鼠血清CXCL1水平变化，判断人源化抗体对IL-17A在体内介导生物活性的影响。简言之，选择40只10周龄的雌性Balb/c小鼠，分为8组，每组5只。给药前4天，搜集血清，并检测CXCL1表达量作为基础值。给药当天，按1mg/kg，心内注射候选抗体和IgG4同种型对照；给药后1小时，按150ug/kg给药量通过皮下注射人IL-17A；人IL-17A注射后2小时，搜集血清检测血液中CXCL1的浓度,并与基础值进行对比,计算各组在给药前后CXCL1的浓度变化倍数(均值±标准误(mean±SEM))。候选抗体与IgG4同种型对照的比较分析使用Student’s-t test检验，P<0.05认为有显著差异，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

如图9所示，相较于IgG4同种型对照，候选得人源化抗体hu31，hu43，hu44，hu60和hu250对IL-17A刺激小鼠体内释放CXCL1具有更强得拮抗作用。

实施例15.人源化抗体改善咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型的疗效研究

在小鼠耳背皮肤涂抹咪喹莫特可诱导银屑病样病理学特征，即角质形成细胞过度增生、炎症细胞聚集和真皮***部血管增生等，构建银屑病小鼠模型。以临床评分、耳部肿胀度等为指标判断药物对银屑病小鼠的治疗作用。

15.1实验方法

取6-8周C57BL/6雌性小鼠(南京大学模式动物研究所购买，动物合格证号为201605578)48只，背部脱毛，除假手术组外，二天后致敏。致敏前两天随机分成5组(每组8只)：I组为假手术组；II组为PBS组，III组为KLH对照组(同型IgG)，给予KLH；IV组为hu31组；V组为hu43给药组；VI组为hu44给药组，各组给药剂量均为50mg/kg；上述各组于分组第0天及第3天腹腔注射药物1次。致敏当天(day 1)，II-VI组小鼠于右耳及背部皮肤上涂抹约62.5mg咪喹莫特乳膏(艾达乐，5％，3M Health Care Limited)，连续4天。

15.2评价方法

致敏当天起每天用螺旋测微仪测量小鼠右耳厚度，以day 1右耳厚度为对照,计算小鼠耳肿胀厚度数值。同时给小鼠每天称重，观察皮肤鳞屑、硬结、红斑情况，进行评分，采用4级评分法：0分，不发病；1分，轻微；2分，中度；3分，严重；4分，非常严重。结果以mean±SEM表示，先使用单因素方差分析(ANOVA)，有差异后两组之间的比较使用Student’s-ttest检验，P<0.05认为有显著差异。

如图10-1所示，给予人源化抗体hu31和hu44可明显抑制咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型皮肤鳞屑、硬结、红肿等情况，即评分值较小。

如图10-2所示，自致敏当天起于小鼠右耳涂抹咪喹莫特乳膏，其右耳会发生严重肿胀，耳厚度增加，而人源化抗体hu31和hu44均可明显改善耳肿胀程度。

在咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型中，hu31和hu44可明显抵抗小鼠的发病，表型为小鼠临床评分及耳部肿胀程度的降低。

实施例16.人源化抗体改善II型胶原蛋白诱导的雌性食蟹猴关节炎的疗效研究

II型胶原蛋白诱导的关节炎是广泛用于类风湿关节炎(RA)研究的动物模型，具有与人RA相同的组织病理学特征，其特征在于小关节的炎症和软骨及骨的进行性侵蚀。人/人源化的生物大分子包括抗体常常与食蟹猴体内抗原具有更优的交叉反应，所以食蟹猴关节炎模型是检测本发明中人源化抗体IL-17A抗风湿作用的一种有效体系。本实验即在食蟹猴类风关节炎模型上评价候选抗体药效。

16.1实验方法

将II型牛胶原(CII，四川大学)溶解在醋酸(货号10000218；国药；上海；中国)中放入4℃冰箱搅拌过夜，然后用等体积的完全弗氏佐剂(货号：F5881，Sigma-Aldrich，美国)乳化胶原，乳剂胶原终浓度2mg/ml。第0天，舒泰(1.5-5mg/kg，i.m)麻醉动物，于背部及尾根部进行多点的胶原乳剂免疫注射，根据需要，免疫时用1.5％-5％的异氟烷维持麻醉。3个星期后(第21天)重新注射一次胶原，方法同第一次。本实验分为4组，G1为正常动物组，不进行关节炎的诱导；G2为溶媒对照组；G3为抗体hu31给药组；G4为抗体hu59给药组。当某只动物的临床评分达到临床评分最大值的5％(192×5％≈10)时，按顺序分别分到各实验组，先达分值的先入组，如此循环直到所有符合条件的动物都依序分入各组中。入组后开始给药，每周一次，每次7.5mg/kg，由输液泵(infusion bump)30分钟持续泵入,持续5周。

16.2评价方法

体重测量：免疫前一天测量动物体重，以后每周测量一次体重直到实验结束。

关节炎评分：在第0天和第21天对猴子四肢关节炎发炎程度进行评分，并在21天后每周评分一次直至实验结束(如果出现提早发病，则相应提前每周一评的关节炎评分)，评分标准见表2。对每个爪掌的下述15个关节进行评分：5个掌指关节(MCP),4个近端指关节(PIP),5个远端指关节(DIP),1个腕关节或踝关节。同时还需要评估四肢膝盖/肘关节的发病程度。各个关节评分的总和即为这只动物的关节炎评分，最大分值为192(16×3×4)。关节炎的评分标准：0分，正常；1分，轻微关节炎，发病轻微但可以明确分辨出；2分，中度肿胀；3分严重关节炎，严重肿胀或有明显的关节变形。

实验数据表示成均值±标准误(mean±S.E.M)。统计分析溶媒对照、参照药和测试药组各项参数的组间差异，p<0.05被认为具有统计学差异(One-way ANOVA/Dunnett)。

如图11-1所示，正常的食蟹猴(G1)体重稳定；关节炎诱导后的食蟹猴，溶媒处理组(G2)的食蟹猴平均体重持续下降，与之相比，受试抗体hu31和hu59均使这种下降趋势得到控制。故在本实验条件下，hu31和hu59对关节炎引起的体重下降具有一定改善作用(**P<0.01，****P<0.0001，和“G2:溶媒组”相比较；One-way ANOVA/Dunnett)。

如图11-2所示，动物入组后，正常对照动物关节炎临床评分保持为0；模型-溶媒组(G2)和受试抗体hu59组的动物关节炎评分呈渐进性增加，而受试抗体hu31显著抑制了动物的关节炎临床评分的增加趋势。故受试抗体hu31有抑制关节炎病情渐进性发展的作用。受试抗体hu31显著抑制了食蟹猴关节炎临床评分的增加趋势(***P<0.001，#P<0.05，和G2:溶媒组；One-way ANOVA/Dunnett)。

序列表

<110> 上海君实生物医药科技股份有限公司

<120> 抗IL-17A抗体及其应用

<160> 69

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 8

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 1

Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr Gly

1 5

<210> 2

<211> 8

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 2

Ile Asn Asp His Thr Gly Glu Pro

1 5

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 3

Ala Asn Tyr Gly Phe Gly Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 4

<211> 5

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 4

Asn Tyr Asp Ile His

1 5

<210> 5

<211> 16

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 5

Val Ile Trp Ala Gly Gly Arg Thr His Ser Asp Ser Ala Leu Met Ser

1 5 10 15

<210> 6

<211> 11

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 6

Glu Gly Gly Asp Tyr Tyr Lys Tyr Leu Asp Phe

1 5 10

<210> 7

<211> 5

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 7

Asp Thr Tyr Ile His

1 5

<210> 8

<211> 17

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 8

Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 9

<211> 10

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 9

Asp Tyr Tyr Gly Ser Ser Leu Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 10

<211> 5

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 10

Ser Asp Tyr Ala Trp

1 5

<210> 11

<211> 16

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 11

Phe Ile Ser Tyr Ser Gly Pro Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 12

<211> 9

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 12

Gly Gly Asp Gly Asp Ser Phe Asp Tyr

1 5

<210> 13

<211> 11

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 13

Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Ser Tyr

1 5 10

<210> 14

<211> 3

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 14

Lys Val Ser

1

<210> 15

<211> 9

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 15

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 16

<211> 16

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 16

Arg Ser Gly Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly His Thr Tyr Phe His

1 5 10 15

<210> 17

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 17

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 18

<211> 9

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 18

Ser Gln Ser Thr His Val Pro Tyr Thr

1 5

<210> 19

<211> 11

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 19

Lys Ala Ser His Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser

1 5 10

<210> 20

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 20

Arg Ala Asn Gly Leu Val Asp

1 5

<210> 21

<211> 9

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 21

Leu Gln Tyr Glu Met Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 22

<211> 16

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 22

Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp

1 5 10 15

<210> 23

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 23

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 24

<211> 8

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 24

Phe Gln Gly Ser His Phe Pro Thr

1 5

<210> 25

<211> 117

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 25

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Met Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Asp His Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Lys Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Asn Tyr Gly Phe Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr

100 105 110

Leu Thr Val Ser Ser

115

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<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 26

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Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ile Asn Tyr

20 25 30

Asp Ile His Trp Leu Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Arg Thr His Ser Asp Ser Ala Leu Met

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Asn Val His Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Glu Gly Gly Asp Tyr Tyr Lys Tyr Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115

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Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Gly Asp Lys Ser Ser Asn Ala Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Leu Ser Arg Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Val Thr Asp Tyr Tyr Gly Ser Ser Leu Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

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<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 28

Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

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Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp

35 40 45

Met Ala Phe Ile Ser Tyr Ser Gly Pro Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe

65 70 75 80

Leu Gln Leu Lys Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Asp Gly Asp Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Leu Thr Val Ser Ser

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<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 29

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20 25 30

Asn Gly Asn Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

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<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 30

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20 25 30

Asn Gly His Thr Tyr Phe His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

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65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Phe Cys Ser Gln Ser

85 90 95

Thr His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

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<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 31

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Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser His Asp Ile Asn Ser Tyr

20 25 30

Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile

35 40 45

Tyr Arg Ala Asn Gly Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Tyr

65 70 75 80

Glu Asp Met Gly Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Glu Met Leu Pro Leu

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<211> 111

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

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Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

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Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

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65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

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<212> PRT

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65 70 75 80

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85 90 95

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65 70 75 80

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr

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65 70 75 80

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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65 70 75 80

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65 70 75 80

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<212> PRT

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20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 40

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

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<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

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Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

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Ser His Phe Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 42

<211> 444

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 42

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

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Gly Trp Ile Asn Asp His Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Phe Thr Leu Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

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<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 43

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Asn Gly Asn Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

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Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

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<210> 44

<211> 444

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 44

Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

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Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr

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Gly Met Asn Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

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Gly Trp Ile Asn Asp His Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Lys Phe

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Gln Gly Arg Val Thr Phe Thr Leu Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Asn Tyr Gly Phe Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

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165 170 175

Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser

180 185 190

Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn

195 200 205

Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro

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Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

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Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

275 280 285

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Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

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Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

325 330 335

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln

340 345 350

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly

355 360 365

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

370 375 380

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

385 390 395 400

Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu

405 410 415

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

420 425 430

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

<210> 45

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 45

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

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Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

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Asn Gly Asn Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

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Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

165 170 175

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180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 46

<211> 445

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 46

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

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65 70 75 80

Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 47

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 47

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Lys Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Phe Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 48

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 48

Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Phe Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 49

<211> 445

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 49

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp

20 25 30

Tyr Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Gly Phe Ile Ser Tyr Ser Gly Pro Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe

65 70 75 80

Leu Gln Leu Lys Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Asp Gly Asp Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu

225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

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Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

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Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 50

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 50

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly

85 90 95

Ser His Phe Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 51

<211> 1335

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 51

caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgccag cgtgaaggtg 60

agctgcaagg ccagcggcta catcttcacc aactacggca tgaactggat gagacaggcc 120

cccggccagg gcctggagtg gatgggctgg atcaacgacc acaccggcga gcccacctac 180

gccgacaagt tccagggcag agtgaccttc accctggaca ccagcatcag caccgcctac 240

atggagctga gcagactgag aagcgacgac accgccgtgt actactgcgc caactacggc 300

ttcggctact tcgactactg gggccagggc accctggtga ccgtgagcag cgctagcacc 360

aagggcccca gcgtgttccc cctggcccct tgcagcagaa gcaccagcga gagcacagcc 420

gccctgggct gcctggtgaa ggactacttc cccgagcccg tgaccgtgtc ctggaacagc 480

ggcgctctga ccagcggcgt gcataccttc cccgccgtgc tccagagcag cggactgtac 540

tccctgagca gcgtggtgac cgtgccttcc agcagcctgg gcaccaagac ctacacctgc 600

aacgtggacc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagtggagag caagtacggc 660

cctccctgcc ccccttgccc tgcccccgag ttcctgggcg gacctagcgt gttcctgttc 720

ccccccaagc ccaaggacac cctgatgatc agcagaaccc ccgaggtgac ctgcgtggtg 780

gtggacgtgt cccaggagga ccccgaggtc cagtttaatt ggtacgtgga cggcgtggaa 840

gtgcataacg ccaagaccaa gcccagagag gagcagttca acagcaccta cagagtggtg 900

tccgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg ctgaacggca aggaatacaa gtgcaaggtc 960

tccaacaagg gcctgcctag cagcatcgag aagaccatca gcaaggccaa gggccagcca 1020

cgggagcccc aggtctacac cctgccacct agccaagagg agatgaccaa gaaccaggtg 1080

tccctgacct gtctggtgaa aggcttctat cccagcgata tcgccgtgga gtgggagagc 1140

aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc accccccctg tgctggacag cgacggcagc 1200

ttcttcctgt actccagact gaccgtggac aagtccagat ggcaggaggg caacgtcttc 1260

agctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagtc cctgagcctg 1320

agcctgggca agtga 1335

<210> 52

<211> 660

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 52

gacgtggtga tgacccagag ccccctgagc ctgcccgtga ccctgggcca gcccgccagc 60

atcagctgca gaagcagcca gagcctggtg cacagcaacg gcaacagcta cctgcactgg 120

tacctgcaga agcccggcca gagcccccag ctgctgatct acaaggtgag caacagattc 180

agcggcgtgc ccgacagatt cagcggcagc ggcagcggca ccgacttcac cctgaagatc 240

agcagagtgg aggccgagga cgtgggcgtg tactactgca gccagagcac ccacgtgccc 300

tacaccttcg gccagggcac caagctggag atcaagcgaa ctgtggctgc accatctgtc 360

ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420

ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480

tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540

agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600

gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660

<210> 53

<211> 1335

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 53

cagatccagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgccag cgtgaagatc 60

agctgcaagg ccagcggcta catcttcacc aactacggca tgaactggat gagacaggcc 120

cccggccagg gcctggagtg gatgggctgg atcaacgacc acaccggcga gcccacctac 180

gccgacaagt tccagggcag agtgaccttc accctggaca ccagcgccag caccgcctac 240

atggagctga gcagactgag aagcgacgac accgccgtgt actactgcgc caactacggc 300

ttcggctact tcgactactg gggccagggc accctggtga ccgtgagcag cgctagcacc 360

aagggcccca gcgtgttccc cctggcccct tgcagcagaa gcaccagcga gagcacagcc 420

gccctgggct gcctggtgaa ggactacttc cccgagcccg tgaccgtgtc ctggaacagc 480

ggcgctctga ccagcggcgt gcataccttc cccgccgtgc tccagagcag cggactgtac 540

tccctgagca gcgtggtgac cgtgccttcc agcagcctgg gcaccaagac ctacacctgc 600

aacgtggacc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga gagtggagag caagtacggc 660

cctccctgcc ccccttgccc tgcccccgag ttcctgggcg gacctagcgt gttcctgttc 720

ccccccaagc ccaaggacac cctgatgatc agcagaaccc ccgaggtgac ctgcgtggtg 780

gtggacgtgt cccaggagga ccccgaggtc cagtttaatt ggtacgtgga cggcgtggaa 840

gtgcataacg ccaagaccaa gcccagagag gagcagttca acagcaccta cagagtggtg 900

tccgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg ctgaacggca aggaatacaa gtgcaaggtc 960

tccaacaagg gcctgcctag cagcatcgag aagaccatca gcaaggccaa gggccagcca 1020

cgggagcccc aggtctacac cctgccacct agccaagagg agatgaccaa gaaccaggtg 1080

tccctgacct gtctggtgaa aggcttctat cccagcgata tcgccgtgga gtgggagagc 1140

aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc accccccctg tgctggacag cgacggcagc 1200

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agctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagtc cctgagcctg 1320

agcctgggca agtga 1335

<210> 54

<211> 660

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 54

gacgtggtga tgacccagag ccccctgagc ctgcccgtga ccctgggcca gcccgccagc 60

atcagctgca gaagcagcca gagcctggtg cacagcaacg gcaacagcta cctgcactgg 120

tacctgcaga agcccggcca gagcccccag ctgctgatct acaaggtgag caacagattc 180

agcggcgtgc ccgacagatt cagcggcagc ggcagcggca ccgacttcac cctgaagatc 240

agcagagtgg aggccgagga cgtgggcgtg tacttctgca gccagagcac ccacgtgccc 300

tacaccttcg gccagggcac caagctggag atcaagcgaa ctgtggctgc accatctgtc 360

ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420

ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480

tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540

agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600

gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660

<210> 55

<211> 1338

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 55

caggtgcagc tgcaggagag cggccccggc ctggtgaagc ccagcgagac cctgagcctg 60

acctgcaccg tgaccggcta cagcatcagc agcgactacg cctggagctg gatcagacag 120

ccccccggca agggcctgga gtggatcggc ttcatcagct acagcggccc caccagctac 180

aaccccagcc tgaagtccag agtgaccatc agcagagaca ccagcaagaa ccagttcagc 240

ctgaagctga gcagcgtgac cgccgccgac accgccgtgt actactgcgc cagaggcggc 300

gacggcgaca gcttcgacta ctggggccag ggcaccctgg tgaccgtgag cagcgctagc 360

accaagggcc ccagcgtgtt ccccctggcc ccttgcagca gaagcaccag cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt gaaggactac ttccccgagc ccgtgaccgt gtcctggaac 480

agcggcgctc tgaccagcgg cgtgcatacc ttccccgccg tgctccagag cagcggactg 540

tactccctga gcagcgtggt gaccgtgcct tccagcagcc tgggcaccaa gacctacacc 600

tgcaacgtgg accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gagcaagtac 660

ggccctccct gccccccttg ccctgccccc gagttcctgg gcggacctag cgtgttcctg 720

ttccccccca agcccaagga caccctgatg atcagcagaa cccccgaggt gacctgcgtg 780

gtggtggacg tgtcccagga ggaccccgag gtccagttta attggtacgt ggacggcgtg 840

gaagtgcata acgccaagac caagcccaga gaggagcagt tcaacagcac ctacagagtg 900

gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggaata caagtgcaag 960

gtctccaaca agggcctgcc tagcagcatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccag 1020

ccacgggagc cccaggtcta caccctgcca cctagccaag aggagatgac caagaaccag 1080

gtgtccctga cctgtctggt gaaaggcttc tatcccagcg atatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgacggc 1200

agcttcttcc tgtactccag actgaccgtg gacaagtcca gatggcagga gggcaacgtc 1260

ttcagctgct ccgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gtccctgagc 1320

ctgagcctgg gcaagtga 1338

<210> 56

<211> 657

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 56

gacgtggtga tgacccagag ccccctgagc ctgcccgtga ccctgggcca gcccgccagc 60

atcagctgca gaagcagcca gagcatcgtg cacagcaacg gcaacaccta cctggactgg 120

tacctgcaga agcccggcaa gagccccaag ctgctgatct acaaggtgag caacagattc 180

agcggcgtgc ccgacagatt cagcggcagc ggcagcggca ccgacttcac cctgaagatc 240

agcagagtgg aggccgagga cctgggcgtg tactactgct tccagggcag ccacttcccc 300

accttcggcc agggcaccaa gctggagatc aagcgaactg tggctgcacc atctgtcttc 360

atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420

aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480

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acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttag 657

<210> 57

<211> 657

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 57

gacgtggtga tgacccagag ccccctgagc ctgcccgtga ccctgggcca gcccgccagc 60

atcagctgca gaagcagcca gagcatcgtg cacagcaacg gcaacaccta cctggactgg 120

tacctgcaga agcccggcca gagccccaag ctgctgatct acaaggtgag caacagattc 180

agcggcgtgc ccgacagatt cagcggcagc ggcagcggca ccagcttcac cctgaagatc 240

agcagagtgg aggccgagga cctgggcgtg tactactgct tccagggcag ccacttcccc 300

accttcggcc agggcaccaa gctggagatc aagcgaactg tggctgcacc atctgtcttc 360

atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420

aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480

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<210> 58

<211> 1338

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 58

caggtgcagc tgcaggagag cggccccggc ctggtgaagc ccagcgagac cctgagcctg 60

acctgcaccg tgagcggcta cagcatcacc agcgactacg cctggagctg gatcagacag 120

ccccccggca agggcctgga gtggatcggc ttcatcagct acagcggccc caccagctac 180

aaccccagcc tgaagtccag agtgaccatc agcagagaca ccagcaagaa ccagttcttc 240

ctgcagctga agtccgtgac cgccgccgac accgccgtgt actactgcgc cagaggcggc 300

gacggcgaca gcttcgacta ctggggccag ggcaccaccg tgaccgtgag cagcgctagc 360

accaagggcc ccagcgtgtt ccccctggcc ccttgcagca gaagcaccag cgagagcaca 420

gccgccctgg gctgcctggt gaaggactac ttccccgagc ccgtgaccgt gtcctggaac 480

agcggcgctc tgaccagcgg cgtgcatacc ttccccgccg tgctccagag cagcggactg 540

tactccctga gcagcgtggt gaccgtgcct tccagcagcc tgggcaccaa gacctacacc 600

tgcaacgtgg accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gagcaagtac 660

ggccctccct gccccccttg ccctgccccc gagttcctgg gcggacctag cgtgttcctg 720

ttccccccca agcccaagga caccctgatg atcagcagaa cccccgaggt gacctgcgtg 780

gtggtggacg tgtcccagga ggaccccgag gtccagttta attggtacgt ggacggcgtg 840

gaagtgcata acgccaagac caagcccaga gaggagcagt tcaacagcac ctacagagtg 900

gtgtccgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggaata caagtgcaag 960

gtctccaaca agggcctgcc tagcagcatc gagaagacca tcagcaaggc caagggccag 1020

ccacgggagc cccaggtcta caccctgcca cctagccaag aggagatgac caagaaccag 1080

gtgtccctga cctgtctggt gaaaggcttc tatcccagcg atatcgccgt ggagtgggag 1140

agcaacggcc agcccgagaa caactacaag accacccccc ctgtgctgga cagcgacggc 1200

agcttcttcc tgtactccag actgaccgtg gacaagtcca gatggcagga gggcaacgtc 1260

ttcagctgct ccgtgatgca cgaggccctg cacaaccact acacccagaa gtccctgagc 1320

ctgagcctgg gcaagtga 1338

<210> 59

<211> 657

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 59

gacgtggtga tgacccagac ccccctgagc ctgagcgtga cccccggcca gcccgccagc 60

atcagctgca agagcagcca gagcatcgtg cacagcaacg gcaacaccta cctggactgg 120

tacctgcaga agcccggcca gagccccaag ctgctgatct acaaggtgag caacagattc 180

agcggcgtgc ccgacagatt cagcggcagc ggcagcggca ccgacttcac cctgaagatc 240

agcagagtgg aggccgagga cgtgggcgtg tactactgct tccagggcag ccacttcccc 300

accttcggcg gcggcaccaa ggtggagatc aagcgaactg tggctgcacc atctgtcttc 360

atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420

aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480

ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540

agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600

acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttag 657

<210> 60

<211> 9

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 60

Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala

1 5

<210> 61

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 61

Ile Ser Tyr Ser Gly Pro Thr

1 5

<210> 62

<211> 11

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 62

Ala Arg Gly Gly Asp Gly Asp Ser Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 63

<211> 11

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 63

Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr

1 5 10

<210> 64

<211> 3

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 64

Lys Val Ser

1

<210> 65

<211> 8

<212> PRT

<213> 小家鼠(Mus musculus)

<400> 65

Phe Gln Gly Ser His Phe Pro Thr

1 5

<210> 66

<211> 132

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 66

Gly Ile Thr Ile Pro Arg Asn Pro Gly Cys Pro Asn Ser Glu Asp Lys

1 5 10 15

Asn Phe Pro Arg Thr Val Met Val Asn Leu Asn Ile His Asn Arg Asn

20 25 30

Thr Asn Thr Asn Pro Lys Arg Ser Ser Asp Tyr Tyr Asn Arg Ser Thr

35 40 45

Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu Asp Pro Glu Arg Tyr Pro Ser

50 55 60

Val Ile Trp Glu Ala Lys Cys Arg His Leu Gly Cys Ile Asn Ala Asp

65 70 75 80

Gly Asn Val Asp Tyr His Met Asn Ser Val Pro Ile Gln Gln Glu Ile

85 90 95

Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Pro His Cys Pro Asn Ser Phe Arg Leu

100 105 110

Glu Lys Ile Leu Val Ser Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Ile Val

115 120 125

His His Val Ala

130

<210> 67

<211> 396

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 67

ggaatcacaa tcccacgaaa tccaggatgc ccaaattctg aggacaagaa cttcccccgg 60

actgtgatgg tcaacctgaa catccataac cggaatacca ataccaatcc caaaaggtcc 120

tcagattact acaaccgatc cacctcacct tggaatctcc accgcaatga ggaccctgag 180

agatatccct ctgtgatctg ggaggcaaag tgccgccact tgggctgcat caacgctgat 240

gggaacgtgg actaccacat gaactctgtc cccatccagc aagagatcct ggtcctgcgc 300

agggagcctc cacactgccc caactccttc cggctggaga agatactggt gtccgtgggc 360

tgcacctgtg tcaccccgat tgtccaccat gtggcc 396

<210> 68

<211> 133

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 68

Arg Lys Ile Pro Lys Val Gly His Thr Phe Phe Gln Lys Pro Glu Ser

1 5 10 15

Cys Pro Pro Val Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Asp Ile Gly Ile Ile

20 25 30

Asn Glu Asn Gln Arg Val Ser Met Ser Arg Asn Ile Glu Ser Arg Ser

35 40 45

Thr Ser Pro Trp Asn Tyr Thr Val Thr Trp Asp Pro Asn Arg Tyr Pro

50 55 60

Ser Glu Val Val Gln Ala Gln Cys Arg Asn Leu Gly Cys Ile Asn Ala

65 70 75 80

Gln Gly Lys Glu Asp Ile Ser Met Asn Ser Val Pro Ile Gln Gln Glu

85 90 95

Thr Leu Val Val Arg Arg Lys His Gln Gly Cys Ser Val Ser Phe Gln

100 105 110

Leu Glu Lys Val Leu Val Thr Val Gly Cys Thr Cys Val Thr Pro Val

115 120 125

Ile His His Val Gln

130

<210> 69

<211> 2601

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 69

atgggggccg cacgcagccc gccgtccgct gtcccggggc ccctgctggg gctgctcctg 60

ctgctcctgg gcgtgctggc cccgggtggc gcctccctgc gactcctgga ccaccgggcg 120

ctggtctgct cccagccggg gctaaactgc acggtcaaga atagtacctg cctggatgac 180

agctggattc accctcgaaa cctgaccccc tcctccccaa aggacctgca gatccagctg 240

cactttgccc acacccaaca aggagacctg ttccccgtgg ctcacatcga atggacactg 300

cagacagacg ccagcatcct gtacctcgag ggtgcagagt tatctgtcct gcagctgaac 360

accaatgaac gtttgtgcgt caggtttgag tttctgtcca aactgaggca tcaccacagg 420

cggtggcgtt ttaccttcag ccactttgtg gttgaccctg accaggaata tgaggtgacc 480

gttcaccacc tgcccaagcc catccctgat ggggacccaa accaccagtc caagaatttc 540

cttgtgcctg actgtgagca cgccaggatg aaggtaacca cgccatgcat gagctcaggc 600

agcctgtggg accccaacat caccgtggag accctggagg cccaccagct gcgtgtgagc 660

ttcaccctgt ggaacgaatc tacccattac cagatcctgc tgaccagttt tccgcacatg 720

gagaaccaca gttgctttga gcacatgcac cacatacctg cgcccagacc agaagagttc 780

caccagcgat ccaacgtcac actcactcta cgcaacctta aagggtgctg tcgccaccaa 840

gtgcagatcc agcccttctt cagcagctgc ctcaatgact gcctcagaca ctccgcgact 900

gtttcctgcc cagaaatgcc agacactcca gaaccaattc cggactacat gcccctgtgg 960

gtgtactggt tcatcacggg catctccatc ctgctggtgg gctccgtcat cctgctcatc 1020

gtctgcatga cctggaggct agctgggcct ggaagtgaaa aatacagtga tgacaccaaa 1080

tacaccgatg gcctgcctgc ggctgacctg atccccccac cgctgaagcc caggaaggtc 1140

tggatcatct actcagccga ccaccccctc tacgtggacg tggtcctgaa attcgcccag 1200

ttcctgctca ccgcctgcgg cacggaagtg gccctggacc tgctggaaga gcaggccatc 1260

tcggaggcag gagtcatgac ctgggtgggc cgtcagaagc aggagatggt ggagagcaac 1320

tctaagatca tcgtcctgtg ctcccgcggc acgcgcgcca agtggcaggc gctcctgggc 1380

cggggggcgc ctgtgcggct gcgctgcgac cacggaaagc ccgtggggga cctgttcact 1440

gcagccatga acatgatcct cccggacttc aagaggccag cctgcttcgg cacctacgta 1500

gtctgctact tcagcgaggt cagctgtgac ggcgacgtcc ccgacctgtt cggcgcggcg 1560

ccgcggtacc cgctcatgga caggttcgag gaggtgtact tccgcatcca ggacctggag 1620

atgttccagc cgggccgcat gcaccgcgta ggggagctgt cgggggacaa ctacctgcgg 1680

agcccgggcg gcaggcagct ccgcgccgcc ctggacaggt tccgggactg gcaggtccgc 1740

tgtcccgact ggttcgaatg tgagaacctc tactcagcag atgaccagga tgccccgtcc 1800

ctggacgaag aggtgtttga ggagccactg ctgcctccgg gaaccggcat cgtgaagcgg 1860

gcgcccctgg tgcgcgagcc tggctcccag gcctgcctgg ccatagaccc gctggtcggg 1920

gaggaaggag gagcagcagt ggcaaagctg gaacctcacc tgcagccccg gggtcagcca 1980

gcgccgcagc ccctccacac cctggtgctc gccgcagagg agggggccct ggtggccgcg 2040

gtggagcctg ggcccctggc tgacggtgcc gcagtccggc tggcactggc gggggagggc 2100

gaggcctgcc cgctgctggg cagcccgggc gctgggcgaa atagcgtcct cttcctcccc 2160

gtggaccccg aggactcgcc ccttggcagc agcaccccca tggcgtctcc tgacctcctt 2220

ccagaggacg tgagggagca cctcgaaggc ttgatgctct cgctcttcga gcagagtctg 2280

agctgccagg cccagggggg ctgcagtaga cccgccatgg tcctcacaga cccacacacg 2340

ccctacgagg aggagcagcg gcagtcagtg cagtctgacc agggctacat ctccaggagc 2400

tccccgcagc cccccgaggg actcacggaa atggaggaag aggaggaaga ggagcaggac 2460

ccagggaagc cggccctgcc actctctccc gaggacctgg agagcctgag gagcctccag 2520

cggcagctgc ttttccgcca gctgcagaag aactcgggct gggacacgat ggggtcagag 2580

tcagaggggc ccagtgcatg a 2601

Claims

1.一种抗体或其抗原结合片段，其能特异性结合IL-17A，其特征为包含至少一个选自序列编号SEQ ID NO：1-24、60-65的互补决定区(CDR)。

2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含至少一个选自SEQ IDNO：1-3、4-6、7-9、10-12或60-62的重链CDR结构域和/或至少一个选自SEQ ID NO：13-15、16-18、19-21、22-24或63-65的轻链CDR结构域。

3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，包含重链可变区(VH),其特征为所述的可变区包含至少一个选自序列编号SEQ ID NO：1、4、7、10或60的HCDR1，至少一个选自序列编号SEQ ID NO：2、5、8、11或61的HCDR2，和至少一个选自序列编号SEQ ID NO：3、6、9、12或62的HCDR3。

4.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，包含重链可变区(VH),其特征为所述的可变区包含的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列选自以下序列中的一组：

5.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区(VL),其特征为所述的可变区包含至少一个选自SEQ ID NO：13、16、19、22或63的LCDR1，至少一个选自SEQ IDNO：14、17、20、23或64的LCDR2，和至少一个选自SEQ ID NO：15、18、21、24或65的LCDR3。

6.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区(VL),其特征为所述的可变区包含的LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列选自以下序列中的一组：

7.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其特征为所述的可变区包含的6个CDR的氨基酸序列选自以下序列中的一组：

8.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其特征为所述的重链可变区氨基酸序列至少一个选自序列编号SEQ ID NO：25、26、27、28、33、35、37或40，和/或所述的轻链可变区(VL)氨基酸序列至少一个选自序列编号SEQID NO：29、30、31、32、34、36、38、39或41。

9.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其特征为所述的可变区氨基酸序列选自以下序列中的一组：

10.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征是鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体或全人抗体。

11.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征是完全抗体、单链抗体、Fab抗体、Fab’抗体、(Fab’)2抗体、或双(多)特异性抗体。

12.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征是任何IgG亚型，如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。

13.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征为能用于治疗关节炎、类风湿性关节炎、银屑病、强制性脊柱炎、慢性阻塞性肺疾病、***性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎、哮喘、多发性硬化或囊性纤维化。

14.一种药物组合物，其包含如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体或赋形剂的组合物。

15.一种分离的核酸分子，其编码如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段中的任一个。

16.一种重组载体或表达载体，其包含一个或多个根据权利要求15所述的核酸序列，其中所述载体适合用于重组产生权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段。

17.一种宿主细胞，其包含一个或多个根据权利要求16所述的重组载体或表达载体。